2017-01-30實施2017-01-30實施新疆維吾爾自治區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布本標準按GB/T1.1-2009《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準的結(jié)構(gòu)和編寫》的要求編制。本標準由新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所(新疆畜牧科學(xué)院動物臨床醫(yī)學(xué)研究中心)提出。本標準由新疆維吾爾自治區(qū)畜牧廳歸口。本標準起草單位：新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所(新疆畜牧科學(xué)院動物臨床醫(yī)學(xué)研究中心)。本標準主要起草人：陳世軍、韓濤、黨新生、秦榮艷、王杰、袁燕、沈辰峰、王力儉、黃炯、楊會國、樊華、郭會玲、薛晶、金映紅工本標準規(guī)定了羊梭菌病的術(shù)語和定義、診斷和防控要求。本標準適用于肉羊養(yǎng)殖場(戶)、牧場和動物診療單位對羊梭菌病的診斷與防控。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB16548病害動物和病害動物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程NY/T5030-2016無公害農(nóng)產(chǎn)品獸藥使用準則NY5032-2016無公害食品畜禽飼料和飼料添加劑使用準則NY/T5151無公害食品肉羊飼養(yǎng)管理準則NY5149無公害食品肉羊飼養(yǎng)獸醫(yī)防疫準則3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。羊梭菌病clostridiosisofsheep由梭菌屬(Clostridium)中的病原菌引起的羊傳染性疾病的總稱，包括羔羊痢疾、羊猝狙、羊腸毒血癥、羊快疫及羊黑疫五種羊傳染病。這類疾病的共同臨床特點是急性死亡(指無明顯臨床癥狀突然死亡，或臨床癥狀出現(xiàn)到死亡不超過24h)和病死率高。病原為B型產(chǎn)氣莢膜桿菌，以腹瀉和小腸出血潰瘍，回腸外觀如紅腸子樣的新生羔羊急性致死性傳病原為C型產(chǎn)氣莢膜桿菌，以急性死亡、腹膜炎、潰瘍性腸炎和死后肌肉出現(xiàn)氣腫疽樣病變?yōu)樘卣鞯模?～24月齡羊多發(fā)的急性致死性傳染病。1病原為D型產(chǎn)氣莢膜桿菌，以急性死亡、腸粘膜脫落或潰瘍，死后腎臟腫大、實質(zhì)柔軟、觸壓即朽爛為特征的，3～12月齡羊多發(fā)的急性致死性傳染病原為腐敗梭菌，以突然死亡，胃底或幽門區(qū)點、斑狀或彌漫性出血為特征，6～18月齡羊多發(fā)的病原為B型諾維氏菌，以尸體迅速腐敗，皮膚呈黑色外觀，肝臟出現(xiàn)特異性壞死灶為特征，2～4歲潛伏期為1d～2d,人工感染則5h～10h。多為急性或亞急性經(jīng)過。體溫40℃,發(fā)病羔羊精神沉郁、低頭弓背，進而拒食、喜臥，持續(xù)性腹瀉。糞便或粘稠如糊惡臭，最后為血便。后期病羔大便失禁，脫水、虛弱、臥地不起，死亡。病程多為1d～2d。角弓反張，體溫低于正常，很快死亡。病程數(shù)小時b)小腸(尤其是回腸)呈出血性腸炎變化，腸內(nèi)充滿血樣物，狀如血腸，俗稱“紅腸子病”;c)肺臟充血有暗色瘀血斑。心包有淡黃色積液，心內(nèi)、外膜有出血點或斑；d)病程稍長時見小腸或結(jié)腸黏膜出現(xiàn)直徑多在1mm～2mm的潰瘍，潰瘍周圍有一出血e)真胃內(nèi)有未消化的凝乳塊，腸系膜淋巴結(jié)充血腫大或出血，其他實質(zhì)器官變性或腫大。