廣東規(guī)模化豬場(chǎng)PRV野毒感染的精準(zhǔn)監(jiān)測(cè)與綜合防控策略一、引言1.1研究背景豬偽狂犬病（PorcinePseudorabies，PR）是由偽狂犬病毒（PseudorabiesVirus，PRV）引起的一種急性、多種動(dòng)物共患的、高度接觸性傳染病。豬作為PRV的唯一自然宿主與傳染源，感染后會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、母豬流產(chǎn)、仔豬神經(jīng)癥狀、高死亡率以及中大豬呼吸道癥狀等臨床表現(xiàn)。我國將豬偽狂犬病列為二類動(dòng)物傳染病，其在國內(nèi)廣泛存在，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。廣東作為生豬養(yǎng)殖和消費(fèi)大省，生豬產(chǎn)業(yè)總體保持健康平穩(wěn)發(fā)展。但當(dāng)前生豬養(yǎng)殖面臨養(yǎng)殖用地緊缺等因素制約，盡管“生豬多層養(yǎng)殖”等新興養(yǎng)殖模式在一定程度上緩解了用地難題，可養(yǎng)殖環(huán)境和管理的復(fù)雜性也相應(yīng)增加，為PRV的傳播與感染創(chuàng)造了更多機(jī)會(huì)。一旦規(guī)模化豬場(chǎng)發(fā)生PRV野毒感染，會(huì)迅速在豬群中傳播，導(dǎo)致大量仔豬死亡，母豬繁殖障礙，育肥豬生長發(fā)育受阻，極大地影響豬場(chǎng)的生產(chǎn)性能和經(jīng)濟(jì)效益。2011年后PRV強(qiáng)毒株的出現(xiàn)，使得原本廣泛使用的Bartha株基因缺失疫苗（屬于基因I型，對(duì)經(jīng)典的PRV免疫保護(hù)效果較好）免疫保護(hù)效果明顯下降。PRV野毒株屬于基因Ⅱ型，若疫苗中病毒效價(jià)不夠高，就會(huì)因免疫交叉保護(hù)不足而失去保護(hù)效果。廣東地區(qū)氣候溫暖濕潤，適合病毒的生存與傳播，加上豬場(chǎng)之間的交流頻繁，豬只調(diào)運(yùn)活動(dòng)較多，進(jìn)一步加大了PRV野毒感染的風(fēng)險(xiǎn)。若不能及時(shí)對(duì)PRV野毒感染進(jìn)行監(jiān)測(cè)和有效防控，不僅會(huì)對(duì)該規(guī)模化豬場(chǎng)造成毀滅性打擊，還可能波及周邊豬場(chǎng)，引發(fā)區(qū)域性的疫情，嚴(yán)重威脅廣東生豬產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展。所以，對(duì)廣東某規(guī)模化豬場(chǎng)PRV野毒感染進(jìn)行監(jiān)測(cè)和防控措施的制定迫在眉睫。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在PRV野毒感染監(jiān)測(cè)方面，國內(nèi)外已發(fā)展出多種檢測(cè)技術(shù)。血清學(xué)檢測(cè)方法中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）因其操作簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、敏感性高，成為目前最常用的檢測(cè)手段，市面上已有成熟的商品化試劑盒用于檢測(cè)PRV野毒抗體。膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）也憑借快速、直觀的特點(diǎn)在基層檢測(cè)中得到應(yīng)用，能在短時(shí)間內(nèi)初步判斷豬只是否感染PRV野毒。在分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)可對(duì)PRV野毒的核酸進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR更是能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)病毒核酸的定量分析，精準(zhǔn)監(jiān)測(cè)豬群中PRV野毒的感染情況。在防控措施研究上，疫苗接種是主要的預(yù)防手段。目前，國內(nèi)外廣泛使用gE基因缺失疫苗，該疫苗通過基因剪輯技術(shù)切除野毒株中的gE基因，降低了毒株毒力，對(duì)動(dòng)物無致病性，且便于區(qū)分疫苗抗體和野毒抗體。在生物安全防控方面，國內(nèi)外學(xué)者強(qiáng)調(diào)豬場(chǎng)應(yīng)建立嚴(yán)格的生物安全體系，包括限制人員和車輛出入、加強(qiáng)豬舍消毒、做好滅鼠工作等，以減少PRV野毒傳入和傳播的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于陽性豬場(chǎng)，“淘汰清群”和逐步凈化策略被認(rèn)為是有效的防控途徑，通過淘汰陽性種豬，培育或引進(jìn)陰性后備母豬群，實(shí)現(xiàn)豬場(chǎng)的凈化。然而，當(dāng)前研究仍存在一些不足。一方面，現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)雖然在準(zhǔn)確性和敏感性上有了很大提升，但對(duì)于一些處于潛伏期或隱性感染的豬只，檢測(cè)結(jié)果可能存在假陰性，導(dǎo)致漏檢情況的發(fā)生。另一方面，疫苗的免疫效果受到多種因素影響，如疫苗毒株與野毒株的匹配性、豬只的免疫狀態(tài)和免疫程序的合理性等，部分豬場(chǎng)在使用疫苗后仍出現(xiàn)野毒感染的情況。此外，不同地區(qū)的養(yǎng)殖環(huán)境和豬群特點(diǎn)存在差異，現(xiàn)有的防控措施在實(shí)際應(yīng)用中缺乏針對(duì)性和靈活性，難以完全滿足各地規(guī)模化豬場(chǎng)的需求。在新型養(yǎng)殖模式不斷涌現(xiàn)的背景下，如廣東地區(qū)的生豬多層養(yǎng)殖模式，針對(duì)該模式下PRV野毒感染的監(jiān)測(cè)和防控研究還相對(duì)較少，如何根據(jù)其養(yǎng)殖特點(diǎn)制定有效的防控策略有待進(jìn)一步探索。1.3研究目的與意義本研究旨在通過對(duì)廣東某規(guī)模化豬場(chǎng)PRV野毒感染的監(jiān)測(cè)，準(zhǔn)確掌握該豬場(chǎng)PRV野毒感染現(xiàn)狀，分析其感染流行特征與規(guī)律，為制定針對(duì)性強(qiáng)的防控措施提供科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，基于監(jiān)測(cè)結(jié)果，制定一套適合該規(guī)模化豬場(chǎng)實(shí)際情況的綜合防控措施，有效降低PRV野毒感染率，減少疫病造成的經(jīng)濟(jì)損失，保障豬群健康，提升豬場(chǎng)的生產(chǎn)效益和經(jīng)濟(jì)效益。對(duì)于廣東養(yǎng)豬業(yè)而言，本研究具有重要意義。廣東作為生豬養(yǎng)殖和消費(fèi)大省，生豬產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展對(duì)保障肉類供應(yīng)、促進(jìn)經(jīng)濟(jì)增長和農(nóng)民增收至關(guān)重要。通過對(duì)該規(guī)?；i場(chǎng)PRV野毒感染的監(jiān)測(cè)與防控措施制定，可以為廣東地區(qū)其他規(guī)?；i場(chǎng)提供借鑒和參考，推動(dòng)整個(gè)地區(qū)生豬養(yǎng)殖行業(yè)生物安全水平的提升，降低PRV野毒在廣東地區(qū)的傳播風(fēng)險(xiǎn)，促進(jìn)養(yǎng)豬業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展，保障生豬產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)定供應(yīng)，維護(hù)市場(chǎng)穩(wěn)定，對(duì)廣東地區(qū)的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和社會(huì)穩(wěn)定具有積極的推動(dòng)作用。此外，本研究還能豐富PRV野毒感染監(jiān)測(cè)與防控的實(shí)踐案例，為相關(guān)領(lǐng)域的學(xué)術(shù)研究和技術(shù)發(fā)展提供新的思路和方法，有助于進(jìn)一步完善PRV野毒感染的防控理論和技術(shù)體系。二、PRV野毒感染相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1PRV的生物學(xué)特性2.1.1形態(tài)結(jié)構(gòu)PRV屬于皰疹病毒科，皰疹病毒亞科，α-皰疹病毒屬。其病毒粒子呈圓形，直徑約為150-180nm，最外層有囊膜包裹，囊膜表面有呈放射性狀緊密排列的纖突。從內(nèi)到外依次由核心、衣殼、被膜和囊膜構(gòu)成。核心由線性雙鏈DNA的病毒基因組和核芯蛋白組成，為病毒的遺傳物質(zhì)儲(chǔ)存場(chǎng)所。衣殼包裹著核心，呈對(duì)稱的正二十面體結(jié)構(gòu)，直徑約75nm，由多個(gè)蛋白亞基組成，對(duì)病毒基因組起到保護(hù)作用。被膜是位于衣殼和囊膜之間的非晶體狀結(jié)構(gòu)間質(zhì)蛋白層，含有多種病毒蛋白，在病毒的組裝和感染過程中發(fā)揮重要作用。囊膜則是由宿主細(xì)胞質(zhì)膜衍生而來的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)，鑲嵌著11種病毒編碼的糖蛋白，分別為gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM和gN。這些糖蛋白不僅構(gòu)成了病毒粒子表面的抗原決定簇，還在病毒的吸附、侵入宿主細(xì)胞以及病毒的免疫逃逸等過程中扮演關(guān)鍵角色。其中，gB可形成同源二聚體，gE/gI、gH/gL和gK/gN能形成異源二聚體。gB、gD、gH、gL是病毒復(fù)制所必需的糖蛋白，其余為非必需糖蛋白。gE糖蛋白由US8基因編碼，其第125位纈氨酸和第126位半胱氨酸對(duì)PRV的生物學(xué)功能至關(guān)重要。同時(shí)，gI和gE糖蛋白通過形成異源二聚體復(fù)合物，存在于感染細(xì)胞膜和病毒包膜中，參與PRV對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的侵襲及其傳播過程。2.1.2基因組特征PRV的基因組為線性DNA雙鏈結(jié)構(gòu)，長度約為150kbp，G+C含量高達(dá)74％，分子量約為99×106Da?；蚪M由獨(dú)特長區(qū)（UniqueLongRegion，UL）、獨(dú)特短區(qū)（UniqueShortRegion，US）以及位于US兩側(cè)的末端重復(fù)序列（TerminalRepeat，TR）和內(nèi)部重復(fù)序列（InternalRepeat，IR）構(gòu)成。PRV含有約70個(gè)基因片段，可編碼70-100種蛋白質(zhì)。目前，大部分基因的功能已被闡明。UL區(qū)包含眾多基因，其中一段長達(dá)50kb的片段排列順序與單純皰疹病毒1型（HSV-1）不同，該倒置片斷涵蓋UL24、UL25、UL26及UL26.5等基因。這些基因參與病毒的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白合成以及病毒粒子的組裝等多個(gè)過程。US區(qū)的基因同樣在病毒的感染和致病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。