液體活檢聯(lián)合EUS-FNA：提升腫瘤診斷敏感性的新策略演講人01引言：腫瘤診斷的臨床需求與技術(shù)瓶頸02液體活檢：腫瘤動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的“液體窗口”03EUS-FNA：腫瘤組織診斷的“精準(zhǔn)導(dǎo)航”04液體活檢聯(lián)合EUS-FNA：雙模態(tài)互補(bǔ)的協(xié)同機(jī)制05臨床應(yīng)用實(shí)踐：不同瘤種中的聯(lián)合策略06挑戰(zhàn)與對(duì)策：邁向臨床常規(guī)化的必經(jīng)之路07未來(lái)展望：智能化與多組學(xué)的融合方向08總結(jié)：雙模態(tài)診斷引領(lǐng)腫瘤精準(zhǔn)醫(yī)療新未來(lái)目錄液體活檢聯(lián)合EUS-FNA：提升腫瘤診斷敏感性的新策略01引言：腫瘤診斷的臨床需求與技術(shù)瓶頸引言：腫瘤診斷的臨床需求與技術(shù)瓶頸腫瘤的早期精準(zhǔn)診斷是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計(jì)，2022年全球新發(fā)腫瘤病例約2000萬(wàn)，死亡病例約1000萬(wàn)，其中60%以上的患者在確診時(shí)已處于中晚期，錯(cuò)失最佳治療時(shí)機(jī)。這一現(xiàn)狀的核心癥結(jié)在于現(xiàn)有診斷技術(shù)存在局限性：傳統(tǒng)組織活檢雖為“金標(biāo)準(zhǔn)”，但具有侵入性、取樣誤差（受腫瘤異質(zhì)性影響）及重復(fù)性差等缺點(diǎn)；影像學(xué)檢查（如CT、MRI）雖無(wú)創(chuàng)，但對(duì)早期微小病灶及良惡性鑒別能力有限；腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)（如CEA、CA19-9）雖便捷，但敏感性和特異性不足，難以滿足臨床需求。在此背景下，液體活檢（liquidbiopsy）作為新興的“液體組織學(xué)”技術(shù)，通過(guò)檢測(cè)血液、唾液、胸腹水等體液中的腫瘤源性物質(zhì)（如循環(huán)腫瘤DNA、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、外泌體等），實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤的動(dòng)態(tài)、微創(chuàng)監(jiān)測(cè)。引言：腫瘤診斷的臨床需求與技術(shù)瓶頸然而，液體活檢在低豐度腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)、組織特異性驗(yàn)證等方面仍存在瓶頸。超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下細(xì)針穿刺活檢（endoscopicultrasound-guidedfine-needleaspiration,EUS-FNA）作為消化系統(tǒng)腫瘤（如胰腺癌、膽管癌）及縱隔、肺部腫瘤診斷的核心手段，雖能獲取組織樣本進(jìn)行病理學(xué)和分子檢測(cè)，但其敏感性受穿刺操作者經(jīng)驗(yàn)、腫瘤位置及樣本質(zhì)量影響，假陰性率可達(dá)10%-20%?；诖?，液體活檢與EUS-FNA的聯(lián)合應(yīng)用——通過(guò)“液體標(biāo)志物”與“組織病理”的雙模態(tài)互補(bǔ)，已成為提升腫瘤診斷敏感性的突破性策略。本文將從技術(shù)原理、協(xié)同機(jī)制、臨床應(yīng)用、挑戰(zhàn)與展望五個(gè)維度，系統(tǒng)闡述這一新策略的理論基礎(chǔ)與實(shí)踐價(jià)值。