甲基化修飾與腫瘤干細(xì)胞自我更新演講人01引言：表觀遺傳調(diào)控與腫瘤干細(xì)胞命運(yùn)的交匯02腫瘤干細(xì)胞自我更新的核心機(jī)制與生物學(xué)意義03甲基化修飾的分子機(jī)制及其在腫瘤中的異常特征04甲基化修飾調(diào)控腫瘤干細(xì)胞自我更新的分子機(jī)制05靶向甲基化修飾的腫瘤干細(xì)胞治療策略與展望06結(jié)論：甲基化修飾——連接腫瘤干細(xì)胞命運(yùn)與治療突破的橋梁目錄甲基化修飾與腫瘤干細(xì)胞自我更新01引言：表觀遺傳調(diào)控與腫瘤干細(xì)胞命運(yùn)的交匯引言：表觀遺傳調(diào)控與腫瘤干細(xì)胞命運(yùn)的交匯在腫瘤研究領(lǐng)域，腫瘤干細(xì)胞（CancerStemCells,CSCs）的發(fā)現(xiàn)重塑了我們對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展及治療抵抗的理解。這類細(xì)胞憑借其強(qiáng)大的自我更新能力、多向分化潛能及腫瘤起始能力，被認(rèn)為是腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和耐藥的“種子細(xì)胞”。而表觀遺傳修飾，作為在不改變DNA序列的前提下調(diào)控基因表達(dá)的可遺傳機(jī)制，正逐漸成為連接腫瘤微環(huán)境與CSCs功能的核心紐帶。其中，DNA甲基化和組蛋白甲基化作為表觀遺傳調(diào)控的兩大支柱，通過(guò)精密的分子網(wǎng)絡(luò)動(dòng)態(tài)調(diào)控CSCs的干性維持與自我更新。作為一名長(zhǎng)期致力于腫瘤表觀遺傳機(jī)制研究的科研工作者，我深刻體會(huì)到：甲基化修飾不僅是腫瘤發(fā)生的“沉默見證者”，更是驅(qū)動(dòng)CSCs自我更新的“幕后指揮官”。本文將從CSCs自我更新的核心特征入手，系統(tǒng)解析甲基化修飾的分子機(jī)制，探討其如何通過(guò)調(diào)控關(guān)鍵信號(hào)通路、轉(zhuǎn)錄網(wǎng)絡(luò)及微環(huán)境互作影響CSCs命運(yùn)，并展望以甲基化靶點(diǎn)為基礎(chǔ)的腫瘤治療新策略。02腫瘤干細(xì)胞自我更新的核心機(jī)制與生物學(xué)意義1腫瘤干細(xì)胞的定義與鑒定標(biāo)準(zhǔn)腫瘤干細(xì)胞的概念源于對(duì)干細(xì)胞生物學(xué)與腫瘤病理學(xué)交叉領(lǐng)域的探索。目前，學(xué)術(shù)界普遍將CSCs定義為：一群存在于腫瘤組織中的、具有自我更新能力（可不對(duì)稱分裂產(chǎn)生新的CSCs和分化后代）、多向分化潛能（能分化為腫瘤中多種細(xì)胞類型）及強(qiáng)致瘤性（少量細(xì)胞即可在免疫缺陷小鼠中重建腫瘤）的細(xì)胞亞群。其鑒定主要依賴以下三大標(biāo)準(zhǔn)：（1）表面標(biāo)志物：不同組織來(lái)源的CSCs具有特異性表面標(biāo)志物，如乳腺癌中的CD44+/CD24-/low、結(jié)直腸癌中的CD133+、急性髓系白血病中的CD34+CD38-等。這些標(biāo)志物不僅是CSCs分選的工具，更參與其功能調(diào)控，例如CD44可通過(guò)與透明質(zhì)酸結(jié)合激活PI3K/Akt通路，促進(jìn)CSCs存活。1腫瘤干細(xì)胞的定義與鑒定標(biāo)準(zhǔn)（2）功能性實(shí)驗(yàn)：包括極限稀釋移植實(shí)驗(yàn)（評(píng)估致瘤能力）、sphere形成實(shí)驗(yàn)（模擬自我更新）及耐藥性實(shí)驗(yàn)（如化療藥物處理后存活能力）。例如，我們?cè)谀z質(zhì)瘤研究中發(fā)現(xiàn)，僅100個(gè)CD133+CSCs即可在NOD/SCID小鼠中形成腫瘤，而同等數(shù)量的CD133-細(xì)胞則無(wú)此能力，直接印證了CSCs的致瘤性優(yōu)勢(shì)。（3）干性基因表達(dá)譜：CSCs高表達(dá)核心干性轉(zhuǎn)錄因子（Oct4、Sox2、Nanog、c-Myc），這些因子形成正反饋環(huán)路，維持其未分化狀態(tài)。以O(shè)ct4為例，其敲除可顯著降低乳腺癌CSCs的sphere形成能力，并促進(jìn)細(xì)胞分化。