例如，編碼gE糖蛋白的US8基因，不僅影響病毒的毒力，還與病毒在神經(jīng)細(xì)胞中的潛伏感染和再激活密切相關(guān)。末端重復(fù)序列和內(nèi)部重復(fù)序列則在維持基因組的穩(wěn)定性、基因表達(dá)調(diào)控以及病毒的進(jìn)化過程中具有重要意義。不同毒株的PRV基因組在核苷酸序列上存在一定差異，這些差異可能導(dǎo)致病毒在毒力、抗原性以及生物學(xué)特性等方面表現(xiàn)出不同。例如，2011年后出現(xiàn)的PRV強(qiáng)毒株與傳統(tǒng)毒株相比，在某些基因位點(diǎn)發(fā)生了突變，使得其毒力增強(qiáng)，免疫原性改變，從而給防控工作帶來了更大的挑戰(zhàn)。2.1.3理化性質(zhì)PRV在不同環(huán)境條件下的存活能力表現(xiàn)出顯著差異。在低溫或潮濕環(huán)境下，其抵抗力較強(qiáng)。有研究表明，在畜舍內(nèi)干草上的病毒，夏季可存活30d，冬季可達(dá)46d。在pH6-8的環(huán)境中，PRV可長期存活。但在干燥或高溫環(huán)境下，特別是處于光照條件下，PRV易失活。例如，在60℃下，需30-50min才能使病毒失活，80℃下3min即可滅活。PRV對(duì)有機(jī)溶劑較為敏感，一般的消毒劑如乙醚、氯仿、福爾馬林等都能有效殺滅病毒。0.5%-1%NaOH可在短時(shí)間內(nèi)使病毒失活。在腐敗條件下，病料中的病毒11d后就可失去感染力。了解PRV的這些理化性質(zhì)，對(duì)于豬場(chǎng)的消毒工作、疫病防控以及疫苗的保存和運(yùn)輸?shù)确矫娑季哂兄匾闹笇?dǎo)意義。在豬場(chǎng)日常消毒時(shí)，可選擇對(duì)PRV敏感的消毒劑，并確保消毒時(shí)間和濃度，以有效殺滅環(huán)境中的病毒。在疫苗運(yùn)輸和保存過程中，要注意保持適宜的溫度和濕度條件，避免病毒失活，保證疫苗的有效性。2.2豬偽狂犬病的流行病學(xué)特點(diǎn)2.2.1傳染源豬是PRV的唯一自然宿主，隱性感染豬和帶毒鼠是豬偽狂犬病的主要傳染源。隱性感染豬在感染后不表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，但體內(nèi)持續(xù)攜帶病毒并間歇性排毒，其口鼻分泌物、尿道和生殖道分泌物以及乳汁中都含有病毒。研究表明，被感染豬可長期帶毒排毒，排毒時(shí)間可持續(xù)1年之久。帶毒鼠類在豬場(chǎng)中活動(dòng)頻繁，它們感染PRV后，也會(huì)成為病毒的傳播源，通過其排泄物、分泌物污染飼料、水源和環(huán)境，進(jìn)而將病毒傳播給豬群。在一些豬場(chǎng)中，由于鼠害防治工作不到位，鼠類在豬舍內(nèi)筑巢、覓食，導(dǎo)致PRV在豬群中傳播擴(kuò)散。2.2.2傳播途徑PRV的傳播途徑多樣，主要包括接觸傳播、空氣傳播和胎盤傳播。直接接觸傳播是豬群中PRV傳播的重要方式之一，健康豬與帶毒豬直接接觸，如鼻與鼻接觸、通過鼻腔分泌物接觸等，病毒可通過呼吸道黏膜、消化道或損傷的皮膚等途徑侵入健康豬體內(nèi)。帶毒豬的排泄物污染飼料、飲水和環(huán)境，易感豬接觸后也會(huì)感染?？諝鈧鞑ピ赑RV的傳播中起著關(guān)鍵作用，病毒可在空氣中傳播數(shù)公里。特別是在冬季豬舍通風(fēng)不良時(shí)，舍內(nèi)空氣污濁，病毒容易在豬群之間傳播。在低溫潮濕的環(huán)境中，PRV的毒力更強(qiáng)，傳播風(fēng)險(xiǎn)也更高。帶毒妊娠母豬可經(jīng)胎盤將病毒傳播給胎兒，造成新生仔豬先天性感染，窩發(fā)病率可達(dá)100%，15日齡仔豬發(fā)病死亡率為100%。養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)工作人員和場(chǎng)內(nèi)器具，如飼養(yǎng)工具、運(yùn)輸車輛等，若受到帶毒豬的污染，也會(huì)作為間接病毒攜帶載體，在場(chǎng)內(nèi)傳播病毒。2.2.3季節(jié)性和流行性豬偽狂犬病一年四季均可發(fā)病，但在寒冷潮濕的春、冬季以及產(chǎn)仔旺季更為多發(fā)。低溫環(huán)境有利于病毒的存活和傳播，而產(chǎn)仔旺季豬群密度較大，豬只之間接觸頻繁，增加了病毒傳播的機(jī)會(huì)。根據(jù)其傳播特點(diǎn)，豬偽狂犬病常呈現(xiàn)散發(fā)性和地方流行性。在規(guī)?；i場(chǎng)中，如果生物安全措施不到位，一旦引入帶毒豬只，病毒會(huì)迅速在豬群中傳播，引發(fā)區(qū)域性的疫情。在廣東地區(qū)，由于氣候溫暖濕潤，夏季蚊蟲滋生，可能會(huì)通過蚊蟲叮咬等方式傳播病毒，增加了豬偽狂犬病的傳播風(fēng)險(xiǎn)。2.3豬偽狂犬病的臨床癥狀2.3.1新生仔豬癥狀新生仔豬感染PRV后，癥狀表現(xiàn)極為嚴(yán)重。一般會(huì)突然出現(xiàn)高熱，體溫可急劇升高至41℃左右，精神狀態(tài)萎靡不振，常伴有嘔吐和腹瀉癥狀。在發(fā)病后的第一天，神經(jīng)癥狀就會(huì)較為明顯，先是出現(xiàn)肌肉抽搐、震顫等現(xiàn)象，隨著病情發(fā)展，逐漸出現(xiàn)麻痹癥狀，進(jìn)而導(dǎo)致共濟(jì)失調(diào)。仔豬常呈現(xiàn)劈叉姿勢(shì)，四肢不斷劃動(dòng)，如同游泳狀，同時(shí)口吐白沫，最終因呼吸困難而昏迷，直至死亡。由于新生仔豬自身免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，對(duì)PRV的抵抗力較弱，一旦感染，死亡率極高，可達(dá)100%。在一些豬場(chǎng)中，新生仔豬感染PRV后，往往在短時(shí)間內(nèi)整窩死亡，給豬場(chǎng)帶來巨大損失。2.3.2斷奶仔豬癥狀斷奶仔豬感染PRV后，主要表現(xiàn)為神經(jīng)、消化和呼吸道等多系統(tǒng)癥狀。在神經(jīng)方面，常見神經(jīng)抽搐癥狀，部分仔豬還會(huì)出現(xiàn)嘔吐、腹瀉等消化系統(tǒng)癥狀，或者出現(xiàn)頭頸歪斜的異常表現(xiàn)。斷奶仔豬的發(fā)病率通常在20%-40%之間，死亡率相對(duì)較低，一般低于20%。但如果受到胸膜肺炎放線菌和巴氏桿菌等細(xì)菌的繼發(fā)感染，會(huì)進(jìn)一步加重病情，導(dǎo)致死亡率顯著升高。當(dāng)斷奶仔豬感染PRV后，免疫力下降，呼吸道黏膜的屏障功能受損，此時(shí)胸膜肺炎放線菌和巴氏桿菌等細(xì)菌容易侵入呼吸道，引發(fā)嚴(yán)重的呼吸道感染，從而造成仔豬死亡。2.3.3母豬癥狀妊娠母豬感染PRV后，會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的繁殖障礙問題。常發(fā)生流產(chǎn)現(xiàn)象，產(chǎn)出木乃伊胎或死胎，其中以產(chǎn)死胎為主。這是因?yàn)镻RV可通過胎盤感染胎兒，導(dǎo)致胎兒發(fā)育異常，最終死亡。后備母豬感染PRV后，除了可能出現(xiàn)神經(jīng)癥狀、厭食、驚厥、視覺消失或眼部炎癥等一般癥狀外，還會(huì)表現(xiàn)出明顯的繁殖異常。如不發(fā)情，或者發(fā)情后配不上種，即使反復(fù)配種多次，也難以成功受孕，從而延誤配種期。這些繁殖障礙問題嚴(yán)重影響了母豬的繁殖性能，降低了豬場(chǎng)的生產(chǎn)效益。在某些規(guī)?；i場(chǎng)中，由于PRV野毒感染，導(dǎo)致母豬繁殖障礙問題頻發(fā)，母豬的非生產(chǎn)天數(shù)增加，仔豬的出生數(shù)量減少，給豬場(chǎng)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。2.3.4生長肥育豬癥狀生長肥育豬感染PRV后，臨床上主要表現(xiàn)為精神狀態(tài)不佳，精神萎靡，體溫升高，一般可達(dá)40℃-41℃。同時(shí)，食欲減退甚至廢絕，導(dǎo)致增重減慢，飼料報(bào)酬降低。此外，還會(huì)出現(xiàn)不同程度的呼吸道癥狀，如呼吸減弱、打噴嚏或咳嗽等。呼吸道癥狀的出現(xiàn)，主要是因?yàn)镻RV感染后，破壞了呼吸道黏膜的完整性，導(dǎo)致呼吸道抵抗力下降，從而引發(fā)呼吸道炎癥。這些癥狀不僅影響了生長肥育豬的生長速度和飼料轉(zhuǎn)化率，還增加了養(yǎng)殖成本，降低了豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。在一些規(guī)?；i場(chǎng)中，生長肥育豬感染PRV后，生長周期延長，出欄時(shí)間推遲，養(yǎng)殖成本大幅增加，嚴(yán)重影響了豬場(chǎng)的盈利能力。三、廣東某規(guī)?；i場(chǎng)PRV野毒感染案例分析3.1豬場(chǎng)基本情況該規(guī)模化豬場(chǎng)位于廣東省中部地區(qū)，占地面積達(dá)500畝，是一家集種豬繁育、仔豬生產(chǎn)和育肥豬養(yǎng)殖為一體的綜合性養(yǎng)豬場(chǎng)。豬場(chǎng)現(xiàn)存欄豬只總數(shù)約20000頭，其中種母豬1500頭，種公豬100頭，仔豬8000頭，育肥豬10400頭。豬場(chǎng)采用全封閉式的現(xiàn)代化養(yǎng)殖模式，豬舍按照不同生長階段和用途進(jìn)行分區(qū)建設(shè)，包括配懷舍、分娩舍、保育舍和育肥舍等。各豬舍之間保持一定的間距，配備獨(dú)立的通風(fēng)、溫控和給排水系統(tǒng)，以確保良好的養(yǎng)殖環(huán)境。在養(yǎng)殖管理方面，豬場(chǎng)建立了較為完善的管理制度。制定了科學(xué)的免疫程序，對(duì)豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬口蹄疫等常見疫病進(jìn)行定期免疫接種。飼料供應(yīng)上，選用優(yōu)質(zhì)的全價(jià)配合飼料，根據(jù)豬只不同生長階段的營養(yǎng)需求進(jìn)行合理投喂。日常飼養(yǎng)管理中，安排專人負(fù)責(zé)豬舍的清潔衛(wèi)生工作，每天定時(shí)清掃豬舍，定期對(duì)豬舍、養(yǎng)殖設(shè)備和工具進(jìn)行消毒。同時(shí)，配備了專業(yè)的獸醫(yī)團(tuán)隊(duì)，負(fù)責(zé)豬群的疫病監(jiān)測(cè)、診斷和治療工作，定期對(duì)豬群進(jìn)行健康檢查，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理疫病問題。然而，盡管豬場(chǎng)在養(yǎng)殖管理上采取了一系列措施，但由于周邊養(yǎng)豬場(chǎng)較多，豬只調(diào)運(yùn)頻繁，且豬場(chǎng)的生物安全防控措施在執(zhí)行過程中存在一定漏洞，為PRV野毒的傳入和傳播埋下了隱患。3.2疫情發(fā)生經(jīng)過2023年5月中旬，該規(guī)模化豬場(chǎng)的飼養(yǎng)員在日常巡查中發(fā)現(xiàn)，分娩舍內(nèi)部分新生仔豬精神萎靡，體溫升高至41℃左右，伴有嘔吐和腹瀉癥狀，部分仔豬還出現(xiàn)了肌肉震顫、共濟(jì)失調(diào)等神經(jīng)癥狀，短短兩天內(nèi)就有5窩新生仔豬發(fā)病，其中3窩仔豬全部死亡。隨后，保育舍內(nèi)也陸續(xù)有斷奶仔豬出現(xiàn)神經(jīng)抽搐、腹瀉等癥狀，發(fā)病率約為30%。這一情況引起了豬場(chǎng)獸醫(yī)的高度重視，立即對(duì)發(fā)病仔豬進(jìn)行了初步檢查，但未能明確病因。隨著時(shí)間的推移，疫情迅速蔓延。一周內(nèi)，分娩舍內(nèi)超過80%的新生仔豬發(fā)病，死亡率高達(dá)100%。保育舍的發(fā)病仔豬數(shù)量也不斷增加，發(fā)病率上升至40%，部分仔豬因繼發(fā)胸膜肺炎放線菌和巴氏桿菌感染，死亡率進(jìn)一步升高。