2025年病毒抑制率測(cè)試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.評(píng)估抗病毒藥物對(duì)新型冠狀病毒（nCoV-2025）的抑制率時(shí)，若實(shí)驗(yàn)組病毒載量為2.1×10?拷貝/mL，空白對(duì)照組為1.8×10?拷貝/mL（無(wú)藥物干預(yù)），則該藥物的抑制率約為：A.98.83%B.90.56%C.95.21%D.89.44%2.以下哪種方法是檢測(cè)病毒抑制率時(shí)最常用的病毒載量定量手段？A.透射電鏡觀察病毒形態(tài)B.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)感染細(xì)胞比例C.實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）檢測(cè)病毒RNAD.免疫組化染色計(jì)數(shù)包涵體3.某實(shí)驗(yàn)中，陽(yáng)性對(duì)照組（已知有效藥物）的病毒抑制率僅為65%（預(yù)期應(yīng)≥85%），最可能的原因是：A.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)血清濃度過(guò)高B.藥物作用時(shí)間短于病毒復(fù)制周期C.實(shí)驗(yàn)用病毒株為臨床分離株而非標(biāo)準(zhǔn)株D.加樣時(shí)移液器未校準(zhǔn)導(dǎo)致藥物濃度偏差4.計(jì)算半數(shù)抑制濃度（IC50）時(shí)，若藥物濃度對(duì)數(shù)（logC）與抑制率（Y）的線性回歸方程為Y=35.2logC+82.1，當(dāng)Y=50時(shí)，IC50對(duì)應(yīng)的藥物濃度（μmol/L）為：A.10^(-0.91)B.10^(-0.99)C.10^(-1.05)D.10^(-1.19)5.針對(duì)呼吸道合胞病毒（RSV）的抑制劑測(cè)試中，若采用空斑減少試驗(yàn)（PlaqueReductionAssay），以下操作錯(cuò)誤的是：A.感染復(fù)數(shù)（MOI）設(shè)置為0.01以模擬自然感染B.藥物與病毒共孵育1小時(shí)后接種細(xì)胞C.固定細(xì)胞前用PBS輕柔洗滌3次去除未吸附病毒D.空斑計(jì)數(shù)時(shí)僅統(tǒng)計(jì)直徑≥1mm的清晰空斑6.評(píng)價(jià)病毒抑制率的實(shí)驗(yàn)中，陰性對(duì)照組（無(wú)病毒、無(wú)藥物）的OD450值顯著高于空白組（無(wú)病毒、無(wú)細(xì)胞），最可能的干擾因素是：A.細(xì)胞裂解液中殘留血清蛋白B.酶標(biāo)儀波長(zhǎng)校準(zhǔn)偏差C.培養(yǎng)基中酚紅指示劑的pH變化D.實(shí)驗(yàn)用96孔板未經(jīng)過(guò)細(xì)胞貼壁處理7.某新型小分子抑制劑對(duì)流感病毒A（H3N2）的抑制率在MOI=0.1時(shí)為82%，MOI=1.0時(shí)降至57%，最合理的解釋是：A.高M(jìn)OI下病毒復(fù)制速度過(guò)快，藥物無(wú)法及時(shí)滲透B.藥物通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合宿主受體起作用，高M(jìn)OI時(shí)受體飽和C.高M(jìn)OI導(dǎo)致細(xì)胞提前病變，影響藥物攝取D.藥物在高濃度病毒環(huán)境中發(fā)生降解8.以下哪種情況會(huì)導(dǎo)致病毒抑制率計(jì)算結(jié)果偏低？A.實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率僅60%（藥物毒性未排除）B.對(duì)照組病毒載量因操作污染被高估C.病毒RNA提取時(shí)實(shí)驗(yàn)組損失率高于對(duì)照組D.qPCR擴(kuò)增效率實(shí)驗(yàn)組（92%）高于對(duì)照組（88%）9.采用TCID50（50%組織細(xì)胞感染劑量）法評(píng)估抑制率時(shí)，若實(shí)驗(yàn)組TCID50為10^3.2/mL，對(duì)照組為10^5.8/mL，則抑制率為：A.1(10^3.2/10^5.8)=99.84%B.1(3.2/5.8)=44.83%C.(5.83.2)/5.8=44.83%D.10^(5.8-3.2)=398倍抑制10.評(píng)估中和抗體抑制率時(shí)，若抗體與病毒預(yù)孵育時(shí)間不足5分鐘（標(biāo)準(zhǔn)為30分鐘），可能導(dǎo)致：A.