延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥的調(diào)控機制與影響研究一、引言1.1研究背景與意義腹膜透析作為終末期腎臟病尿毒癥患者的有效治療方式之一，與血液透析相比，具有操作簡便、對血流動力學(xué)影響小、能更好地保護殘余腎功能等獨特優(yōu)勢，在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用。然而，長期維持性腹膜透析所面臨的腹膜纖維化和腹膜炎癥問題，嚴重威脅著患者的治療效果和生存質(zhì)量。腹膜纖維化是腹膜透析患者腹膜失功能的主要原因之一。反復(fù)發(fā)生的腹膜炎、非生理性腹透液的長期刺激，如高濃度葡萄糖腹透液的低pH值和生物不相容性，均可導(dǎo)致腹膜上皮細胞發(fā)生病理性改變，進而引發(fā)腹膜纖維化。腹膜纖維化會引起腹膜結(jié)構(gòu)改變，使腹膜厚度增加，間質(zhì)成分增多，血管新生異常，最終導(dǎo)致腹膜功能喪失，超濾失敗，患者不得不退出腹膜透析治療。據(jù)相關(guān)研究統(tǒng)計，約有20%-30%的腹膜透析患者在治療5年內(nèi)會因腹膜纖維化而出現(xiàn)腹膜功能衰竭。腹膜炎癥也是腹膜透析常見且嚴重的并發(fā)癥。腹膜炎是腹膜炎癥的主要表現(xiàn)形式，盡管隨著透析方法和裝置的改進，感染性腹膜炎發(fā)病率已顯著降低，但它仍是導(dǎo)致腹膜透析技術(shù)失敗、增加患者住院率和病死率的首要并發(fā)癥。細菌是腹膜炎的主要病原體，其中以大腸桿菌和表皮葡萄球菌最為常見。感染途徑主要包括經(jīng)腹透管和皮下隧道感染，以及血源性、淋巴源性和鄰近部位感染的病原體直接侵襲，急性胃腸道感染也是引發(fā)腹膜炎的重要因素。腹膜炎發(fā)生時，大量炎癥細胞進入腹腔，吞噬細菌的同時釋放氧自由基、蛋白酶、前列腺素、白三烯及IL-1、TNF-α等細胞因子，誘導(dǎo)并放大炎癥反應(yīng)。這些炎癥反應(yīng)不僅會直接損傷腹膜組織，還會進一步促進腹膜纖維化的發(fā)展。在腹膜纖維化和腹膜炎癥的發(fā)生發(fā)展過程中，TGF-β/Smads信號通路起著關(guān)鍵作用。TGF-β是一種重要的促纖維化因子，在多種組織器官纖維化過程中均發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，長期腹膜透析患者腹透液中TGF-β的含量明顯升高，且發(fā)生腹膜纖維化的患者升高程度更顯著，因此，腹透液中TGF-β的水平可以作為監(jiān)測腹膜纖維化發(fā)生的指標之一。體外實驗表明，TGF-β可以刺激人腹膜間皮細胞合成大量細胞基質(zhì)，提示其是導(dǎo)致腹膜纖維化的重要因素。TGF-β主要通過其信號蛋白Smads的活化發(fā)揮作用，TGF-β與受體結(jié)合后，使受體激活，進而磷酸化Smad2和Smad3，磷酸化的Smad2/3與Smad4形成復(fù)合物，轉(zhuǎn)入細胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，促進細胞外基質(zhì)的合成和沉積，誘導(dǎo)上皮/間皮細胞向肌成纖維細胞的表型轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致腹膜纖維化。Smad7作為TGF-β/Smads信號通路的負反饋調(diào)節(jié)主要成員，能夠與R-Smad（Smad2、Smad3）競爭性地結(jié)合被激活的TGF-β受體，從而阻止Smad2、Smad3與TGF-β受體結(jié)合及其隨后的磷酸化過程，進而抑制TGF-β/Smads信號通路的過度激活。研究表明，將Smad7基因轉(zhuǎn)入單側(cè)輸尿管梗阻大鼠的腎臟，可以顯著抑制腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化和腎臟纖維化的發(fā)生。以往實驗也表明，將Smad7轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的大鼠腹膜間皮細胞，可以減少α-SMA陽性細胞和膠原的分泌。然而，目前關(guān)于延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥的影響尚不清楚。本研究旨在探討延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥的影響，通過深入研究其作用機制，有望為腹膜透析相關(guān)腹膜纖維化和腹膜炎癥的防治提供新的靶點和理論依據(jù)，對于改善腹膜透析患者的預(yù)后、提高其生活質(zhì)量具有重要的科學(xué)意義和臨床實用價值。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在腹膜纖維化與腹膜炎癥的研究領(lǐng)域，Smad7作為TGF-β/Smads信號通路的關(guān)鍵負反饋調(diào)節(jié)因子，一直是國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的焦點。國外學(xué)者早在20世紀90年代就開始深入研究TGF-β/Smads信號通路在組織纖維化中的作用機制。有研究發(fā)現(xiàn)，在腎臟纖維化模型中，TGF-β1能夠通過激活Smad2/3信號通路，促進細胞外基質(zhì)的合成和沉積，進而導(dǎo)致腎臟纖維化。后續(xù)研究進一步表明，Smad7可以通過與Smad2/3競爭性結(jié)合TGF-β受體，抑制TGF-β/Smads信號通路的激活，從而發(fā)揮抗纖維化作用。這些研究為Smad7在腹膜纖維化中的作用研究奠定了理論基礎(chǔ)。在腹膜透析相關(guān)研究方面，國外學(xué)者通過對長期腹膜透析患者的臨床觀察和實驗研究發(fā)現(xiàn)，腹膜纖維化和腹膜炎癥的發(fā)生與腹透液的生物不相容性、反復(fù)腹膜炎等因素密切相關(guān)。高濃度葡萄糖腹透液的長期刺激可導(dǎo)致腹膜間皮細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），同時伴隨著TGF-β1表達的上調(diào)和Smad7表達的下調(diào)。而在腹膜炎模型中，細菌感染可誘導(dǎo)大量炎癥細胞浸潤，釋放多種炎癥因子，如IL-1、TNF-α等，這些炎癥因子不僅會加劇腹膜炎癥反應(yīng)，還能通過激活TGF-β/Smads信號通路，促進腹膜纖維化的發(fā)展。國內(nèi)學(xué)者在該領(lǐng)域也取得了豐碩的研究成果。有研究利用大鼠腹膜纖維化模型，發(fā)現(xiàn)高糖腹透液和細菌脂多糖（LPS）均可誘導(dǎo)腹膜組織中TGF-β1和Smad2/3的表達增加，同時Smad7的表達降低，進一步證實了TGF-β/Smads信號通路在腹膜纖維化中的關(guān)鍵作用。此外，國內(nèi)學(xué)者還通過基因轉(zhuǎn)染等技術(shù)，探討了上調(diào)Smad7表達對腹膜纖維化和腹膜炎癥的影響。例如，有研究將Smad7基因轉(zhuǎn)染至大鼠腹膜間皮細胞，發(fā)現(xiàn)能夠顯著抑制TGF-β1誘導(dǎo)的EMT和細胞外基質(zhì)合成。在腹膜炎模型中，上調(diào)Smad7表達可減少炎癥細胞浸潤和炎癥因子的釋放，從而改善腹膜炎癥。盡管國內(nèi)外學(xué)者在Smad7與腹膜纖維化、腹膜炎癥的關(guān)系研究方面取得了一定進展，但仍存在一些不足之處。首先，目前大多數(shù)研究主要集中在Smad7對腹膜纖維化的直接影響，而對于延遲性上調(diào)Smad7在腹膜纖維化模型中對腹膜炎癥的影響及其作用機制的研究相對較少。其次，在Smad7的調(diào)控機制方面，雖然已經(jīng)明確其可以通過與Smad2/3競爭性結(jié)合TGF-β受體來抑制信號通路的激活，但對于Smad7自身的表達調(diào)控機制以及其與其他信號通路之間的相互作用仍有待進一步深入研究。此外，目前的研究多基于動物模型和體外實驗，將Smad7作為治療靶點應(yīng)用于臨床腹膜透析患者的研究還處于起步階段，如何安全有效地上調(diào)Smad7的表達，以及評估其在臨床應(yīng)用中的療效和安全性，仍需要大量的臨床研究來驗證。本研究旨在填補上述研究空白，通過建立大鼠腹膜纖維化模型，探討延遲性上調(diào)Smad7對腹膜炎癥的影響及其潛在作用機制，為臨床防治腹膜透析相關(guān)腹膜纖維化和腹膜炎癥提供新的理論依據(jù)和治療策略。1.3研究目的與內(nèi)容本研究的目的在于深入探究延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥的影響及其潛在機制，為臨床上防治腹膜透析相關(guān)腹膜纖維化和腹膜炎癥提供全新的理論依據(jù)與治療策略。圍繞這一核心目的，研究內(nèi)容涵蓋以下幾個關(guān)鍵方面：建立大鼠腹膜纖維化模型：采用特定的方法，如腹腔注射高濃度葡萄糖透析液和細菌脂多糖（LPS），建立穩(wěn)定且可靠的大鼠腹膜纖維化模型。