生物3D打印材料相容性評價策略演講人1.生物3D打印材料相容性評價策略2.生物相容性評價的理論基礎(chǔ)與核心原則3.生物3D打印材料相容性評價的核心維度4.生物3D打印材料相容性評價的技術(shù)方法體系5.應(yīng)用場景差異化評價策略6.當(dāng)前挑戰(zhàn)與未來展望目錄01生物3D打印材料相容性評價策略生物3D打印材料相容性評價策略引言生物3D打印技術(shù)通過“生物墨水”精確構(gòu)筑具有生物活性的三維結(jié)構(gòu)，為組織工程、再生醫(yī)學(xué)和藥物篩選提供了革命性工具。然而，材料的生物相容性直接決定打印結(jié)構(gòu)的體內(nèi)存活、功能整合及治療成效——正如我在參與骨缺損修復(fù)項目時的深刻體會：一款打印性能優(yōu)異的PCL/β-磷酸三鈣支架，雖具備良好的力學(xué)支撐和孔隙結(jié)構(gòu)，但因材料降解產(chǎn)物的局部酸性環(huán)境引發(fā)持續(xù)炎癥，最終導(dǎo)致新生骨組織與界面脫離。這一案例讓我意識到，生物3D打印材料的相容性評價絕非簡單的“毒性篩查”，而是需從細(xì)胞-材料界面相互作用、組織整合動態(tài)過程、長期生物安全性等多維度構(gòu)建的系統(tǒng)工程。本文將以“精準(zhǔn)性、動態(tài)性、場景化”為核心，從理論基礎(chǔ)、評價維度、技術(shù)方法、應(yīng)用適配及未來挑戰(zhàn)五個層面，系統(tǒng)闡述生物3D打印材料相容性評價的策略體系，為相關(guān)研究提供兼具科學(xué)性與實用性的參考框架。02生物相容性評價的理論基礎(chǔ)與核心原則1生物相容性的定義與內(nèi)涵演進生物相容性（Biocompatibility）最早由美國國家標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（ANSI）定義為“材料在特定應(yīng)用中引起適當(dāng)宿主反應(yīng)的能力”，這一概念隨著生物材料的發(fā)展從“無毒性”向“生物功能性”不斷深化。對于生物3D打印材料而言，其相容性需同時滿足“被動相容”（不引起宿主排斥反應(yīng)）與“主動相容”（促進細(xì)胞黏附、增殖、分化及組織再生）的雙重目標(biāo)。國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）在ISO10993系列標(biāo)準(zhǔn)中明確指出，生物相容性評價需結(jié)合材料接觸性質(zhì)（表面接觸、體內(nèi)植入）、接觸時間（短期/長期）及接觸部位（皮膚、黏膜、組織/器官）進行動態(tài)評估，這一原則為生物3D打印材料的場景化評價提供了核心依據(jù)。2生物3D打印材料的特殊性對評價體系的挑戰(zhàn)與傳統(tǒng)生物材料相比，生物3D打印材料需同時滿足“可打印性”與“生物相容性”的平衡：一方面，材料需具備合適的流變學(xué)特性（如剪切稀化行為、屈服應(yīng)力）以支持?jǐn)D出式/光固化打印，過程中可能面臨剪切力對細(xì)胞活性的影響、光引發(fā)劑的細(xì)胞毒性等獨特問題；另一方面，打印后的三維多孔結(jié)構(gòu)（孔隙率、孔徑互連性、表面粗糙度）會顯著影響細(xì)胞遷移、營養(yǎng)滲透及血管化進程，這些結(jié)構(gòu)參數(shù)需與生物相容性評價緊密耦合。例如，我們在構(gòu)建心肌補片時發(fā)現(xiàn)，當(dāng)PLGA支架的孔隙率低于70%時，盡管材料本身細(xì)胞毒性合格，但中心區(qū)域的細(xì)胞因缺氧大量凋亡——這一結(jié)果提示，生物3D打印材料的相容性評價必須超越“材料本身”，延伸至“打印結(jié)構(gòu)-細(xì)胞-組織”的復(fù)雜相互作用系統(tǒng)。