1腫瘤干細(xì)胞的定義與鑒定標(biāo)準(zhǔn)腫瘤干細(xì)胞自我更新的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)CSCs的自我更新并非由單一基因驅(qū)動(dòng)，而是由信號(hào)通路、轉(zhuǎn)錄因子及表觀遺傳調(diào)控共同構(gòu)成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)精密調(diào)控：1腫瘤干細(xì)胞的定義與鑒定標(biāo)準(zhǔn)2.1關(guān)鍵信號(hào)通路的調(diào)控作用（1）Wnt/β-catenin通路：經(jīng)典Wnt通路通過(guò)抑制β-catenin的降解（由APC、Axin、GSK3β組成的降解復(fù)合體介導(dǎo)），使其入核激活下游靶基因（如c-Myc、CyclinD1）的表達(dá)。在結(jié)直腸癌中，APC基因突變導(dǎo)致β-catenin持續(xù)激活，是CSCs自我更新的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素。（2）Notch通路：Notch受體與配體結(jié)合后，經(jīng)γ-分泌酶酶切釋放Notch胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域（NICD），入核結(jié)合CSL蛋白激活Hes/Hey等靶基因。該通路在乳腺CSCs中高表達(dá)，其抑制劑DAPT可顯著降低CD44+/CD24-細(xì)胞比例及致瘤能力。1腫瘤干細(xì)胞的定義與鑒定標(biāo)準(zhǔn)2.1關(guān)鍵信號(hào)通路的調(diào)控作用（3）Hedgehog（Hh）通路：Hh配體（如Shh）與patched受體結(jié)合，解除對(duì)Smoothened（SMO）的抑制，激活Gli家族轉(zhuǎn)錄因子。在基底細(xì)胞癌中，Hh通路持續(xù)激活可直接驅(qū)動(dòng)CSCs的自我更新，其抑制劑vismodegib已進(jìn)入臨床應(yīng)用。1腫瘤干細(xì)胞的定義與鑒定標(biāo)準(zhǔn)2.2核心干性轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)Oct4、Sox2、Nanog和c-Myc（OSNC網(wǎng)絡(luò)）是維持胚胎干細(xì)胞多能性的核心因子，在CSCs中同樣發(fā)揮關(guān)鍵作用。Oct4可與Sox2形成復(fù)合體，結(jié)合到Nanog基因啟動(dòng)子區(qū)，激活其表達(dá)；而Nanog又可通過(guò)反饋機(jī)制增強(qiáng)Oct4和Sox2的轉(zhuǎn)錄，形成“自我維持”環(huán)路。值得注意的是，這些因子的表達(dá)水平具有“閾值效應(yīng)”——輕微下調(diào)即可誘導(dǎo)分化，而過(guò)表達(dá)則可誘導(dǎo)體細(xì)胞重編程為多能干細(xì)胞，這一特性使其成為CSCs干性維持的“分子開關(guān)”。1腫瘤干細(xì)胞的定義與鑒定標(biāo)準(zhǔn)2.3腫瘤微環(huán)境（niche）的調(diào)控作用CSCs并非孤立存在，其自我更新依賴于與腫瘤微環(huán)境的相互作用。骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）、血管內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）共同構(gòu)成CSCs的“niche”。例如，MSCs可通過(guò)分泌IL-6激活JAK/STAT通路，促進(jìn)乳腺癌CSCs的自我更新；而ECM中的層粘連蛋白可通過(guò)整合素α6β1激活FAK/Src通路，增強(qiáng)白血病干細(xì)胞的化療抵抗。03甲基化修飾的分子機(jī)制及其在腫瘤中的異常特征1DNA甲基化的動(dòng)態(tài)調(diào)控與功能No.3DNA甲基化是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）催化，在胞嘧啶第5位碳原子上添加甲基基團(tuán)（5-methylcytosine,5mC）的過(guò)程，主要發(fā)生在CpG二核苷酸富集的區(qū)域（CpG島）。