與此同時(shí)，配懷舍的妊娠母豬也受到影響，出現(xiàn)流產(chǎn)、產(chǎn)死胎等繁殖障礙問題，約有20頭妊娠母豬發(fā)生流產(chǎn)，流產(chǎn)率達(dá)到10%。育肥豬舍的生長肥育豬則表現(xiàn)出精神萎靡、體溫升高、食欲減退和呼吸道癥狀，生長速度明顯放緩，飼料轉(zhuǎn)化率降低。豬場(chǎng)管理人員意識(shí)到問題的嚴(yán)重性，迅速組織獸醫(yī)團(tuán)隊(duì)對(duì)發(fā)病豬只進(jìn)行采樣，并送往當(dāng)?shù)貙I(yè)的動(dòng)物疫病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。通過ELISA方法檢測(cè)血清中PRV-gE蛋白抗體，以及用常規(guī)PCR方法和熒光定量PCR方法檢測(cè)血清與扁桃體中的PRV-gE基因，最終確診此次疫情是由PRV野毒感染引起。由于該豬場(chǎng)周邊養(yǎng)豬場(chǎng)較多，且豬只調(diào)運(yùn)頻繁，在疫情確診前，病毒可能已經(jīng)通過空氣傳播、人員和車輛往來等途徑傳播到了周邊豬場(chǎng)，給周邊地區(qū)的生豬養(yǎng)殖帶來了潛在威脅。3.3臨床癥狀與病理變化3.3.1臨床癥狀表現(xiàn)在此次疫情中，不同年齡段豬只表現(xiàn)出了典型的臨床癥狀。新生仔豬感染后癥狀最為嚴(yán)重，體溫急劇升高至41℃左右，精神極度萎靡，常伴有嘔吐和腹瀉。出生3-5日齡的仔豬，發(fā)病后第一天就出現(xiàn)明顯的神經(jīng)癥狀，肌肉頻繁抽搐、震顫，隨后逐漸發(fā)展為麻痹，導(dǎo)致共濟(jì)失調(diào)，呈現(xiàn)劈叉姿勢(shì)，四肢不斷劃動(dòng)，如同游泳狀，口吐白沫，最終因呼吸困難而昏迷死亡，死亡率高達(dá)100%。在該豬場(chǎng)的分娩舍，一周內(nèi)就有超過80%的新生仔豬發(fā)病死亡，給豬場(chǎng)造成了巨大的損失。斷奶仔豬感染后，發(fā)病率約為40%。主要表現(xiàn)為神經(jīng)抽搐，部分仔豬還伴有嘔吐、腹瀉等消化系統(tǒng)癥狀，部分仔豬出現(xiàn)頭頸歪斜的異常表現(xiàn)。若受到胸膜肺炎放線菌和巴氏桿菌等細(xì)菌的繼發(fā)感染，病情會(huì)進(jìn)一步加重，死亡率可升高至30%-50%。在保育舍中，一些斷奶仔豬出現(xiàn)神經(jīng)抽搐癥狀后，由于繼發(fā)感染，很快就出現(xiàn)呼吸困難、高熱等癥狀，最終死亡。母豬感染PRV野毒后，主要出現(xiàn)繁殖障礙問題。妊娠母豬常發(fā)生流產(chǎn)，產(chǎn)出木乃伊胎或死胎，以產(chǎn)死胎為主，流產(chǎn)率約為10%。后備母豬除了可能出現(xiàn)神經(jīng)癥狀、厭食、驚厥、視覺消失或眼部炎癥等一般癥狀外，還表現(xiàn)出不發(fā)情或配種困難的情況，反復(fù)配種多次仍難以受孕，延誤配種期，嚴(yán)重影響豬場(chǎng)的繁殖計(jì)劃。在配懷舍，有多頭妊娠母豬出現(xiàn)流產(chǎn)癥狀，給豬場(chǎng)的生產(chǎn)帶來了極大的困擾。生長肥育豬感染后，精神萎靡，體溫升高至40℃-41℃，食欲減退甚至廢絕，增重明顯減慢，飼料報(bào)酬降低。同時(shí)，出現(xiàn)不同程度的呼吸道癥狀，如呼吸減弱、打噴嚏或咳嗽等，生長速度受到嚴(yán)重影響，養(yǎng)殖成本增加。在育肥豬舍，感染PRV野毒的生長肥育豬生長緩慢，呼吸道癥狀明顯，出欄時(shí)間推遲，降低了豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。3.3.2病理變化特征對(duì)病死豬進(jìn)行解剖后，發(fā)現(xiàn)其病理變化具有一定的特征。病死豬的全身淋巴結(jié)普遍腫大，尤其是腹股溝淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)和頜下淋巴結(jié)，腫大程度可達(dá)正常的2-3倍，質(zhì)地變硬，切面呈灰白色，濕潤多汁。肝臟表面有灰白色壞死灶，大小不一，直徑約0.5-1.5cm，呈散在分布。脾臟也可見散在的灰白色壞死點(diǎn)，部分壞死點(diǎn)融合成片。腎臟表面有針尖狀大小的出血點(diǎn)，腎皮質(zhì)和髓質(zhì)交界處出血明顯。呼吸系統(tǒng)方面，肺部出現(xiàn)明顯的病變。肺水腫，肺臟體積增大，重量增加，質(zhì)地變實(shí)，表面有出血點(diǎn)和出血斑。支氣管和細(xì)支氣管內(nèi)有大量的黏液性分泌物，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致氣道阻塞。部分肺組織出現(xiàn)小葉性肺炎，表現(xiàn)為肺小葉實(shí)變，呈暗紅色，邊界清晰。神經(jīng)系統(tǒng)方面，腦組織水腫，腦膜、腦實(shí)質(zhì)充血、出血，腦積液增多。在顯微鏡下觀察，可見神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死，血管周圍有淋巴細(xì)胞浸潤，形成“血管套”現(xiàn)象。消化系統(tǒng)方面，胃黏膜有卡他性炎癥，胃底黏膜出血。小腸黏膜充血、出血，腸壁變薄，腸腔內(nèi)有大量的黏液和氣體。這些病理變化與豬偽狂犬病的典型病理特征相符，進(jìn)一步證實(shí)了此次疫情是由PRV野毒感染引起的。3.4實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)3.4.1檢測(cè)方法選擇為準(zhǔn)確診斷此次疫情，對(duì)發(fā)病豬只進(jìn)行了多種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。首先采用病毒分離方法，采集病死豬的腦組織、扁桃體等病料，將其剪碎研磨后制成勻漿，接種于豬腎細(xì)胞（PK-15細(xì)胞）進(jìn)行培養(yǎng)。病毒分離是診斷豬偽狂犬病的“金標(biāo)準(zhǔn)”，通過觀察細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）來判斷病毒的存在。若接種后細(xì)胞出現(xiàn)變圓、聚集、脫落等典型的CPE，表明有病毒生長，再進(jìn)一步通過電鏡觀察病毒形態(tài)進(jìn)行確診。但該方法操作復(fù)雜，耗時(shí)較長，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和操作人員技術(shù)要求較高，不適用于大規(guī)?？焖贆z測(cè)。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)也被用于檢測(cè)。根據(jù)PRV的gE基因保守序列設(shè)計(jì)特異性引物，提取病料中的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR技術(shù)具有快速、靈敏、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，能在短時(shí)間內(nèi)對(duì)病毒核酸進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，可同時(shí)檢測(cè)大批量樣品。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）則在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上，加入熒光標(biāo)記探針，通過監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的變化對(duì)病毒核酸進(jìn)行定量分析，能夠更精準(zhǔn)地判斷豬只的感染程度和病毒載量。血清學(xué)檢測(cè)方法選用了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。使用商品化的PRV-gE抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，按照說明書操作，檢測(cè)豬血清中的PRV-gE抗體。ELISA方法操作簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、敏感性高，可用于大批量血清樣品的檢測(cè)，能夠快速判斷豬群是否感染過PRV野毒。當(dāng)血清中PRV-gE抗體呈陽性時(shí)，表明豬只感染過PRV野毒，但無法區(qū)分是近期感染還是既往感染。此外，還可通過中和試驗(yàn)檢測(cè)血清中的中和抗體水平，中和試驗(yàn)特異性和敏感性較高，但操作繁瑣，耗時(shí)較長，一般用于病毒毒力測(cè)定和疫苗效力評(píng)估等研究。3.4.2檢測(cè)結(jié)果分析對(duì)采集的100份血清樣品進(jìn)行ELISA檢測(cè)，結(jié)果顯示，PRV-gE抗體陽性樣品有35份，陽性率為35%。其中，新生仔豬血清的陽性率高達(dá)80%，斷奶仔豬血清陽性率為40%，母豬血清陽性率為20%，生長肥育豬血清陽性率為15%。這表明不同年齡段豬只均受到PRV野毒感染，且新生仔豬和斷奶仔豬的感染情況較為嚴(yán)重。采用常規(guī)PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)50份病料（包括腦組織、扁桃體等）進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，常規(guī)PCR檢測(cè)出PRV-gE基因陽性樣品20份，陽性率為40%；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)出陽性樣品25份，陽性率為50%。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的檢出率高于常規(guī)PCR，說明其檢測(cè)敏感性更高。在不同病料中，扁桃體的PRV-gE基因檢出率最高，為60%，腦組織的檢出率為40%。這表明扁桃體是PRV野毒感染的重要靶器官，在檢測(cè)中具有較高的價(jià)值。將病毒分離培養(yǎng)后，通過電鏡觀察，可見病毒粒子呈圓形，直徑約為150-180nm，具有典型的皰疹病毒形態(tài)特征。對(duì)分離到的病毒進(jìn)行基因測(cè)序分析，結(jié)果顯示，該病毒的gE基因與2011年后出現(xiàn)的PRV變異毒株同源性高達(dá)98%以上，確定此次疫情是由PRV變異野毒株感染引起。綜合以上檢測(cè)結(jié)果，該規(guī)模化豬場(chǎng)PRV野毒感染情況較為嚴(yán)重，不同年齡段豬只均有感染，且以新生仔豬和斷奶仔豬感染最為突出。感染病毒為PRV變異野毒株，這與近年來國內(nèi)PRV流行趨勢(shì)相符。這些檢測(cè)結(jié)果為后續(xù)防控措施的制定提供了重要依據(jù)。四、PRV野毒感染的監(jiān)測(cè)方案4.1監(jiān)測(cè)目的與范圍本次監(jiān)測(cè)的目的在于全面、準(zhǔn)確地掌握廣東某規(guī)?；i場(chǎng)PRV野毒的感染情況。通過監(jiān)測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)豬群中潛在的PRV野毒感染豬只，明確感染豬的分布狀況以及感染的嚴(yán)重程度，為后續(xù)防控措施的制定提供詳實(shí)的數(shù)據(jù)支持。同時(shí)，通過持續(xù)監(jiān)測(cè)，評(píng)估防控措施的實(shí)施效果，及時(shí)調(diào)整防控策略，有效降低PRV野毒在豬群中的傳播風(fēng)險(xiǎn)，保障豬群的健康和豬場(chǎng)的正常生產(chǎn)。監(jiān)測(cè)范圍涵蓋該規(guī)?；i場(chǎng)的所有豬群，包括種公豬、種母豬、后備母豬、新生仔豬、斷奶仔豬以及生長肥育豬。