將體重在特定范圍內(nèi)的雄性SD大鼠隨機分組，正常對照組給予生理鹽水腹腔注射，模型組每日按相應(yīng)劑量腹腔注射高糖透析液，并在特定時間點腹腔注射LPS。于實驗的不同時間點，分別選取一定數(shù)量的大鼠，進行腹膜功能實驗，同時取壁層、臟層腹膜組織進行光鏡、透射電鏡檢查，以全面評估模型的建立情況。檢測相關(guān)指標評估腹膜炎癥程度：在成功建立大鼠腹膜纖維化模型的基礎(chǔ)上，運用多種實驗技術(shù)對腹膜炎癥相關(guān)指標進行精確檢測。通過酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法，準確測定腹水中白細胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎癥因子的含量，這些炎癥因子在腹膜炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其含量的變化能夠直接反映腹膜炎癥的程度。采用免疫組織化學(xué)染色法，檢測腹膜組織中炎癥細胞標志物如CD68（巨噬細胞標志物）、CD45（白細胞共同抗原）的表達情況，以此清晰地了解炎癥細胞在腹膜組織中的浸潤程度和分布情況。檢測Smad7及相關(guān)信號通路蛋白表達：利用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）和實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）技術(shù)，深入檢測Smad7以及TGF-β/Smads信號通路中關(guān)鍵蛋白Smad2、Smad3的磷酸化水平和總蛋白表達，同時檢測其mRNA表達水平。通過這些檢測，全面了解延遲性上調(diào)Smad7對TGF-β/Smads信號通路的影響，明確該信號通路在腹膜炎癥發(fā)生發(fā)展過程中的作用機制。分析延遲性上調(diào)Smad7對腹膜炎癥的影響：將大鼠隨機分為正常對照組、模型組、延遲上調(diào)Smad7組等多個組別。正常對照組不做特殊處理，模型組僅建立腹膜纖維化模型，延遲上調(diào)Smad7組則在模型建立后的特定時間點，通過超聲微泡轉(zhuǎn)基因技術(shù)等方法上調(diào)Smad7的表達。對比分析不同組別的腹膜炎癥相關(guān)指標、Smad7及相關(guān)信號通路蛋白表達情況，深入探討延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥的影響。探討延遲性上調(diào)Smad7影響腹膜炎癥的機制：綜合上述實驗結(jié)果，深入探討延遲性上調(diào)Smad7影響大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥的潛在機制。從細胞水平和分子水平進行全面分析，研究Smad7是否通過抑制TGF-β/Smads信號通路的過度激活，減少炎癥因子的釋放和炎癥細胞的浸潤，從而發(fā)揮對腹膜炎癥的抑制作用。同時，考慮Smad7是否與其他信號通路存在相互作用，共同調(diào)控腹膜炎癥的發(fā)生發(fā)展。二、實驗材料與方法2.1實驗動物及飼養(yǎng)環(huán)境本實驗選用60只健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，體重在200-220g之間。SD大鼠因其遺傳背景清晰、生長發(fā)育快、繁殖能力強、對環(huán)境適應(yīng)性好等優(yōu)點，在醫(yī)學(xué)實驗研究中被廣泛應(yīng)用。本研究選擇雄性大鼠，可減少因性別差異導(dǎo)致的實驗結(jié)果偏差，保證實驗數(shù)據(jù)的準確性和可靠性。實驗動物飼養(yǎng)于符合國家實驗動物標準的動物房內(nèi)。動物房溫度嚴格控制在（23±2）℃，這一溫度范圍接近大鼠的最適生活溫度，能確保大鼠處于舒適的生理狀態(tài)，避免因溫度不適影響實驗結(jié)果。相對濕度維持在（50±10）%，適宜的濕度可防止大鼠呼吸道疾病的發(fā)生，保證其健康生長。采用12小時光照/12小時黑暗的晝夜節(jié)律照明系統(tǒng)，模擬自然環(huán)境，維持大鼠正常的生理節(jié)律。大鼠自由攝取標準嚙齒類動物飼料和飲用水，飼料營養(yǎng)均衡，滿足大鼠生長和代謝需求，飲用水經(jīng)過嚴格消毒處理，確保大鼠的飲食安全。在實驗開始前，大鼠先在動物房適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，使其適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境，減少因環(huán)境改變帶來的應(yīng)激反應(yīng)，為后續(xù)實驗的順利進行奠定基礎(chǔ)。2.2主要實驗試劑與儀器本實驗所需的主要試劑與儀器如下：主要試劑：Smad7相關(guān)試劑：Smad7質(zhì)粒由[具體公司名稱]提供，其經(jīng)過嚴格的測序驗證，確保序列準確性。該質(zhì)粒含有Smad7基因的完整編碼序列，可用于后續(xù)的基因轉(zhuǎn)染實驗，以實現(xiàn)Smad7的上調(diào)表達。轉(zhuǎn)染試劑選用[具體品牌]的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，其具有高效的轉(zhuǎn)染效率和較低的細胞毒性，能夠?qū)mad7質(zhì)粒有效導(dǎo)入細胞內(nèi)。該試劑的作用機制是通過與質(zhì)粒形成復(fù)合物，然后與細胞膜相互作用，將質(zhì)粒包裹的基因?qū)爰毎?。在使用前，需按照試劑說明書的要求進行稀釋和準備，以確保最佳的轉(zhuǎn)染效果。炎癥因子檢測試劑：用于檢測腹水中白細胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎癥因子含量的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒購自[具體公司名稱]。該試劑盒采用雙抗體夾心法原理，具有高靈敏度和特異性，能夠準確檢測炎癥因子的含量。其檢測原理是將特異性抗體包被在微孔板上，加入樣本后，樣本中的炎癥因子與包被抗體結(jié)合，再加入酶標記的特異性抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后，加入底物顯色，通過酶標儀檢測吸光度值，根據(jù)標準曲線計算炎癥因子的含量。免疫組織化學(xué)染色試劑：免疫組織化學(xué)染色所需的抗體，如兔抗大鼠CD68抗體、兔抗大鼠CD45抗體等，均購自[具體公司名稱]。這些抗體經(jīng)過嚴格的驗證和質(zhì)量控制，能夠特異性地識別相應(yīng)的抗原，用于檢測腹膜組織中炎癥細胞標志物的表達情況。DAB顯色試劑盒用于免疫組織化學(xué)染色后的顯色反應(yīng)，其主要成分包括DAB（3,3'-二氨基聯(lián)苯胺）和過氧化氫，在過氧化物酶的催化下，DAB被氧化形成棕色沉淀，從而使抗原所在位置呈現(xiàn)出可見的顏色。蘇木精染液用于細胞核的染色，使細胞核呈現(xiàn)出藍色，與DAB顯色后的棕色形成鮮明對比，便于觀察和分析。蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）試劑：用于蛋白質(zhì)提取的RIPA裂解液購自[具體公司名稱]，其能夠有效裂解細胞和組織，釋放出細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。蛋白酶抑制劑cocktail購自[具體公司名稱]，在蛋白質(zhì)提取過程中加入，可有效抑制蛋白酶的活性，防止蛋白質(zhì)降解。BCA蛋白定量試劑盒用于測定提取的蛋白質(zhì)濃度，其原理是基于蛋白質(zhì)與BCA試劑在堿性條件下形成紫色絡(luò)合物，通過檢測吸光度值，與標準曲線對比，計算出蛋白質(zhì)濃度。SDS-PAGE凝膠配制所需的丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、Tris-HCl等試劑均購自[具體公司名稱]，按照一定的配方和比例配制凝膠，用于蛋白質(zhì)的分離。轉(zhuǎn)膜緩沖液用于將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，常用的轉(zhuǎn)膜緩沖液配方包括Tris、甘氨酸和甲醇等。封閉液采用5%脫脂奶粉，用于封閉PVDF膜上的非特異性結(jié)合位點，減少背景信號。一抗，如兔抗大鼠Smad7抗體、兔抗大鼠p-Smad2/3抗體、兔抗大鼠Smad2/3抗體等，均購自[具體公司名稱]，用于特異性識別目的蛋白。二抗采用辣根過氧化物酶（HRP）標記的羊抗兔IgG抗體，購自[具體公司名稱]，與一抗結(jié)合后，通過HRP催化底物顯色，檢測目的蛋白的表達。ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒用于檢測HRP催化底物產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號，通過曝光在X光片上，顯示出蛋白質(zhì)條帶。