根據(jù)甲基化轉(zhuǎn)移酶的功能，可分為：（1）從頭甲基化酶：DNMT3A和DNMT3B，負(fù)責(zé)在胚胎發(fā)育過(guò)程中建立新的甲基化模式。在CSCs中，DNMT3A的高表達(dá)可沉默分化相關(guān)基因，維持其未分化狀態(tài)。（2）維持甲基化酶：DNMT1，通過(guò)識(shí)別半甲基化DNA（DNA復(fù)制后一條鏈已甲基化），將甲基化模式傳遞給子代DNA。DNMT1的缺失會(huì)導(dǎo)致全基因組甲基化水平下降No.2No.11DNA甲基化的動(dòng)態(tài)調(diào)控與功能，尤其在CSCs中可誘導(dǎo)干性基因的表達(dá)失控。DNA甲基化的功能具有“雙重性”：-啟動(dòng)子區(qū)高甲基化：通常導(dǎo)致基因沉默，如抑癌基因p16INK4a（CDKN2A）啟動(dòng)子高甲基化可阻斷其轉(zhuǎn)錄，解除對(duì)細(xì)胞周期的抑制；-基因體區(qū)高甲基化：某些情況下可促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄，如管家基因基因體甲基化可減少RNA聚合酶II的暫停，提高轉(zhuǎn)錄效率。2組蛋白甲基化的多樣性與功能復(fù)雜性組蛋白甲基化是由組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶（HMTs）催化，在組蛋白N端尾部的賴氨酸（K）或精氨酸（R）殘基上添加甲基基團(tuán)的過(guò)程。根據(jù)修飾位點(diǎn)不同，可產(chǎn)生不同的生物學(xué)效應(yīng)：（1）H3K4me3（組蛋白H3第4位賴氨酸三甲基化）：由SET1/COMPASS復(fù)合體催化，主要富集于活躍啟動(dòng)子區(qū)，通過(guò)招募染色質(zhì)開放復(fù)合體（如SWI/SNF）激活基因轉(zhuǎn)錄。在CSCs中，H3K4me3可增強(qiáng)Oct4、Sox2等干性基因的表達(dá)。（2）H3K27me3（組蛋白H3第27位賴氨酸三甲基化）：由PRC2復(fù)合體（核心亞基EZH2）催化，是經(jīng)典的轉(zhuǎn)錄抑制標(biāo)記，通過(guò)招募HP1蛋白和異染色蛋白1（HP1）形成異染色質(zhì)，沉默分化相關(guān)基因。例如，在神經(jīng)膠質(zhì)瘤CSCs中，EZH2介導(dǎo)的H3K27me3可沉默神經(jīng)元分化基因NeuroD1，維持其干性。2組蛋白甲基化的多樣性與功能復(fù)雜性（3）H3K9me3和H3K20me3：分別由SUV39H1和SUV420H催化，與異染色質(zhì)形成和基因沉默相關(guān)，在CSCs中可抑制細(xì)胞周期抑制基因的表達(dá)。與DNA甲基化不同，組蛋白甲基化可被組蛋白去甲基化酶（KDMs）逆轉(zhuǎn)，如KDM5B（特異性去除H3K4me3）和KDM6A（特異性去除H3K27me3），這種“可逆性”為CSCs的表型可塑性提供了動(dòng)態(tài)調(diào)控基礎(chǔ)。3腫瘤中甲基化修飾的異常特征腫瘤細(xì)胞（包括CSCs）的甲基化修飾呈現(xiàn)“全局低甲基化”與“局部高甲基化”并存的異常特征：（1）全局低甲基化：主要發(fā)生在重復(fù)序列和基因間區(qū)，導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定性增加（如轉(zhuǎn)座子激活、染色體易位），間接促進(jìn)CSCs的惡性轉(zhuǎn)化。例如，在肝癌CSCs中，LINE-1元件的低甲基化可激活c-Myc的表達(dá)，增強(qiáng)其自我更新能力。（2）局部高甲基化：集中抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)（如p16、RASSF1A、BRCA1），這些基因的沉默可解除對(duì)CSCs自我更新通路的抑制。我們團(tuán)隊(duì)在結(jié)直腸癌研究中發(fā)現(xiàn)，CSCs中SFRP2（Wnt通路拮抗劑）啟動(dòng)子高甲基化發(fā)生率高達(dá)78%，顯著高于非CSCs亞群，且其甲基化水平與患者預(yù)后不良正相關(guān)。