2025年大學生化分離技術（親和層析）期末考核卷

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______一、單項選擇題（總共10題，每題3分，每題只有一個正確答案，請將正確答案填入括號內）1.親和層析的基本原理是利用固定相載體上的配基與目標生物大分子之間的（）。A.共價鍵結合B.離子鍵結合C.疏水作用D.特異性親和力2.以下哪種物質通常不作為親和層析的配基？（）A.抗體B.酶的底物C.金屬離子D.激素3.在親和層析中，洗脫目標生物大分子的方法不包括（）。A.改變pH值B.加入競爭性抑制劑C.升高溫度D.增加離子強度4.親和層析柱的裝填過程中，下列操作錯誤的是（）。A.先將載體裝柱，再連接配基B.裝填過程中避免氣泡產(chǎn)生C.控制裝填速度D.裝填后立即進行平衡5.親和層析的分辨率主要取決于（）。A.配基的特異性B.柱長C.流速D.樣品濃度6.與傳統(tǒng)層析方法相比，親和層析的優(yōu)點不包括（）。A.特異性高B.分辨率高C.操作簡便D.成本低7.對于親和層析柱的再生，以下說法正確的是（）。A.用高濃度酸液沖洗B.用大量水沖洗即可C.去除雜質后重新裝填配基D.用有機溶劑浸泡8.在親和層析實驗中，平衡緩沖液的作用不包括（）。A.維持合適的pH值B.提供適當?shù)碾x子強度C.促進配基與目標分子結合D.防止非特異性吸附9.親和層析中，目標生物大分子的濃度對吸附效果的影響是（）。A.濃度越高，吸附越強B.濃度越高，吸附越弱C.存在一個最佳濃度范圍D.無影響10.以下哪種情況可能導致親和層析的分辨率降低？（）A.配基與目標分子親和力過高B.柱溫過低C.流速過慢D.樣品雜質過多二、多項選擇題（總共5題，每題5分，每題有兩個或兩個以上正確答案，請將正確答案填入括號內）1.親和層析中常用的載體有（）。A.瓊脂糖B.葡聚糖C.聚丙烯酰胺D.硅膠2.親和層析的應用領域包括（）。A.蛋白質純化B.酶的分離C.核酸分離D.抗體篩選3.影響親和層析吸附和解吸效果的因素有（）。A.配基與目標分子的親和力B.溫度C.pH值D.離子強度4.在親和層析實驗中，為了提高目標生物大分子的回收率，可以采取的措施有（）。A.優(yōu)化洗脫條件B.增加柱體積C.減少樣品上樣量D.多次上樣5.親和層析柱的性能評價指標包括（）。A.分辨率B.載量C.回收率D.流速三、判斷題（總共10題，每題2分，請判斷下列說法的對錯，對的打“√”，錯的打“×”）1.親和層析只能用于蛋白質的分離，不能用于其他生物大分子的分離。（）2.配基與目標生物大分子的親和力越強，親和層析的效果越好。（）3.親和層析柱裝填后可以直接使用，不需要進行平衡。（）4.在親和層析中，洗脫劑的強度越高，洗脫效果越好。（）5.提高親和層析的分辨率可以通過增加柱長來實現(xiàn)。（）6.親和層析的成本主要取決于載體和配基的價格。（）7.親和層析柱的再生次數(shù)越多，其性能越好。（）8.平衡緩沖液的離子強度對親和層析的吸附和解吸過程沒有影響。（）9.親和層析中，目標生物大分子的純度越高，其吸附效果越好。（）10.親和層析技術是一種高效、特異性強的分離技術，在生物工程領域有廣泛應用。（）四、簡答題（總共3題，每題10分）1.簡述親和層析的基本原理及操作流程。2.舉例說明親和層析在蛋白質純化中的應用，并闡述其優(yōu)勢。3.如何優(yōu)化親和層析的條件以提高目標生物大分子的分離效果？五、案例分析題（總共1題，20分）某實驗室欲從混合蛋白質樣品中分離純化一種特定的酶。已知該酶與一種特定的配基具有高度特異性親和力。請設計一個親和層析分離該酶的實驗方案，并分析可能遇到的問題及解決方法。答案：一、單項選擇題1.D2.C3.C4.A5.A6.D7.C8.C9.C10.D二、多項選擇題1.ABC2.ABCD3.ABCD4.ABD5.ABCD三、判斷題1.×2.×3.×4.×5.√6.√7.×8.×9.×10.√四、簡答題1.親和層析基本原理：利用固定相載體上的配基與目標生物大分子之間的特異性親和力進行分離。操作流程：選擇合適載體與配基制備親和層析柱，裝柱后用平衡緩沖液平衡，上樣含目標分子樣品，目標分子吸附在柱上，用適當洗脫劑洗脫目標分子，收集洗脫液，最后對親和層析柱進行再生。2.例如用抗某蛋白抗體作為配基分離該蛋白。優(yōu)勢：特異性強，能從復雜混合物中直接分離目標蛋白；分辨率高，可有效分離性質相近的蛋白；操作相對簡便，無需復雜梯度洗脫等操作。3.優(yōu)化條件可從以下方面：選擇特異性強、親和力適中的配基；控制合適的溫度、pH值、離子強度等緩沖液條件；優(yōu)化洗脫方式，如采用梯度洗脫等；合理控制上樣量和流速，避免過載和拖尾現(xiàn)象；定期對親和層析柱進行再生和維護，保持其性能穩(wěn)定。五、案例分析題實驗方案：選擇合適的載體如瓊脂糖，將特定配基共價偶聯(lián)到載體上制成親和層析柱。用平衡緩沖液平衡柱子，將混合蛋白質樣品上樣，目標酶特異性吸附在柱上。先用低鹽緩沖液沖洗去除雜質，再用含競爭性抑制劑或改變pH值、離子強度的洗脫液洗脫目標