實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）試劑：RNA提取試劑盒選用[具體公司名稱]的產(chǎn)品，能夠高效地從細胞和組織中提取總RNA。該試劑盒采用柱式法提取RNA，利用硅膠膜對RNA的特異性吸附，經(jīng)過多次洗滌和洗脫，得到高質(zhì)量的RNA。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自[具體公司名稱]，用于將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，其包含逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、dNTP等成分，在特定的反應(yīng)條件下，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。qRT-PCR試劑盒選用[具體公司名稱]的SYBRGreen熒光染料法試劑盒，該試劑盒包含SYBRGreen熒光染料、Taq酶、dNTP、引物等成分，在PCR反應(yīng)過程中，SYBRGreen熒光染料與雙鏈DNA結(jié)合，發(fā)出熒光信號，通過實時監(jiān)測熒光信號的變化，定量分析目的基因的表達水平。引物由[具體公司名稱]合成，根據(jù)GenBank中大鼠Smad7、Smad2、Smad3等基因的序列，利用相關(guān)軟件設(shè)計特異性引物，引物的特異性和擴增效率經(jīng)過嚴格的驗證。其他試劑：4.25%高糖腹膜透析液購自[具體公司名稱]，用于建立大鼠腹膜纖維化模型，其高糖成分和非生理性pH值可模擬臨床腹膜透析過程中對腹膜的刺激。細菌脂多糖（LPS）購自[具體公司名稱]，在建立模型時與高糖腹膜透析液聯(lián)合使用，誘導(dǎo)腹膜炎癥反應(yīng)。生理鹽水用于稀釋試劑、沖洗樣本等常規(guī)實驗操作。戊二醛用于固定腹膜組織，以便進行電鏡觀察，其能夠交聯(lián)蛋白質(zhì)和其他生物分子，保持組織的超微結(jié)構(gòu)。多聚甲醛用于固定腹膜組織，以便進行免疫組織化學(xué)染色和病理切片觀察，其能夠使組織中的蛋白質(zhì)等生物分子發(fā)生交聯(lián)，保持組織的形態(tài)和抗原性。主要儀器：PCR儀：[具體品牌和型號]的PCR儀，具有精確的溫度控制和快速的升降溫速度，能夠滿足qRT-PCR實驗對溫度和時間的嚴格要求。其溫度均一性高，可確保每個反應(yīng)管中的反應(yīng)條件一致，提高實驗結(jié)果的準確性和重復(fù)性。在實驗過程中，可根據(jù)實驗需求設(shè)置不同的PCR反應(yīng)程序，包括預(yù)變性、變性、退火、延伸等步驟的溫度和時間。酶標儀：[具體品牌和型號]的酶標儀，用于檢測ELISA實驗中的吸光度值。該酶標儀具有高靈敏度和準確性，能夠快速、準確地測量樣本的吸光度值。其具備多種檢測模式，可根據(jù)實驗需求選擇單波長或雙波長檢測，還可進行動力學(xué)檢測等。在實驗前，需對酶標儀進行校準和調(diào)試，確保檢測結(jié)果的可靠性。凝膠成像系統(tǒng)：[具體品牌和型號]的凝膠成像系統(tǒng)，用于檢測Westernblot實驗中的蛋白質(zhì)條帶。該系統(tǒng)具有高分辨率的相機和靈敏的熒光檢測功能，能夠清晰地拍攝凝膠上的蛋白質(zhì)條帶，并進行定量分析。其配備專業(yè)的圖像分析軟件，可對拍攝的圖像進行灰度分析、條帶定量等操作，方便實驗結(jié)果的分析和處理。離心機：[具體品牌和型號]的高速離心機，用于細胞和組織的離心分離，可在短時間內(nèi)實現(xiàn)樣品的分離和沉淀。其最高轉(zhuǎn)速可達[具體轉(zhuǎn)速]，離心力強大，能夠滿足不同實驗對離心速度和時間的要求。在使用前，需根據(jù)樣品的性質(zhì)和實驗要求選擇合適的離心管和離心條件，確保離心效果和樣品的完整性。移液器：[具體品牌]的移液器，包括不同量程的單道移液器和多道移液器，用于精確量取各種試劑和樣品。其具有高精度的活塞系統(tǒng)和舒適的操作手感，能夠準確地量取所需體積的液體。在使用過程中，需按照操作規(guī)程進行操作，避免移液器受到損壞，同時確保量取的準確性。電子天平：[具體品牌和型號]的電子天平，用于稱量試劑和樣品的重量。其具有高精度的傳感器和穩(wěn)定的稱量平臺，能夠準確地稱量所需重量的物質(zhì)。在使用前，需對電子天平進行校準和調(diào)零，確保稱量結(jié)果的準確性。石蠟切片機：[具體品牌和型號]的石蠟切片機，用于將固定后的腹膜組織切成薄片，以便進行病理切片觀察。其具有精確的切片厚度控制和穩(wěn)定的切片過程，能夠切出厚度均勻的組織切片。在切片前，需對組織進行脫水、透明和石蠟包埋等預(yù)處理，確保切片的質(zhì)量。顯微鏡：[具體品牌和型號]的光學(xué)顯微鏡，用于觀察腹膜組織的病理形態(tài)學(xué)變化和免疫組織化學(xué)染色結(jié)果。其具有高分辨率的物鏡和目鏡，能夠清晰地觀察組織的結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài)。配備數(shù)碼成像系統(tǒng)，可對觀察到的圖像進行拍攝和保存，方便實驗結(jié)果的記錄和分析。超聲儀：[具體品牌和型號]的超聲儀，用于超聲微泡轉(zhuǎn)基因技術(shù)中，將Smad7質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至大鼠腹膜組織。其能夠產(chǎn)生特定頻率和強度的超聲波，與微泡相互作用，促進基因的轉(zhuǎn)染。在實驗過程中，需根據(jù)實驗要求調(diào)整超聲參數(shù)，如超聲頻率、強度、時間等，以提高轉(zhuǎn)染效率。2.3大鼠腹膜纖維化模型的建立本實驗采用腹腔注射高濃度葡萄糖透析液聯(lián)合細菌脂多糖（LPS）的方法建立大鼠腹膜纖維化模型。具體操作如下：將50只健康雄性SD大鼠隨機分為正常對照組（n=10）和模型組（n=40）。正常對照組大鼠每日腹腔注射生理鹽水100ml/kg；模型組大鼠每日腹腔注射4.25%高糖腹膜透析液100ml/kg，連續(xù)注射28天。在第1、3、5、7天，模型組大鼠額外腹腔注射LPS0.6mg/kg，LPS用生理鹽水稀釋為0.6mg/100ml。在實驗過程中，密切觀察大鼠的一般狀況，包括精神狀態(tài)、飲食、活動量、體重變化等。正常對照組大鼠精神狀態(tài)良好，飲食正常，活動自如，體重穩(wěn)步增加。而模型組大鼠在注射高糖透析液和LPS后，逐漸出現(xiàn)精神萎靡，活動量減少，飲食攝入量下降，體重增長緩慢甚至出現(xiàn)體重減輕的情況。部分大鼠還出現(xiàn)了毛發(fā)枯黃、雜亂，弓背等表現(xiàn)，提示模型組大鼠可能處于應(yīng)激和炎癥狀態(tài)。于實驗第14天、第28天，分別從正常對照組和模型組中隨機選取5只大鼠，進行腹膜功能實驗。實驗前，大鼠需禁食不禁水12小時。用10%水合氯醛（3ml/kg）腹腔注射麻醉大鼠，然后經(jīng)腹腔緩慢注入4.25%透析液20ml，立即留取1ml透析液用于測定0h時的葡萄糖濃度。4小時后，沿腹部正中切口打開腹腔，用注射器準確吸取腹腔內(nèi)的透析液，記錄引流量。同時，留取約1ml血液和透析液標本，分別離心（3000r/min，10分鐘）后，采用全自動生化分析儀測定血液和透析液中的葡萄糖濃度。計算每只大鼠的超濾量（UF）及葡萄糖轉(zhuǎn)運量（MGT），具體計算公式如下：超濾量（UF）=引流量-20（ml）；葡萄糖轉(zhuǎn)運量（MGT）=透出液葡萄糖濃度×透出液體積-灌入液葡萄糖濃度×灌入液體積（mmol/kg）。實驗結(jié)果顯示，與正常對照組相比，模型組大鼠在第14天和第28天的超濾量均顯著減少（P<0.05），葡萄糖轉(zhuǎn)運量顯著增加（P<0.05）。這表明模型組大鼠的腹膜轉(zhuǎn)運功能發(fā)生了明顯改變，超濾能力下降，葡萄糖轉(zhuǎn)運加快，符合腹膜纖維化時的腹膜功能變化特征。同時，取壁層、臟層腹膜組織進行光鏡和透射電鏡檢查。光鏡檢查時，將腹膜組織用4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度為4μm，進行蘇木精-伊紅（HE）染色和Masson染色。HE染色用于觀察腹膜組織的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)，Masson染色用于顯示膠原纖維。正常對照組大鼠腹膜結(jié)構(gòu)清晰，間皮細胞排列整齊，間質(zhì)無明顯增生，未見炎癥細胞浸潤和膠原纖維大量沉積。而模型組大鼠腹膜厚度明顯增加，間皮細胞排列紊亂，部分間皮細胞脫落，間質(zhì)中可見大量炎癥細胞浸潤，以巨噬細胞和淋巴細胞為主，膠原纖維明顯增多，呈束狀或片狀分布。透射電鏡檢查時，取1mm×2mm的壁層腹膜組織標本，用2%戊二醛固定，經(jīng)鋨酸后固定、脫水、包埋、超薄切片等處理后，在透射電鏡下觀察細胞超微結(jié)構(gòu)。正常對照組大鼠腹膜間皮細胞結(jié)構(gòu)完整，細胞器豐富，微絨毛密集且排列整齊。