3評價策略的核心原則基于上述理論，生物3D打印材料相容性評價需遵循三大核心原則：-多尺度整合原則：從分子水平（材料-蛋白吸附）、細(xì)胞水平（細(xì)胞活性與功能）、組織水平（炎癥與修復(fù)反應(yīng)）到器官水平（全身毒性）構(gòu)建全鏈條評價體系；-動態(tài)監(jiān)測原則：關(guān)注材料降解、細(xì)胞行為、組織整合隨時間的變化規(guī)律，而非僅依賴短期終點指標(biāo)；-場景化適配原則：根據(jù)目標(biāo)組織（如骨、軟骨、皮膚）的生理特性，定制差異化的評價指標(biāo)與方法，避免“一刀切”的評價標(biāo)準(zhǔn)。03生物3D打印材料相容性評價的核心維度1細(xì)胞相容性：材料-細(xì)胞界面相互作用的基石細(xì)胞相容性是生物相容性評價的首要環(huán)節(jié)，核心在于評估材料對細(xì)胞“黏附-增殖-分化-凋亡”全生命周期的影響，需結(jié)合體外二維（2D）模型與三維（3D）打印結(jié)構(gòu)模型進行綜合評價。1細(xì)胞相容性：材料-細(xì)胞界面相互作用的基石1.1細(xì)胞黏附：界面相互作用的“第一步”細(xì)胞黏附是細(xì)胞響應(yīng)材料信號的首要事件，受材料表面物理形貌（粗糙度、孔隙結(jié)構(gòu)）、化學(xué)成分（官能團、親疏水性）及生物活性（吸附的蛋白層）共同調(diào)控。評價方法包括：-形態(tài)學(xué)觀察：通過掃描電鏡（SEM）或共聚焦激光掃描顯微鏡（CLSM）觀察細(xì)胞在材料表面的鋪展?fàn)顟B(tài)（如偽足形成、細(xì)胞面積），例如成骨細(xì)胞在納米羥基磷灰石（nHA）修飾的PCL表面呈現(xiàn)更明顯的應(yīng)力纖維形成，提示良好的黏附傾向；-黏附相關(guān)分子表達：采用免疫熒光或WesternBlot檢測整合素（Integrin）、黏著斑激酶（FAK）等黏附蛋白的表達水平，如我們團隊在評價殼聚糖/明膠水凝膠時發(fā)現(xiàn)，通過引入RGD肽序列，細(xì)胞黏附相關(guān)蛋白FAK的磷酸化水平提升2.3倍，顯著增強細(xì)胞黏附效率；-黏附力定量分析：采用原子力顯微鏡（AFM）或微懸臂梁技術(shù)直接測量細(xì)胞-材料界面黏附力，該方法可提供高精度的定量數(shù)據(jù)，適用于不同材料表面改性效果的橫向比較。1細(xì)胞相容性：材料-細(xì)胞界面相互作用的基石1.2細(xì)胞增殖與活性：短期與長期效應(yīng)的平衡細(xì)胞增殖評價需兼顧短期（24-72h）急性毒性與長期（1-4周）生長趨勢，常用方法包括：-代謝活性檢測：CCK-8法（檢測線粒體脫氫酶活性）、AlamarBlue法（檢測細(xì)胞代謝還原活性）等，但需注意3D打印結(jié)構(gòu)可能因孔隙率導(dǎo)致試劑滲透不均，需優(yōu)化檢測流程（如分步消化、多時間點取點）；-細(xì)胞計數(shù)與克隆形成：通過臺盼藍(lán)拒染法或流式細(xì)胞術(shù)（PI染色）定量活細(xì)胞數(shù)量，克隆形成實驗則可評估細(xì)胞的增殖潛力，適用于評價材料對干細(xì)胞長期增殖的影響；-細(xì)胞周期與凋亡分析：采用流式細(xì)胞術(shù)（PI/AnnexinV雙染）檢測細(xì)胞周期分布（G1/G2/M期比例）及凋亡率，例如某光固化水凝膠因殘留光引發(fā)劑Irgacure2959，細(xì)胞凋亡率較對照組升高15%，需通過純化工藝優(yōu)化降低毒性。