2025年大學(xué)生物技術(shù)（細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用）試題及答案

（考試時(shí)間：90分鐘滿分100分）班級(jí)______姓名______第I卷（選擇題共40分）答題要求：每題只有一個(gè)正確答案，請(qǐng)將正確答案的序號(hào)填在括號(hào)內(nèi)。(總共20題，每題2分)1.細(xì)胞培養(yǎng)中，最常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是（）A.DMEMB.RPMI-1640C.MEMD.F122.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，血清的主要作用不包括（）A.提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)B.促進(jìn)細(xì)胞貼壁C.調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝D.抑制細(xì)胞生長(zhǎng)3.細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境條件不包括（）A.溫度B.濕度C.光照D.pH值4.細(xì)胞凍存時(shí)，常用的保護(hù)劑是（）A.DMSOB.甘油C.乙醇D.丙二醇5.細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)，正確的操作順序是（）A.37℃水浴快速解凍→離心棄上清→加培養(yǎng)液重懸接種B.37℃水浴緩慢解凍→離心棄上清→加培養(yǎng)液重懸接種C.4℃水浴快速解凍→離心棄上清→加培養(yǎng)液重懸接種D.4℃水浴緩慢解凍→離心棄上清→加培養(yǎng)液重懸接種6.細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)，一般選擇細(xì)胞處于（）時(shí)進(jìn)行A.對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期B.平臺(tái)期C.衰退期D.靜止期7.細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，常用的染色劑是（）A.臺(tái)盼藍(lán)B.結(jié)晶紫C.蘇木精D.伊紅8.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，防止微生物污染的措施不包括（）A.嚴(yán)格無(wú)菌操作B.定期更換培養(yǎng)液C.使用抗生素D.增加血清濃度9.用于細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，常用的消毒方法是（）A.紫外線照射B.高壓蒸汽滅菌C.化學(xué)消毒劑浸泡D.干熱滅菌10.細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞的生長(zhǎng)特性不包括（）A.貼壁生長(zhǎng)B.懸浮生長(zhǎng)C.半貼壁生長(zhǎng)D.無(wú)規(guī)則生長(zhǎng)11.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，二氧化碳培養(yǎng)箱的作用是（）A.調(diào)節(jié)溫度B.調(diào)節(jié)濕度C.調(diào)節(jié)pH值D.提供光照12.細(xì)胞培養(yǎng)中，常用的消化液是（）A.胰蛋白酶B.胃蛋白酶C.膠原酶D.鏈霉蛋白酶13.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不包括（）A.無(wú)支原體污染B.無(wú)病毒污染C.無(wú)內(nèi)毒素污染D.無(wú)色素污染14.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞出現(xiàn)老化的表現(xiàn)不包括（）A.細(xì)胞形態(tài)變大B.細(xì)胞增殖速度減慢C.細(xì)胞內(nèi)顆粒增多D.細(xì)胞貼壁能力增強(qiáng)15.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，常用的緩沖液是（）A.PBSB.Tris-HClC.HEPESD.以上都是16.細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞的代謝產(chǎn)物不包括（）A.乳酸B.丙酮酸C.二氧化碳D.氧氣17.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，常用的抗生素不包括（）A.青霉素B.鏈霉素C.卡那霉素D.慶大霉素18.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞出現(xiàn)凋亡的特征不包括（）A.細(xì)胞核固縮B.細(xì)胞膜破裂C.染色質(zhì)凝集D.凋亡小體形成19.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，常用的血清來(lái)源不包括（）A.小牛血清B.胎牛血清C.馬血清D.人血清20.細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞的傳代比例一般為（）A.1:2B.1:3C.1:4D.1:5第II卷（非選擇題共60分）21.（10分）簡(jiǎn)述細(xì)胞培養(yǎng)的基本流程。22.（10分）細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，如何進(jìn)行細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇？23.（10分）分析細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中微生物污染的來(lái)源及預(yù)防措施。第四大題（材料分析題共15分）答題要求：閱讀材料，回答問題。(總共3題，每題5分)材料：在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，研究人員將某細(xì)胞株接種到含有不同濃度生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)。一段時(shí)間后，觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)隨著生長(zhǎng)因子濃度的增加，細(xì)胞的增殖速度加快，但當(dāng)生長(zhǎng)因子濃度超過(guò)一定值后，細(xì)胞增殖速度反而下降。24.請(qǐng)分析細(xì)胞增殖速度先升后降的原因。25.該實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有何啟示？26.若要進(jìn)一步研究該生長(zhǎng)因子對(duì)細(xì)胞的作用機(jī)制，可采取哪些實(shí)驗(yàn)方法？第五大題（綜合應(yīng)用題共15分）答題要求：根據(jù)題目要求，結(jié)合所學(xué)知識(shí)進(jìn)行綜合分析與解答。(總共3題，每題5分)材料：某生物技術(shù)公司計(jì)劃利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)一種生物活性蛋白。