02液體活檢：腫瘤動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的“液體窗口”液體活檢：腫瘤動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的“液體窗口”液體活檢的核心優(yōu)勢(shì)在于通過(guò)“液體”這一載體，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤全貌的實(shí)時(shí)捕捉。其檢測(cè)的物質(zhì)基礎(chǔ)主要包括三大類：循環(huán)腫瘤DNA（circulatingtumorDNA,ctDNA）、循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulatingtumorcells,CTCs）及外泌體（exosomes）。ctDNA：腫瘤基因組的“血液指紋”ctDNA是腫瘤細(xì)胞凋亡或壞死釋放到血液循環(huán)中的DNA片段，長(zhǎng)度通常為166-200bp，攜帶腫瘤特異性突變、甲基化、片段化等遺傳表觀學(xué)信息。與正常DNA相比，ctDNA具有腫瘤特異性（如KRAS、EGFR、TP53等基因突變）、動(dòng)態(tài)可監(jiān)測(cè)性（反映腫瘤負(fù)荷變化）及可量化性（通過(guò)數(shù)字PCR、NGS等技術(shù)檢測(cè)豐度）。技術(shù)進(jìn)展：近年來(lái)，ctDNA檢測(cè)技術(shù)已從單一基因突變檢測(cè)（如胰腺癌的KRAS突變）發(fā)展為多組學(xué)聯(lián)合分析（包括全外顯子測(cè)序、甲基化譜、片段化模式等）。例如，基于NGS的ctDNA甲基化檢測(cè)（如SEPT9基因甲基化）對(duì)結(jié)直腸癌的診斷敏感性可達(dá)85%-90%，特異性超90%；而ctDNA片段化分析（如末端motif分析）則能進(jìn)一步區(qū)分腫瘤來(lái)源與正常細(xì)胞釋放的DNA。ctDNA：腫瘤基因組的“血液指紋”臨床價(jià)值：ctDNA檢測(cè)已廣泛應(yīng)用于腫瘤早篩、療效評(píng)估及耐藥監(jiān)測(cè)。在胰腺癌中，約90%的患者存在KRAS突變，ctDNA檢測(cè)的陽(yáng)性率顯著高于CA19-9（敏感性78%vs62%）；在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中，EGFR突變陽(yáng)性的患者接受靶向治療后，ctDNA水平下降與影像學(xué)緩解高度一致，早于影像學(xué)變化4-8周。CTCs：腫瘤細(xì)胞的“活體信使”CTCs是自發(fā)或因診療操作（如手術(shù)、穿刺）從原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶脫落進(jìn)入外周血的腫瘤細(xì)胞，其數(shù)量與腫瘤負(fù)荷、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)及預(yù)后相關(guān)。與ctDNA相比，CTCs保留了完整的細(xì)胞形態(tài)和生物學(xué)活性，可用于體外培養(yǎng)、藥敏試驗(yàn)及單細(xì)胞測(cè)序。檢測(cè)技術(shù)：CTCs的富集與檢測(cè)主要基于物理（如密度梯度離心、膜過(guò)濾）和生物學(xué)（如上皮細(xì)胞黏附分子EpCAM捕獲、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物檢測(cè)）方法。例如，CellSearch?系統(tǒng)通過(guò)EpCAM免疫磁珠富集CTCs，聯(lián)合細(xì)胞角蛋白（CK）和CD45染色，已獲FDA批準(zhǔn)用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌、結(jié)直腸癌和前列腺癌的預(yù)后評(píng)估。臨床意義：CTCs計(jì)數(shù)在轉(zhuǎn)移性腫瘤中具有獨(dú)立預(yù)后價(jià)值。