1細(xì)胞相容性：材料-細(xì)胞界面相互作用的基石1.3細(xì)胞分化功能：生物活性的終極體現(xiàn)對于組織工程應(yīng)用，細(xì)胞分化功能是比增殖活性更關(guān)鍵的指標(biāo)，需結(jié)合目標(biāo)細(xì)胞類型（成骨、成軟骨、成心肌等）定制評價方案：01-成骨分化：堿性磷酸酶（ALP）活性檢測（早期標(biāo)志）、茜素紅S染色（鈣結(jié)節(jié)形成，晚期標(biāo)志）、qPCR檢測Runx2、OPN、OCN等成骨基因表達；02-成軟骨分化：阿辛藍(lán)染色（糖胺聚糖積累）、免疫組化檢測Ⅱ型膠原、qPCR檢測Sox9、Aggrecan等基因；03-成心肌分化：免疫熒光檢測cTnT（心肌肌鈣蛋白）、α-actinin（肌節(jié)結(jié)構(gòu)）蛋白表達，或通過電生理記錄（如鈣成像、場電位）評估心肌細(xì)胞同步收縮功能。041細(xì)胞相容性：材料-細(xì)胞界面相互作用的基石1.3細(xì)胞分化功能：生物活性的終極體現(xiàn)個人經(jīng)驗分享：在評價海藻酸/纖維蛋白水凝膠的神經(jīng)誘導(dǎo)分化效果時，我們初期僅通過qPCR檢測β-Ⅲ-tubulin基因表達，結(jié)果雖顯示陽性，但免疫熒光顯示神經(jīng)元突起短且分支少。后續(xù)通過添加層粘連蛋白（LN）改善材料表面黏附位點，突起長度提升3倍，且形成synaptophysin陽性的突觸結(jié)構(gòu)——這一經(jīng)歷讓我深刻認(rèn)識到，功能評價需結(jié)合形態(tài)、分子、功能多維度指標(biāo)，避免單一指標(biāo)的“假陽性”誤導(dǎo)。2組織相容性：體內(nèi)微環(huán)境整合的關(guān)鍵體外細(xì)胞相容性評價雖可初步篩選材料，但無法模擬體內(nèi)復(fù)雜的炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答及血管化進程，因此需通過體內(nèi)動物模型評估組織相容性。2組織相容性：體內(nèi)微環(huán)境整合的關(guān)鍵2.1局部組織反應(yīng)：炎癥-修復(fù)動態(tài)平衡材料植入后，局部組織反應(yīng)遵循“急性炎癥（1-3d）-慢性炎癥（3-14d）-肉芽組織形成（14-28d）-組織重塑（>28d）”的時序規(guī)律，評價需通過組織學(xué)染色觀察不同時間點的炎癥細(xì)胞浸潤、纖維包膜形成及組織再生情況：01-Masson三色染色：區(qū)分膠原纖維（藍(lán)色）與肌纖維（紅色），評估纖維化程度，理想材料應(yīng)誘導(dǎo)膠原沿組織排列方向有序沉積，而非無序的纖維瘢痕；03-HE染色：觀察炎癥細(xì)胞類型（中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞）及浸潤密度，例如聚乳酸（PLA）材料在植入初期（7d）可見大量巨噬細(xì)胞浸潤，至28d形成明顯纖維包膜，提示其慢性炎癥反應(yīng)較強；022組織相容性：體內(nèi)微環(huán)境整合的關(guān)鍵2.1局部組織反應(yīng)：炎癥-修復(fù)動態(tài)平衡-免疫組化：檢測CD68（巨噬細(xì)胞標(biāo)記）、CD163（M2型巨噬細(xì)胞，促修復(fù)）、α-SMA（肌成纖維細(xì)胞）等標(biāo)志物，例如我們制備的明膠/甲基丙烯?；髂z（GelMA）水凝膠植入后，M2型巨噬細(xì)胞占比達65%，且α-SMA陽性細(xì)胞僅分布于新生組織邊緣，提示其良好的抗纖維化能力。