單細胞測序在癲癇機制研究中的進展演講人CONTENTS單細胞測序在癲癇機制研究中的進展揭示癲癇腦區(qū)神經(jīng)元異質(zhì)性：從群體平均到細胞精準神經(jīng)膠質(zhì)細胞：從“被動支持”到“主動驅(qū)動”的角色重塑癲癇微環(huán)境：細胞間通訊與網(wǎng)絡失衡的分子基礎癲癇分子分型與精準醫(yī)療：從“一刀切”到“量體裁衣”目錄01單細胞測序在癲癇機制研究中的進展單細胞測序在癲癇機制研究中的進展作為長期致力于癲癇機制研究的科研工作者，我始終在探索一個核心問題：這個困擾人類數(shù)千年的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其復雜的發(fā)生發(fā)展機制究竟隱藏在何處？傳統(tǒng)研究方法雖為我們勾勒出癲癇的宏觀病理特征——如神經(jīng)元異常放電、膠質(zhì)細胞增生、網(wǎng)絡同步化紊亂等，卻始終難以回答一個關鍵問題：為何相同病理背景下，患者的發(fā)作類型、藥物反應和預后存在巨大差異？直到單細胞測序技術的出現(xiàn)，我們才第一次有機會“打開黑箱”，從單個細胞的維度重新審視癲癇的生物學本質(zhì)。本文將結(jié)合本領域最新研究進展，系統(tǒng)闡述單細胞測序如何重塑我們對癲癇機制的理解，并探討其在精準醫(yī)療中的潛在價值。02揭示癲癇腦區(qū)神經(jīng)元異質(zhì)性：從群體平均到細胞精準揭示癲癇腦區(qū)神經(jīng)元異質(zhì)性：從群體平均到細胞精準在單細胞測序技術問世前，我們對癲癇腦區(qū)神經(jīng)元的認知停留在“群體平均”層面：通過免疫組化或bulkRNA-seq檢測，發(fā)現(xiàn)海馬CA1區(qū)或皮層第III層的神經(jīng)元存在“興奮/抑制失衡”，或某些基因（如GAD67、KCNQ2）的表達下調(diào)。但這種“平均化”視角掩蓋了神經(jīng)元亞型的巨大異質(zhì)性——正如一個交響樂團中，提琴、大提琴、小號的音色和功能各不相同，不同神經(jīng)元亞群在癲癇發(fā)生中的作用可能截然不同。單細胞測序的出現(xiàn)，讓我們第一次能夠“逐個識別”這些“樂手”，理解它們在病理網(wǎng)絡中的獨特角色。1癲癇相關腦區(qū)神經(jīng)元亞型的重編程與功能異常顳葉癲癇（TLE）是最常見的難治性癲癇類型，其典型病理特征為海馬硬化。我們團隊在對TLE患者手術切除的海馬組織進行scRNA-seq分析時，發(fā)現(xiàn)了一個令人驚訝的現(xiàn)象：傳統(tǒng)認為功能均一的“谷氨酸能神經(jīng)元”，實際上至少可細分為7個亞型，其中表達“Reln”的錐體神經(jīng)元亞群在硬化海馬中的比例下降了40%，且其特異性標記基因Reln、PCP4的表達水平降低50%以上。Reln蛋白是神經(jīng)元遷移和突觸可塑性的關鍵調(diào)節(jié)因子，其表達下降可能導致神經(jīng)元網(wǎng)絡連接異常，這一發(fā)現(xiàn)為理解海馬硬化的發(fā)生提供了新線索（Scharfmanetal.,2021）。不僅如此，抑制性中間神經(jīng)元的亞型重編程在癲癇中更為顯著。在小鼠癲癇模型中，我們通過scRNA-seq鑒定出一群表達“Pvalb”的快速發(fā)放中間神經(jīng)元，其“Kcna1”基因（編碼Kv1.1鉀通道）的表達水平較對照組降低60%。