例如，轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者外周血CTCs≥5個(gè)/7.5mL，預(yù)示無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）和總生存期（OS）顯著縮短；在NSCLC中，CTCs中PD-L1表達(dá)狀態(tài)可指導(dǎo)免疫治療選擇，彌補(bǔ)組織活檢樣本不足的缺陷。外泌體：細(xì)胞間通訊的“納米載體”外泌體直徑30-150nm，是細(xì)胞分泌的囊泡結(jié)構(gòu)，攜帶DNA、RNA、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)等生物活性分子。腫瘤來(lái)源外泌體（Tumor-derivedexosomes,TDEs）可通過(guò)其表面標(biāo)志物（如EGFRvIII、HER2）及內(nèi)容物（如miR-21、lncRNAH19）反映腫瘤的生物學(xué)行為。技術(shù)突破：外泌體分離技術(shù)已從超速離心法（傳統(tǒng)方法）發(fā)展為免疫磁珠法、微流控芯片法等，可高效純化TDEs。例如，基于微流控的外泌體捕獲芯片（如ExoChip）能特異性識(shí)別胰腺癌相關(guān)抗原CA19-9，檢測(cè)靈敏度達(dá)10?個(gè)/mL。應(yīng)用前景：外泌體在腫瘤早期診斷中潛力巨大。在胰腺癌中，TDEs攜帶的miR-196a水平較健康人升高5-10倍，聯(lián)合CA19-9檢測(cè)可將敏感性提升至92%；在膠質(zhì)瘤中，外泌體中的EGFRvIII突變檢測(cè)可突破血腦屏障的限制，彌補(bǔ)腦組織活檢的困難。01030203EUS-FNA：腫瘤組織診斷的“精準(zhǔn)導(dǎo)航”EUS-FNA：腫瘤組織診斷的“精準(zhǔn)導(dǎo)航”EUS-FNA是內(nèi)鏡技術(shù)與超聲成像的完美結(jié)合，通過(guò)將高頻超聲探頭置于消化道管腔內(nèi)，實(shí)時(shí)顯示消化道管壁、鄰近器官（如胰腺、肝臟、淋巴結(jié)）及縱隔結(jié)構(gòu)的層次，引導(dǎo)細(xì)針穿刺獲取組織樣本。目前，EUS-FNA已成為胰腺癌、膽管癌、縱隔腫瘤及肺部周圍型病變?cè)\斷的一線手段。技術(shù)原理與操作流程EUS-FNA的核心設(shè)備為超聲內(nèi)鏡（凸陣或環(huán)掃探頭），頻率為5-12MHz，可清晰顯示病灶大小、邊界、血流信號(hào)及與周圍血管的關(guān)系。操作步驟包括：①病灶定位：通過(guò)內(nèi)鏡超聲確定穿刺目標(biāo)及最佳穿刺路徑；②穿刺引導(dǎo)：將22G或25G穿刺針經(jīng)內(nèi)鏡鉗道送至病灶邊緣，在超聲實(shí)時(shí)監(jiān)視下刺入病灶；③樣本獲?。贺?fù)壓抽吸或無(wú)負(fù)壓快速?gòu)椛浍@取組織樣本，涂片后行細(xì)胞學(xué)檢查，剩余樣本行組織病理學(xué)、免疫組化或分子檢測(cè)。臨床應(yīng)用與局限性優(yōu)勢(shì)領(lǐng)域：EUS-FNA在胰腺癌診斷中具有不可替代的地位，其敏感性為85%-95%，特異性超90%；對(duì)于直徑≤2cm的胰腺癌，EUS-FNA的敏感性仍可達(dá)80%以上，顯著優(yōu)于CT引導(dǎo)下穿刺（敏感性約60%）。此外，EUS-FNA還可同時(shí)獲取腫大淋巴結(jié)或轉(zhuǎn)移灶樣本，為TNM分期提供依據(jù)。核心局限：盡管EUS-FNA是“金標(biāo)準(zhǔn)”，但其敏感性受多重因素影響：①操作者依賴性：穿刺針角度、負(fù)壓控制、樣本處理經(jīng)驗(yàn)等均影響取材質(zhì)量，研究顯示不同醫(yī)療中心的EUS-FNA陰性率差異可達(dá)5%-30%；②腫瘤生物學(xué)特性：胰腺導(dǎo)管腺癌的纖維間質(zhì)成分豐富，穿刺針易堵塞，導(dǎo)致樣本量不足；③腫瘤異質(zhì)性：穿刺樣本僅代表局部病灶，可能遺漏內(nèi)部壞死區(qū)域或轉(zhuǎn)移克隆，導(dǎo)致假陰性。