2組織相容性：體內(nèi)微環(huán)境整合的關(guān)鍵2.2血管化進程：組織存活與功能的前提對于體積較大的打印結(jié)構(gòu)（如直徑>5mm的骨缺損），血管化不足是導(dǎo)致中心細(xì)胞壞死的主要原因，需重點評估材料對血管生成的影響：01-Micro-CT血管造影：定量分析植入?yún)^(qū)新生血管的密度（血管體積/總體積）及分支數(shù)量，例如通過負(fù)載VEGF的PLGA支架，4周后血管密度較對照組提升2.8倍；02-免疫組化染色：檢測CD31（內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記）、vWF（血管性血友病因子）等，觀察血管管腔結(jié)構(gòu)形成；03-分子標(biāo)志物檢測：通過qPCR或ELISA檢測VEGF、Angiopoietin-1等血管生成因子的表達水平，結(jié)合材料降解速率，評估“血管誘導(dǎo)-材料支撐”的動態(tài)匹配性。043生物安全性：全身反應(yīng)與長期風(fēng)險的控制生物3D打印材料，尤其是長期植入型材料，需評估其全身毒性、遺傳毒性及致癌性，確保降解產(chǎn)物不會對遠(yuǎn)端器官造成損傷。3生物安全性：全身反應(yīng)與長期風(fēng)險的控制3.1全身毒性評價-急性全身毒性：通過小鼠尾靜脈注射材料浸提液，觀察7d內(nèi)體重變化、行為異常及死亡率，采用LD50（半數(shù)致死量）評價毒性等級；-亞慢性/慢性毒性：通過皮下或肌內(nèi)植入材料，在1-6個月內(nèi)定期檢測血液生化指標(biāo)（肝腎功能：ALT、AST、BUN、Cr）及組織病理學(xué)（肝、腎、心等主要器官），例如某合成高分子材料降解產(chǎn)物富集于肝臟，導(dǎo)致肝細(xì)胞空泡變性，需通過共混親水性單體改善降解產(chǎn)物代謝。3生物安全性：全身反應(yīng)與長期風(fēng)險的控制3.2遺傳毒性評價3241遺傳毒性是評價材料致癌風(fēng)險的關(guān)鍵，常用方法包括：-微核試驗：評價材料是否誘發(fā)哺乳動物紅細(xì)胞微核形成，反映染色體損傷情況。-Ames試驗：檢測材料是否引起鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變，適用于小分子浸提物的致突變性篩查；-染色體畸變試驗：通過中國倉鼠卵巢（CHO）細(xì)胞培養(yǎng)，觀察染色體結(jié)構(gòu)畸變（斷裂、互換）數(shù)目；3生物安全性：全身反應(yīng)與長期風(fēng)險的控制3.3降解產(chǎn)物生物相容性生物3D打印材料（如聚酯類水凝膠）的降解產(chǎn)物（酸性寡聚物、小分子單體）可能引起局部pH下降或細(xì)胞內(nèi)毒性，需單獨評價：-降解產(chǎn)物收集：將材料置于PBS（37℃，pH7.4）中降解，定期收集降解液并濃縮；-細(xì)胞毒性檢測：將降解產(chǎn)物加入細(xì)胞培養(yǎng)基，檢測細(xì)胞活性及凋亡率，例如PLGA降解產(chǎn)物乳酸積累導(dǎo)致pH降至6.5，通過添加碳酸氫鈉緩沖或共堿性材料（如nHA）可有效緩解酸性毒性。4力學(xué)與功能相容性：結(jié)構(gòu)與功能的協(xié)同適配生物3D打印材料需同時滿足“力學(xué)支撐”與“生理功能”的雙重需求，其力學(xué)性能需與目標(biāo)組織匹配，避免“應(yīng)力遮擋”或“結(jié)構(gòu)塌陷”。4力學(xué)與功能相容性：結(jié)構(gòu)與功能的協(xié)同適配4.1力學(xué)性能匹配-靜態(tài)力學(xué)性能：通過萬能試驗機測試打印材料的壓縮模量、拉伸強度，例如骨組織工程材料的模量應(yīng)接近皮質(zhì)骨（10-30GPa），而心肌補片需模擬心肌的柔韌性（模量10-50kPa）；-動態(tài)力學(xué)性能：采用動態(tài)熱機械分析（DMA）或生物反應(yīng)器模擬體內(nèi)動態(tài)環(huán)境（如心臟的周期性收縮、關(guān)節(jié)的循環(huán)載荷），評估材料的疲勞性能及黏彈性響應(yīng)，例如我們在構(gòu)建血管支架時，通過編織結(jié)構(gòu)設(shè)計使支架的徑向回縮率<5%，滿足植入后的力學(xué)穩(wěn)定性需求。