2025年高職生物技術(shù)（基因克隆基礎(chǔ)）試題及答案

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______第I卷（選擇題共40分）本大題共20小題，每小題2分，共40分。在每小題給出的四個選項中，只有一項是符合題目要求的。^1.基因克隆的核心步驟是（）A.目的基因的獲取B.載體的選擇與構(gòu)建C.目的基因與載體的連接D.重組DNA導入受體細胞^2.以下哪種方法不能用于目的基因的獲?。ǎ〢.從基因組文庫中篩選B.從cDNA文庫中篩選C.化學合成法D.細胞增殖法^3.載體應具備的條件不包括（）A.有多個限制酶切割位點B.有篩選標記基因C.能自我復制D.能整合到宿主細胞染色體上^4.限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生的末端類型不包括（）A.黏性末端B.平末端C.鈍性末端D.缺口末端^5.連接目的基因與載體常用的酶是（）A.DNA聚合酶B.DNA連接酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.核酸酶^6.將重組DNA導入受體細胞的方法不包括（）A.轉(zhuǎn)化B.轉(zhuǎn)導C.感染D.轉(zhuǎn)錄^7.以下哪種細胞可作為基因克隆的受體細胞（）A.動物細胞B.植物細胞C.微生物細胞D.以上均可^8.藍白斑篩選法中，白色菌落表示（）A.含有重組質(zhì)粒B.含有非重組質(zhì)粒C.不含質(zhì)粒D.質(zhì)粒發(fā)生突變^9.基因克隆過程中，用于鑒定重組子的方法不包括（）A.酶切鑒定B.PCR鑒定C.核酸分子雜交D.細胞形態(tài)觀察^10.以下關(guān)于基因組文庫的說法正確的是（）A.包含了某種生物的全部基因B.只包含了編碼蛋白質(zhì)的基因C.是由mRNA反轉(zhuǎn)錄構(gòu)建的D.比cDNA文庫小^11.cDNA文庫構(gòu)建過程中，需要的關(guān)鍵酶是（）A.DNA聚合酶B.DNA連接酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.核酸酶^12.化學合成法合成目的基因時，需要知道（）A.基因的核苷酸序列B.基因的表達產(chǎn)物C.基因的功能D.基因所在的染色體位置^13.載體上的篩選標記基因不包括（）A.抗生素抗性基因B.營養(yǎng)缺陷型基因C.熒光蛋白基因D.啟動子^14.以下哪種限制性核酸內(nèi)切酶識別的序列是回文序列（）A.EcoRIB.BamHIC.HindIIID.以上都是^15.連接目的基因與載體時，常用的緩沖液是（）A.Tris-HCl緩沖液B.EDTA緩沖液C.磷酸緩沖液D.醋酸緩沖液^16.轉(zhuǎn)化過程中，常用的化學試劑是（）A.CaCl?B.NaClC.KClD.MgCl?^17.轉(zhuǎn)導是指（）A.噬菌體將外源DNA導入受體細胞B.病毒將外源DNA導入受體細胞C.細菌將外源DNA導入受體細胞D.細胞將外源DNA導入受體細胞^18.核酸分子雜交不包括（）A.Southern雜交B.Northern雜交C.Western雜交D.原位雜交^19.用于PCR擴增的酶是（）A.DNA聚合酶B.DNA連接酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.核酸酶^20.基因克隆過程中，以下哪種操作不會導致基因變異（）A.限制性核酸內(nèi)切酶切割B.DNA連接酶連接C.PCR擴增D.正常的細胞代謝第II卷（非選擇題共60分）^21.（10分）簡述基因克隆的基本流程。^22.（10分）比較基因組文庫和cDNA文庫的異同。^23.（10分）說明載體應具備的條件及其作用。^24.（15分）材料：在基因克隆實驗中，研究人員從某種植物中提取了總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成了cDNA，然后用PCR擴增出了目的基因。將目的基因與載體連接后導入大腸桿菌細胞，通過藍白斑篩選得到了一些白色菌落。對白色菌落進行酶切鑒定，發(fā)現(xiàn)部分菌落的酶切結(jié)果與預期不符。問題：請分析可能導致酶切結(jié)果與預期不符的原因。^25.（15分）材料：某科研團隊想要克隆一種新發(fā)現(xiàn)的基因，用于后續(xù)的功能研究。他們首先從細胞中提取了基因組DNA，然后用限制性核酸內(nèi)切酶進行切割，獲得了目的基因片段。將目的基因片段與載體連接后導入酵母細胞。問題：請設(shè)計一個實驗方案來鑒定導入酵母細胞的重組子是否含有正確的目的基因。答案：1.C2.D3.D4.D5.B6.D7.D8.A9.D10.A11.C12.A13.D14.D15.A16.A17.A18.C19.A20.D21.基因克隆基本流程：首先獲取目的基因，可通過從基因組文庫或cDNA文庫篩選、化學合成等方法。接著選擇與構(gòu)建合適載體，載體要有多克隆位點、篩選標記等。然后將目的基因與載體連接。再把重組DNA導入受體細胞，如轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導等。最后對重組子進行篩選與鑒定，如藍白斑篩選、酶切鑒定、PCR鑒定、核酸分子雜交等。22.相同點：都是基因克隆的工具，都可用于獲取目的基因。不同點：基因組文庫包含某種生物的全部基因，包括編碼區(qū)和非編碼區(qū)，由基因組DNA構(gòu)建；cDNA文庫只包含編碼蛋白質(zhì)的基因，由mRNA反轉(zhuǎn)錄構(gòu)建，比基因組文庫小。23.載體應具備條件及作用：有多個限制酶切割位點，便于插入目的基因；有篩選標記基因，如抗生素抗性基因等，用于篩選含重組質(zhì)粒的細胞；能自我復制，保證目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在和遺傳；相對分子質(zhì)量小，便于操作。24.可能原因：目的基因擴增過程中發(fā)生突變，導致序列改變；載體構(gòu)建時連接錯誤，使目的基因與載體連接方式異常；導入大腸桿菌細胞后，質(zhì)?？赡馨l(fā)生自身環(huán)化等異常情況，影響酶切結(jié)果；藍白斑篩選可能存在假陽性，實際并非重組子的菌落被誤選。25.實驗方案：提取導入酵母細胞后的重組子DNA，用PCR擴增，將擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，觀察條帶大小是否與預期目