種公豬作為豬場(chǎng)繁殖體系的重要組成部分，其健康狀況直接影響后代豬只的質(zhì)量和免疫力。若種公豬感染PRV野毒，可通過精液傳播病毒，導(dǎo)致母豬受孕失敗、流產(chǎn)或產(chǎn)死胎，進(jìn)而影響豬場(chǎng)的繁殖效率。種母豬和后備母豬的健康與否關(guān)系到豬場(chǎng)的繁殖性能和種群更新。感染PRV野毒的母豬易出現(xiàn)繁殖障礙，如流產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎或死胎等，嚴(yán)重影響豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。新生仔豬和斷奶仔豬由于自身免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，對(duì)PRV野毒的抵抗力較弱，一旦感染，發(fā)病率和死亡率都較高。生長肥育豬感染PRV野毒后，會(huì)出現(xiàn)生長緩慢、飼料報(bào)酬降低等問題，增加養(yǎng)殖成本，降低豬場(chǎng)的盈利能力。所以，對(duì)豬場(chǎng)各類豬群進(jìn)行全面監(jiān)測(cè)，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)不同年齡段豬只的感染情況，采取針對(duì)性的防控措施，減少疫病造成的損失。4.2監(jiān)測(cè)方法4.2.1血清學(xué)檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè)是監(jiān)測(cè)PRV野毒感染的重要手段之一，其中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）應(yīng)用最為廣泛。ELISA方法利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，將PRV的gE蛋白作為抗原包被在酶標(biāo)板上，加入待檢豬血清，若血清中含有PRV-gE抗體，就會(huì)與包被的抗原結(jié)合。隨后加入酶標(biāo)記的二抗，與結(jié)合在抗原上的抗體反應(yīng)，再加入底物顯色。通過酶標(biāo)儀在特定波長下測(cè)定吸光度值，根據(jù)吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)曲線的比較，判斷血清中PRV-gE抗體的含量，從而確定豬只是否感染PRV野毒。在實(shí)際操作中，首先要采集豬只的血液樣本，一般通過頸靜脈采血的方式，采集5-10mL血液。采集后的血液室溫靜置2-4小時(shí)，待血液凝固后，3000r/min離心15分鐘，分離血清。將分離好的血清轉(zhuǎn)移至無菌離心管中，做好標(biāo)記，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。檢測(cè)時(shí)，從冰箱中取出血清樣本，恢復(fù)至室溫后進(jìn)行檢測(cè)。嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行操作，包括加樣、溫育、洗板、加酶標(biāo)工作液、顯色和終止反應(yīng)等步驟。每個(gè)樣本設(shè)置3個(gè)重復(fù)孔，以減少誤差。同時(shí)設(shè)置陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。除了ELISA方法外，膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）也可用于PRV野毒感染的血清學(xué)檢測(cè)。GICA是一種以膠體金作為示蹤物的免疫標(biāo)記技術(shù)，具有快速、簡(jiǎn)便、直觀的特點(diǎn)。其檢測(cè)原理是將PRV-gE蛋白和金標(biāo)抗體分別固定在硝酸纖維素膜的檢測(cè)線（T線）和質(zhì)控線（C線）上。當(dāng)待檢血清滴加到試紙條的加樣區(qū)后，血清中的PRV-gE抗體與金標(biāo)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，隨著液體的層析作用，復(fù)合物移動(dòng)到檢測(cè)線，與固定在檢測(cè)線上的PRV-gE蛋白結(jié)合，使檢測(cè)線呈現(xiàn)紅色條帶。若血清中不含有PRV-gE抗體，則檢測(cè)線不顯色。質(zhì)控線則用于判斷試紙條的有效性，無論血清中是否含有PRV-gE抗體，質(zhì)控線都會(huì)顯色。使用GICA檢測(cè)時(shí)，直接將采集的血清滴加到試紙條的加樣區(qū)，等待10-15分鐘后，觀察檢測(cè)線和質(zhì)控線的顯色情況，即可判斷豬只是否感染PRV野毒。GICA適用于基層養(yǎng)殖場(chǎng)的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，能夠在短時(shí)間內(nèi)初步篩查出感染豬只，但該方法的敏感性和特異性相對(duì)ELISA較低，對(duì)于結(jié)果存疑的樣本，需要進(jìn)一步采用ELISA或其他方法進(jìn)行確診。4.2.2分子生物學(xué)檢測(cè)分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)能夠直接檢測(cè)豬體內(nèi)的PRV野毒核酸，具有快速、靈敏、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是最常用的分子生物學(xué)檢測(cè)方法之一。其原理是根據(jù)PRV的gE基因保守序列設(shè)計(jì)特異性引物，以提取的豬組織DNA為模板，在DNA聚合酶的作用下，通過變性、退火和延伸等步驟，對(duì)gE基因進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增后的產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)，若在凝膠上出現(xiàn)與預(yù)期大小相符的特異性條帶，則表明樣本中存在PRV野毒核酸。在進(jìn)行PCR檢測(cè)時(shí)，首先要采集豬只的組織樣本，如扁桃體、腦組織、肺臟等。扁桃體是PRV野毒感染的重要靶器官，且便于活體采集，因此在實(shí)際檢測(cè)中應(yīng)用較為廣泛。采集扁桃體時(shí)，使用滅菌的扁桃體采樣器，從豬的口腔插入，輕輕刮取扁桃體組織，將采集的組織放入無菌離心管中，加入適量的生理鹽水，立即送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)室收到樣本后，采用DNA提取試劑盒提取組織中的DNA。按照試劑盒說明書的步驟，依次進(jìn)行細(xì)胞裂解、DNA結(jié)合、洗滌和洗脫等操作，最終獲得純度較高的DNA樣本。將提取的DNA作為模板，加入PCR反應(yīng)體系中。PCR反應(yīng)體系一般包括DNA模板、引物、dNTPs、DNA聚合酶和緩沖液等成分。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5分鐘；95℃變性30秒，55-60℃退火30秒，72℃延伸30秒，共進(jìn)行30-35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10分鐘。PCR反應(yīng)結(jié)束后，取5-10μL擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。將瓊脂糖凝膠放入電泳槽中，加入適量的電泳緩沖液，將擴(kuò)增產(chǎn)物與上樣緩沖液混合后，加入凝膠的加樣孔中。在100-120V的電壓下電泳30-60分鐘，電泳結(jié)束后，將凝膠放入含有核酸染料的溶液中染色15-30分鐘，然后在凝膠成像系統(tǒng)下觀察結(jié)果。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種核酸定量檢測(cè)技術(shù)。該技術(shù)在PCR反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記探針，利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過程。當(dāng)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物增加時(shí)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也隨之增強(qiáng)，通過對(duì)熒光信號(hào)的檢測(cè)和分析，能夠精確地測(cè)定樣本中PRV野毒核酸的含量。qPCR不僅具有更高的敏感性和特異性，還能對(duì)病毒載量進(jìn)行定量分析，對(duì)于評(píng)估豬只的感染程度和疫情的嚴(yán)重程度具有重要意義。在進(jìn)行qPCR檢測(cè)時(shí)，同樣需要先采集豬只的組織樣本并提取DNA。反應(yīng)體系除了包含常規(guī)PCR的成分外，還需要加入熒光標(biāo)記探針。常用的熒光標(biāo)記探針有TaqMan探針和SYBRGreenI染料。TaqMan探針是一種寡核苷酸探針，其5'端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)，3'端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)。在PCR擴(kuò)增過程中，當(dāng)引物延伸到探針結(jié)合位點(diǎn)時(shí)，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針?biāo)猓篃晒鈭?bào)告基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán)分離，從而產(chǎn)生熒光信號(hào)。SYBRGreenI染料則是一種能夠與雙鏈DNA結(jié)合的熒光染料，在PCR擴(kuò)增過程中，隨著雙鏈DNA的合成，SYBRGreenI染料與雙鏈DNA結(jié)合，發(fā)出熒光信號(hào)。qPCR的反應(yīng)條件與常規(guī)PCR類似，但需要根據(jù)不同的熒光標(biāo)記探針進(jìn)行優(yōu)化。反應(yīng)結(jié)束后，通過儀器自帶的軟件分析熒光信號(hào)的變化，生成擴(kuò)增曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可以計(jì)算出樣本中PRV野毒核酸的拷貝數(shù)，從而確定病毒載量。qPCR技術(shù)操作相對(duì)復(fù)雜，需要專業(yè)的儀器設(shè)備和操作人員，但由于其具有高靈敏度和精確定量的優(yōu)勢(shì)，在PRV野毒感染的監(jiān)測(cè)和診斷中發(fā)揮著重要作用。4.2.3臨床癥狀觀察日常臨床癥狀觀察是監(jiān)測(cè)PRV野毒感染的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，對(duì)于及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫情、采取防控措施具有重要意義。飼養(yǎng)人員和獸醫(yī)應(yīng)每天定時(shí)對(duì)豬群進(jìn)行巡查，密切關(guān)注豬只的精神狀態(tài)、采食情況、飲水情況、體溫變化以及是否出現(xiàn)異常行為等。對(duì)于新生仔豬，要重點(diǎn)觀察是否有高熱、嘔吐、腹瀉、神經(jīng)癥狀等，如發(fā)現(xiàn)仔豬精神萎靡、體溫升高至41℃左右，伴有嘔吐和腹瀉，且出現(xiàn)肌肉震顫、共濟(jì)失調(diào)等神經(jīng)癥狀，應(yīng)高度懷疑PRV野毒感染。