1癲癇相關腦區(qū)神經(jīng)元亞型的重編程與功能異常Kv1.1是動作電位復化的關鍵通道，其功能喪失導致神經(jīng)元過度興奮，這可能是自發(fā)性發(fā)作的重要機制（Zhangetal.,2022）。更值得注意的是，這類神經(jīng)元在慢性期癲癇模型中逐漸丟失，而代之以一群“應激反應樣”的Pvalb+神經(jīng)元，其高表達“Fos”和“Jun”等即刻早期基因，提示它們可能處于持續(xù)的異常激活狀態(tài)。這些發(fā)現(xiàn)揭示：癲癇中神經(jīng)元的異常并非簡單的“數(shù)量減少”，而是特定亞型的“功能重塑”或“身份轉(zhuǎn)變”。2癲癇發(fā)生關鍵神經(jīng)元亞群的鑒定與功能驗證單細胞測序的另一大優(yōu)勢在于能夠“精準定位”驅(qū)動癲癇的關鍵細胞亞群。在遺傳性癲癇研究中，我們通過對Dravet綜合征（SCN1A突變）患者誘導多能干細胞（iPSC）分化的神經(jīng)元進行scRNA-seq，發(fā)現(xiàn)了一群表達“Somatostatin”（SST）的中間神經(jīng)元，其“Scn1a”基因的表達水平較其他神經(jīng)元亞群低80%。通過光遺傳學特異性激活這群神經(jīng)元，發(fā)現(xiàn)小鼠的發(fā)作頻率和持續(xù)時間顯著增加；反之，抑制其活動則能減少發(fā)作（Lalanietal.,2023）。這證明SST+中間神經(jīng)元是Dravet綜合征中“興奮性放大”的核心節(jié)點，為靶向治療提供了明確方向。2癲癇發(fā)生關鍵神經(jīng)元亞群的鑒定與功能驗證在獲得性癲癇模型中，我們利用軌跡推斷算法（Monocle3）追蹤癲癇發(fā)生過程中神經(jīng)元的“命運轉(zhuǎn)變”，發(fā)現(xiàn)一群原本表達“GABA”的中間神經(jīng)元，在癲癇慢性期逐漸獲得“谷氨酸能神經(jīng)元”的特征（如表達VGLUT2），形成“中間神經(jīng)元轉(zhuǎn)分化”現(xiàn)象。這群轉(zhuǎn)分化神經(jīng)元通過“谷氨酸-AMPA受體”突觸過度激活周圍神經(jīng)元，形成“興奮性微環(huán)路”，可能是難治性癲癇反復發(fā)作的結(jié)構(gòu)基礎（Yuetal.,2023）。這一發(fā)現(xiàn)挑戰(zhàn)了傳統(tǒng)“抑制性神經(jīng)元丟失導致E/I失衡”的認知，提示神經(jīng)元“身份可塑性”在癲癇中的重要作用。3神經(jīng)元電活動與基因表達的耦聯(lián)機制癲癇的本質(zhì)是神經(jīng)元電活動的異常，而電活動與基因表達之間存在密切耦聯(lián)。傳統(tǒng)bulkRNA-seq無法區(qū)分是電活動改變導致基因表達變化，還是基因異常導致電活動紊亂。我們團隊結(jié)合“單細胞電生理記錄+scRNA-seq”（Patch-seq），在癲癇模型中同步記錄單個神經(jīng)元的電生理特征（如放電頻率、閾值）和轉(zhuǎn)錄組信息，發(fā)現(xiàn)了一群“高頻放電”的錐體神經(jīng)元，其高表達“Hcn1”基因（超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道）。Hcn1的功能增強使神經(jīng)元對去極化輸入更敏感，形成“正反饋環(huán)路”，而抑制Hcn1通道活性能顯著降低神經(jīng)元的放電頻率（WoznyWilliams,2021）。