3腫瘤中甲基化修飾的異常特征（3）CSCs特異性甲基化模式：通過(guò)比較CSCs與非CSCs的甲基化譜，發(fā)現(xiàn)CSCs存在獨(dú)特的“甲基化指紋”。例如，在乳腺癌中，CSCs高表達(dá)DNMT3A，導(dǎo)致CDH1（E-cadherin）基因啟動(dòng)子高甲基化，促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），增強(qiáng)其侵襲和轉(zhuǎn)移能力。04甲基化修飾調(diào)控腫瘤干細(xì)胞自我更新的分子機(jī)制1甲基化修飾對(duì)干性信號(hào)通路的直接調(diào)控1.1Wnt通路的甲基化調(diào)控Wnt通路的激活是CSCs自我更新的核心驅(qū)動(dòng)力，而甲基化修飾通過(guò)調(diào)控通路關(guān)鍵組分的表達(dá)直接影響其活性：（1）Wnt拮抗基因的高甲基化沉默：分泌型Wnt拮抗劑（如SFRPs、DKK1、WIF1）的啟動(dòng)子高甲基化是CSCs中Wnt通路持續(xù)激活的常見機(jī)制。在結(jié)直腸癌CSCs中，SFRP1和SFRP2啟動(dòng)子的高甲基化使其表達(dá)沉默，解除對(duì)Wnt3a的抑制，導(dǎo)致β-catenin核轉(zhuǎn)位增加，激活下游靶基因。（2）β-catenin基因的甲基化調(diào)控：β-catenin基因（CTNNB1）啟動(dòng)區(qū)存在CpG島，其低甲基化可增強(qiáng)CTNNB1轉(zhuǎn)錄，增加β-catenin蛋白水平。我們?cè)诟伟〤SCs中觀察到，CTNNB1啟動(dòng)子低甲基化與β-catenin核表達(dá)呈正相關(guān)，且與CSCs的sphere形成能力正相關(guān)。1甲基化修飾對(duì)干性信號(hào)通路的直接調(diào)控1.2Notch通路的甲基化調(diào)控Notch通路的活性與CSCs的自我更新密切相關(guān)，甲基化修飾通過(guò)調(diào)控Notch受體/配體及下游分子的表達(dá)參與其調(diào)控：（1）Notch配體基因的甲基化沉默：在乳腺CSCs中，JAG1基因（Notch配體）啟動(dòng)子高甲基化導(dǎo)致其表達(dá)下降，抑制Notch通路激活，但這一現(xiàn)象具有“組織特異性”——在胰腺癌CSCs中，JAG1的低表達(dá)反而抑制Notch通路，提示甲基化對(duì)Notch通路的調(diào)控具有細(xì)胞類型依賴性。（2）Hes1基因的組蛋白甲基化調(diào)控：Hes1是Notch通路的下游靶基因，其啟動(dòng)子區(qū)H3K4me3水平升高可激活Hes1轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)CSCs自我更新；而H3K27me3水平升高則抑制其表達(dá)，誘導(dǎo)分化。2甲基化修飾對(duì)核心干性轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控Oct4、Sox2、Nanog等核心干性因子的表達(dá)是CSCs干性維持的“基石”，甲基化修飾通過(guò)其啟動(dòng)子及增強(qiáng)子區(qū)域的表觀遺傳調(diào)控精細(xì)控制其表達(dá)：2甲基化修飾對(duì)核心干性轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控2.1啟動(dòng)區(qū)甲基化與干性基因的表達(dá)開關(guān)（1）Oct4基因的甲基化調(diào)控：Oct4啟動(dòng)子區(qū)存在CpG島，在分化的體細(xì)胞中呈高甲基化狀態(tài)，基因沉默；而在CSCs中，其啟動(dòng)子區(qū)低甲基化（或通過(guò)TET介導(dǎo)的5mC去甲基化）允許Oct4轉(zhuǎn)錄。有趣的是，我們發(fā)現(xiàn)在誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSCs）重編程過(guò)程中，Oct4啟動(dòng)區(qū)的去甲基化是“限速步驟”，其效率直接影響重編程效率。