該蛋白在人體疾病治療方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。27.請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)該生物活性蛋白的方案。28.在細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)過(guò)程中，如何保證產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量？29.若該生物活性蛋白生產(chǎn)成功，如何進(jìn)行產(chǎn)品的純化和鑒定？答案：1.A2.D3.C4.A5.A6.A7.A8.D9.B10.D11.C12.A13.D14.D15.D16.D17.C18.B19.D20.A21.細(xì)胞培養(yǎng)基本流程：準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)所需的器皿、培養(yǎng)液（含血清、緩沖液等）、消化液等。選取合適的細(xì)胞株，復(fù)蘇細(xì)胞。將復(fù)蘇后的細(xì)胞接種到合適的培養(yǎng)液中，置于適宜的環(huán)境條件（溫度、濕度、pH值、二氧化碳濃度等）下培養(yǎng)。定期觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，進(jìn)行傳代培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿或達(dá)到一定密度時(shí)，進(jìn)行傳代，傳代時(shí)需用消化液消化細(xì)胞，然后接種到新的培養(yǎng)器皿中繼續(xù)培養(yǎng)。22.細(xì)胞凍存：選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，用胰蛋白酶消化后制成細(xì)胞懸液，離心棄上清。加入含保護(hù)劑（如DMSO）的凍存液，重懸細(xì)胞，分裝到凍存管中。先置于4℃冰箱1-2小時(shí)，再放入-20℃冰箱2小時(shí)，最后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過(guò)夜或長(zhǎng)期保存于液氮中。細(xì)胞復(fù)蘇：從液氮中取出凍存管，迅速放入37℃水浴中快速解凍，取出后用75%酒精消毒凍存管外壁。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，加入適量培養(yǎng)液，離心棄上清，再用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，接種到培養(yǎng)器皿中，置于適宜環(huán)境培養(yǎng)。23.微生物污染來(lái)源：空氣（如細(xì)菌、真菌孢子等）、實(shí)驗(yàn)操作人員（如手上細(xì)菌、未嚴(yán)格消毒等）、培養(yǎng)液及血清（本身污染）、培養(yǎng)器皿（消毒不徹底）等。預(yù)防措施：嚴(yán)格無(wú)菌操作，實(shí)驗(yàn)前操作人員洗手消毒，穿戴無(wú)菌工作服、口罩等；培養(yǎng)器皿嚴(yán)格消毒滅菌；培養(yǎng)液和血清進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，選擇優(yōu)質(zhì)無(wú)污染產(chǎn)品；在超凈工作臺(tái)或無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行操作；定期對(duì)培養(yǎng)環(huán)境進(jìn)行消毒監(jiān)測(cè)等。24.生長(zhǎng)因子濃度較低時(shí)，其與細(xì)胞表面受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖，所以細(xì)胞增殖速度加快。當(dāng)生長(zhǎng)因子濃度超過(guò)一定值后，可能導(dǎo)致受體過(guò)度激活，引發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路紊亂，或者生長(zhǎng)因子與其他物質(zhì)結(jié)合形成不利于細(xì)胞增殖的復(fù)合物，從而使細(xì)胞增殖速度下降。25.啟示：在細(xì)胞培養(yǎng)中，生長(zhǎng)因子的添加濃度并非越高越好，要找到合適的濃度范圍以促進(jìn)細(xì)胞最佳生長(zhǎng)。在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，需對(duì)生長(zhǎng)因子等添加物的濃度進(jìn)行優(yōu)化，避免因濃度不當(dāng)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生不利影響。26.可采取蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)蛋白的表達(dá)變化；進(jìn)行基因芯片分析，了解生長(zhǎng)因子作用下細(xì)胞基因表達(dá)譜的改變；運(yùn)用RNA干擾技術(shù)沉默相關(guān)基因，觀察對(duì)細(xì)胞增殖的影響等實(shí)驗(yàn)方法來(lái)研究生長(zhǎng)因子對(duì)細(xì)胞的作用機(jī)制。27.方案：選擇合適的細(xì)胞株，如CHO細(xì)胞等，復(fù)蘇細(xì)胞后接種到含適量血清、生長(zhǎng)因子等添加劑的培養(yǎng)液中，置于二氧化碳培養(yǎng)箱中，在37℃、適宜pH值條件下培養(yǎng)。定期傳代，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到一定密度時(shí)，增加培養(yǎng)液體積，同時(shí)適當(dāng)提高生長(zhǎng)因子濃度，以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。通過(guò)優(yōu)化培養(yǎng)條件，如調(diào)整攪拌速度、溶氧水平等，提高細(xì)胞密度。待細(xì)胞生長(zhǎng)至高密度時(shí)，誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)目的生物活性蛋白，可通過(guò)基因工程手段導(dǎo)入相關(guān)表達(dá)載體。最后收集培養(yǎng)液，進(jìn)行后續(xù)處理。28.保證質(zhì)量和產(chǎn)量：嚴(yán)格控制培養(yǎng)環(huán)境條件，包括溫度、pH值、二氧化碳濃度等，確保細(xì)胞生長(zhǎng)在適宜環(huán)境。定期檢測(cè)培養(yǎng)液成分，及時(shí)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和調(diào)整添加劑濃度。對(duì)細(xì)胞進(jìn)行定期檢測(cè)，如細(xì)胞活力、形態(tài)等，確保細(xì)胞健康生長(zhǎng)。優(yōu)化培養(yǎng)工藝，如采用合適的培養(yǎng)方式（分批培養(yǎng)、連續(xù)培養(yǎng)等），提高細(xì)胞密度和蛋白表達(dá)量。建立質(zhì)量控制體系，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量檢測(cè)，包括蛋白含量、純度、活性等指標(biāo)檢測(cè)。29.產(chǎn)品純化：采用超濾、離子交換色