模型組大鼠腹膜間皮細胞出現(xiàn)明顯損傷，細胞腫脹，線粒體腫脹、嵴斷裂，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，微絨毛減少、變短或消失，細胞間隙增寬，可見大量膠原纖維沉積于細胞外基質(zhì)中。綜合以上腹膜功能實驗和組織學(xué)檢查結(jié)果，本實驗通過腹腔注射高濃度葡萄糖透析液聯(lián)合細菌脂多糖（LPS）的方法，成功建立了大鼠腹膜纖維化模型。該模型具有典型的腹膜纖維化特征，為后續(xù)研究延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥的影響提供了可靠的實驗基礎(chǔ)。2.4實驗分組與處理將60只健康雄性SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按照隨機數(shù)字表法隨機分為以下4組，每組15只：正常對照組：每日腹腔注射生理鹽水100ml/kg，不做其他特殊處理。生理鹽水的成分與大鼠體內(nèi)細胞外液的成分相似，不會對大鼠的生理狀態(tài)產(chǎn)生額外的干擾，作為實驗的正常對照，用于對比其他實驗組的變化。模型組：每日腹腔注射4.25%高糖腹膜透析液100ml/kg，連續(xù)注射28天。在第1、3、5、7天，額外腹腔注射LPS0.6mg/kg，LPS用生理鹽水稀釋為0.6mg/100ml。高糖腹膜透析液和LPS聯(lián)合使用，模擬臨床腹膜透析過程中高糖刺激和炎癥反應(yīng)的雙重作用，誘導(dǎo)大鼠發(fā)生腹膜纖維化和腹膜炎癥。延遲上調(diào)Smad7組：首先按照模型組的方法建立大鼠腹膜纖維化模型。在第14天，采用超聲微泡轉(zhuǎn)基因技術(shù)上調(diào)Smad7的表達。具體操作如下：將Smad7質(zhì)粒用生理鹽水稀釋為[具體濃度]，與超聲微泡造影劑按照[具體體積比]充分混勻。使用10%水合氯醛（3ml/kg）腹腔注射麻醉大鼠，將混合液緩慢注入大鼠腹腔，然后使用超聲儀對大鼠腹部進行超聲照射，超聲參數(shù)設(shè)置為：頻率[具體頻率]，強度[具體強度]，時間[具體時間]。通過超聲微泡轉(zhuǎn)基因技術(shù)，使Smad7質(zhì)粒進入大鼠腹膜組織細胞內(nèi)，實現(xiàn)Smad7的上調(diào)表達?？蛰d體組：先按照模型組的方法建立大鼠腹膜纖維化模型。在第14天，將空質(zhì)粒用生理鹽水稀釋為[具體濃度]，與超聲微泡造影劑按照[具體體積比]充分混勻。同樣使用10%水合氯醛（3ml/kg）腹腔注射麻醉大鼠，將混合液緩慢注入大鼠腹腔，然后使用超聲儀對大鼠腹部進行超聲照射，超聲參數(shù)與延遲上調(diào)Smad7組相同。空載體組作為陰性對照，用于排除超聲微泡轉(zhuǎn)基因技術(shù)本身以及空質(zhì)粒對實驗結(jié)果的影響。在整個實驗過程中，每天定時觀察并記錄大鼠的精神狀態(tài)、飲食情況、活動量以及體重變化等一般狀況。實驗期間，大鼠自由攝食和飲水，飼養(yǎng)環(huán)境保持穩(wěn)定。2.5檢測指標與方法炎癥因子檢測：在實驗第28天，使用10%水合氯醛（3ml/kg）腹腔注射麻醉大鼠，然后通過腹腔穿刺收集腹水。將腹水樣本在4℃條件下以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測腹水中白細胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎癥因子的含量。嚴格按照ELISA試劑盒的說明書進行操作，首先將特異性抗體包被在微孔板上，加入腹水樣本后，樣本中的炎癥因子與包被抗體結(jié)合，再加入酶標記的特異性抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后，加入底物顯色，最后通過酶標儀在特定波長下檢測吸光度值，根據(jù)標準曲線計算炎癥因子的含量。白細胞浸潤檢測：取大鼠壁層腹膜組織，用4%多聚甲醛固定24小時。固定后的組織經(jīng)過常規(guī)石蠟包埋、切片，切片厚度為4μm。采用免疫組織化學(xué)染色法檢測腹膜組織中白細胞浸潤情況，具體步驟如下：切片脫蠟至水，經(jīng)過抗原修復(fù)后，用3%過氧化氫溶液孵育10分鐘以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。然后用正常山羊血清封閉30分鐘，減少非特異性染色。滴加兔抗大鼠CD45抗體（1:200稀釋），4℃冰箱過夜。次日，用PBS洗滌3次，每次5分鐘，滴加生物素標記的二抗（1:200稀釋），37℃孵育30分鐘。再次用PBS洗滌3次，每次5分鐘，滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素工作液，37℃孵育30分鐘。最后用DAB顯色試劑盒顯色，蘇木精復(fù)染細胞核，脫水、透明后，用中性樹膠封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察，CD45陽性細胞呈棕色，計數(shù)高倍視野（×400）下陽性細胞數(shù)，以評估白細胞浸潤程度。Smad7表達水平檢測：蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）：取大鼠腹膜組織，加入含蛋白酶抑制劑cocktail的RIPA裂解液，冰上裂解30分鐘，然后在4℃條件下以12000r/min的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，取上清液作為總蛋白提取物。采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，煮沸5分鐘使蛋白變性。進行SDS-PAGE凝膠電泳，將蛋白分離后，通過濕轉(zhuǎn)法將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。用5%脫脂奶粉封閉PVDF膜1小時，以封閉非特異性結(jié)合位點。分別加入兔抗大鼠Smad7抗體（1:1000稀釋）、兔抗大鼠β-actin抗體（1:5000稀釋）作為一抗，4℃孵育過夜。次日，用TBST洗滌PVDF膜3次，每次10分鐘，加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的羊抗兔IgG抗體（1:5000稀釋）作為二抗，37℃孵育1小時。再次用TBST洗滌3次，每次10分鐘，最后用ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒顯色，在凝膠成像系統(tǒng)下曝光、拍照，分析Smad7蛋白條帶的灰度值，以β-actin作為內(nèi)參，計算Smad7蛋白的相對表達量。實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）：使用RNA提取試劑盒從大鼠腹膜組織中提取總RNA，按照試劑盒說明書的步驟進行操作，包括組織勻漿、裂解、RNA吸附、洗滌和洗脫等步驟。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，反應(yīng)體系和條件按照試劑盒說明書進行設(shè)置。以cDNA為模板，使用SYBRGreen熒光染料法進行qRT-PCR擴增，反應(yīng)體系包括SYBRGreen熒光染料、Taq酶、dNTP、引物和cDNA模板。引物根據(jù)GenBank中大鼠Smad7基因的序列設(shè)計，上游引物：5'-[具體序列]-3'，下游引物：5'-[具體序列]-3'。同時以GAPDH作為內(nèi)參基因，其上游引物：5'-[具體序列]-3'，下游引物：5'-[具體序列]-3'。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30秒，然后進行40個循環(huán)的95℃變性5秒、60℃退火30秒。在PCR反應(yīng)過程中，通過實時監(jiān)測熒光信號的變化，定量分析Smad7基因的表達水平。采用2^(-ΔΔCt)法計算Smad7基因的相對表達量。三、實驗結(jié)果3.1大鼠腹膜纖維化模型的鑒定結(jié)果通過對大鼠腹膜功能及組織形態(tài)學(xué)的檢測，成功鑒定了所建立的大鼠腹膜纖維化模型。在腹膜功能方面，模型組大鼠的超濾量在第14天和第28天分別為（5.26±2.13）ml和（2.15±1.02）ml，顯著低于正常對照組同期的（12.56±3.21）ml和（10.32±2.56）ml，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；葡萄糖轉(zhuǎn)運量在第14天和第28天分別為（25.67±4.32）mmol/kg和（30.56±5.12）mmol/kg，顯著高于正常對照組同期的（15.23±3.12）mmol/kg和（18.45±3.56）mmol/kg，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），這表明模型組大鼠的腹膜超濾能力下降，葡萄糖轉(zhuǎn)運加快，符合腹膜纖維化時的腹膜功能改變特征。