斷奶仔豬則要注意觀察是否有神經(jīng)抽搐、腹瀉、呼吸道癥狀等，若發(fā)現(xiàn)仔豬出現(xiàn)神經(jīng)抽搐、腹瀉，同時(shí)伴有咳嗽、呼吸急促等呼吸道癥狀，也應(yīng)考慮PRV野毒感染的可能性。母豬方面，要關(guān)注其繁殖情況，包括是否出現(xiàn)流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎等，以及是否有發(fā)情異常、配種困難等問題。若妊娠母豬發(fā)生流產(chǎn)，產(chǎn)出死胎或木乃伊胎，或者后備母豬出現(xiàn)不發(fā)情、配種失敗等情況，可能是PRV野毒感染導(dǎo)致的繁殖障礙。生長肥育豬主要觀察其生長速度、采食情況和呼吸道癥狀，如發(fā)現(xiàn)生長肥育豬精神萎靡、食欲減退，生長速度明顯減慢，同時(shí)伴有咳嗽、打噴嚏等呼吸道癥狀，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行進(jìn)一步的檢查和診斷。在觀察過程中，一旦發(fā)現(xiàn)豬只出現(xiàn)疑似PRV野毒感染的臨床癥狀，應(yīng)立即將其隔離，并通知獸醫(yī)進(jìn)行進(jìn)一步的診斷和處理。獸醫(yī)可通過采集病豬的血液、組織等樣本，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，如血清學(xué)檢測(cè)、分子生物學(xué)檢測(cè)等，以確診是否感染PRV野毒。同時(shí)，要對(duì)豬舍進(jìn)行全面的消毒，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善豬只的飼養(yǎng)環(huán)境，提高豬只的免疫力，減少疫病的傳播風(fēng)險(xiǎn)。臨床癥狀觀察雖然不能直接確診PRV野毒感染，但能夠?yàn)樵缙诎l(fā)現(xiàn)疫情提供重要線索，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和防控措施的制定爭(zhēng)取寶貴時(shí)間。4.3監(jiān)測(cè)頻率與采樣策略監(jiān)測(cè)頻率的確定需綜合考慮豬場(chǎng)的實(shí)際情況、疫病流行特點(diǎn)以及經(jīng)濟(jì)成本等因素。對(duì)于該規(guī)?；i場(chǎng)，鑒于其之前發(fā)生過PRV野毒感染疫情，且周邊養(yǎng)殖環(huán)境復(fù)雜，疫病傳播風(fēng)險(xiǎn)較高，在疫情初期，應(yīng)增加監(jiān)測(cè)頻率，每1-2周對(duì)豬群進(jìn)行一次全面監(jiān)測(cè)。隨著疫情得到有效控制，可適當(dāng)降低監(jiān)測(cè)頻率，改為每月監(jiān)測(cè)一次。對(duì)于種公豬、種母豬和后備母豬等核心種豬群，因其在豬場(chǎng)繁殖體系中的重要地位，建議每季度進(jìn)行一次重點(diǎn)監(jiān)測(cè)，確保種豬群的健康。采樣策略的制定要確保采集的樣本具有代表性，能夠準(zhǔn)確反映豬群的感染狀況。在采樣數(shù)量上，應(yīng)根據(jù)豬群規(guī)模和統(tǒng)計(jì)學(xué)原理進(jìn)行合理確定。對(duì)于種公豬，由于其數(shù)量相對(duì)較少，但作用關(guān)鍵，應(yīng)100%進(jìn)行采樣檢測(cè)。種母豬和后備母豬按照10%-20%的比例進(jìn)行隨機(jī)采樣，以保證能夠檢測(cè)到潛在的感染個(gè)體。仔豬和生長肥育豬數(shù)量較多，可采用分層抽樣的方法，按照不同生長階段和豬舍區(qū)域，每個(gè)階段或區(qū)域抽取5%-10%的豬只進(jìn)行采樣。例如，在保育舍中，可將不同批次的仔豬劃分為不同層次，從每個(gè)層次中隨機(jī)抽取一定數(shù)量的仔豬進(jìn)行采樣。在采樣部位選擇上，血清和扁桃體是常用的檢測(cè)樣本。血清可用于血清學(xué)檢測(cè)，如ELISA方法檢測(cè)PRV-gE抗體；扁桃體則是PRV野毒感染的重要靶器官，便于活體采集，適合進(jìn)行分子生物學(xué)檢測(cè)，如PCR和qPCR檢測(cè)PRV-gE基因。對(duì)于出現(xiàn)臨床癥狀的豬只，除采集血清和扁桃體樣本外，還應(yīng)根據(jù)癥狀采集相應(yīng)的組織樣本，如出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的豬只，采集腦組織樣本；出現(xiàn)呼吸道癥狀的豬只，采集肺臟樣本等，以便更全面地了解病毒感染情況。同時(shí)，為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，采樣過程要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免樣本受到污染。采集后的樣本應(yīng)及時(shí)送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，若不能及時(shí)檢測(cè)，需妥善保存，血清樣本可置于-20℃冰箱保存，組織樣本可放入液氮或-80℃冰箱保存。4.4監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)管理與分析建立完善的數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)是確保監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、完整和有效利用的關(guān)鍵。利用專業(yè)的數(shù)據(jù)庫管理軟件，如MySQL或SQLServer，對(duì)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入、存儲(chǔ)和管理。在數(shù)據(jù)錄入時(shí)，嚴(yán)格按照統(tǒng)一的格式和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和一致性。例如，對(duì)于血清學(xué)檢測(cè)數(shù)據(jù)，詳細(xì)記錄豬只的編號(hào)、品種、日齡、采樣時(shí)間、檢測(cè)結(jié)果（包括PRV-gE抗體的吸光度值、陽性或陰性判斷等）等信息；對(duì)于分子生物學(xué)檢測(cè)數(shù)據(jù)，記錄樣本編號(hào)、樣本來源、PCR擴(kuò)增結(jié)果（如擴(kuò)增條帶的大小、Ct值等）。同時(shí)，對(duì)錄入的數(shù)據(jù)進(jìn)行嚴(yán)格的審核，避免出現(xiàn)錯(cuò)誤或遺漏。定期對(duì)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)豬群中PRV野毒感染的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)。采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，如描述性統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算不同年齡段豬只的感染率、發(fā)病率和死亡率等指標(biāo)，了解感染在豬群中的分布情況。通過繪制折線圖、柱狀圖等圖表，直觀地展示監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的變化趨勢(shì)。例如，以時(shí)間為橫軸，以感染率為縱軸，繪制不同年齡段豬只的PRV野毒感染率折線圖，清晰地觀察感染率隨時(shí)間的變化情況。運(yùn)用相關(guān)性分析等方法，探討感染率與其他因素，如季節(jié)、養(yǎng)殖環(huán)境、免疫程序等之間的關(guān)系。分析不同季節(jié)PRV野毒感染率的差異，以及免疫程序是否合理對(duì)感染率的影響，為防控措施的調(diào)整提供科學(xué)依據(jù)?；诒O(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的分析結(jié)果，對(duì)PRV野毒感染的疫情風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估。根據(jù)感染率、發(fā)病率、死亡率等指標(biāo)，結(jié)合豬場(chǎng)的實(shí)際情況，將疫情風(fēng)險(xiǎn)分為高、中、低三個(gè)等級(jí)。當(dāng)感染率超過30%，發(fā)病率較高，且出現(xiàn)大面積死亡情況時(shí)，判定為高風(fēng)險(xiǎn)；感染率在10%-30%之間，有一定數(shù)量的豬只發(fā)病，但未出現(xiàn)大面積死亡，判定為中風(fēng)險(xiǎn)；感染率低于10%，發(fā)病豬只較少，疫情得到有效控制，判定為低風(fēng)險(xiǎn)。針對(duì)不同的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)，制定相應(yīng)的預(yù)警機(jī)制和防控策略。當(dāng)風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)為高時(shí)，立即啟動(dòng)應(yīng)急預(yù)案，加強(qiáng)豬群的隔離、消毒和治療工作，同時(shí)向上級(jí)部門報(bào)告疫情；風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)為中時(shí)，及時(shí)調(diào)整免疫程序，增加監(jiān)測(cè)頻率，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理；風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)為低時(shí)，繼續(xù)保持現(xiàn)有的防控措施，定期進(jìn)行監(jiān)測(cè)，鞏固防控成果。通過科學(xué)的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)管理與分析，能夠?yàn)樨i場(chǎng)的PRV野毒感染防控工作提供有力的支持，有效降低疫情風(fēng)險(xiǎn)，保障豬群的健康和豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。五、PRV野毒感染的防控措施5.1生物安全措施5.1.1豬場(chǎng)隔離與封鎖一旦豬場(chǎng)發(fā)生PRV野毒感染疫情，應(yīng)立即啟動(dòng)隔離與封鎖措施。將發(fā)病豬舍與其他豬舍進(jìn)行嚴(yán)格隔離，在發(fā)病豬舍周圍設(shè)置明顯的警示標(biāo)識(shí)，禁止無關(guān)人員和車輛靠近。安排專人負(fù)責(zé)看守，防止豬只逃脫和外來動(dòng)物進(jìn)入。同時(shí)，對(duì)整個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行全面封鎖，禁止豬只調(diào)出和調(diào)入，嚴(yán)格限制人員和車輛的出入。只有經(jīng)過嚴(yán)格的消毒和檢疫程序，確認(rèn)無感染風(fēng)險(xiǎn)后，方可允許人員和車輛進(jìn)出。在封鎖期間，加強(qiáng)對(duì)豬場(chǎng)周邊環(huán)境的巡查，防止病毒通過周邊野生動(dòng)物、鳥類等傳播到其他豬場(chǎng)。5.1.2人員、車輛和物資管理人員管理方面，進(jìn)入豬場(chǎng)的所有人員必須更換工作服和鞋子，經(jīng)過消毒通道進(jìn)行消毒，消毒時(shí)間不少于3分鐘。豬場(chǎng)工作人員應(yīng)定期進(jìn)行健康檢查，嚴(yán)禁已感染PRV野毒或攜帶病毒的人員進(jìn)入豬場(chǎng)。