EUS-FNA樣本的拓展應(yīng)用：從病理到分子傳統(tǒng)EUS-FNA樣本主要用于細(xì)胞學(xué)和組織病理學(xué)檢查，但隨著分子檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，微量樣本的分子分析成為可能。例如，通過(guò)細(xì)胞塊（cellblock）技術(shù)將穿刺細(xì)胞制成石蠟塊，可進(jìn)行EGFR、ALK、ROS1等基因突變檢測(cè)，為NSCLC的靶向治療提供依據(jù)；此外，EUS-FNA獲取的樣本還可用于PD-L1免疫組化檢測(cè)，指導(dǎo)免疫治療選擇。然而，由于EUS-FNA樣本量有限（通常1-2條組織條），分子檢測(cè)的失敗率仍高達(dá)15%-25%，限制了其在精準(zhǔn)醫(yī)療中的應(yīng)用。04液體活檢聯(lián)合EUS-FNA：雙模態(tài)互補(bǔ)的協(xié)同機(jī)制液體活檢聯(lián)合EUS-FNA：雙模態(tài)互補(bǔ)的協(xié)同機(jī)制液體活檢與EUS-FNA的聯(lián)合并非簡(jiǎn)單疊加，而是通過(guò)“液體廣度”與“組織深度”的互補(bǔ)，實(shí)現(xiàn)1+1>2的診斷效能。其協(xié)同機(jī)制可概括為“三提升、一驗(yàn)證”：提升診斷敏感性：彌補(bǔ)單一方法的假陰性EUS-FNA的假陰性主要源于取材不足或腫瘤異質(zhì)性，而液體活檢的“全身性”特征可捕捉腫瘤釋放的分子標(biāo)志物，彌補(bǔ)局部取樣的缺陷。臨床證據(jù)：一項(xiàng)針對(duì)胰腺癌的前瞻性研究納入120例疑似患者，分別接受EUS-FNA、ctDNA檢測(cè)（KRAS突變）及兩者聯(lián)合檢測(cè)。結(jié)果顯示，EUS-FNA的敏感性為82.1%，ctDNA檢測(cè)敏感性為79.3%，聯(lián)合檢測(cè)敏感性提升至96.4%（P<0.01）；在15例EUS-FNA假陰性患者中，12例ctDNA檢測(cè)陽(yáng)性，最終通過(guò)手術(shù)或隨訪確診為胰腺癌。機(jī)制分析：ctDNA來(lái)源于腫瘤細(xì)胞的全身性釋放，即使EUS-FNA穿刺未取到腫瘤核心區(qū)域，ctDNA仍可反映腫瘤的存在；而EUS-FNA獲取的組織樣本可驗(yàn)證ctDNA的腫瘤來(lái)源（如通過(guò)Sanger測(cè)序確認(rèn)KRAS突變），避免假陽(yáng)性。提升診斷特異性：液體標(biāo)志物的組織驗(yàn)證液體活檢的假陽(yáng)性主要源于“背景噪音”（如炎癥、壞死細(xì)胞釋放的DNA），而EUS-FNA的組織病理學(xué)檢查可明確腫瘤性質(zhì)。典型案例：一位65歲患者因“CA19-1999U/mL（正常<37U/mL）、胰腺占位”入院，EUS-FNA穿刺顯示慢性胰腺炎，細(xì)胞學(xué)未見(jiàn)異型細(xì)胞；但ctDNA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)KRASG12D突變，高度提示胰腺癌。結(jié)合影像學(xué)（病灶直徑2.5cm，邊界不清），最終行胰十二指腸切除術(shù)，術(shù)后病理診斷為胰腺導(dǎo)管腺癌。此案例中，EUS-FNA的組織學(xué)檢查排除了炎癥導(dǎo)致的假陽(yáng)性，而ctDNA的分子檢測(cè)則彌補(bǔ)了EUS-FNA的取樣誤差。提升分子檢測(cè)成功率：微量樣本的補(bǔ)充與富集EUS-FNA樣本量有限，常導(dǎo)致分子檢測(cè)失??；而液體活檢中的ctDNA/CTCs可作為“分子備份”，提供充足的檢測(cè)模板。技術(shù)策略：采用“EUS-FNA組織+ctDNA”聯(lián)合檢測(cè)模式，對(duì)于EUS-FNA樣本不足（如細(xì)胞塊制備失?。┑那闆r，可利用ctDNA進(jìn)行NGS檢測(cè)；反之，若ctDNA陰性但EUS-FNA樣本充足，可進(jìn)行組織RNA測(cè)序或蛋白質(zhì)組學(xué)分析，實(shí)現(xiàn)多維度分子分型。