涂片鏡檢病料(腸內(nèi)容物或病變部腸黏膜)涂片染色鏡檢，見大量莢膜肥厚、兩端稍方、短粗的革蘭氏陽性大桿菌(1μm～1.5μm×2μm～8μm),多單獨存在，也有成雙排列的。少數(shù)菌體中有橢圓形的芽孢，位于菌體中央或略微偏端。腸道中菌體較多，肝臟、脾臟、腎臟和淋巴結(jié)涂片可見少量菌體。2細菌分離及生化反應(yīng)試驗羔羊痢疾病原菌的細菌分離和生化反應(yīng)的具體內(nèi)容如下：a)無菌采取腎、肝、心、血液等病料，接種于厭氧肝湯中，37℃培養(yǎng)3h～4h后，肝湯產(chǎn)氣渾濁，此時將肝湯培養(yǎng)物接種于鮮血瓊脂平板上，在厭氧條件下37℃培養(yǎng)18h～24h,可見長出圓形、光滑、隆起、邊緣整齊、淡灰色菌落，培養(yǎng)72h后可見菌落為中央隆起、表面有放射狀條紋、邊緣呈鋸齒狀、灰白色、半透明、直徑2mm～5mm的“勛章”樣。菌落周圍有一β溶血環(huán)，之外還有一圈不完全溶血環(huán)，即所謂“雙重溶血環(huán)”。在乳糖卵黃瓊脂平板上，菌落周圍可形成乳白色渾濁圈(細菌產(chǎn)生卵磷脂酶分解卵黃中的卵磷脂)。取其培養(yǎng)物涂片、染色、鏡檢，可觀察到大量散在、成雙、兩端鈍圓、革蘭氏陽性短粗大桿菌。為了獲得純培養(yǎng)物，可在接種病料后將厭氧肝湯在65℃加熱15min后再進行培養(yǎng)；b)將無菌采集的肝、脾、腎病料剪碎呈小塊，分別接種于厭氧肉肝湯培養(yǎng)基中，置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)5h～6h,即呈渾濁生長，并產(chǎn)生大量氣體；24h后，肉肝湯渾濁，產(chǎn)生氣泡，管底形成白色沉淀物；c)石蕊牛乳培養(yǎng)基中產(chǎn)酸、產(chǎn)氣并凝固，由于氣體膨脹使凝乳塊斷裂，呈現(xiàn)明顯的“洶涌發(fā)酵反應(yīng)”,或稱“暴力發(fā)酵”,該特點可用于本菌的快速鑒定；d)生化反應(yīng)實驗結(jié)果顯示，本菌能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、淀粉并產(chǎn)生氣體；可分解水楊苷、甘油；不發(fā)酵甘露醇和衛(wèi)矛醇。動物回歸試驗以培養(yǎng)18h的厭氧肝湯培養(yǎng)物0.2mL在豚鼠腿部行肌內(nèi)注射，豚鼠于24h左右死亡，注射局部形成氣性壞疽。以局部病灶取病料涂片染色鏡檢，有大量的兩端鈍圓、短粗的革蘭氏陽性大桿菌存在，而血液涂片則細菌極少。對照豚鼠(注射空白厭氧肝湯)則不死亡。對鴿子肌肉接種具有更典型的氣體捻發(fā)音。小鼠的易感性較豚鼠差。主要采取病死羊的回腸及其內(nèi)容物。用標準產(chǎn)氣莢膜梭菌抗毒素與處理得到的腸內(nèi)容物上清液做中和試驗。羔羊痢疾病原菌為B型產(chǎn)氣莢膜梭菌。操作方法詳見附錄A。4.2羊猝狙4.2.1流行病學(xué)特點6月齡至2歲綿羊易感，成年羊多發(fā)。山羊亦可感染。主要是食入被本菌污染的飼草、飼料及飲水等，經(jīng)消化道感染。散發(fā)或呈地方流行性，多見于早春和秋冬的低洼、沼澤牧場。4.2.2臨床癥狀突然發(fā)病，常在3h～6h內(nèi)死亡，或見不到癥狀即死亡。早期癥狀不明顯，有時可見病羊掉群，臥地，突然沉郁，劇烈痙攣，倒地磨牙，眼球突出，驚厥死亡。4.2.3病理剖檢a)死亡8h尸檢可見骨骼肌出現(xiàn)氣腫疽樣病變，即肌間積聚帶氣泡和酸腐氣味的血樣液體，此病變具有特殊診斷意義；b)小腸一段或全部呈出血性腸炎變化，有的腸段可見糜爛和潰瘍；3涂片鏡檢用腸內(nèi)容物或病變部腸黏膜涂片，見。