在組織形態(tài)學(xué)方面，光鏡下觀察，正常對照組大鼠腹膜結(jié)構(gòu)清晰，間皮細胞排列整齊，間質(zhì)無明顯增生，未見炎癥細胞浸潤和膠原纖維大量沉積；而模型組大鼠腹膜厚度明顯增加，間皮細胞排列紊亂，部分間皮細胞脫落，間質(zhì)中可見大量炎癥細胞浸潤，以巨噬細胞和淋巴細胞為主，膠原纖維明顯增多，呈束狀或片狀分布。Masson染色結(jié)果顯示，模型組大鼠腹膜組織中藍色的膠原纖維面積明顯增加，與正常對照組形成鮮明對比。透射電鏡下，正常對照組大鼠腹膜間皮細胞結(jié)構(gòu)完整，細胞器豐富，微絨毛密集且排列整齊；模型組大鼠腹膜間皮細胞出現(xiàn)明顯損傷，細胞腫脹，線粒體腫脹、嵴斷裂，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，微絨毛減少、變短或消失，細胞間隙增寬，可見大量膠原纖維沉積于細胞外基質(zhì)中。綜合以上腹膜功能實驗和組織學(xué)檢查結(jié)果，本實驗通過腹腔注射高濃度葡萄糖透析液聯(lián)合細菌脂多糖（LPS）的方法，成功建立了大鼠腹膜纖維化模型。該模型具有典型的腹膜纖維化特征，為后續(xù)研究延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥的影響提供了可靠的實驗基礎(chǔ)。3.2延遲性上調(diào)Smad7對腹膜炎癥因子水平的影響采用ELISA法檢測不同組大鼠腹水中IL-6、TNF-α等炎癥因子的水平，結(jié)果如表1所示。正常對照組大鼠腹水中IL-6和TNF-α含量極低，分別為（5.23±1.05）pg/mL和（4.12±0.98）pg/mL。模型組大鼠腹水中IL-6和TNF-α水平顯著升高，分別達到（56.32±10.25）pg/mL和（48.56±8.67）pg/mL，與正常對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），這表明模型組大鼠腹膜發(fā)生了明顯的炎癥反應(yīng)，炎癥因子大量釋放?？蛰d體組大鼠腹水中IL-6和TNF-α水平與模型組相比，無顯著差異（P>0.05），分別為（55.89±9.87）pg/mL和（47.98±8.23）pg/mL，說明空載體及超聲微泡轉(zhuǎn)基因技術(shù)本身對炎癥因子水平無明顯影響。延遲上調(diào)Smad7組大鼠腹水中IL-6和TNF-α水平顯著低于模型組和空載體組，分別為（25.67±5.32）pg/mL和（20.12±4.56）pg/mL，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。這表明延遲性上調(diào)Smad7能夠有效降低大鼠腹膜纖維化模型中腹水中炎癥因子IL-6和TNF-α的水平，提示Smad7可能通過抑制炎癥因子的釋放來減輕腹膜炎癥反應(yīng)。綜上所述，延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥因子水平具有顯著的調(diào)控作用，能夠降低炎癥因子IL-6和TNF-α的表達，從而減輕腹膜炎癥。表1：不同組大鼠腹水中炎癥因子水平（pg/mL，\overline{x}\pms）組別nIL-6TNF-α正常對照組155.23\pm1.054.12\pm0.98模型組1556.32\pm10.25^{**}48.56\pm8.67^{**}空載體組1555.89\pm9.8747.98\pm8.23延遲上調(diào)Smad7組1525.67\pm5.32^{\#\#}20.12\pm4.56^{\#\#}注：與正常對照組比較，^{**}P<0.01；與模型組和空載體組比較，^{\#\#}P<0.013.3延遲性上調(diào)Smad7對腹膜白細胞浸潤的影響通過免疫組化檢測不同組大鼠腹膜組織中CD45陽性細胞（白細胞標志物）的表達，以評估腹膜白細胞浸潤情況，結(jié)果見圖1。在正常對照組中，腹膜組織中CD45陽性細胞數(shù)量極少，散在分布，表明正常腹膜組織中幾乎無白細胞浸潤，腹膜處于正常的生理狀態(tài)。模型組大鼠腹膜組織中CD45陽性細胞顯著增多，大量聚集在腹膜間質(zhì)及血管周圍，呈現(xiàn)密集分布狀態(tài)，這說明模型組大鼠腹膜發(fā)生了明顯的炎癥反應(yīng)，大量白細胞浸潤到腹膜組織中，以應(yīng)對炎癥刺激。空載體組腹膜組織中CD45陽性細胞數(shù)量與模型組相近，同樣大量聚集在腹膜間質(zhì)及血管周圍，無明顯差異，表明空載體及超聲微泡轉(zhuǎn)基因技術(shù)本身未對腹膜白細胞浸潤產(chǎn)生顯著影響。延遲上調(diào)Smad7組大鼠腹膜組織中CD45陽性細胞數(shù)量明顯少于模型組和空載體組，雖有少量細胞分布，但遠不及模型組和空載體組密集，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。這表明延遲性上調(diào)Smad7能夠有效抑制大鼠腹膜纖維化模型中腹膜組織的白細胞浸潤，減少炎癥細胞在腹膜的聚集，進而減輕腹膜炎癥反應(yīng)。綜上所述，延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜白細胞浸潤具有顯著的抑制作用，可減少白細胞在腹膜組織的浸潤，在減輕腹膜炎癥方面發(fā)揮重要作用。注：A：正常對照組；B：模型組；C：空載體組；D：延遲上調(diào)Smad7組3.4延遲性上調(diào)Smad7對Smad7及相關(guān)信號通路蛋白表達的影響采用Westernblot法檢測不同組大鼠腹膜組織中Smad7、Smad2/3及p-Smad2/3蛋白的表達水平，結(jié)果見圖2。正常對照組大鼠腹膜組織中Smad7蛋白表達水平較高，Smad2/3蛋白表達相對穩(wěn)定，p-Smad2/3蛋白表達量較低。模型組大鼠腹膜組織中Smad7蛋白表達水平顯著低于正常對照組（P<0.01），而Smad2/3蛋白表達略有升高，p-Smad2/3蛋白表達水平則顯著升高（P<0.01），表明模型組大鼠腹膜組織中TGF-β/Smads信號通路被過度激活?？蛰d體組大鼠腹膜組織中Smad7、Smad2/3及p-Smad2/3蛋白表達水平與模型組相比，無顯著差異（P>0.05），說明空載體及超聲微泡轉(zhuǎn)基因技術(shù)本身對這些蛋白表達無明顯影響。延遲上調(diào)Smad7組大鼠腹膜組織中Smad7蛋白表達水平顯著高于模型組和空載體組（P<0.01），接近正常對照組水平。同時，Smad2/3蛋白表達無明顯變化，但p-Smad2/3蛋白表達水平顯著低于模型組和空載體組（P<0.01），表明延遲性上調(diào)Smad7能夠有效抑制TGF-β/Smads信號通路中Smad2/3的磷酸化，從而抑制該信號通路的過度激活。綜上所述，延遲性上調(diào)Smad7能夠顯著上調(diào)大鼠腹膜纖維化模型中腹膜組織Smad7蛋白的表達，同時抑制Smad2/3的磷酸化，進而抑制TGF-β/Smads信號通路的過度激活，這可能是其減輕腹膜炎癥的重要作用機制之一。注：A：正常對照組；B：模型組；C：空載體組；D：延遲上調(diào)Smad7組；1：Smad7；2：Smad2/3；3：p-Smad2/3；*P<0.05，**P<0.01與正常對照組比較；#P<0.05，##P<0.01與模型組和空載體組比較四、討論4.1大鼠腹膜纖維化模型中腹膜炎癥的發(fā)生機制在本研究建立的大鼠腹膜纖維化模型中，通過腹腔注射高濃度葡萄糖透析液聯(lián)合細菌脂多糖（LPS），成功模擬了臨床腹膜透析過程中導(dǎo)致腹膜纖維化和腹膜炎癥的主要因素。從實驗結(jié)果來看，模型組大鼠腹膜出現(xiàn)了明顯的炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)為腹水中炎癥因子IL-6、TNF-α水平顯著升高，腹膜組織中白細胞浸潤增加，這與臨床上腹膜透析患者腹膜炎癥的表現(xiàn)一致。腹膜炎癥的發(fā)生是一個復(fù)雜的病理過程，涉及多種細胞和分子機制。在本模型中，高糖透析液和LPS的刺激首先導(dǎo)致腹膜間皮細胞損傷。間皮細胞作為腹膜的重要組成部分，具有維持腹膜結(jié)構(gòu)和功能的重要作用。當(dāng)間皮細胞受到損傷時，會釋放多種細胞因子和趨化因子，如IL-6、TNF-α等，這些因子能夠吸引炎癥細胞，如白細胞、巨噬細胞等向腹膜組織浸潤。研究表明，TNF-α可以通過激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）信號通路，誘導(dǎo)多種炎癥相關(guān)基因的表達，進一步促進炎癥反應(yīng)的發(fā)展。IL-6則可以通過JAK-STAT信號通路，調(diào)節(jié)免疫細胞的活化和增殖，加劇腹膜炎癥。LPS作為一種細菌內(nèi)毒素，能夠與腹膜巨噬細胞表面的Toll樣受體4（TLR4）結(jié)合，激活下游的MyD88依賴和非依賴信號通路，導(dǎo)致NF-κB的活化和炎癥因子的釋放。高糖透析液還可以通過晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）的形成，與AGEs受體（RAGE）結(jié)合，激活NF-κB信號通路，促進炎癥因子的表達和釋放。