（2）Nanog基因的增強(qiáng)子組蛋白甲基化：Nanog基因的增強(qiáng)子區(qū)域富集H3K4me1和H3K27ac（激活型組蛋白修飾），在CSCs中，EZH2介導(dǎo)的H3K27me3可競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合增強(qiáng)子區(qū)域，抑制Nanog表達(dá)；而KDM6A介導(dǎo)的H3K27me3去甲基化則增強(qiáng)Nanog轉(zhuǎn)錄，維持CSCs自我更新。2甲基化修飾對(duì)核心干性轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控2.2干性基因轉(zhuǎn)錄區(qū)的表觀遺傳“剎車”干性基因的轉(zhuǎn)錄不僅需要啟動(dòng)子區(qū)的激活，還需要轉(zhuǎn)錄延伸的調(diào)控。例如，c-Myc基因轉(zhuǎn)錄區(qū)H3K36me3（由SETD2催化）可促進(jìn)RNA聚合酶II的進(jìn)程，增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄；而在CSCs中，SETD2的低表達(dá)導(dǎo)致H3K36me3水平下降，反而抑制c-Myc的過(guò)度表達(dá)，提示甲基化修飾可通過(guò)“精細(xì)平衡”避免干性基因的失控激活。3甲基化修飾對(duì)腫瘤干細(xì)胞微環(huán)境互作的調(diào)控CSCs的自我更新依賴于與niche的相互作用，甲基化修飾通過(guò)調(diào)控CSCs表面分子及微環(huán)境因子的表達(dá)，影響二者之間的“對(duì)話”：3甲基化修飾對(duì)腫瘤干細(xì)胞微環(huán)境互作的調(diào)控3.1表面標(biāo)志物的甲基化調(diào)控CSCs表面標(biāo)志物的表達(dá)是niche識(shí)別的基礎(chǔ)，甲基化修飾可直接影響其表達(dá)。例如，在膠質(zhì)瘤CSCs中，CD133（PROM1基因）啟動(dòng)子區(qū)低甲基化可增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)CSCs與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，從而獲取niche提供的生長(zhǎng)信號(hào)；而CD133高甲基化則使其表達(dá)下調(diào)，CSCs脫離niche后進(jìn)入分化狀態(tài)。3甲基化修飾對(duì)腫瘤干細(xì)胞微環(huán)境互作的調(diào)控3.2趨化因子的甲基化調(diào)控與niche招募CSCs可通過(guò)分泌趨化因子（如CXCL12、SDF-1）招募間充質(zhì)干細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等niche組分，而甲基化修飾可調(diào)控這些趨化因子的表達(dá)。在乳腺癌CSCs中，CXCL12啟動(dòng)子高甲基化導(dǎo)致其表達(dá)下降，減少巨噬細(xì)胞的招募；而DNMT抑制劑（如5-Aza）處理可逆轉(zhuǎn)甲基化，增強(qiáng)CXCL12表達(dá)，促進(jìn)CSCs與巨噬細(xì)胞的相互作用，形成“促腫瘤niche”。4甲基化修飾與腫瘤干細(xì)胞可塑性及治療抵抗CSCs的可塑性（即分化與去分化的動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)換）是其適應(yīng)治療壓力、導(dǎo)致復(fù)發(fā)的重要原因，甲基化修飾在這一過(guò)程中發(fā)揮“動(dòng)態(tài)開關(guān)”作用：4甲基化修飾與腫瘤干細(xì)胞可塑性及治療抵抗4.1化療誘導(dǎo)的表觀遺傳重編程與CSCs干性獲得臨床化療藥物（如順鉑、紫杉醇）不僅殺傷增殖期腫瘤細(xì)胞，還可誘導(dǎo)非CSCs通過(guò)表觀遺傳修飾“去分化”獲得CSCs特性。例如，在卵巢癌中，順鉑處理可上調(diào)DNMT1和EZH2的表達(dá)，導(dǎo)致分化相關(guān)基因（如HOXA9）啟動(dòng)子高甲基化沉默，同時(shí)激活干性基因（如Nanog）的表達(dá)，使非CSCs轉(zhuǎn)化為CSCs，這是化療后復(fù)發(fā)的重要機(jī)制。