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)與療效評(píng)估：實(shí)時(shí)追蹤腫瘤演變EUS-FNA為“單次取樣”，難以反映腫瘤的動(dòng)態(tài)變化；而液體活檢可實(shí)現(xiàn)“實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)”，為療效評(píng)估和耐藥機(jī)制分析提供依據(jù)。臨床應(yīng)用：晚期胰腺癌患者接受吉西他濱化療后，可通過(guò)ctDNA水平變化早期判斷療效。研究顯示，化療2周后ctDNA水平下降>50%的患者，其中位PFS顯著長(zhǎng)于ctDNA水平未下降者（9.2個(gè)月vs4.8個(gè)月，P=0.002）；當(dāng)影像學(xué)提示疾病進(jìn)展時(shí)，ctDNA已提前4-6周出現(xiàn)KRAS突變克隆擴(kuò)增，為調(diào)整治療方案（如更換為FOLFIRINOX方案）提供窗口。05臨床應(yīng)用實(shí)踐：不同瘤種中的聯(lián)合策略臨床應(yīng)用實(shí)踐：不同瘤種中的聯(lián)合策略液體活檢聯(lián)合EUS-FNA的診斷策略已在多種腫瘤中展現(xiàn)出獨(dú)特價(jià)值，以下重點(diǎn)闡述胰腺癌、肺癌及消化道腫瘤中的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)。胰腺癌：破解“癌中之王”的診斷困局胰腺癌起病隱匿，早期診斷率不足10%，EUS-FNA是其主要診斷手段，但仍有10%-15%的患者因取材不足導(dǎo)致假陰性。聯(lián)合液體活檢可顯著提升早期診斷敏感性。聯(lián)合方案：對(duì)于疑似胰腺癌患者，先行EUS-FNA獲取組織樣本，同時(shí)采集外周血進(jìn)行ctDNA（KRAS、GNAS、TP53等基因突變）和外泌體（miR-21、CA19-9）檢測(cè)。若EUS-FNA陰性但液體活檢陽(yáng)性，建議短期內(nèi)復(fù)查EUS-FNA或結(jié)合MRI/MRCP隨訪；若兩者均陽(yáng)性，則可確診并啟動(dòng)治療。研究數(shù)據(jù)：一項(xiàng)多中心研究納入300例疑似胰腺癌患者，聯(lián)合檢測(cè)的敏感性為94.7%，特異性為91.2%，較單一EUS-FNA（敏感性85.3%）提升9.4個(gè)百分點(diǎn)，較單一液體活檢（敏感性88.1%）提升6.6個(gè)百分點(diǎn)。對(duì)于直徑≤2cm的早期胰腺癌，聯(lián)合檢測(cè)的敏感性仍達(dá)87.5%，顯著優(yōu)于EUS-FNA單獨(dú)檢測(cè)（70.0%）。肺癌：縱隔及肺部周圍型病變的精準(zhǔn)診斷肺癌的縱隔淋巴結(jié)分期直接影響治療策略（如是否需要手術(shù)或新輔助治療），EUS-FNA可通過(guò)經(jīng)支氣管超聲引導(dǎo)針吸活檢（EBUS-TBNA）或經(jīng)食管超聲引導(dǎo)針吸活檢（EUS-FNA）獲取縱隔淋巴結(jié)樣本，但對(duì)于肺部周圍型病變，EUS-FNA的穿刺難度較大。聯(lián)合液體活檢可彌補(bǔ)這一缺陷。應(yīng)用場(chǎng)景：①縱隔淋巴結(jié)分期：對(duì)于CT顯示縱隔淋巴結(jié)腫大的NSCLC患者，先行EUS-FNA獲取淋巴結(jié)樣本，同時(shí)檢測(cè)CTCs中PD-L1表達(dá)狀態(tài)和ctDNA的EGFR突變；若EUS-FNA陰性但ctDNA檢測(cè)到驅(qū)動(dòng)突變，則提示存在隱匿性轉(zhuǎn)移，需調(diào)整為全身治療。②肺部周圍型病變：對(duì)于CT提示周圍型肺癌但無(wú)法耐受手術(shù)或經(jīng)皮穿刺風(fēng)險(xiǎn)高的患者，可通過(guò)EUS-FNA經(jīng)支氣管或食管穿刺，聯(lián)合ctDNA檢測(cè)，提高診斷陽(yáng)性率。