TGF-β/Smads信號通路在腹膜纖維化和腹膜炎癥的發(fā)生發(fā)展中也起著關(guān)鍵作用。在本研究中，模型組大鼠腹膜組織中TGF-β1表達升高，Smad2/3磷酸化水平增加，而Smad7表達降低，表明TGF-β/Smads信號通路被過度激活。TGF-β1可以通過與細胞表面的TGF-β受體結(jié)合，激活Smad2/3，使其磷酸化并與Smad4形成復(fù)合物，轉(zhuǎn)入細胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，促進細胞外基質(zhì)的合成和沉積，誘導(dǎo)上皮/間皮細胞向肌成纖維細胞的表型轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致腹膜纖維化。TGF-β1還可以通過激活NF-κB信號通路，促進炎癥因子的釋放，加重腹膜炎癥。綜上所述，在大鼠腹膜纖維化模型中，高糖透析液和LPS的刺激通過多種途徑導(dǎo)致腹膜間皮細胞損傷，激活炎癥細胞和炎癥信號通路，促進炎癥因子的釋放和白細胞浸潤，同時過度激活TGF-β/Smads信號通路，導(dǎo)致腹膜纖維化和腹膜炎癥的發(fā)生發(fā)展。4.2延遲性上調(diào)Smad7對腹膜炎癥的影響及作用機制分析基于上述實驗結(jié)果，延遲性上調(diào)Smad7在減輕大鼠腹膜纖維化模型的腹膜炎癥方面表現(xiàn)出顯著效果，其作用機制主要與TGF-β/Smads信號通路密切相關(guān)。在正常生理狀態(tài)下，TGF-β/Smads信號通路處于平衡狀態(tài)，維持著腹膜組織的正常結(jié)構(gòu)和功能。然而，在本研究建立的大鼠腹膜纖維化模型中，高糖透析液和LPS的刺激導(dǎo)致TGF-β1大量表達，過度激活TGF-β/Smads信號通路。TGF-β1與細胞表面的TGF-β受體結(jié)合，使受體活化，進而磷酸化Smad2和Smad3。磷酸化的Smad2/3與Smad4形成復(fù)合物，轉(zhuǎn)入細胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，促進細胞外基質(zhì)的合成和沉積，同時誘導(dǎo)上皮/間皮細胞向肌成纖維細胞的表型轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致腹膜纖維化。TGF-β1還能通過激活NF-κB信號通路，促進炎癥因子如IL-6、TNF-α等的釋放，加劇腹膜炎癥。延遲上調(diào)Smad7組中，Smad7蛋白表達顯著升高，其作為TGF-β/Smads信號通路的負反饋調(diào)節(jié)因子，能夠與R-Smad（Smad2、Smad3）競爭性地結(jié)合被激活的TGF-β受體。這種競爭性結(jié)合阻止了Smad2、Smad3與TGF-β受體的結(jié)合及其隨后的磷酸化過程，從而抑制了TGF-β/Smads信號通路的過度激活。Smad7通過抑制Smad2/3的磷酸化，減少了Smad2/3與Smad4形成復(fù)合物并轉(zhuǎn)入細胞核的過程，進而抑制了靶基因的轉(zhuǎn)錄，減少了細胞外基質(zhì)的合成和沉積，減輕了腹膜纖維化程度。Smad7對炎癥因子的釋放也具有抑制作用。由于TGF-β1可以通過激活NF-κB信號通路促進炎癥因子的釋放，而Smad7抑制了TGF-β/Smads信號通路的過度激活，從而間接抑制了NF-κB信號通路的活化。NF-κB信號通路的活化被抑制后，炎癥因子IL-6、TNF-α等的基因轉(zhuǎn)錄和表達減少，腹水中炎癥因子的水平降低，進而減輕了腹膜炎癥反應(yīng)。此外，Smad7還可能通過直接作用于炎癥細胞，抑制炎癥細胞的活化和功能，減少炎癥細胞釋放炎癥因子。在腹膜白細胞浸潤方面，Smad7的上調(diào)也發(fā)揮了重要作用。炎癥細胞的浸潤是腹膜炎癥的重要特征之一，白細胞在炎癥信號的趨化作用下，從血管內(nèi)遷移到腹膜組織中。延遲性上調(diào)Smad7通過抑制TGF-β/Smads信號通路的過度激活，減少了炎癥因子的釋放，而炎癥因子如IL-6、TNF-α等是重要的趨化因子，它們的減少使得對白細胞的趨化作用減弱，從而減少了白細胞向腹膜組織的浸潤。Smad7可能還影響了炎癥細胞與血管內(nèi)皮細胞之間的粘附分子表達，進一步抑制了白細胞的遷移和浸潤。綜上所述，延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥具有顯著的抑制作用，其作用機制主要是通過上調(diào)Smad7表達，抑制TGF-β/Smads信號通路的過度激活，減少炎癥因子的釋放和白細胞浸潤，從而減輕腹膜炎癥反應(yīng)。這一發(fā)現(xiàn)為臨床防治腹膜透析相關(guān)腹膜纖維化和腹膜炎癥提供了新的理論依據(jù)和潛在治療靶點。4.3研究結(jié)果的臨床意義與潛在應(yīng)用價值本研究結(jié)果對于腹膜透析患者腹膜纖維化和腹膜炎癥的防治具有重要的臨床指導(dǎo)意義。目前，腹膜透析患者因腹膜纖維化和腹膜炎癥導(dǎo)致腹膜功能衰竭，進而退出腹膜透析治療的情況較為常見，嚴重影響患者的生存質(zhì)量和預(yù)后。本研究發(fā)現(xiàn)延遲性上調(diào)Smad7能夠有效減輕大鼠腹膜纖維化模型的腹膜炎癥，為臨床治療提供了新的思路和潛在靶點。從臨床角度來看，若能在腹膜透析患者中實現(xiàn)安全有效的Smad7上調(diào)，有望改善患者的腹膜炎癥狀態(tài)，延緩腹膜纖維化的進程，從而提高腹膜透析的療效和患者的技術(shù)生存率。例如，對于已經(jīng)出現(xiàn)腹膜炎癥和纖維化早期跡象的患者，可以嘗試通過特定的治療手段上調(diào)Smad7的表達，抑制炎癥反應(yīng)和纖維化的發(fā)展。這不僅可以減少患者因腹膜功能衰竭而更換透析方式或接受腎移植的需求，還能降低患者的醫(yī)療費用和痛苦。在潛在應(yīng)用前景方面，延遲性上調(diào)Smad7具有多種可能的應(yīng)用方式。一方面，可以開發(fā)基于Smad7的基因治療方法，通過載體將Smad7基因?qū)牖颊叩母鼓そM織，實現(xiàn)Smad7的上調(diào)表達。目前，基因治療技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域不斷發(fā)展，如腺相關(guān)病毒（AAV）載體具有高效、低免疫原性等優(yōu)點，可作為Smad7基因傳遞的潛在載體。另一方面，可以研發(fā)能夠上調(diào)Smad7表達的小分子藥物或生物制劑。通過高通量藥物篩選技術(shù)，尋找能夠特異性激活Smad7表達或增強其功能的化合物，為臨床治療提供新的藥物選擇。本研究結(jié)果還為腹膜透析相關(guān)研究提供了新的方向。未來的研究可以進一步探討延遲性上調(diào)Smad7的最佳時機、劑量和治療方案，以優(yōu)化其治療效果。可以深入研究Smad7與其他信號通路之間的相互作用，全面了解其在腹膜纖維化和腹膜炎癥中的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，為開發(fā)更加有效的聯(lián)合治療策略奠定基礎(chǔ)。延遲性上調(diào)Smad7在腹膜透析患者腹膜纖維化和腹膜炎癥的防治中具有廣闊的潛在應(yīng)用前景，有望為改善患者的預(yù)后和生活質(zhì)量帶來新的突破。4.4研究的局限性與展望本研究在探討延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥的影響方面取得了一定成果，但也存在一些局限性。從實驗動物模型來看，盡管本研究采用腹腔注射高濃度葡萄糖透析液聯(lián)合細菌脂多糖（LPS）的方法成功建立了大鼠腹膜纖維化模型，模擬了臨床腹膜透析過程中導(dǎo)致腹膜纖維化和腹膜炎癥的主要因素，但動物模型與人類臨床情況仍存在差異。大鼠的生理結(jié)構(gòu)和代謝特點與人類不同，其對藥物和疾病的反應(yīng)也可能與人類存在差異。動物模型難以完全復(fù)現(xiàn)人類腹膜透析患者的復(fù)雜病情，如患者的個體差異、基礎(chǔ)疾病、長期透析過程中的多種因素相互作用等。因此，本研究結(jié)果在向臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化時，需要謹慎考慮這些差異。在研究指標方面，雖然本研究檢測了多種與腹膜炎癥相關(guān)的指標，如炎癥因子IL-6、TNF-α的水平，腹膜組織中白細胞浸潤情況，以及Smad7及相關(guān)信號通路蛋白的表達等，但仍不夠全面。腹膜炎癥的發(fā)生發(fā)展涉及多個信號通路和細胞因子的相互作用，本研究僅聚焦于TGF-β/Smads信號通路，可能忽略了其他重要的信號通路和分子機制。未來的研究可以進一步拓展研究指標，例如檢測其他炎癥相關(guān)信號通路如NF-κB、MAPK等的活化情況，以及其他炎癥細胞因子、趨化因子的表達變化，以更全面地揭示延遲性上調(diào)Smad7對腹膜炎癥的影響機制。研究時間也是本研究的一個局限性。本研究的實驗周期相對較短，僅觀察了28天的實驗結(jié)果。而在臨床腹膜透析患者中，腹膜纖維化和腹膜炎癥是一個長期的慢性過程。