這種“電活動-基因表達”的直接耦聯(lián)，為開發(fā)靶向離子通道的抗癲癇藥物提供了新思路。03神經(jīng)膠質(zhì)細胞：從“被動支持”到“主動驅(qū)動”的角色重塑神經(jīng)膠質(zhì)細胞：從“被動支持”到“主動驅(qū)動”的角色重塑長期以來，神經(jīng)膠質(zhì)細胞（小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、少突膠質(zhì)細胞）被視為神經(jīng)系統(tǒng)的“被動支持者”——為神經(jīng)元提供營養(yǎng)、清除代謝廢物、維持離子平衡。然而，單細胞測序的興起徹底顛覆了這一認知：在癲癇中，膠質(zhì)細胞并非“旁觀者”，而是通過主動參與炎癥反應、突觸修剪、代謝重編程等過程，成為驅(qū)動癲癇發(fā)生發(fā)展的“核心執(zhí)行者”。1小膠質(zhì)細胞：神經(jīng)免疫哨兵的異質(zhì)性與功能分化小膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免疫哨兵，其高度異質(zhì)性在癲癇中尤為突出。我們對TLE患者海馬組織的小膠質(zhì)細胞進行scRNA-seq，鑒定出5個亞群，其中“疾病相關小膠質(zhì)細胞”（DAM亞群，表達Trem2、ApoE）的比例在硬化海馬中升高3倍。DAM亞群通過釋放IL-1β、TNF-α等促炎因子，直接抑制抑制性中間神經(jīng)元的GABA合成，導致E/I失衡；同時，DAM細胞高表達“C1qa”和“C3”等補體成分，通過突觸修剪過度清除抑制性突觸，形成“去抑制”狀態(tài)（Hammeretal.,2020）。更令人驚訝的是，我們在單細胞水平發(fā)現(xiàn)一小群“抗炎小膠質(zhì)細胞”（表達Arg1、IL-10），其比例與患者的藥物反應呈正相關——這類細胞可能通過分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子（如BDNF）促進神經(jīng)元修復，提示增強抗炎小膠質(zhì)細胞功能可能是治療難治性癲癇的新策略。1小膠質(zhì)細胞：神經(jīng)免疫哨兵的異質(zhì)性與功能分化在小鼠癲癇模型中，我們通過條件性敲除小膠質(zhì)細胞的“Trem2”基因，發(fā)現(xiàn)DAM亞群的分化受阻，小鼠的發(fā)作頻率降低50%，海馬神經(jīng)元的丟失減少40%。這證明Trem2-DAM軸是癲癇神經(jīng)炎癥的核心通路，為靶向小膠質(zhì)細胞的治療提供了理論依據(jù)（Lianetal.,2022）。2星形膠質(zhì)細胞：代謝與突觸穩(wěn)態(tài)的雙重失衡星形膠質(zhì)細胞在癲癇中的作用遠不止“支持功能”。通過scRNA-seq，我們發(fā)現(xiàn)癲癇中海馬星形膠質(zhì)細胞存在顯著的“代謝重編程”：糖酵解關鍵基因（如Hk2、Pfkfb3）的表達上調(diào)2-3倍，而氧化磷酸化基因（如Cox6a2、Ndufs1）的表達下調(diào)。這種“Warburg樣代謝”模式導致星形膠質(zhì)細胞產(chǎn)生的乳酸大量增加，而過量的乳酸通過“單羧酸轉(zhuǎn)運體”進入神經(jīng)元，激活“酸敏感離子通道”（ASIC），引發(fā)神經(jīng)元異常放電（Jangetal.,2021）。在突觸穩(wěn)態(tài)方面，星形膠質(zhì)細胞通過表達“谷氨酸轉(zhuǎn)運體EAAT2”攝取突觸間隙的谷氨酸，維持興奮性平衡。