生物制藥純化工藝優(yōu)化工程師崗位招聘考試試卷及答案生物制藥純化工藝優(yōu)化工程師崗位招聘考試試卷第一部分填空題（10題，1分/題）1.蛋白A親和層析常用于______類藥物的純化。2.離子交換層析中，目標蛋白帶負電時應選擇______型樹脂。3.切向流過濾（TFF）的截留分子量（MWCO）單位是______。4.病毒滅活低pH孵育法的pH范圍通常為______。5.尺寸排阻層析（SEC）基于分子的______差異分離。6.緩沖液常用鹽成分除NaCl外，還常用______（合理即可）。7.純化收率=（______）×100%。8.除菌過濾常用濾膜孔徑是______μm。9.去除內毒素的常用層析方法是______（合理即可）。10.親和層析中目標蛋白與配基為______結合。第二部分單項選擇題（10題，2分/題）1.分離分子量差異大的蛋白首選______。A.離子交換層析B.尺寸排阻層析C.親和層析D.疏水層析2.TFF截留率計算公式為______。A.(C滲透/C保留)×100%B.(1-C滲透/C進料)×100%C.(C保留/C滲透)×100%3.病毒滅活低pH孵育時間通常為______。A.1-2hB.<30minC.4-6hD.>12h4.不屬于純化關鍵質量屬性（CQA）的是______。A.純度B.收率C.內毒素D.HCP殘留5.SEC中分子量越大，保留時間______。A.越長B.越短C.不變D.無規(guī)律6.蛋白A層析常用洗脫試劑是______。A.高鹽B.低pH甘氨酸緩沖液C.高pH緩沖液D.乙醇7.超濾膜不常用材質是______。A.PESB.CAC.PTFED.RC8.目標蛋白pI=5.5，陽離子交換平衡pH選______。A.3.0B.4.5C.6.5D.7.59.中性條件下內毒素帶______。A.正電B.負電C.中性D.無電荷10.TFF透析過濾（Diafiltration）主要目的是______。A.濃縮B.除小分子C.濃縮+除雜D.換緩沖液第三部分多項選擇題（10題，2分/題）1.純化工藝優(yōu)化需考慮______。A.收率B.純度C.成本D.法規(guī)2.常見層析類型包括______。A.親和B.離子交換C.SECD.疏水層析3.TFF操作關鍵參數有______。A.跨膜壓（TMP）B.通量C.MWCOD.流速4.病毒滅活驗證需滿足______。A.滅活因子選擇B.條件驗證C.病毒指示物D.殘留檢測5.純化CQA包括______。A.純度B.活性C.內毒素D.HCP殘留6.離子交換洗脫方法有______。A.變pHB.變鹽濃度C.變速D.變溫7.SEC應用場景包括______。A.分子量測定B.聚集體去除C.換緩沖液D.雜質分離8.親和層析配基類型有______。A.蛋白A/GB.抗體C.金屬螯合物D.染料9.影響超濾截留率的因素有______。A.蛋白濃度B.TMPC.pHD.膜材質10.內毒素去除方法有______。A.陰離子交換B.疏水層析C.超濾D.活性炭吸附第四部分判斷題（10題，2分/題）1.蛋白A僅用于單抗純化。（）2.SEC基于電荷差異分離。（）3.TFF截留率越高越好。（）4.病毒滅活需放在純化最后一步。（）5.緩沖液pH不影響蛋白穩(wěn)定性。（）6.離子交換高鹽洗脫是鹽離子競爭結合。（）7.TFF通量比死端過濾高。（）8.內毒素可通過0.22μm濾膜。（）9.親和洗脫后需立即中和pH。（）10.純化收率越高無需考慮純度。（）第五部分簡答題（4題，5分/題）1.簡述蛋白A層析在單抗純化中的優(yōu)勢及挑戰(zhàn)。2.影響TFF截留率的主要因素有哪些？3.如何確定純化工藝的關鍵工藝參數（CPP）？4.內毒素去除的常用方法及適用場景。第六部分討論題（2題，5分/題）1.單抗蛋白A層析收率突然下降30%，分析可能原因及排查步驟。2.結合ICHQ2，談談對純化工藝驗證的理解，重點說明PPQ關鍵關注點。---答案第一部分填空題答案1.單抗/單克隆抗體2.陰離子3.kDa4.3.0-4.05.分子量/大小6.Na?HPO?/檸檬酸三鈉（合理即可）7.（終產物濃度×終體積）/（初始濃度×初始體積）8.0.229.陰離子交換層析（合理即可）10.特異性第二部分單項選擇題答案1.B2.B3.A4.B5.B6.B7.C8.B9.B10.C第三部分多項選擇題答案1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.AB7.ABCD8.ABCD9.ABCD10.ABCD第四部分判斷題答案1.×2.×3.×4.×5.×6.√7.√8.√9.√10.×第五部分簡答題答案1.優(yōu)勢：①特異性強，直接捕獲單抗Fc段；②初始純度高，去除大部分HCP/DNA；③步驟簡化。挑戰(zhàn)：①樹脂昂貴；②配基易脫落；③低pH洗脫可能影響活性；④再生次數有限。2.①MWCO（越小截留率越高）；②蛋白濃度（濃度升高截留率上升）；③TMP（過高易污染）；④緩沖液pH/鹽濃度（影響蛋白構象）；⑤膜材質（吸附性差異）。3.①風險評估（識別影響CQA的參數）；②DoE實驗（篩選潛在CPP，優(yōu)化范圍）；③工藝驗證（PPQ確認可靠性）；④法規(guī)遵循（ICHQ8要求）。4.①陰離子交換（目標蛋白帶正電時）；②疏水層析（利用疏水結合差異）；③超濾（目標蛋白分子量遠大于內毒素）；④活性炭吸附（粗品初步除雜）。第六部分討論題答案1.可能原因：①樹脂污染（HCP/DNA堵塞）；②洗脫條件偏離（pH/濃度不足）；③上樣量過載；④再生不完全；⑤目標蛋白降解。排查步驟：①檢測上樣液濃度/活性；②驗證洗脫緩沖液參數；③評估樹脂再生記錄；④檢測樹脂結合容量