抑制率虛高（抗體未充分結(jié)合病毒）B.抑制率虛低（病毒提前感染細(xì)胞）C.無(wú)顯著影響（結(jié)合反應(yīng)為快速平衡過(guò)程）D.細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）觀察困難11.某實(shí)驗(yàn)中，同一藥物在37℃培養(yǎng)條件下抑制率為78%，25℃時(shí)為92%，最可能的原因是：A.低溫增強(qiáng)藥物穩(wěn)定性B.病毒在低溫下復(fù)制更活躍C.宿主細(xì)胞代謝減慢導(dǎo)致藥物攝取減少D.低溫抑制病毒與宿主受體結(jié)合12.以下哪項(xiàng)是病毒抑制率實(shí)驗(yàn)中“劑量-反應(yīng)關(guān)系”的關(guān)鍵驗(yàn)證指標(biāo)？A.最高濃度組抑制率≥90%B.最低濃度組抑制率≤10%C.抑制率隨藥物濃度升高呈S型曲線上升D.半數(shù)有效濃度（EC50）與半數(shù)毒性濃度（TC50）比值＞1013.采用熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)抑制率時(shí)，若實(shí)驗(yàn)組熒光值顯著高于對(duì)照組（無(wú)藥物），可能的原因是：A.藥物激活了細(xì)胞內(nèi)熒光素酶表達(dá)B.病毒感染導(dǎo)致細(xì)胞熒光素酶活性下降C.藥物抑制了病毒編碼的熒光素酶D.對(duì)照組病毒感染效率過(guò)低14.評(píng)估中藥提取物抑制率時(shí)，若提取物含色素干擾qPCR檢測(cè)，應(yīng)優(yōu)先采用的替代方法是：A.調(diào)整qPCR引物序列避免干擾B.增加RNA提取時(shí)的純化步驟C.改用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)感染細(xì)胞比例D.稀釋提取物至色素?zé)o干擾濃度15.某抗病毒藥物在體外抑制率為95%，但體內(nèi)實(shí)驗(yàn)效果僅50%，最可能的影響因素是：A.藥物在體內(nèi)被血漿蛋白結(jié)合，游離濃度降低B.體外實(shí)驗(yàn)使用傳代細(xì)胞系，體內(nèi)為原代細(xì)胞C.體外實(shí)驗(yàn)病毒株未經(jīng)過(guò)體內(nèi)適應(yīng)性突變D.體內(nèi)存在免疫系統(tǒng)協(xié)同作用二、填空題（每空1分，共20分）1.病毒抑制率的核心計(jì)算公式為：抑制率（%）=[1（__________/__________）]×100%。2.空斑減少試驗(yàn)中，通常將病毒與藥物共孵育后接種細(xì)胞，待__________形成后染色計(jì)數(shù)，抑制率通過(guò)比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的__________數(shù)量計(jì)算。3.TCID50法計(jì)算抑制率時(shí)，需先通過(guò)__________法確定實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的TCID50值，其本質(zhì)是通過(guò)__________概率模型估算病毒感染能力。4.評(píng)估抑制率時(shí)，需設(shè)置3類(lèi)關(guān)鍵對(duì)照組：__________（無(wú)藥物、有病毒）、__________（無(wú)病毒、有藥物）、__________（無(wú)病毒、無(wú)藥物）。5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)病毒RNA時(shí)，抑制率計(jì)算需確保實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的__________效率一致，常用__________基因作為內(nèi)參校正。6.藥物毒性會(huì)干擾抑制率結(jié)果，因此需同步檢測(cè)__________（如MTT法），僅當(dāng)細(xì)胞存活率≥__________時(shí)，抑制率數(shù)據(jù)才有效。7.溫度、pH、血清濃度等實(shí)驗(yàn)條件會(huì)影響抑制率，因此需在實(shí)驗(yàn)方案中明確__________，并通過(guò)__________實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證條件穩(wěn)定性。