肺癌：縱隔及肺部周圍型病變的精準(zhǔn)診斷案例分享：一位72歲患者因“咳嗽、痰中帶血1個(gè)月”就診，CT顯示右肺上葉周圍型占位（直徑3cm），縱隔淋巴結(jié)腫大。因患者肺功能差，無(wú)法耐受經(jīng)皮穿刺活檢，遂行EUS-FNA穿刺縱隔淋巴結(jié)，細(xì)胞學(xué)未見(jiàn)腫瘤細(xì)胞；但ctDNA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)EGFRL858R突變，結(jié)合影像學(xué)，診斷為肺腺癌伴縱隔轉(zhuǎn)移，予奧希替尼靶向治療，2個(gè)月后影像學(xué)顯示病灶縮小50%。消化道腫瘤：早期診斷與分子分型的雙重突破結(jié)直腸癌、胃癌等消化道腫瘤的早期診斷依賴腸鏡/胃鏡活檢，但對(duì)于進(jìn)展期患者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的評(píng)估至關(guān)重要。EUS-FNA可對(duì)腫大淋巴結(jié)或轉(zhuǎn)移灶進(jìn)行穿刺，聯(lián)合液體活檢可完善分期并指導(dǎo)個(gè)體化治療。結(jié)直腸癌應(yīng)用：對(duì)于疑似局部進(jìn)展期結(jié)直腸癌（cT3-4N+），EUS-FNA可評(píng)估淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)，同時(shí)檢測(cè)ctDNA的BRAF突變和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI）；若EUS-FNA淋巴結(jié)陰性但ctDNA檢測(cè)到BRAFV600E突變，則提示存在隱匿性轉(zhuǎn)移，需新輔助化療；若MSI-H，則可考慮免疫治療。胃癌應(yīng)用：對(duì)于胃上部癌或胃食管結(jié)合部癌，EUS-FNA可對(duì)腹腔動(dòng)脈旁淋巴結(jié)穿刺，檢測(cè)CTCs中HER2表達(dá)狀態(tài)；若EUS-FNA樣本不足，可通過(guò)ctDNA的HER2擴(kuò)增檢測(cè)輔助判斷，為曲妥珠單抗治療提供依據(jù)。06挑戰(zhàn)與對(duì)策：邁向臨床常規(guī)化的必經(jīng)之路挑戰(zhàn)與對(duì)策：邁向臨床常規(guī)化的必經(jīng)之路盡管液體活檢聯(lián)合EUS-FNA展現(xiàn)出巨大潛力，但其臨床常規(guī)化仍面臨技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化、成本效益、多學(xué)科協(xié)作等多重挑戰(zhàn)。技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化：建立統(tǒng)一的檢測(cè)流程挑戰(zhàn)：液體活檢的檢測(cè)方法（如ctDNA提取、CTC富集）和數(shù)據(jù)分析平臺(tái)（如NGSpanel設(shè)計(jì)）尚未統(tǒng)一，不同實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果可比性差；EUS-FNA的操作規(guī)范（如穿刺針型號(hào)、樣本處理流程）也存在差異，影響組織學(xué)診斷的一致性。對(duì)策：①建立液體活檢標(biāo)準(zhǔn)化操作流程（SOP），包括樣本采集（抗凝劑選擇、保存溫度）、核酸提?。ú捎米詣?dòng)化提取平臺(tái)）、檢測(cè)方法（推薦數(shù)字PCR或NGS）及結(jié)果判讀（設(shè)定統(tǒng)一的陽(yáng)性閾值）；②推廣EUS-FNA的“快速onsiteevaluation”（ROSE）技術(shù)，即由病理醫(yī)師在穿刺現(xiàn)場(chǎng)對(duì)樣本進(jìn)行評(píng)估，確保樣本量充足；③制定多學(xué)科協(xié)作（MDT）指南，明確液體活檢與EUS-FNA的聯(lián)合應(yīng)用指征和報(bào)告規(guī)范。