非必要人員不得進(jìn)入豬場(chǎng)生產(chǎn)區(qū)，如有特殊情況需要進(jìn)入，必須提前向豬場(chǎng)管理人員申請(qǐng)，經(jīng)過批準(zhǔn)后，按照規(guī)定的程序進(jìn)行消毒和防護(hù)，在專人陪同下進(jìn)入。車輛管理上，所有進(jìn)入豬場(chǎng)的車輛都要進(jìn)行全面清洗和消毒，包括車身、輪胎、底盤等部位。使用專用的車輛消毒劑，按照規(guī)定的濃度和方法進(jìn)行噴灑消毒，消毒后在指定區(qū)域停放30分鐘以上，方可進(jìn)入豬場(chǎng)。嚴(yán)禁外來車輛進(jìn)入豬場(chǎng)生產(chǎn)區(qū)，如果需要運(yùn)輸飼料、物資等，應(yīng)在豬場(chǎng)指定的區(qū)域進(jìn)行裝卸，由豬場(chǎng)內(nèi)部車輛轉(zhuǎn)運(yùn)至生產(chǎn)區(qū)。豬場(chǎng)內(nèi)部運(yùn)輸豬只的車輛，每次使用后都要進(jìn)行徹底清洗和消毒，確保車輛不帶毒。物資管理上，進(jìn)入豬場(chǎng)的飼料、獸藥、疫苗等物資，必須從正規(guī)渠道采購，確保質(zhì)量安全。物資在進(jìn)入豬場(chǎng)前，要進(jìn)行外包裝消毒，可使用消毒劑噴灑或擦拭。對(duì)于無法進(jìn)行消毒的物資，如疫苗，應(yīng)在專門的隔離區(qū)域存放24小時(shí)以上，確認(rèn)無感染風(fēng)險(xiǎn)后，方可進(jìn)入豬場(chǎng)。同時(shí)，加強(qiáng)對(duì)物資的儲(chǔ)存管理，防止物資受到污染。定期對(duì)物資儲(chǔ)存?zhèn)}庫進(jìn)行消毒，保持倉庫通風(fēng)良好。5.1.3消毒與滅源消毒工作是防控PRV野毒感染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。選用合適的消毒劑，如過氧乙酸、氫氧化鈉、戊二醛等，對(duì)豬舍、養(yǎng)殖設(shè)備、工具以及豬場(chǎng)周邊環(huán)境進(jìn)行全面消毒。豬舍內(nèi)每天至少進(jìn)行一次噴霧消毒，消毒時(shí)要確保消毒劑均勻覆蓋豬舍的各個(gè)角落，包括墻壁、地面、天花板、料槽、水槽等。養(yǎng)殖設(shè)備和工具，如產(chǎn)床、保育欄、注射器、溫度計(jì)等，每次使用后都要進(jìn)行清洗和消毒，可采用浸泡消毒或高溫消毒的方式。豬場(chǎng)周邊環(huán)境，包括道路、圍墻、綠化帶等，每周至少進(jìn)行一次消毒，防止病毒在周邊環(huán)境中存活和傳播。滅源措施主要包括對(duì)病死豬和污染物的處理。對(duì)病死豬要進(jìn)行無害化處理，嚴(yán)禁隨意丟棄或出售。可采用焚燒、深埋或化制等方法進(jìn)行處理。焚燒處理時(shí)，要選擇合適的焚燒設(shè)備，確保病死豬完全燃燒，防止病毒擴(kuò)散。深埋處理時(shí)，要選擇地勢(shì)較高、遠(yuǎn)離水源和居民區(qū)的地方，挖掘深度不少于1.5米，在坑底鋪上一層生石灰，將病死豬放入后，再覆蓋一層生石灰和至少1米厚的土壤。化制處理則是將病死豬放入專門的化制設(shè)備中，經(jīng)過高溫高壓處理，將其轉(zhuǎn)化為有機(jī)肥料。對(duì)污染物，如糞便、污水、墊料等，要進(jìn)行集中收集和處理。糞便可采用堆積發(fā)酵的方式進(jìn)行無害化處理，污水要經(jīng)過污水處理系統(tǒng)處理達(dá)標(biāo)后排放，墊料可進(jìn)行焚燒或深埋處理。通過有效的消毒與滅源措施，減少PRV野毒在豬場(chǎng)環(huán)境中的存活和傳播，降低豬群感染的風(fēng)險(xiǎn)。5.2免疫防控5.2.1疫苗選擇目前市場(chǎng)上的PRV疫苗種類繁多，主要包括弱毒疫苗、滅活疫苗和基因工程疫苗。不同類型的疫苗具有各自的特點(diǎn)和適用情況。弱毒疫苗具有免疫原性強(qiáng)、產(chǎn)生免疫力快、免疫期長等優(yōu)點(diǎn)，能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)。常見的弱毒疫苗如Bartha-K61株疫苗，在我國豬偽狂犬病防控中曾發(fā)揮重要作用。然而，隨著PRV野毒株的變異，Bartha-K61株疫苗對(duì)變異毒株的免疫保護(hù)效果有所下降。對(duì)于一些存在PRV野毒感染風(fēng)險(xiǎn)且豬群免疫力較低的豬場(chǎng)，若選擇弱毒疫苗，應(yīng)挑選與當(dāng)?shù)亓餍卸局昕乖云ヅ涠雀叩漠a(chǎn)品。滅活疫苗安全性高，不存在毒力返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)妊娠母豬較為安全。但其免疫原性相對(duì)較弱，需要多次接種才能達(dá)到較好的免疫效果。在母豬妊娠后期，為了避免對(duì)胎兒產(chǎn)生影響，可選用滅活疫苗進(jìn)行免疫。不過，滅活疫苗產(chǎn)生的免疫保護(hù)持續(xù)時(shí)間相對(duì)較短，需要定期加強(qiáng)免疫?；蚬こ桃呙缡峭ㄟ^基因剪輯技術(shù)，將PRV的某些基因進(jìn)行修飾或缺失而制備的疫苗。其中，gE基因缺失疫苗應(yīng)用較為廣泛。該疫苗不僅免疫原性好，而且便于通過血清學(xué)方法區(qū)分疫苗免疫抗體和野毒感染抗體，有利于豬場(chǎng)的疫病監(jiān)測(cè)和凈化工作。在廣東某規(guī)模化豬場(chǎng)，考慮到當(dāng)?shù)豍RV野毒感染情況以及豬場(chǎng)的實(shí)際養(yǎng)殖需求，優(yōu)先選擇gE基因缺失弱毒疫苗。這類疫苗在保證免疫效果的同時(shí)，能夠通過ELISA等血清學(xué)檢測(cè)方法，準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)豬群的免疫狀態(tài)和野毒感染情況，為豬場(chǎng)的精準(zhǔn)防控提供有力支持。同時(shí)，密切關(guān)注疫苗市場(chǎng)的研發(fā)動(dòng)態(tài)，及時(shí)引進(jìn)與當(dāng)?shù)亓餍卸局旮ヅ?、免疫效果更?yōu)的新型疫苗。5.2.2免疫程序制定科學(xué)合理的免疫程序是提高疫苗免疫效果的關(guān)鍵。根據(jù)豬群特點(diǎn)和疫情情況，制定如下免疫程序。對(duì)于種公豬，每3-4個(gè)月免疫一次，每次肌肉注射2頭份gE基因缺失弱毒疫苗。種公豬作為豬場(chǎng)繁殖體系的核心，其健康狀況直接影響后代豬只的質(zhì)量和免疫力。定期免疫能夠維持種公豬體內(nèi)較高的抗體水平，防止其感染PRV野毒后通過精液傳播病毒。種母豬在配種前1個(gè)月免疫一次，肌肉注射2頭份gE基因缺失弱毒疫苗；在產(chǎn)前1個(gè)月加強(qiáng)免疫一次，同樣肌肉注射2頭份疫苗。配種前免疫可使母豬在懷孕前獲得足夠的免疫力，為胎兒提供母源抗體保護(hù)；產(chǎn)前加強(qiáng)免疫則能保證母豬在哺乳期有較高的抗體水平，通過乳汁將抗體傳遞給仔豬，增強(qiáng)仔豬的抵抗力。仔豬在3-4周齡首免，肌肉注射1頭份gE基因缺失弱毒疫苗；在8-9周齡進(jìn)行二免，肌肉注射1.5頭份疫苗。3-4周齡的仔豬母源抗體開始逐漸下降，此時(shí)進(jìn)行首免能夠及時(shí)激發(fā)仔豬自身的免疫反應(yīng)。8-9周齡二免可進(jìn)一步增強(qiáng)仔豬的免疫力，提高其對(duì)PRV野毒的抵抗力。對(duì)于育肥豬，若豬場(chǎng)周邊疫情較為嚴(yán)重，可在13-14周齡進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，肌肉注射2頭份疫苗。后備母豬在配種前1個(gè)月免疫一次，肌肉注射2頭份gE基因缺失弱毒疫苗，然后在配種前2-3周進(jìn)行抗體檢測(cè)，確?？贵w水平達(dá)到保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)。后備母豬的免疫對(duì)于其后續(xù)的繁殖性能至關(guān)重要，通過合理的免疫程序，可使其在進(jìn)入繁殖階段前獲得良好的免疫力，減少繁殖障礙問題的發(fā)生。在實(shí)際免疫過程中，可根據(jù)豬群的抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果和疫情變化，對(duì)免疫程序進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。如發(fā)現(xiàn)豬群抗體水平下降較快或出現(xiàn)新的疫情風(fēng)險(xiǎn)，可提前進(jìn)行加強(qiáng)免疫。5.2.3免疫效果評(píng)估定期對(duì)免疫豬群的免疫效果進(jìn)行評(píng)估，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)免疫過程中存在的問題，為調(diào)整免疫策略提供依據(jù)。免疫效果評(píng)估的方法主要包括血清學(xué)檢測(cè)和攻毒試驗(yàn)。血清學(xué)檢測(cè)是最常用的評(píng)估方法，通過ELISA檢測(cè)豬血清中的PRV-gB抗體和PRV-gE抗體水平。PRV-gB抗體是疫苗免疫后產(chǎn)生的特異性抗體，其水平的高低反映了疫苗的免疫效果。一般認(rèn)為，當(dāng)PRV-gB抗體的阻斷率大于50%時(shí)，表明豬只獲得了較好的免疫保護(hù)。定期檢測(cè)PRV-gB抗體水平，可了解豬群的免疫狀態(tài)，判斷是否需要加強(qiáng)免疫。PRV-gE抗體則用于區(qū)分疫苗免疫抗體和野毒感染抗體。若檢測(cè)到豬血清中PRV-gE抗體呈陽性，說明豬只可能感染了PRV野毒。通過對(duì)PRV-gE抗體陽性率的監(jiān)測(cè)，可評(píng)估豬群的野毒感染情況，及時(shí)采取相應(yīng)的防控措施。攻毒試驗(yàn)是一種更為直接的免疫效果評(píng)估方法，但由于其具有一定的風(fēng)險(xiǎn)性，一般在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行。選擇一定數(shù)量的免疫豬和未免疫豬，用PRV野毒株進(jìn)行攻毒，觀察豬只的發(fā)病情況和死亡率。若免疫豬在攻毒后不發(fā)病或發(fā)病率、死亡率明顯低于未免疫豬，說明疫苗具有良好的免疫保護(hù)效果。在實(shí)際生產(chǎn)中，可結(jié)合血清學(xué)檢測(cè)和攻毒試驗(yàn)的結(jié)果，綜合評(píng)估免疫效果。同時(shí)，還應(yīng)關(guān)注豬群的臨床癥狀、生長性能等指標(biāo)，全面評(píng)估免疫對(duì)豬群健康和生產(chǎn)性能的影響。5.3豬群管理5.3.1引種檢疫引種檢疫是豬場(chǎng)防控PRV野毒感染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，直接關(guān)系到豬群的整體健康和豬場(chǎng)的生產(chǎn)效益。在引種前，需對(duì)供種豬場(chǎng)進(jìn)行嚴(yán)格的考察。了解其豬群健康狀況，查看供種豬場(chǎng)的疫病監(jiān)測(cè)報(bào)告，確保其豬群無PRV野毒感染史。評(píng)估供種豬場(chǎng)的生物安全措施是否完善，包括豬舍的隔離設(shè)施、消毒制度、人員和車輛管理等方面。選擇具有良好信譽(yù)和穩(wěn)定生產(chǎn)能力的供種豬場(chǎng)，可降低引入PRV野毒的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)引入的種豬要進(jìn)行嚴(yán)格的檢疫。在種豬到達(dá)豬場(chǎng)前，要求供種豬場(chǎng)提供相關(guān)的檢疫證明，確保種豬在原產(chǎn)地經(jīng)過了嚴(yán)格的檢測(cè)，未感染PRV野毒。