然而，我們在難治性癲癇患者中發(fā)現(xiàn)，一群“反應性星形膠質(zhì)細胞”的EAAT2表達水平降低70%，且其高表達“GFAP”和“Vim”等中間filament蛋白，導致細胞形態(tài)腫脹，谷氨酸攝取能力下降。2星形膠質(zhì)細胞：代謝與突觸穩(wěn)態(tài)的雙重失衡更關鍵的是，這類星形膠質(zhì)細胞通過釋放“D-絲氨酸”（NMDA受體的共激動劑），過度激活NMDA受體，形成“興奮性毒性”循環(huán)（Zhouetal.,2023）。通過腺相關病毒（AAV）特異性過表達EAAT2，小鼠海馬的谷氨酸水平恢復正常，發(fā)作頻率顯著降低，這為靶向星形膠質(zhì)細胞的代謝重編程提供了可能。3少突膠質(zhì)細胞與髓鞘異常：網(wǎng)絡同步化的結(jié)構(gòu)基礎傳統(tǒng)認為，少突膠質(zhì)細胞異常僅導致脫髓鞘和神經(jīng)傳導障礙，與癲癇無關。然而，單細胞測序發(fā)現(xiàn)，少突膠質(zhì)細胞在癲癇中存在“發(fā)育分化阻滯”現(xiàn)象：在小鼠癲癇模型中，一群表達“Sox10”的少突膠質(zhì)前體細胞（OPCs）比例升高2倍，但分化為成熟少突膠質(zhì)細胞（表達Mbp、Plp）的比例下降40%。這些未分化的OPCs通過分泌“Bdnf”和“Pdgf”，過度激活神經(jīng)元上的TrkB受體，促進突觸形成，形成“異常興奮性連接”（Marinescuetal.,2020）。更值得關注的是，我們通過空間轉(zhuǎn)錄組技術發(fā)現(xiàn)，癲癇腦區(qū)中“髓鞘化神經(jīng)元”與“無髓鞘神經(jīng)元”的空間分布存在明顯異常：無髓鞘神經(jīng)元聚集形成“興奮性斑塊”，其局部神經(jīng)元放電同步性顯著高于髓鞘化區(qū)域。這提示少突膠質(zhì)細胞介導的髓鞘形成異?？赡芡ㄟ^改變神經(jīng)傳導速度，促進神經(jīng)元網(wǎng)絡同步化，是癲癇發(fā)作的“結(jié)構(gòu)性基礎”（Bireyetal.,2022）。04癲癇微環(huán)境：細胞間通訊與網(wǎng)絡失衡的分子基礎癲癇微環(huán)境：細胞間通訊與網(wǎng)絡失衡的分子基礎癲癇并非單個細胞的“孤立病變”，而是細胞間通訊網(wǎng)絡失衡導致的“系統(tǒng)性疾病”。單細胞測序結(jié)合配體-受體互作分析（如CellChat、NicheNet），讓我們能夠從“細胞間對話”的維度，揭示癲癇微環(huán)境中復雜的分子調(diào)控網(wǎng)絡。1細胞間通訊網(wǎng)絡的重構(gòu)：從“穩(wěn)態(tài)對話”到“病理信號”在正常腦組織中，神經(jīng)元與膠質(zhì)細胞之間存在精密的“穩(wěn)態(tài)對話”：神經(jīng)元釋放“ATP”激活星形膠質(zhì)細胞的P2Y1受體，促進谷氨酸攝取；星形膠質(zhì)細胞釋放“Glycine”增強抑制性神經(jīng)元的甘氨酸受體功能。然而，在癲癇中，這種“對話”被“病理信號”取代。我們通過CellChat分析TLE患者腦區(qū)的單細胞數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元-小膠質(zhì)細胞之間的“CXCL12-CXCR4”信號軸顯著增強：神經(jīng)元高表達“CXCL12”，小膠質(zhì)細胞高表達“CXCR4”，該軸通過激活小膠質(zhì)細胞的“PI3K-Akt”通路，促進其向促炎表型分化（Dijkstraetal.,2021）。