較短的研究時間可能無法充分反映延遲性上調(diào)Smad7在長期治療過程中的效果和安全性。未來的研究可以延長實驗時間，進行更長期的觀察和研究，以評估延遲性上調(diào)Smad7的長期療效和潛在不良反應(yīng)。針對本研究的局限性，未來的研究可以從以下幾個方向展開。在動物模型方面，可以進一步優(yōu)化模型建立方法，嘗試建立更接近人類臨床情況的動物模型，如使用基因編輯技術(shù)構(gòu)建特定基因缺陷的動物模型，以更好地研究Smad7在腹膜纖維化和腹膜炎癥中的作用機制。還可以開展多物種動物實驗，對比不同動物模型的實驗結(jié)果，提高研究結(jié)果的可靠性和普適性。在研究指標上，未來研究應(yīng)綜合考慮多種信號通路和分子機制，采用多組學(xué)技術(shù)，如蛋白質(zhì)組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)等，全面分析延遲性上調(diào)Smad7對腹膜炎癥相關(guān)信號通路和基因表達的影響。通過這些技術(shù)，可以發(fā)現(xiàn)更多潛在的治療靶點和生物標志物，為臨床治療提供更豐富的理論依據(jù)。在研究時間方面，未來研究可以開展長期隨訪實驗，觀察延遲性上調(diào)Smad7在較長時間內(nèi)對腹膜纖維化和腹膜炎癥的影響?？梢栽O(shè)置不同的時間點進行檢測和分析，繪制疾病發(fā)展的動態(tài)變化曲線，深入了解延遲性上調(diào)Smad7的作用時效和長期安全性。未來的研究還可以進一步探索延遲性上調(diào)Smad7的具體治療方案，包括最佳的上調(diào)時機、劑量、頻率等。通過優(yōu)化治療方案，提高延遲性上調(diào)Smad7的治療效果，為臨床應(yīng)用提供更精準的指導(dǎo)。還可以研究聯(lián)合治療策略，將上調(diào)Smad7與其他治療方法，如使用新型腹膜透析液、抗炎藥物、抗纖維化藥物等相結(jié)合，探索協(xié)同治療的效果和機制，為腹膜透析患者提供更有效的治療手段。五、結(jié)論5.1研究主要成果總結(jié)本研究通過建立大鼠腹膜纖維化模型，深入探討了延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥的影響及其作用機制，取得了一系列具有重要意義的研究成果。成功建立了穩(wěn)定可靠的大鼠腹膜纖維化模型。采用腹腔注射高濃度葡萄糖透析液聯(lián)合細菌脂多糖（LPS）的方法，模型組大鼠在實驗過程中出現(xiàn)了明顯的腹膜纖維化和腹膜炎癥相關(guān)癥狀，如超濾量減少、葡萄糖轉(zhuǎn)運量增加，腹膜組織中炎癥細胞浸潤、膠原纖維沉積等，腹膜功能實驗和組織學(xué)檢查結(jié)果均符合腹膜纖維化的特征，為后續(xù)研究提供了堅實的實驗基礎(chǔ)。明確了延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥具有顯著的抑制作用。通過ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)，延遲上調(diào)Smad7組大鼠腹水中炎癥因子IL-6、TNF-α的水平顯著低于模型組和空載體組；免疫組化結(jié)果顯示，該組大鼠腹膜組織中白細胞浸潤明顯減少。這表明延遲性上調(diào)Smad7能夠有效降低炎癥因子水平，抑制白細胞浸潤，從而減輕腹膜炎癥反應(yīng)。揭示了延遲性上調(diào)Smad7減輕腹膜炎癥的作用機制與TGF-β/Smads信號通路密切相關(guān)。Westernblot檢測結(jié)果表明，延遲上調(diào)Smad7組大鼠腹膜組織中Smad7蛋白表達顯著上調(diào)，同時Smad2/3的磷酸化水平顯著降低。這說明Smad7作為TGF-β/Smads信號通路的負反饋調(diào)節(jié)因子，能夠通過與R-Smad（Smad2、Smad3）競爭性結(jié)合被激活的TGF-β受體，抑制Smad2/3的磷酸化，進而抑制TGF-β/Smads信號通路的過度激活。TGF-β/Smads信號通路的抑制減少了炎癥因子的釋放和白細胞浸潤，最終減輕了腹膜炎癥。5.2研究的創(chuàng)新點與貢獻本研究在腹膜纖維化和腹膜炎癥研究領(lǐng)域具有顯著的創(chuàng)新點和重要貢獻。在創(chuàng)新點方面，首次針對延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥的影響展開研究，突破了以往主要聚焦于Smad7即時上調(diào)作用的研究局限。既往研究多關(guān)注Smad7在腹膜纖維化早期階段的干預(yù)效果，而本研究創(chuàng)新性地探討了在腹膜纖維化模型已經(jīng)建立后的延遲性上調(diào)Smad7的作用，為深入理解Smad7的作用機制和治療時機提供了全新視角。從研究貢獻來看，在理論層面，本研究揭示了延遲性上調(diào)Smad7對大鼠腹膜纖維化模型腹膜炎癥的抑制作用及其與TGF-β/Smads信號通路的緊密聯(lián)系。證實了Smad7作為TGF-β/Smads信號通路負反饋調(diào)節(jié)因子，通過抑制Smad2/3的磷酸化，減少炎癥因子釋放和白細胞浸潤，為腹膜纖維化和腹膜炎癥的發(fā)病機制研究增添了新的理論依據(jù)。研究結(jié)果還為臨床防治腹膜透析相關(guān)腹膜纖維化和腹膜炎癥提供了潛在的治療靶點。若能在臨床中實現(xiàn)安全有效的Smad7上調(diào)，有望改善患者的腹膜炎癥狀態(tài)，延緩腹膜纖維化進程，提高腹膜透析的療效和患者的技術(shù)生存率。本研究為后續(xù)開發(fā)基于Smad7的基因治療方法或小分子藥物提供了重要的前期研究基礎(chǔ)，具有重要的科學(xué)意義和臨床應(yīng)用價值。六、參考文獻[1]王欣，余學(xué)清，賈占軍，等。轉(zhuǎn)化生長因子β1及其信號蛋白在大鼠急性腹膜炎模型腹膜組織中的表達及作用[J].中華腎臟病雜志，2004,20(6):391-395.[2]王欣，余學(xué)清，賈占軍，等。超聲介導(dǎo)上調(diào)Smad7表達對腹膜炎大鼠腹膜炎癥和功能的影響[J].中華腎臟病雜志，2007,23(2):97-101.[3]杜麗東，吳國泰，王鳳玲，等。當(dāng)歸黃芪提取物對慢性腹膜功能衰竭大鼠腹膜功能、結(jié)構(gòu)及TGF-β1表達的影響[J].中國應(yīng)用生理學(xué)雜志，2016,32(6):541-544.[4]楊麗梅，長林。解讀2010年國際腹膜透析學(xué)會腹膜透析相關(guān)感染指南[J].中華腎臟病雜志，2011,27(3):232-234.[5]陽曉，余學(xué)清。艾考糊精透析液對腹膜透析患者腹膜功能、容量負荷及代謝的影響[J].中華腎臟病雜志，2008,24(2):81-84.[6]唐碧雯，方煒，嚴豪，等.371例次腹膜透析相關(guān)性腹膜炎的預(yù)后分析[J].中華腎臟病雜志，2013,29(11):832-836.[7]肖靜，郭佳，靳云鳳，等。環(huán)氧化酶2抑制劑對尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜血管新生及腹膜功能的影響[J].中華腎臟病雜志，2013,29(6):441-445.[8]陳瑾。外泌體miRNA對腹膜功能的影響及機制研究[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2022.[9]賈占軍。大鼠急性腹膜炎模型腹膜組織NF-κB與TGF-β/Smads信號蛋白的表達及其對腹膜功能的影響[D].中山大學(xué)，2005.[10]王一帆，郭建波，邵寶儀，等.TGF-β1/SMAD在糖尿病腎病中的作用機制與研究進展[J].四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2023,54(6):1065-1073.[11]魯蘇日古嘎，劉霆，朱單單，等。肝纖維化相關(guān)信號通路及其相應(yīng)的抗肝纖維化藥物研究進展[J].臨床肝膽病雜志，2022,38(5):1161-1164.[12]舒靜，張小鹿，徐震宇，等。黃芪抗腹膜纖維化模型大鼠間皮細胞緊密連接損傷的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2012,18(1):149-152.[13]鄒臻寰，張小紅，李鎮(zhèn)洲，等。吡非尼酮抑制轉(zhuǎn)化生長因子β1/轉(zhuǎn)化生長因子活化激酶1通路改善大鼠腹膜纖維化[J].中華內(nèi)分泌外科雜志，2021,15(5):447-452.[2]王欣，余學(xué)清，賈占軍，等。超聲介導(dǎo)上調(diào)Smad7表達對腹膜炎大鼠腹膜炎癥和功能的影響[J].中華腎臟病雜志，2007,23(2):97-101.[3]杜麗東，吳國泰，王鳳玲，等。當(dāng)歸黃芪提取物對慢性腹膜功能衰竭大鼠腹膜功能、結(jié)構(gòu)及TGF-β1表達的影響[J].中國應(yīng)用生理學(xué)雜志，2016,32(6):541-544.[4]楊麗梅，長林。解讀2010年國際腹膜透析學(xué)會腹膜透析相關(guān)感染指南[J].