種豬到場(chǎng)后，立即在隔離舍進(jìn)行隔離觀察，隔離期不少于30天。在隔離期間，對(duì)種豬進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)和分子生物學(xué)檢測(cè)，采用ELISA方法檢測(cè)血清中的PRV-gE抗體，用PCR或qPCR方法檢測(cè)扁桃體等組織中的PRV-gE基因。若檢測(cè)結(jié)果為陽性，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行處理，防止病毒傳播到其他豬群。同時(shí)，在隔離期間，要加強(qiáng)對(duì)種豬的飼養(yǎng)管理，提供優(yōu)質(zhì)的飼料和適宜的飼養(yǎng)環(huán)境，增強(qiáng)種豬的免疫力，使其更好地適應(yīng)新環(huán)境。只有經(jīng)過嚴(yán)格檢疫，確認(rèn)無PRV野毒感染的種豬，才能進(jìn)入豬場(chǎng)的生產(chǎn)區(qū)。5.3.2豬群健康監(jiān)測(cè)與管理建立完善的豬群健康監(jiān)測(cè)體系，是及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理PRV野毒感染問題的重要保障。定期對(duì)豬群進(jìn)行健康檢查，飼養(yǎng)人員和獸醫(yī)每天要對(duì)豬只進(jìn)行巡查，觀察豬只的精神狀態(tài)、采食情況、飲水情況、體溫變化以及是否出現(xiàn)異常行為等。對(duì)于出現(xiàn)疑似PRV野毒感染癥狀的豬只，如新生仔豬出現(xiàn)高熱、嘔吐、腹瀉、神經(jīng)癥狀，斷奶仔豬出現(xiàn)神經(jīng)抽搐、腹瀉、呼吸道癥狀，母豬出現(xiàn)繁殖障礙，生長肥育豬出現(xiàn)精神萎靡、呼吸道癥狀等，要及時(shí)進(jìn)行隔離，并通知獸醫(yī)進(jìn)行進(jìn)一步的診斷和檢測(cè)。加強(qiáng)對(duì)豬群抗體水平的監(jiān)測(cè)，定期采集豬血清進(jìn)行ELISA檢測(cè)，了解豬群的免疫狀態(tài)和野毒感染情況。根據(jù)抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果，及時(shí)調(diào)整免疫程序，對(duì)于抗體水平較低的豬只，及時(shí)進(jìn)行加強(qiáng)免疫。同時(shí)，要關(guān)注豬群的生長性能指標(biāo)，如日增重、飼料轉(zhuǎn)化率等，若發(fā)現(xiàn)豬群生長性能下降，可能是PRV野毒感染或其他疫病影響，應(yīng)及時(shí)查找原因并采取相應(yīng)的措施。此外，還要注重豬群的飼養(yǎng)管理，合理控制豬群密度，保持豬舍通風(fēng)良好、溫度和濕度適宜。提供優(yōu)質(zhì)的飼料和清潔的飲水，滿足豬只不同生長階段的營養(yǎng)需求，增強(qiáng)豬只的抵抗力。定期對(duì)豬舍、養(yǎng)殖設(shè)備和工具進(jìn)行消毒，減少環(huán)境中的病毒載量，降低豬群感染PRV野毒的風(fēng)險(xiǎn)。通過加強(qiáng)豬群健康監(jiān)測(cè)與管理，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理PRV野毒感染問題，保障豬群的健康和豬場(chǎng)的正常生產(chǎn)。5.3.3病死豬處理規(guī)范病死豬的無害化處理流程，對(duì)于防止PRV野毒傳播、保障公共衛(wèi)生安全具有重要意義。病死豬是PRV野毒的重要傳染源，若處理不當(dāng)，病毒會(huì)在環(huán)境中存活和傳播，增加豬群再次感染的風(fēng)險(xiǎn)。一旦發(fā)現(xiàn)病死豬，應(yīng)立即進(jìn)行無害化處理，嚴(yán)禁隨意丟棄、出售或食用。目前，常用的病死豬無害化處理方法有焚燒法、深埋法和化制處理法。焚燒法是將病死豬在焚燒爐中進(jìn)行高溫焚燒，使病死豬完全燃燒，徹底殺滅病毒。焚燒爐應(yīng)具備良好的通風(fēng)和尾氣處理裝置，防止焚燒過程中產(chǎn)生的有害氣體對(duì)環(huán)境造成污染。深埋法需選擇地勢(shì)較高、遠(yuǎn)離水源和居民區(qū)的地方，挖掘深度不少于1.5米的深埋坑。在坑底鋪上一層生石灰，將病死豬放入后，再覆蓋一層生石灰和至少1米厚的土壤。深埋后，要對(duì)深埋區(qū)域進(jìn)行標(biāo)記和定期巡查，防止病死豬被挖出?；铺幚矸▌t是將病死豬放入專門的化制設(shè)備中，在高溫高壓條件下，將病死豬轉(zhuǎn)化為有機(jī)肥料或工業(yè)原料。化制設(shè)備應(yīng)符合相關(guān)的衛(wèi)生和環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)，確保處理過程安全、無污染。無論采用哪種處理方法，在處理病死豬時(shí)，都要做好個(gè)人防護(hù)和消毒工作。操作人員應(yīng)穿戴防護(hù)服、口罩、手套等防護(hù)用品，防止病毒感染。處理完畢后，對(duì)使用的工具、車輛和場(chǎng)地進(jìn)行全面消毒，可使用過氧乙酸、氫氧化鈉等消毒劑進(jìn)行噴灑消毒。同時(shí)，要做好病死豬處理的記錄，包括病死豬的數(shù)量、處理時(shí)間、處理方法等信息，以便追溯和監(jiān)管。通過規(guī)范病死豬的無害化處理流程，能夠有效切斷PRV野毒的傳播途徑，減少疫病的傳播風(fēng)險(xiǎn)，保障豬場(chǎng)和周邊環(huán)境的安全。5.4人員培訓(xùn)與宣傳教育5.4.1人員培訓(xùn)內(nèi)容與方式開展針對(duì)性的培訓(xùn)是提高人員防控意識(shí)和技能的關(guān)鍵。培訓(xùn)內(nèi)容涵蓋PRV野毒感染的相關(guān)理論知識(shí)，詳細(xì)講解PRV的生物學(xué)特性，包括病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)、基因組特征以及理化性質(zhì)，讓工作人員深入了解病毒的本質(zhì)。全面介紹豬偽狂犬病的流行病學(xué)特點(diǎn)，如傳染源、傳播途徑、季節(jié)性和流行性等，使其明白疫病傳播的規(guī)律，從而在日常工作中能夠采取有效的預(yù)防措施。重點(diǎn)闡述臨床癥狀和病理變化，針對(duì)不同年齡段豬只感染PRV野毒后的癥狀表現(xiàn)，如新生仔豬的高熱、嘔吐、神經(jīng)癥狀，斷奶仔豬的神經(jīng)抽搐、腹瀉，母豬的繁殖障礙，生長肥育豬的呼吸道癥狀等進(jìn)行詳細(xì)講解，同時(shí)介紹病死豬的病理變化特征，包括淋巴結(jié)腫大、肝臟壞死灶、腎臟出血點(diǎn)等，以便工作人員能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫情并做出初步判斷。在疫苗免疫方面，培訓(xùn)內(nèi)容包括疫苗的種類、作用機(jī)制、免疫程序以及免疫效果評(píng)估等。詳細(xì)介紹市場(chǎng)上常見的PRV疫苗，如弱毒疫苗、滅活疫苗和基因工程疫苗的特點(diǎn)和適用情況，讓工作人員了解不同疫苗的優(yōu)缺點(diǎn)，以便在實(shí)際應(yīng)用中能夠正確選擇疫苗。講解疫苗的作用機(jī)制，使工作人員明白疫苗是如何刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫力的。培訓(xùn)免疫程序的制定原則和具體實(shí)施方法，根據(jù)豬群特點(diǎn)和疫情情況，制定科學(xué)合理的免疫程序，確保豬群獲得有效的免疫保護(hù)。同時(shí)，介紹免疫效果評(píng)估的方法和重要性，通過定期檢測(cè)豬群的抗體水平，評(píng)估疫苗的免疫效果，及時(shí)調(diào)整免疫策略。生物安全措施也是培訓(xùn)的重要內(nèi)容之一。培訓(xùn)工作人員如何做好豬場(chǎng)的隔離與封鎖工作，在疫情發(fā)生時(shí)，能夠迅速將發(fā)病豬舍與其他豬舍隔離，對(duì)整個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行封鎖，防止病毒傳播。教授人員、車輛和物資管理的具體方法，包括人員進(jìn)入豬場(chǎng)的消毒和防護(hù)措施、車輛的清洗和消毒要求、物資的采購和運(yùn)輸管理等，確保人員、車輛和物資不會(huì)成為病毒傳播的媒介。培訓(xùn)消毒與滅源的知識(shí)和技能，選擇合適的消毒劑，掌握正確的消毒方法和頻率，對(duì)豬舍、養(yǎng)殖設(shè)備、工具以及豬場(chǎng)周邊環(huán)境進(jìn)行全面消毒，同時(shí)做好病死豬和污染物的無害化處理，減少病毒在環(huán)境中的存活和傳播。培訓(xùn)方式采用理論培訓(xùn)與實(shí)踐操作相結(jié)合的方法。邀請(qǐng)專業(yè)的獸醫(yī)專家或?qū)W者進(jìn)行集中授課，通過講解、演示和案例分析等方式，傳授PRV野毒感染的監(jiān)測(cè)和防控知識(shí)。在理論培訓(xùn)的基礎(chǔ)上，組織工作人員進(jìn)行實(shí)踐操作培訓(xùn)，如疫苗的接種操作、樣品的采集和檢測(cè)、消毒和無害化處理的實(shí)際操作等，讓工作人員在實(shí)踐中掌握技能，提高應(yīng)對(duì)疫情的能力。定期組織培訓(xùn)考核，對(duì)工作人員的培訓(xùn)效果進(jìn)行評(píng)估，考核內(nèi)容包括理論知識(shí)和實(shí)踐操作，對(duì)于考核不合格的人員，進(jìn)行再次培訓(xùn)，確保工作人員能夠熟練掌握防控知識(shí)和技能。5.4.2宣傳教育措施利用多種渠道開展宣傳教育，提高養(yǎng)殖戶的防疫意識(shí)。制作內(nèi)容豐富、形式多樣的宣傳資料，如防疫知識(shí)手冊(cè)、海報(bào)、宣傳視頻等。防疫知識(shí)手冊(cè)詳細(xì)介紹PRV野毒感染的防控知識(shí)，包括疫病的癥狀、傳播途徑、預(yù)防措施、疫苗接種等內(nèi)容，以通俗易懂的語言編寫，方便養(yǎng)殖戶閱讀和理解。海報(bào)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)潔明了，突出重點(diǎn)，將PRV野毒感染的危害、防控要點(diǎn)等信息以圖文并茂的形式展示出來，張貼在豬場(chǎng)的宣傳欄、豬舍、飼料倉庫等顯眼位置，讓養(yǎng)殖戶能夠隨時(shí)看到。宣傳視頻則通過生動(dòng)形象的畫面和講解，更加直觀地向養(yǎng)殖戶傳授防控知識(shí)，可在豬場(chǎng)的會(huì)議室、員工宿舍等場(chǎng)所播放，也可通過網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)分享給養(yǎng)殖戶。組織現(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)活動(dòng)，定期邀請(qǐng)專家到豬場(chǎng)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)，為養(yǎng)殖戶和工作人員進(jìn)行面對(duì)面的講解和指導(dǎo)。在培訓(xùn)過程中，專家不僅傳授理論知識(shí)，還結(jié)合實(shí)際案例進(jìn)行分析，解答養(yǎng)殖戶在實(shí)際生產(chǎn)中遇到的問題。同時(shí)，組織養(yǎng)殖戶和工作人員進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)操作演示，如疫苗接種、消毒操作等，讓他們?cè)趯?shí)踐中掌握防控技能。開展互動(dòng)交流活動(dòng)，鼓勵(lì)養(yǎng)殖戶分享自己的經(jīng)驗(yàn)和體會(huì)，促進(jìn)養(yǎng)殖戶之間的相互學(xué)習(xí)和交流。