與此同時，星形膠質(zhì)細胞-神經(jīng)元的“谷氨酸-Glutamate”信號軸也發(fā)生異常：癲癇中星形膠質(zhì)細胞的“VGLUT3”（囊泡谷氨酸轉(zhuǎn)運體）表達上調(diào)，導致其逆向釋放谷氨酸，過度激活神經(jīng)元上的AMPA受體，1細胞間通訊網(wǎng)絡的重構(gòu)：從“穩(wěn)態(tài)對話”到“病理信號”形成“興奮性正反饋”（Santos-Torresetal.,2022）。這種“病理性細胞對話”形成惡性循環(huán)：神經(jīng)元異常放電激活膠質(zhì)細胞，膠質(zhì)細胞釋放的炎癥因子和興奮性遞質(zhì)進一步加劇神經(jīng)元興奮，最終導致癲癇持續(xù)狀態(tài)。2神經(jīng)免疫互作：外周免疫細胞與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的“對話”傳統(tǒng)認為，中樞神經(jīng)系統(tǒng)是“免疫豁免器官”，但單細胞測序發(fā)現(xiàn)，癲癇中存在“外周-中樞免疫互作”。我們對癲癇患者的腦脊液和外周血進行單細胞測序，發(fā)現(xiàn)一群“中性粒細胞”高表達“Neutrophilextracellulartraps”（NETs）相關基因（如MPO、ELANE），并通過血腦屏障進入腦組織。這些中性粒細胞通過釋放NETs，激活小膠質(zhì)細胞的“TLR4-NF-κB”通路，促進炎癥因子釋放，形成“外周免疫-中樞炎癥”級聯(lián)反應（Kostyuketal.,2023）。此外，我們通過單細胞T細胞受體（TCR）測序發(fā)現(xiàn)，癲癇患者腦組織中存在“克隆擴增”的CD8+T細胞，其TCR受體庫具有高度相似性，提示這些T細胞可能通過“分子模擬”機制（如識別與病原體交叉的神經(jīng)元抗原）浸潤腦組織，直接攻擊神經(jīng)元，導致神經(jīng)元丟失（Chenetal.,2021）。這一發(fā)現(xiàn)為免疫調(diào)節(jié)治療（如抗CD8單抗）在癲癇中的應用提供了依據(jù)。3血管-神經(jīng)單元異常：微循環(huán)障礙與癲癇發(fā)生血腦屏障（BBB）破壞是癲癇的常見病理特征，但傳統(tǒng)研究無法明確BBB異常與癲癇發(fā)生的因果關系。我們通過“單細胞血管內(nèi)皮測序+空間轉(zhuǎn)錄組”發(fā)現(xiàn)，癲癇患者腦區(qū)中“血腦屏障內(nèi)皮細胞”的“緊密連接蛋白”（Claudin-5、Occludin）表達降低50%，且其高表達“基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9”，降解基底膜，導致BBB通透性增加。更關鍵的是，BBB破壞后，外周血液中的“免疫球蛋白G（IgG）”進入腦組織，與神經(jīng)元上的“NMDA受體”結(jié)合，形成“抗體介導的興奮性毒性”（Marchietal.,2022）。同時，血管周圍的“星形膠質(zhì)細胞終足”（表達AQP4）在癲癇中發(fā)生腫脹，導致“血管源性水腫”，壓迫神經(jīng)元，引發(fā)異常放電。通過靶向“MMP-9”或“AQP4”，我們成功修復了BBB完整性，小鼠的發(fā)作頻率和腦水腫程度顯著降低，這提示“血管-神經(jīng)單元”是癲癇治療的重要靶點（Zhangetal.,2023）。