成本效益控制：降低醫(yī)療負(fù)擔(dān)挑戰(zhàn)：液體活檢（尤其是NGS檢測(cè)）和EUS-FNA的費(fèi)用較高（單次EUS-FNA約3000-5000元，ctDNA檢測(cè)約2000-5000元），部分患者難以承擔(dān)；同時(shí)，聯(lián)合檢測(cè)是否能為患者帶來(lái)明確的生存獲益，需衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)評(píng)價(jià)驗(yàn)證。對(duì)策：①開(kāi)發(fā)低成本、高效率的檢測(cè)技術(shù)，如基于微流控的ctDNA快速檢測(cè)芯片（單次檢測(cè)成本<1000元）；②建分層檢測(cè)策略：對(duì)高度疑似腫瘤的患者先行EUS-FNA，根據(jù)結(jié)果決定是否加做液體活檢，避免過(guò)度檢測(cè)；③開(kāi)展衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)研究，評(píng)估聯(lián)合檢測(cè)對(duì)早期診斷、治療成本及生活質(zhì)量的改善價(jià)值，推動(dòng)醫(yī)保覆蓋。多學(xué)科協(xié)作：打破“技術(shù)孤島”挑戰(zhàn)：液體活檢多由檢驗(yàn)科或分子病理科開(kāi)展，EUS-FNA由消化內(nèi)鏡科或胸外科執(zhí)行，而腫瘤治療需腫瘤科、放療科等多學(xué)科參與，各學(xué)科間缺乏有效協(xié)作機(jī)制，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果與臨床決策脫節(jié)。對(duì)策：①建立以患者為中心的MDT團(tuán)隊(duì)，涵蓋消化內(nèi)鏡科、病理科、檢驗(yàn)科、腫瘤科、影像科等，定期召開(kāi)病例討論會(huì)；②開(kāi)發(fā)一體化信息管理平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)EUS-FNA圖像、液體活檢數(shù)據(jù)、影像學(xué)報(bào)告及治療方案的實(shí)時(shí)共享；③加強(qiáng)醫(yī)師培訓(xùn)，提升臨床醫(yī)師對(duì)液體活檢結(jié)果的理解和應(yīng)用能力（如區(qū)分致病突變與良性多態(tài)性）。07未來(lái)展望：智能化與多組學(xué)的融合方向未來(lái)展望：智能化與多組學(xué)的融合方向隨著技術(shù)的進(jìn)步，液體活檢聯(lián)合EUS-FNA將向“更精準(zhǔn)、更智能、更微創(chuàng)”的方向發(fā)展，主要體現(xiàn)在以下三個(gè)方面：人工智能輔助診斷：提升決策效率人工智能（AI）可通過(guò)深度學(xué)習(xí)分析EUS-FNA的超聲圖像和穿刺樣本的病理圖像，自動(dòng)識(shí)別可疑病灶和異型細(xì)胞；同時(shí)，AI可整合液體活檢的多組學(xué)數(shù)據(jù)（ctDNA突變、甲基化、外泌體蛋白等），構(gòu)建腫瘤診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)模型，提高診斷的準(zhǔn)確性和效率。例如，基于卷積神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（CNN）的EUS圖像分析系統(tǒng)對(duì)胰腺癌的診斷敏感性已達(dá)93.5%，與經(jīng)驗(yàn)豐富的內(nèi)鏡醫(yī)師相當(dāng)；而多組學(xué)AI模型（整合ctDNA、CA19-9和EUS特征）對(duì)胰腺癌的預(yù)測(cè)AUC達(dá)0.96，顯著優(yōu)于單一指標(biāo)。新型液體活檢標(biāo)志物：拓展檢