毒素檢查取病死羊回腸內(nèi)容物經(jīng)5倍生理鹽水稀釋，3000r/min離心15min取上清液過濾。上清液分成2份，1份不加熱，1份60℃處理30min,分別給小鼠靜脈注射0.1mL～0.3mL,或家兔靜注1mL～3mL,如加熱組不死亡，不加熱組動物于數(shù)分鐘至十幾小時內(nèi)死亡，說明有產(chǎn)氣莢膜菌型鑒定2月齡至2歲綿羊多發(fā)，山羊較少發(fā)病，以2～12月齡的綿羊最易感。多散發(fā)，多發(fā)于春夏或秋冬換病情緩慢的病例，可延至12h或2d~3d死亡。可見羊只表現(xiàn)不安，有腹痛癥狀，肚脹，離群呆立，病羊體溫一般不高，病死率很高。臨死前出現(xiàn)明顯的高血糖和糖尿。e)腎腫大，質(zhì)軟如泥，觸壓即朽爛，故俗稱“軟腎病”,為羊腸毒血癥的特征性病理變化。膀胱f)肺充血、氣腫，表面散在出血斑，氣管和支氣管內(nèi)有許多白色泡沫；4g)心臟擴張，有時含有氣泡，左心室內(nèi)外膜有出血點，心耳部脂肪黃染，房室瓣膜水腫，有膠凍樣滲出物；h)胸腺出血。4.3.4實驗室診斷涂片鏡檢用病死羊小腸內(nèi)容物、腎、淋巴結(jié)和肝涂片和觸片，染色鏡檢，可見有單在或成雙排列、兩端稍方、革蘭氏陽性的短粗大桿菌，菌體周圍見有折光性較強的肥厚莢膜；小腸內(nèi)容物涂片除了見革蘭氏陽性大桿菌外，還可見到一些位于菌體中央或偏近端、卵圓形、直徑大于菌體的芽孢。細菌分離及生化反應(yīng)試驗羊腸毒血癥病原的細菌分離及生化反應(yīng)使用內(nèi)容見。動物試驗本菌對豚鼠、小鼠、家兔和鴿子均有致病力。動物回歸試驗見。菌型鑒定用標準產(chǎn)氣莢膜梭菌抗毒素與病羊腸內(nèi)容物處理所得上清液做中和試驗，定型為D型產(chǎn)氣莢膜梭菌。操作方法見附錄A。血糖和尿糖檢查檢查病死羊血液和尿液，可發(fā)現(xiàn)血糖明顯升高，尿液葡萄糖強陽性。4.4羊快疫4.4.1流行病學(xué)特點綿羊最易感，山羊和鹿也可感染發(fā)病。發(fā)病羊多在6～18月齡之間，營養(yǎng)狀體較好的綿羊多發(fā)。主要經(jīng)消化道感染。多發(fā)于秋、冬、早春氣候劇變的寒冷霜降時。腐敗梭菌通常以芽孢的形式散布于自然界中，潮濕低洼的環(huán)境以及寒冷、饑餓?？纱偈拱l(fā)病。4.4.2臨床癥狀突然發(fā)病，往往未見癥狀就已死亡。常見病羊放牧?xí)r死在牧場上或清晨發(fā)現(xiàn)死于圈內(nèi)，多是營養(yǎng)狀態(tài)較好的羊只。有的病羊死前可見疝痛、臌氣，眼結(jié)膜發(fā)紅，磨牙呻吟，倒地痙攣抽搐，口內(nèi)流出帶血泡沫，多于數(shù)分鐘至數(shù)小時之內(nèi)死亡。4.4.3病理剖檢病死羊剖檢可見：a)尸體迅速腐敗，腹部膨脹，皮下組織膠凍樣；b)真胃出血壞死性炎癥，黏膜腫脹、充血，黏膜下層水腫，幽門及胃底部粘膜見點、斑狀或彌漫性出血，并可見潰瘍和壞死灶；c)腸道內(nèi)充滿氣體或氣泡，黏膜也見充血、出血；d)腹腔、胸腔、心包腔大量積液，積液接觸空氣易凝固；e)心內(nèi)、外膜可見點狀出血；f)膽囊多腫脹，腸道和肺臟漿膜出血。5組織觸片鏡檢取病死羊心、脾、肝觸片用革蘭氏染色、瑞氏染色或美藍染色，鏡檢可見革蘭氏陽性、兩端鈍圓、還可見無關(guān)節(jié)、長短不等、微彎曲的長絲狀菌。其他臟器涂片有細菌培養(yǎng)平板，37℃厭氧培養(yǎng)24h,形成微微隆起、邊緣厚薄不均的淡灰色菌落，菌落周圍有微弱的溶血區(qū)。氧肝湯中，37℃厭氧培養(yǎng)24h,肝湯均勻混濁，并產(chǎn)生有脂肪腐敗的氣味的氣體。動物接種試驗試驗組每只小鼠(18g～20g)腿部肌內(nèi)注射0.2mL厭氧肝湯18h培養(yǎng)物，對照組每只注射0.2mL有時呈膠凍樣水腫。