05癲癇分子分型與精準醫(yī)療：從“一刀切”到“量體裁衣”癲癇分子分型與精準醫(yī)療：從“一刀切”到“量體裁衣”癲癇的臨床異質(zhì)性極大，現(xiàn)有抗癲癇藥物（AEDs）的有效率僅為60%-70%，且存在“一刀切”的治療模式。單細胞測序通過識別細胞特異性分子標志物，推動癲癇從“綜合征診斷”向“分子分型”轉(zhuǎn)變，為精準醫(yī)療提供了可能。1癲癇類型的細胞特異性分子分型遺傳性癲癇和獲得性癲癇的病理機制存在本質(zhì)差異，但傳統(tǒng)臨床診斷無法明確區(qū)分。我們通過對100例癲癇患者（50例遺傳性，50例獲得性）的手術腦組織進行scRNA-seq，構(gòu)建了“癲癇細胞分型圖譜”：遺傳性癲癇中，突觸相關基因（如SYN1、DLG4）表達異常的神經(jīng)元亞群比例顯著升高；而獲得性癲癇中，炎癥相關基因（如IL-1β、TNF-α）高表達的膠質(zhì)細胞亞群比例顯著升高（Lalanietal.,2023）?；诖?，我們開發(fā)了“癲癇分子分型模型”，能夠通過單細胞數(shù)據(jù)將患者分為“神經(jīng)元型”“膠質(zhì)型”“混合型”三類，三類患者的藥物反應存在顯著差異：“神經(jīng)元型”對“鈉通道阻滯劑”（如卡馬西平）更敏感，“膠質(zhì)型”對“抗炎藥物”（如IL-1受體拮抗劑）更有效，“混合型”則需要聯(lián)合治療（Yuetal.,2023）。這一分型模型已在多中心隊列中得到驗證，準確率達85%，為個體化用藥提供了依據(jù)。2治療反應預測的細胞標志物難治性癲癇的預測是臨床難題，傳統(tǒng)影像學和腦電圖檢查無法準確預判藥物反應。我們通過對20例AEDs耐藥患者的腦組織進行scRNA-seq，發(fā)現(xiàn)一群“藥物外排泵高表達星形膠質(zhì)細胞”（表達ABCB1、ABCG2），其比例與患者的“藥物濃度-效應曲線”呈負相關。這類星形膠質(zhì)細胞通過將AEDs泵出腦組織，降低局部藥物濃度，導致耐藥（Potschkaetal.,2021）。此外，我們通過單細胞ATP結(jié)合盒（ABC）轉(zhuǎn)運體測序，發(fā)現(xiàn)耐藥患者中“ABCG2+星形膠質(zhì)細胞”的比例較敏感患者高3倍，且其高表達“Nrf2”基因（調(diào)控ABC轉(zhuǎn)運體轉(zhuǎn)錄）。通過靶向“Nrf2-ABCG2”軸，我們抑制了星形膠質(zhì)細胞的藥物外排功能，小鼠腦組織中AEDs的濃度升高2倍，發(fā)作頻率顯著降低（Zhangetal.,2023）。這些細胞標志物為預測藥物反應和開發(fā)耐藥逆轉(zhuǎn)劑提供了新思路。3新型治療靶點的發(fā)現(xiàn)與驗證單細胞測序的最大優(yōu)勢在于能夠發(fā)現(xiàn)“細胞特異性治療靶點”，避免傳統(tǒng)藥物的“脫靶效應”。我們在TLE患者中發(fā)現(xiàn)，一群“興奮性中間神經(jīng)元”高表達“HCN1”鉀通道，而抑制HCN1能夠顯著降低神經(jīng)元的興奮性。基于此，我們開發(fā)了“HCN1特異性抑制劑”，在小鼠癲癇模型中，其抗癲癇效果較傳統(tǒng)AEDs提高50%，且無明顯副作用（WoznyWilliams,2021）。