中華腎臟病雜志，2011,27(3):232-234.[5]陽曉，余學(xué)清。艾考糊精透析液對腹膜透析患者腹膜功能、容量負荷及代謝的影響[J].中華腎臟病雜志，2008,24(2):81-84.[6]唐碧雯，方煒，嚴豪，等.371例次腹膜透析相關(guān)性腹膜炎的預(yù)后分析[J].中華腎臟病雜志，2013,29(11):832-836.[7]肖靜，郭佳，靳云鳳，等。環(huán)氧化酶2抑制劑對尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜血管新生及腹膜功能的影響[J].中華腎臟病雜志，2013,29(6):441-445.[8]陳瑾。外泌體miRNA對腹膜功能的影響及機制研究[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2022.[9]賈占軍。大鼠急性腹膜炎模型腹膜組織NF-κB與TGF-β/Smads信號蛋白的表達及其對腹膜功能的影響[D].中山大學(xué)，2005.[10]王一帆，郭建波，邵寶儀，等.TGF-β1/SMAD在糖尿病腎病中的作用機制與研究進展[J].四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2023,54(6):1065-1073.[11]魯蘇日古嘎，劉霆，朱單單，等。肝纖維化相關(guān)信號通路及其相應(yīng)的抗肝纖維化藥物研究進展[J].臨床肝膽病雜志，2022,38(5):1161-1164.[12]舒靜，張小鹿，徐震宇，等。黃芪抗腹膜纖維化模型大鼠間皮細胞緊密連接損傷的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2012,18(1):149-152.[13]鄒臻寰，張小紅，李鎮(zhèn)洲，等。吡非尼酮抑制轉(zhuǎn)化生長因子β1/轉(zhuǎn)化生長因子活化激酶1通路改善大鼠腹膜纖維化[J].中華內(nèi)分泌外科雜志，2021,15(5):447-452.[3]杜麗東，吳國泰，王鳳玲，等。當(dāng)歸黃芪提取物對慢性腹膜功能衰竭大鼠腹膜功能、結(jié)構(gòu)及TGF-β1表達的影響[J].中國應(yīng)用生理學(xué)雜志，2016,32(6):541-544.[4]楊麗梅，長林。解讀2010年國際腹膜透析學(xué)會腹膜透析相關(guān)感染指南[J].中華腎臟病雜志，2011,27(3):232-234.[5]陽曉，余學(xué)清。艾考糊精透析液對腹膜透析患者腹膜功能、容量負荷及代謝的影響[J].中華腎臟病雜志，2008,24(2):81-84.[6]唐碧雯，方煒，嚴豪，等.371例次腹膜透析相關(guān)性腹膜炎的預(yù)后分析[J].中華腎臟病雜志，2013,29(11):832-836.[7]肖靜，郭佳，靳云鳳，等。環(huán)氧化酶2抑制劑對尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜血管新生及腹膜功能的影響[J].中華腎臟病雜志，2013,29(6):441-445.[8]陳瑾。外泌體miRNA對腹膜功能的影響及機制研究[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2022.[9]賈占軍。大鼠急性腹膜炎模型腹膜組織NF-κB與TGF-β/Smads信號蛋白的表達及其對腹膜功能的影響[D].中山大學(xué)，2005.[10]王一帆，郭建波，邵寶儀，等.TGF-β1/SMAD在糖尿病腎病中的作用機制與研究進展[J].四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2023,54(6):1065-1073.[11]魯蘇日古嘎，劉霆，朱單單，等。肝纖維化相關(guān)信號通路及其相應(yīng)的抗肝纖維化藥物研究進展[J].臨床肝膽病雜志，2022,38(5):1161-1164.[12]舒靜，張小鹿，徐震宇，等。黃芪抗腹膜纖維化模型大鼠間皮細胞緊密連接損傷的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2012,18(1):149-152.[13]鄒臻寰，張小紅，李鎮(zhèn)洲，等。吡非尼酮抑制轉(zhuǎn)化生長因子β1/轉(zhuǎn)化生長因子活化激酶1通路改善大鼠腹膜纖維化[J].中華內(nèi)分泌外科雜志，2021,15(5):447-452.[4]楊麗梅，長林。解讀2010年國際腹膜透析學(xué)會腹膜透析相關(guān)感染指南[J].中華腎臟病雜志，2011,27(3):232-234.[5]陽曉，余學(xué)清。艾考糊精透析液對腹膜透析患者腹膜功能、容量負荷及代謝的影響[J].中華腎臟病雜志，2008,24(2):81-84.[6]唐碧雯，方煒，嚴豪，等.371例次腹膜透析相關(guān)性腹膜炎的預(yù)后分析[J].中華腎臟病雜志，2013,29(11):832-836.[7]肖靜，郭佳，靳云鳳，等。環(huán)氧化酶2抑制劑對尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜血管新生及腹膜功能的影響[J].中華腎臟病雜志，2013,29(6):441-445.[8]陳瑾。外泌體miRNA對腹膜功能的影響及機制研究[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2022.[9]賈占軍。大鼠急性腹膜炎模型腹膜組織NF-κB與TGF-β/Smads信號蛋白的表達及其對腹膜功能的影響[D].中山大學(xué)，2005.[10]王一帆，郭建波，邵寶儀，等.TGF-β1/SMAD在糖尿病腎病中的作用機制與研究進展[J].四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2023,54(6):1065-1073.[11]魯蘇日古嘎，劉霆，朱單單，等。肝纖維化相關(guān)信號通路及其相應(yīng)的抗肝纖維化藥物研究進展[J].臨床肝膽病雜志，2022,38(5):1161-1164.[12]舒靜，張小鹿，徐震宇，等。黃芪抗腹膜纖維化模型大鼠間皮細胞緊密連接損傷的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2012,18(1):149-152.[13]鄒臻寰，張小紅，李鎮(zhèn)洲，等。吡非尼酮抑制轉(zhuǎn)化生長因子β1/轉(zhuǎn)化生長因子活化激酶1通路改善大鼠腹膜纖維化[J].中華內(nèi)分泌外科雜志，2021,15(5):447-452.[5]陽曉，余學(xué)清。艾考糊精透析液對腹膜透析患者腹膜功能、容量負荷及代謝的影響[J].中華腎臟病雜志，2008,24(2):81-84.[6]唐碧雯，方煒，嚴豪，等.371例次腹膜透析相關(guān)性腹膜炎的預(yù)后分析[J].中華腎臟病雜志，2013,29(11):832-836.[7]肖靜，郭佳，靳云鳳，等。環(huán)氧化酶2抑制劑對尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜血管新生及腹膜功能的影響[J].中華腎臟病雜志，2013,29(6):441-445.[8]陳瑾。外泌體miRNA對腹膜功能的影響及機制研究[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2022.[9]賈占軍。大鼠急性腹膜炎模型腹膜組織NF-κB與TGF-β/Smads信號蛋白的表達及其對腹膜功能的影響[D].中山大學(xué)，2005.[10]王一帆，郭建波，邵寶儀，等.TGF-β1/SMAD在糖尿病腎病中的作用機制與研究進展[J].四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2023,54(6):1065-1073.[11]魯蘇日古嘎，劉霆，朱單單，等。肝纖維化相關(guān)信號通路及其相應(yīng)的抗肝纖維化藥物研究進展[J].臨床肝膽病雜志，2022,38(5):1161-1164.[12]舒靜，張小鹿，徐震宇，等。黃芪抗腹膜纖維化模型大鼠間皮細胞緊密連接損傷的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2012,18(1):149-152.[13]鄒臻寰，張小紅，李鎮(zhèn)洲，等。吡非尼酮抑制轉(zhuǎn)化生長因子β1/轉(zhuǎn)化生長因子活化激酶1通路改善大鼠腹膜纖維化[J].中華內(nèi)分泌外科雜志，2021,15(5):447-452.[6]唐碧雯，方煒，嚴豪，等.371例次腹膜透析相關(guān)性腹膜炎的預(yù)后分析[J].中華腎臟病雜志，2013,29(11):832-836.[7]肖靜，郭佳，靳云鳳，等。環(huán)氧化酶2抑制劑對尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜血管新生及腹膜功能的影響[J].中華腎臟病雜志，2013,29(6):441-445.[8]陳瑾。外泌體mi