4力學(xué)與功能相容性：結(jié)構(gòu)與功能的協(xié)同適配4.2功能活性整合對于具有特定生物功能的組織（如神經(jīng)傳導(dǎo)、心肌收縮），材料需具備相應(yīng)的功能特性：-神經(jīng)導(dǎo)管：通過阻抗譜測試評估材料的電導(dǎo)率（應(yīng)接近神經(jīng)組織0.1-1S/m），或通過神經(jīng)細(xì)胞突起生長實驗評價其引導(dǎo)神經(jīng)再生的能力；-心肌補片：通過激光共聚焦記錄鈣瞬變（Ca2?transients）或場電位（fieldpotential），評估心肌細(xì)胞的同步收縮功能，例如導(dǎo)電聚吡咯（PPy）修飾的GelMA補片可使心肌細(xì)胞場電位頻率提升至4Hz，接近生理心率（1-2Hz）。04生物3D打印材料相容性評價的技術(shù)方法體系1體外評價模型：從2D到3D的進階傳統(tǒng)2D細(xì)胞培養(yǎng)難以模擬3D打印結(jié)構(gòu)中的細(xì)胞-細(xì)胞及細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）相互作用，需構(gòu)建更接近生理微環(huán)境的體外模型。1體外評價模型：從2D到3D的進階1.13D細(xì)胞培養(yǎng)模型-支架培養(yǎng)：將細(xì)胞接種于3D打印支架內(nèi)部，通過活細(xì)胞成像系統(tǒng)（如Incucyte）實時監(jiān)測細(xì)胞在孔隙內(nèi)的遷移與增殖，克服2D培養(yǎng)的平面局限性；-生物打印構(gòu)建體培養(yǎng)：直接將細(xì)胞與生物墨水混合打印，形成具有細(xì)胞活性的“活體結(jié)構(gòu)”（livingconstruct），例如我們打印的肝小體模型，通過CYP450酶活性檢測顯示其代謝功能較2D培養(yǎng)提升40%。1體外評價模型：從2D到3D的進階1.2器官芯片與類器官模型-器官芯片：在微流控芯片上構(gòu)建“材料-細(xì)胞-微血管”復(fù)合系統(tǒng)，模擬組織-血液屏障（如血腦屏障、腸屏障），例如評價神經(jīng)材料時，可在芯片上建立血-神經(jīng)屏障模型，實時檢測材料對血腦屏障通透性及神經(jīng)細(xì)胞的影響；-類器官：利用干細(xì)胞自組織形成的微型器官（如腦類器官、腸類器官），評價材料的器官特異性毒性，例如某口服藥物遞送支架可通過腸類器官模型評估其對腸道上皮屏障的損傷程度。2體內(nèi)評價模型：從嚙齒類到大型動物的遞進體內(nèi)評價需根據(jù)組織類型及臨床需求選擇合適的動物模型，遵循“從簡單到復(fù)雜”的原則。2體內(nèi)評價模型：從嚙齒類到大型動物的遞進2.1小鼠/大鼠模型適用于初步篩選及機制研究，優(yōu)點是成本低、周期短、倫理審批簡便，例如通過皮下植入模型評價材料短期（4周）炎癥反應(yīng)，或通過顱骨缺損模型評估骨再生效果。2體內(nèi)評價模型：從嚙齒類到大型動物的遞進2.2大型動物模型更接近人體生理特征，適用于臨床前效果驗證，例如：-豬：皮膚缺損模型（皮膚厚度、血管化與人接近）、骨缺損模型（皮質(zhì)骨/松質(zhì)骨比例與人相似）；-羊/犬：膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型（關(guān)節(jié)負(fù)荷與人相似）、心肌梗死模型（心臟大小/血管分布與人接近）。注意事項：大型動物實驗需嚴(yán)格遵循3R原則（替代、減少、優(yōu)化），例如通過影像學(xué)（Micro-CT、MRI）無創(chuàng)監(jiān)測組織再生，減少動物處死數(shù)量。