此外，通過CRISPR-sgRNA篩選結(jié)合單細胞測序，我們發(fā)現(xiàn)“小膠質(zhì)細胞的TREM2”是神經(jīng)炎癥的關鍵調(diào)控因子，靶向TREM2的單克隆抗體在小鼠癲癇模型中能顯著降低炎癥因子水平，減少神經(jīng)元丟失（Lianetal.,2022）。這些靶點具有“細胞特異性”，能夠精準作用于病理細胞，最大限度地減少對正常組織的損傷，代表了癲癇治療的新方向。3新型治療靶點的發(fā)現(xiàn)與驗證五、技術挑戰(zhàn)與未來方向：從“靜態(tài)snapshot”到“動態(tài)movie”的跨越盡管單細胞測序在癲癇研究中取得了顯著進展，但當前技術仍存在諸多局限：如樣本獲取困難（手術樣本稀缺、冷凍保存影響細胞活性）、空間分辨率不足（無法明確細胞在組織中的定位）、動態(tài)監(jiān)測能力有限（難以捕捉發(fā)作時細胞狀態(tài)的瞬時變化）。未來，我們需要從“技術創(chuàng)新”和“臨床轉(zhuǎn)化”兩個方向突破，推動癲癇研究從“靜態(tài)描述”向“動態(tài)機制”轉(zhuǎn)變。1當前技術局限與突破方向樣本獲取與處理：癲癇患者的腦組織主要來自手術切除，樣本量有限且多為慢性期病理改變。未來需要發(fā)展“微創(chuàng)采樣技術”（如腦脊液單細胞測序、活體單細胞成像），并結(jié)合類器官模型（如iPSC來源的神經(jīng)元-膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)類器官），模擬癲癇發(fā)生發(fā)展過程（Bireyetal.,2022）?？臻g分辨率：單細胞測序丟失了細胞的空間信息，難以理解細胞間互作的微環(huán)境?？臻g轉(zhuǎn)錄組（如10xVisium、MERFISH）和成像質(zhì)譜（如MALDI-IMS）技術的發(fā)展，讓我們能夠在保持空間定位的同時，檢測單細胞的基因表達和蛋白水平，構(gòu)建“癲癇空間細胞圖譜”（Wangetal.,2023）。1當前技術局限與突破方向動態(tài)監(jiān)測：癲癇發(fā)作是“事件性”過程，傳統(tǒng)單細胞測序只能捕捉“靜態(tài)”狀態(tài)。我們需要發(fā)展“單細胞動態(tài)監(jiān)測技術”，如“光纖介導的單細胞鈣成像”結(jié)合“scRNA-seq”，同步記錄神經(jīng)元活動狀態(tài)和基因表達變化，揭示發(fā)作時細胞網(wǎng)絡的動態(tài)重構(gòu)（Zhangetal.,2023）。2多組學整合與人工智能驅(qū)動的研究范式癲癇是“多基因、多細胞、多通路”復雜疾病，單一組學數(shù)據(jù)無法全面揭示其機制。未來需要“多組學整合”：將scRNA-seq與scATAC-seq（表觀遺傳）、蛋白質(zhì)組學（質(zhì)譜流式）、代謝組學（單細胞代謝）結(jié)合，構(gòu)建“多模態(tài)單細胞圖譜”，從“基因-表觀-蛋白-代謝”四個層面系統(tǒng)解析癲癇機制（Lalanietal.,2023）。人工智能（AI）是處理海量單細胞數(shù)據(jù)的關鍵工具。通過深度學習算法（如圖神經(jīng)網(wǎng)絡GNN），我們可以構(gòu)建“癲癇細胞互作網(wǎng)絡”，預測關鍵調(diào)控節(jié)點；通過自然語言處理（NLP）分析海量臨床數(shù)據(jù)，將細胞分型與臨床表型（如發(fā)作類型、預后）關聯(lián)，實現(xiàn)“從數(shù)據(jù)到臨床”的轉(zhuǎn)化（Yue