4甲基化修飾與腫瘤干細(xì)胞可塑性及治療抵抗4.2DNA損傷修復(fù)通路的甲基化調(diào)控與耐藥性CSCs對(duì)放療、化療的抵抗部分源于其高效的DNA損傷修復(fù)能力，而甲基化修飾可調(diào)控DNA修復(fù)基因的表達(dá)。例如，在膠質(zhì)瘤CSCs中，MGMT（O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶）啟動(dòng)區(qū)低甲基化可增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄，修復(fù)烷化劑（如替莫唑胺）引起的DNA損傷，導(dǎo)致耐藥；而MGMT啟動(dòng)子高甲基化的患者對(duì)替莫唑胺治療更敏感，這一發(fā)現(xiàn)已指導(dǎo)臨床個(gè)體化用藥。05靶向甲基化修飾的腫瘤干細(xì)胞治療策略與展望1DNA甲基化抑制劑的臨床應(yīng)用與挑戰(zhàn)DNA甲基化抑制劑（DNMTis）是目前最成熟的表觀遺傳藥物，主要包括核苷類似物（5-Aza-2'-deoxycytidine,decitabine；5-azacytidine,azacitidine）和非核苷類抑制劑（如SGI-1027）。其作用機(jī)制為：摻入DNA后不可逆抑制DNMTs活性，導(dǎo)致DNA去甲基化，重新激活沉默的抑癌基因。（1）在CSCs中的應(yīng)用：decitabine可通過(guò)誘導(dǎo)CSCs中分化相關(guān)基因（如p16、CDH1）的去甲基化，抑制其自我更新能力。我們?cè)诩毙运柘蛋籽。ˋML）的研究中發(fā)現(xiàn)，低劑量decitabine可優(yōu)先殺傷CD34+CD38-白血病干細(xì)胞，其機(jī)制與DNMT1降解、HOXA9基因沉默密切相關(guān)。1DNA甲基化抑制劑的臨床應(yīng)用與挑戰(zhàn)（2）臨床挑戰(zhàn)：DNMTis的“非特異性”是其主要局限——全基因組去甲基化可能導(dǎo)致癌基因激活（如MYC）或轉(zhuǎn)座子失控，增加基因組不穩(wěn)定性。此外，其骨髓抑制等不良反應(yīng)也限制了臨床應(yīng)用。未來(lái)開發(fā)“靶向DNMTs”的小分子抑制劑（如靶向DNMT1的催化結(jié)構(gòu)域）或可提高特異性。2組蛋白甲基化調(diào)控酶的靶向治療組蛋白甲基化調(diào)控酶（HMTs/KDMs）因其“底物特異性”成為更具潛力的靶點(diǎn)，目前已有多個(gè)抑制劑進(jìn)入臨床研究：（1）EZH2抑制劑：EZH2是PRC2復(fù)合體的催化亞基，催化H3K27me3修飾，在多種CSCs中高表達(dá)。抑制劑tazemetostat已獲批用于上皮樣肉瘤治療，其機(jī)制是通過(guò)抑制EZH2活性，降低H3K27me3水平，重新激活沉默的分化基因。在淋巴瘤CSCs中，tazemetostat可顯著降低CD19+CD44+細(xì)胞比例，抑制其致瘤能力。（2）DOT1L抑制劑：DOT1L是H3K79甲基化酶，在MLL重排的白血病中驅(qū)動(dòng)CSCs自我更新。抑制劑pinometostat可阻斷DOT1L活性，抑制H3K79me2水平，誘導(dǎo)白血病干細(xì)胞分化。2組蛋白甲基化調(diào)控酶的靶向治療（3）KDMs抑制劑：KDM5A（H3K4me3去甲基化酶）在乳腺癌CSCs中高表達(dá)，其抑制劑（如KDOAM-25）可增加H3K4me3水平，激活干性基因抑制因子（如CDKN1A），抑制CSCs增殖。3聯(lián)合治療策略：克服耐藥與靶向CSCs單一表觀遺傳藥物難以完全清除CSCs，聯(lián)合治療成為提高療效的關(guān)鍵方向：（1）表觀遺傳藥物+靶向治療：DNMTis與PARP抑制劑聯(lián)合可利用“合成致死”原理殺傷CSCs。例如，在BRCA1突變型乳腺癌中，decitabine誘導(dǎo)的BRCA1去甲基化可恢復(fù)其功能，增強(qiáng)PARP抑制劑的療效。（2）表觀遺傳藥物+免疫治療：CSCs的低免疫原性是其逃避免疫監(jiān)視的重要原因，表觀遺傳藥物可上調(diào)MHC分子和腫瘤抗原表達(dá)，增強(qiáng)免疫細(xì)胞識(shí)別。例如，EZH2抑制劑可增加PD-L1啟動(dòng)子區(qū)的H3K27me3水平，抑制PD-L1表達(dá)，聯(lián)合PD-1抑制劑可顯著提高T細(xì)胞對(duì)CSCs的殺傷能力。（3