肝觸片染色鏡檢可發(fā)現(xiàn)腐敗梭菌無關(guān)節(jié)長絲狀的特征菌體。取厭氧肝湯18h培養(yǎng)物3000r/min離心15min,取上清液于耳靜脈接種家兔0.5mL,家兔于1h內(nèi)死亡。由此可確診該病。經(jīng)消化道感染。多發(fā)于春夏季節(jié)肝片吸蟲流行與羊快疫、羊腸毒血癥極相似，病程極短，多數(shù)未見癥狀突然死亡。少數(shù)病程可延長至1d～2d,病羊精神沉郁，食欲廢絕，反芻停止，離群或呆立不動，呼吸急促，體溫可升至41℃~42℃,最后，徑多為2cm～3cm,常被一充血帶所包繞，其中偶見肝片吸蟲的幼蟲，或發(fā)現(xiàn)黃綠色彎曲似e)胸腔、腹腔和心包等漿膜腔積液，色黃，遇空氣易凝固。組織涂片鏡檢彎曲，兩兩相聯(lián)(也有3～4個菌體連成短鏈)或單在的革蘭氏陽性大桿菌。該菌芽孢少見，不形成莢膜。6細菌分離培養(yǎng)本菌嚴格厭氧。動物死亡后應(yīng)及時取樣(肝、脾),接種于葡萄糖鮮血瓊脂平板培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng)24h～48h,可見菌落淺薄透明，形狀不規(guī)則，邊緣呈細線狀散開，蔓延生長。動物接種試驗用研磨的肝病變組織混懸液肌內(nèi)注射接種豚鼠，豚鼠常于1d～3d內(nèi)死亡，剖檢可見注射部位有出血和水腫，皮下廣泛性膠凍樣水腫增厚，肝表面有大面積灰白色壞死灶。肝病料涂片染色鏡檢，可見描述的B型諾維氏菌。5防控要求5.1預(yù)防5.1.1提高羊群整體免疫力注意補充微量元素(如微量元素舔磚)和控制寄生蟲病，尤其是控制肝片吸蟲病。飼料添加劑使用應(yīng)符合NY5032-2016的規(guī)定，獸藥使用應(yīng)符合NY/T5030-2016的規(guī)定。5.1.2消毒與隔離圈舍消毒，按說明使用三氯異氰尿酸、二氯異氰尿酸鈉或復(fù)合酚類等消毒劑，交替使用。及時隔離病羊，妥善處理病死羊的尸體(焚燒或深埋并加墊生石灰)。消毒劑使用及防疫綜合措施的實施應(yīng)符合5.1.3加強飼養(yǎng)管理劃區(qū)輪牧，在溝塘放牧?xí)r避免羊只飲用坑中的不潔積水。在易感季節(jié)，選擇高燥地區(qū)放牧，盡量避免在低洼濕地放牧。農(nóng)、牧區(qū)春夏之際，應(yīng)盡量減少搶青，搶茬，秋季避免過食結(jié)籽飼草和蔬菜等多汁飼料，避免采食過多精料。加強運動，增強抗病力，氣候突變時做好保暖工作。有霜期避免羊只采食霜凍牧草。肉羊飼養(yǎng)管理應(yīng)符合NY/T5151的規(guī)定。5.1.4疫苗免疫在疫區(qū)，春秋兩季定期注射羊黑疫疫苗和羊梭菌三聯(lián)四防蜂膠滅活疫苗、羊梭菌三聯(lián)四防濃縮疫苗 (油乳苗)或“羊快疫、腸毒血癥、猝狙、羔羊痢疾、羊黑疫五聯(lián)疫苗”。為預(yù)防羔羊發(fā)生梭菌病，妊娠母羊應(yīng)在產(chǎn)前45d和30d分別接種1次羊梭菌三聯(lián)四防疫苗。羊免疫應(yīng)符合NY5149的規(guī)定。5.1.5預(yù)防性抗菌給藥發(fā)病時，要及時隔離治療發(fā)病羊，未發(fā)病的羊應(yīng)全群預(yù)防性抗菌給藥，可選用阿莫西林·克拉維酸鉀(劑量以阿莫西林計15mg/kg體重，口服或肌內(nèi)注射，2次/d,連用2d～3d)、多西環(huán)素(3mg/kg~5mg/kg體重，口服，1次/d,連用2d～3d;或2mg/kg體重，肌內(nèi)注射或靜脈注射，1次/d,連用2d~3d)、長效土霉素(15mg/kg體重，肌內(nèi)注射，1次/d,連用2d～3d)等抗生素之一。