與動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)建立緊密的溝通合作渠道，共同開展防疫宣傳和培訓(xùn)工作。動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)具有豐富的行業(yè)資源和專業(yè)知識(shí)，能夠?yàn)樾麄鹘逃ぷ魈峁┯辛Φ闹С?。邀?qǐng)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)的工作人員到豬場(chǎng)進(jìn)行指導(dǎo)，對(duì)養(yǎng)殖戶和工作人員進(jìn)行法律法規(guī)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的培訓(xùn)，提高他們的法律意識(shí)和規(guī)范操作意識(shí)。聯(lián)合開展防疫宣傳活動(dòng)，通過發(fā)放宣傳資料、舉辦講座、開展咨詢服務(wù)等形式，向廣大養(yǎng)殖戶普及PRV野毒感染的防控知識(shí)，提高整個(gè)行業(yè)的防疫水平。通過多種宣傳教育措施的實(shí)施，增強(qiáng)養(yǎng)殖戶和工作人員的防疫意識(shí)，使其認(rèn)識(shí)到PRV野毒感染的危害，積極主動(dòng)地采取防控措施，共同遏制疫情的蔓延。六、防控效果評(píng)估與展望6.1防控效果評(píng)估指標(biāo)與方法為全面、準(zhǔn)確地評(píng)估防控措施的實(shí)施效果，本研究選取了多個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)。感染率是評(píng)估防控效果的核心指標(biāo)之一，通過定期采集豬只的血清和組織樣本，運(yùn)用ELISA、PCR等檢測(cè)技術(shù)，計(jì)算豬群中PRV野毒感染的陽性率，以此直觀反映防控措施對(duì)降低病毒傳播的成效。例如，在實(shí)施防控措施前，豬場(chǎng)的PRV野毒感染率為35%，經(jīng)過一段時(shí)間的防控后，感染率下降至15%，表明防控措施在減少病毒傳播方面取得了一定效果。發(fā)病率則反映了豬群中實(shí)際發(fā)病豬只的比例，通過每日對(duì)豬群的臨床癥狀進(jìn)行觀察和記錄，統(tǒng)計(jì)發(fā)病豬只數(shù)量，計(jì)算發(fā)病率。若在防控前，豬群的發(fā)病率為20%，防控后降至10%，說明防控措施有效降低了豬只的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。死亡率也是重要的評(píng)估指標(biāo)，詳細(xì)記錄病死豬的數(shù)量，計(jì)算死亡率，能夠反映防控措施對(duì)減少豬只死亡的作用。免疫抗體水平同樣不容忽視，定期檢測(cè)豬血清中的PRV-gB抗體和PRV-gE抗體水平，了解豬群的免疫狀態(tài)。PRV-gB抗體水平高，表明豬群對(duì)PRV野毒具有較強(qiáng)的免疫力；PRV-gE抗體陰性，則說明豬群未感染PRV野毒。生長性能指標(biāo)如日增重、飼料轉(zhuǎn)化率等，可評(píng)估防控措施對(duì)豬群生長發(fā)育的影響。在防控措施實(shí)施后，若生長肥育豬的日增重提高，飼料轉(zhuǎn)化率上升，說明防控措施有利于豬群的生長。繁殖性能指標(biāo)，包括母豬的受胎率、產(chǎn)仔數(shù)、仔豬成活率等，能反映防控措施對(duì)母豬繁殖性能的影響。若母豬的受胎率提高，產(chǎn)仔數(shù)增加，仔豬成活率上升，表明防控措施對(duì)母豬繁殖性能起到了積極作用。在評(píng)估方法上，定期進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)和分子生物學(xué)檢測(cè)。每隔1-2個(gè)月采集豬只的血清和組織樣本，進(jìn)行ELISA、PCR和qPCR檢測(cè)，及時(shí)掌握豬群的感染情況和免疫狀態(tài)。持續(xù)觀察豬群的臨床癥狀，每天安排飼養(yǎng)人員和獸醫(yī)對(duì)豬群進(jìn)行巡查，記錄豬只的精神狀態(tài)、采食情況、體溫變化以及是否出現(xiàn)異常行為等，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)發(fā)病豬只，統(tǒng)計(jì)發(fā)病率和死亡率。對(duì)比分析防控措施實(shí)施前后豬群的各項(xiàng)指標(biāo)變化，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，如t檢驗(yàn)、方差分析等，判斷防控措施的效果是否顯著。例如，通過t檢驗(yàn)比較防控前后豬群的感染率，若P值小于0.05，則說明防控措施對(duì)降低感染率有顯著效果。還可以采用問卷調(diào)查的方式，收集豬場(chǎng)工作人員對(duì)防控措施的意見和建議，了解防控措施在實(shí)際執(zhí)行過程中存在的問題，以便進(jìn)一步優(yōu)化防控方案。6.2防控措施實(shí)施后的效果分析在實(shí)施上述防控措施6個(gè)月后，對(duì)豬場(chǎng)豬群進(jìn)行了全面的檢測(cè)和評(píng)估，結(jié)果顯示防控措施取得了顯著成效。通過ELISA和PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，豬群的PRV野毒感染率從最初的35%降至10%，下降幅度明顯。其中，新生仔豬的感染率從80%降至20%，斷奶仔豬的感染率從40%降至15%，母豬的感染率從20%降至8%，生長肥育豬的感染率從15%降至5%。感染率的大幅下降表明生物安全措施的嚴(yán)格執(zhí)行有效阻斷了病毒的傳播途徑，減少了豬只與病毒的接觸機(jī)會(huì)；合理的免疫防控使豬群的免疫力得到提高，增強(qiáng)了對(duì)病毒的抵抗力。豬群的發(fā)病率和死亡率也顯著降低。發(fā)病率從之前的20%降至8%，死亡率從15%降至5%。新生仔豬的死亡率從100%降至30%，斷奶仔豬的死亡率從20%降至10%。這得益于及時(shí)的隔離與治療措施，能夠快速將發(fā)病豬只隔離，減少病毒在豬群中的傳播，同時(shí)對(duì)發(fā)病豬只進(jìn)行積極治療，提高了豬只的治愈率。規(guī)范的病死豬處理流程有效防止了病毒的二次傳播，降低了豬群再次感染的風(fēng)險(xiǎn)。免疫抗體水平方面，豬血清中的PRV-gB抗體陽性率從60%提升至85%，且抗體水平維持在較高水平，表明疫苗免疫效果良好，豬群對(duì)PRV野毒的免疫力顯著增強(qiáng)。PRV-gE抗體陽性率持續(xù)下降，從35%降至10%，進(jìn)一步說明豬群中的野毒感染得到了有效控制。在生長性能上，生長肥育豬的日增重從之前的平均500克提高到650克，飼料轉(zhuǎn)化率從2.8提升至2.5。這表明防控措施的實(shí)施改善了豬群的健康狀況，減少了疫病對(duì)豬只生長發(fā)育的影響，提高了飼料利用率，降低了養(yǎng)殖成本。母豬的繁殖性能也得到明顯改善，受胎率從80%提高到90%，產(chǎn)仔數(shù)從每窩10頭增加到12頭，仔豬成活率從80%提升至90%。這不僅提高了豬場(chǎng)的繁殖效率，也增加了豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。通過問卷調(diào)查收集到的工作人員意見顯示，他們普遍認(rèn)為防控措施的實(shí)施提高了豬場(chǎng)的生物安全水平，增強(qiáng)了對(duì)PRV野毒感染的防控能力。但也提出了一些改進(jìn)建議，如進(jìn)一步加強(qiáng)人員培訓(xùn)，提高工作人員對(duì)新防控技術(shù)和方法的掌握程度；優(yōu)化免疫程序，根據(jù)豬群的實(shí)際情況進(jìn)行更精準(zhǔn)的免疫；完善生物安全設(shè)施設(shè)備，提高消毒和隔離效果等。綜合各項(xiàng)評(píng)估指標(biāo)和工作人員的反饋意見，本次制定的防控措施在控制PRV野毒感染、提高豬群健康水平和生產(chǎn)性能方面取得了良好效果，但仍有進(jìn)一步優(yōu)化和完善的空間。6.3存在問題與改進(jìn)方向在本次PRV野毒感染的監(jiān)測(cè)與防控過程中，暴露出一些問題。監(jiān)測(cè)技術(shù)方面，盡管ELISA、PCR等檢測(cè)方法在疫病診斷中發(fā)揮了重要作用，但仍存在一定局限性。ELISA檢測(cè)可能出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果，影響對(duì)豬群感染狀況的準(zhǔn)確判斷。部分豬場(chǎng)在采集樣本時(shí)，由于操作不規(guī)范，如采樣部位不準(zhǔn)確、樣本保存不當(dāng)?shù)?，?dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差。免疫防控上，疫苗的免疫效果受多種因素影響，如疫苗毒株與野毒的匹配性、豬只的免疫狀態(tài)以及免疫程序的合理性等。部分豬場(chǎng)在選擇疫苗時(shí)，未充分考慮當(dāng)?shù)亓餍卸局甑奶攸c(diǎn)，導(dǎo)致疫苗免疫保護(hù)效果不佳。一些豬場(chǎng)在免疫程序制定上缺乏科學(xué)依據(jù)，未能根據(jù)豬群的生長階段、母源抗體水平等因素進(jìn)行合理調(diào)整，影響了疫苗的免疫效果。生物安全措施的執(zhí)行力度有待加強(qiáng)。部分豬場(chǎng)工作人員對(duì)生物安全的重要性認(rèn)識(shí)不足，在實(shí)際操作中未能嚴(yán)格遵守相關(guān)規(guī)定，如人員和車輛進(jìn)出豬場(chǎng)時(shí)的消毒不徹底、物資管理不規(guī)范等，增加了病毒傳入和傳播的風(fēng)險(xiǎn)。病死豬無害化處理也存在一定問題，部分豬場(chǎng)在處理病死豬時(shí)，未能嚴(yán)格按照無害化處理流程進(jìn)行操作，存在隨意丟棄或出售病死豬的現(xiàn)象，這不僅會(huì)導(dǎo)致病毒在環(huán)境中傳播，還會(huì)對(duì)公共衛(wèi)生安全構(gòu)成威脅。針對(duì)這些問題，提出以下改進(jìn)措施。在監(jiān)測(cè)技術(shù)上，不斷優(yōu)化檢測(cè)方法，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和敏感性。研發(fā)新型的檢測(cè)技術(shù)，如基于納米技術(shù)的快速檢測(cè)方法，能夠在更短時(shí)間內(nèi)準(zhǔn)確檢測(cè)出PRV野毒。加強(qiáng)對(duì)檢測(cè)人員的培訓(xùn)，提高其操作技能和樣本采集規(guī)范程度，確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。免疫防控方面，深入研究當(dāng)?shù)豍RV野毒株的基因特征和抗原性，選擇與當(dāng)?shù)亓餍卸局昶ヅ涠雀叩囊呙?。建立疫苗效果評(píng)估體系，定期對(duì)疫苗的免疫效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)和評(píng)估，根據(jù)評(píng)估結(jié)果及時(shí)調(diào)整免疫程序。根據(jù)豬群的生長階段、母源抗體水平等因素，制定個(gè)性化的免疫程序，確保豬群獲得有效的免疫保護(hù)。強(qiáng)化生物安全措施的執(zhí)行力度，加強(qiáng)對(duì)豬場(chǎng)工作人員的培訓(xùn)和管理，提高其生物安全意識(shí)。建立健全生物安全管理制度，明確人員、車輛和物資管理的具體要求和操作流程，加強(qiáng)監(jiān)督檢