8.新型冠狀病毒變異株（如刺突蛋白N501Y突變）可能導(dǎo)致現(xiàn)有藥物抑制率下降，原因是突變可能影響藥物與病毒__________或宿主__________的結(jié)合。9.復(fù)合抑制劑（如兩種藥物聯(lián)用）的抑制率若__________單藥抑制率之和，提示存在協(xié)同作用；若__________，則提示拮抗。10.抑制率實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性需通過(guò)__________（至少3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)）和__________（同一實(shí)驗(yàn)重復(fù)孔數(shù)≥3）保證，統(tǒng)計(jì)分析常用__________檢驗(yàn)。三、簡(jiǎn)答題（每題6分，共30分）1.簡(jiǎn)述病毒抑制率實(shí)驗(yàn)中“感染復(fù)數(shù)（MOI）”的選擇依據(jù)及對(duì)結(jié)果的影響。2.比較空斑減少試驗(yàn)（PlaqueReductionAssay）與qPCR法檢測(cè)抑制率的優(yōu)缺點(diǎn)。3.若某藥物在抑制率實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)“鉤狀效應(yīng)”（高濃度藥物抑制率下降），可能的原因有哪些？4.如何通過(guò)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)區(qū)分“病毒直接滅活”與“抑制病毒復(fù)制”兩種抑制機(jī)制？5.簡(jiǎn)述質(zhì)量控制（QC）在病毒抑制率實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵措施及意義。四、綜合分析題（共20分）某實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展新型抗病毒藥物X對(duì)流感病毒H1N1的抑制率研究，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下：細(xì)胞：MDCK（狗腎上皮細(xì)胞），傳代至第15代（推薦≤20代）病毒：H1N1標(biāo)準(zhǔn)株（ATCCVR-1469），TCID50=10^6.5/mL（凍存3個(gè)月）藥物濃度：0.1、1、10、100μmol/L（設(shè)3個(gè)復(fù)孔）對(duì)照組：陽(yáng)性對(duì)照：奧司他韋（已知IC50=0.5μmol/L）陰性對(duì)照：無(wú)病毒+藥物（100μmol/L）空白對(duì)照：無(wú)病毒+無(wú)藥物操作流程：1.細(xì)胞接種96孔板（1×10^4cells/孔），培養(yǎng)24小時(shí)至80%匯合2.病毒用維持液（2%FBS）稀釋至MOI=0.13.藥物與病毒等體積混合，37℃孵育1小時(shí)4.接種細(xì)胞（100μL/孔），37℃、5%CO?培養(yǎng)48小時(shí)5.收集上清，qPCR檢測(cè)病毒RNA（引物針對(duì)NP基因）6.MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率（藥物組存活率均＞90%）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：陽(yáng)性對(duì)照（奧司他韋）抑制率：1μmol/L時(shí)92%，10μmol/L時(shí)95%（預(yù)期IC50=0.5μmol/L）藥物X抑制率：0.1μmol/L：32%1μmol/L：65%10μmol/L：88%100μmol/L：72%（細(xì)胞存活率92%）qPCR檢測(cè)顯示，空白對(duì)照Ct值＞38（無(wú)擴(kuò)增），陰性對(duì)照Ct值35（弱擴(kuò)增）問(wèn)題：1.分析藥物X在100μmol/L時(shí)抑制率下降的可能原因（4分）。2.陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果與預(yù)期IC50存在偏差，可能的實(shí)驗(yàn)誤差有哪些？（6分）3.陰性對(duì)照出現(xiàn)弱擴(kuò)增（Ct=35），可能的污染來(lái)源及改進(jìn)措施（5分）。4.若需計(jì)算藥物X的IC50，應(yīng)如何處理數(shù)據(jù)并說(shuō)明依據(jù)（5分）。