羔羊痢疾發(fā)病羊場，可在羔羊出生12h內(nèi)開始灌服上述藥物之一，用法同前?？咕幬锏氖褂脩?yīng)符合NY/T5030-2016發(fā)病時可及時轉(zhuǎn)圈，放牧羊群可轉(zhuǎn)移到高燥牧場。5.1.7使用生物制劑7越早治療效果越好。a)青霉素類可選用青霉素(2萬U/kg～3萬U/kg體重，肌內(nèi)注射，2次/d～3次/d,連用2d~3d)、阿莫西林(15mg/kg體重，肌內(nèi)注射，2次/d～3次/d,連用2d～3d)、氨芐西林(用法同阿莫西林)或阿莫西林·克拉維酸鉀(見5.1.5);b)四環(huán)素類可選用土霉素(10mg/kg～20mg/kg體重，口服或肌內(nèi)注射，2次/d,連用3d~5d)、四環(huán)素(10mg/kg～20mg/kg體重，口服，2次/d,連用2d～3d)或多西環(huán)素(見c)磺胺類可選用磺胺六甲氧嘧啶(25mg/kg～50mg/kg體重，首次加倍，口服、肌內(nèi)注射或靜脈注射，1次/d～2次/d,連用3d～5d)、復(fù)方磺胺嘧啶鈉(以SD計20mg/kg~30mg/kg體重，口服，2次/d,連用3d~5d)、磺胺脒(0.1g/kg～0.2g/kg體重，口服，2次/d,連用3d～5d)。a)輕瀉排毒硫酸鎂(成年羊每只30g/次～100g/次，加水500mL～1500mL溶解后灌服);b)止血維生素K(成年羊每只5mg/次～10mg/次，肌內(nèi)注射，1次/d,連用2d～3d)、酚磺乙胺(成年羊每只0.25g/次，肌內(nèi)注射，1次/d,連用2d～3d);c)輸液5%葡萄糖、0.9%氯化鈉或復(fù)方鹽水，根據(jù)病羊脫水程度決定總輸液量，一般為10mL/kg~d)調(diào)整酸堿平衡5%碳酸氫鈉(0.5mL/kg~1mL/kg體重，靜脈注射，1次/d,連用2d～3d);1)羔羊痢疾病羔：土霉素10g,胃蛋白酶10g,次硝酸鉍8g,鞣酸蛋白8g,涼開水250mL;或磺胺脒15g,乳酸鈣15g,次硝酸鉍15g,鞣酸蛋白15g,涼開水250mL?；鞈揖鶆?，灌服，每只羊羔每次10mL,2次/d,連用2d～3d;2)羊快疫病羊：磺胺脒8g(或磺胺嘧啶2.5g),次硝酸鉍10g,鞣酸蛋白5g,涼開水100mL,混勻一次灌服，1次/d,連用2d～3d。a)羊快疫治療的早期每只羊可灌服10%石灰乳50mL/次～100mL/次，間隔12h,連用2次；b)發(fā)生羊黑疫時每只羊可肌內(nèi)注射抗諾維氏梭菌血清508c)對脫水嚴重的病羊可自由飲用口服補液鹽溶液(配方：氯化鈉3.5g,氯化鉀1.5g,碳酸氫鈉2.5g,葡萄糖20g,純凈水或涼開水1000mL)。對不主動飲水的病羊可灌服口服補液鹽d)治療羊黑疫是要考慮全群驅(qū)蟲，可選用：蛭得凈(溴酚磷)16mg/kg體重、三氯苯唑8mg/kg~12mg/kg體重、丙硫咪唑10mg/kg體重、硫雙二氯酚(別丁)80mg/kg體重或硝氯酚(拜耳e)羔羊痢疾病羔可選用：36%甲醛11mL,硫酸鎂60g,水1kg,溶解均勻后每只羔羊灌服30mL~60mL;6h～8h后再灌服0.1%高錳酸鉀溶液30mL～60mL。2次/d。9DB65/T3969—2016(規(guī)范性附錄)產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒素的分離和鑒定方法A.1毒素檢查羊只死亡后，盡快取小腸內(nèi)容物(最好是回腸內(nèi)容物),加1%的氯仿防腐，在冷藏條件下送檢。實驗室在收到送檢材料后，用生理鹽水稀釋2～4倍(若內(nèi)容物稀薄，不必稀釋),充分混合后經(jīng)離心沉淀 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