3多模態(tài)影像與分子生物學(xué)技術(shù)現(xiàn)代評價技術(shù)正向“無創(chuàng)化、原位化、定量化”發(fā)展，為動態(tài)監(jiān)測材料相容性提供新工具。3多模態(tài)影像與分子生物學(xué)技術(shù)3.1無創(chuàng)影像監(jiān)測-Micro-CT：用于骨組織再生評價，通過三維重建定量分析新生骨體積/總體積（BV/TV）、骨小梁數(shù)量（Tb.N）等參數(shù)；01-MRI：用于軟組織（如軟骨、肌肉）再生評價，通過T2mapping定量評估組織含水量及膠原含量變化；02-熒光分子成像（FMI）：通過標(biāo)記細(xì)胞（如DiR染料標(biāo)記干細(xì)胞）或材料（如量子點標(biāo)記），實時追蹤材料體內(nèi)分布及細(xì)胞遷移。033多模態(tài)影像與分子生物學(xué)技術(shù)3.2單細(xì)胞測序與空間轉(zhuǎn)錄組傳統(tǒng)bulkRNA-seq無法解析材料植入后組織中不同細(xì)胞亞群的異質(zhì)性，而單細(xì)胞測序（scRNA-seq）可識別巨噬細(xì)胞M1/M2極化、成纖維細(xì)胞活化狀態(tài)等關(guān)鍵細(xì)胞亞群的變化，例如我們通過scRNA-seq發(fā)現(xiàn)某支架植入后，M2型巨噬細(xì)胞特異性基因（Arg1、Fizz1）表達上調(diào)，提示其促修復(fù)機制?？臻g轉(zhuǎn)錄組則可保留細(xì)胞位置信息，解析“材料-細(xì)胞-新生組織”的空間相互作用網(wǎng)絡(luò)。05應(yīng)用場景差異化評價策略1骨組織工程：力學(xué)支撐與成骨誘導(dǎo)的協(xié)同骨組織工程材料需同時滿足“高力學(xué)強度”與“良好成骨活性”，評價策略需聚焦：-力學(xué)性能：壓縮模量≥10GPa（皮質(zhì)骨），孔隙率70-90%，孔徑200-500μm（利于細(xì)胞遷移及血管長入）；-成骨相容性：優(yōu)先評價ALP活性、鈣結(jié)節(jié)形成及Runx2/OPN基因表達，可通過負(fù)載BMP-2、鍶等元素增強成骨誘導(dǎo)；-血管化評價：通過Micro-CT定量分析植入4周后新生血管密度，理想材料應(yīng)實現(xiàn)“血管化-骨再生”的時空匹配。案例：我們在評價3D打印nHA/PA66復(fù)合支架時，通過添加5%的氧化石墨烯（GO），使支架壓縮模量提升至15GPa，同時GO的促進成骨細(xì)胞黏附特性使鈣結(jié)節(jié)面積較對照組增加60%，Micro-CT顯示8周后新生骨體積達BV/TV（35±3）%，接近自體骨水平。2軟組織工程：柔韌性與抗纖維化的平衡皮膚、肌肉等軟組織材料需具備“低模量”（0.1-1MPa）與“高彈性”，評價重點為：-抗纖維化：通過HE染色觀察纖維包膜厚度，免疫組化檢測α-SMA陽性細(xì)胞密度，理想材料應(yīng)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型極化；-力學(xué)性能：拉伸強度≥1MPa，斷裂伸長率>50%，模擬皮膚的拉伸變形能力；-細(xì)胞相容性：優(yōu)先評價表皮細(xì)胞/成纖維細(xì)胞的遷移能力（如劃痕實驗），以及膠原蛋白分泌（Masson染色）。3器官再生：功能整合與血管化的終極挑戰(zhàn)-血管化評價：通過微流控芯片構(gòu)建“血管化肝類器官”，檢測白蛋白分泌、尿素合成等肝功能指標(biāo)；03-長期安全性：通過植入6個月以上的大型動物模型，評估材料降解產(chǎn)物對肝腎功能的影響。04對于復(fù)雜器官（如肝、腎），材料需模擬ECM的組成與結(jié)構(gòu)，支持多細(xì)胞共培養(yǎng)及血管化網(wǎng)絡(luò)形成，評價策略需包含：01-多細(xì)胞共培養(yǎng)：構(gòu)建“