答案一、單項(xiàng)選擇題1.A2.C3.D4.A5.B6.A7.B8.C9.A10.B11.A12.C13.A14.C15.A二、填空題1.實(shí)驗(yàn)組病毒載量；對(duì)照組病毒載量2.空斑；空斑3.Reed-Muench；二項(xiàng)分布4.病毒對(duì)照；藥物對(duì)照；空白對(duì)照5.RNA提?。还芗?.細(xì)胞毒性；80%7.實(shí)驗(yàn)條件；預(yù)8.靶點(diǎn)；受體9.高于；低于10.重復(fù)實(shí)驗(yàn)；復(fù)孔；t三、簡(jiǎn)答題1.MOI選擇需模擬自然感染狀態(tài)（通常0.01-0.1），低MOI（＜0.01）可能因病毒復(fù)制周期長(zhǎng)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)，高M(jìn)OI（＞1）可能因病毒快速破壞細(xì)胞掩蓋藥物效果，且可能激活細(xì)胞抗病毒通路干擾結(jié)果。2.空斑法優(yōu)點(diǎn)：直接反映病毒感染性（活病毒計(jì)數(shù)），結(jié)果直觀；缺點(diǎn)：耗時(shí)（需3-7天）、僅適用于形成明顯空斑的病毒。qPCR法優(yōu)點(diǎn)：快速（4-6小時(shí)）、靈敏度高；缺點(diǎn)：無(wú)法區(qū)分活病毒與死病毒，可能高估抑制率（殘留RNA干擾）。3.可能原因：①藥物高濃度下與病毒非特異性結(jié)合，阻礙藥物與靶點(diǎn)結(jié)合；②藥物本身具有細(xì)胞毒性（但本題中細(xì)胞存活率＞90%，排除）；③病毒變異株在高藥物壓力下快速?gòu)?fù)制（需通過(guò)測(cè)序驗(yàn)證）；④qPCR檢測(cè)時(shí)藥物成分抑制擴(kuò)增（需設(shè)置無(wú)病毒+藥物的qPCR對(duì)照）。4.設(shè)計(jì)兩組實(shí)驗(yàn)：①病毒與藥物共孵育后離心去除藥物，接種細(xì)胞（檢測(cè)直接滅活）；②細(xì)胞先感染病毒，2小時(shí)后加藥物（檢測(cè)復(fù)制抑制）。若第一組抑制率顯著高于第二組，提示以直接滅活為主；反之則以抑制復(fù)制為主。5.關(guān)鍵措施：①使用標(biāo)準(zhǔn)病毒株和細(xì)胞系（記錄傳代次數(shù)）；②設(shè)置三重復(fù)孔和獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)；③定期校準(zhǔn)儀器（如qPCR儀、移液器）；④使用陽(yáng)性/陰性對(duì)照監(jiān)控實(shí)驗(yàn)有效性；⑤記錄溫濕度等環(huán)境參數(shù)。意義：確保數(shù)據(jù)可重復(fù)性，排除操作誤差和污染干擾，提高結(jié)果可信度。四、綜合分析題1.100μmol/L抑制率下降可能原因：①藥物高濃度下與病毒表面非靶點(diǎn)蛋白結(jié)合，形成保護(hù)殼（需通過(guò)病毒-藥物共沉淀實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證）；②藥物成分抑制qPCR擴(kuò)增（陰性對(duì)照Ct=35提示藥物可能含PCR抑制劑，需用無(wú)病毒+藥物的RNA提取液做qPCR空白對(duì)照）；③病毒在高藥物壓力下啟動(dòng)應(yīng)急復(fù)制機(jī)制（需觀察細(xì)胞病變效應(yīng)是否提前）。2.陽(yáng)性對(duì)照偏差可能誤差：①奧司他韋儲(chǔ)存不當(dāng)（如反復(fù)凍融）導(dǎo)致效價(jià)降低；②病毒TCID50測(cè)定誤差（實(shí)際MOI高于0.1，需重新滴定病毒）；③維持液中血清濃度（2%）影響藥物吸收（奧司他韋為前藥，需血清酯酶激活，低血清可能降低轉(zhuǎn)化效率）；④孵育時(shí)間不足（病毒-藥物共孵育1小時(shí)可能短于奧司他韋起效時(shí)間）。3.陰性對(duì)照弱擴(kuò)增污染來(lái)源：①細(xì)胞培養(yǎng)基污染病毒RNA（需檢測(cè)細(xì)胞傳代時(shí)是否使用無(wú)病毒血清）；②移液器交叉污染（藥物稀釋時(shí)未更換槍頭）；③qPCR試劑污染（引物或探針被病毒DNA污染，需做無(wú)模板對(duì)照）。改進(jìn)措施：使用帶濾芯槍頭，分區(qū)操作（配液區(qū)、擴(kuò)增區(qū)分離），定期用DNA酶/RNA酶清潔工作臺(tái)，檢測(cè)細(xì)胞和培養(yǎng)基的病毒背景。4.計(jì)算IC5