2025年大學大二（分子生物學）PCR擴增技術(shù)操作綜合測試題及答案

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______第I卷（選擇題，共40分）每題給出的四個選項中，只有一個選項符合題目要求。(總共20題，每題2分，在每題給出的四個選項中，選出最符合題目要求的一項)1.PCR擴增技術(shù)中，引物的作用是A.提供模板B.催化合成DNAC.打開DNA雙鏈D.引導DNA合成的起始位置2.以下關(guān)于PCR反應(yīng)體系的說法，錯誤的是A.需要DNA模板B.不需要dNTPC.需耐高溫的DNA聚合酶D.含有引物3.PCR反應(yīng)的變性溫度一般為A.55℃左右B.65℃左右C.72℃左右D.95℃左右4.PCR反應(yīng)中延伸溫度通常是A.55℃B.65℃C.72℃D.95℃5.一個典型的PCR反應(yīng)需要經(jīng)歷的循環(huán)次數(shù)通常是A.5-10次B.10-20次C.20-30次D.30-40次6.在PCR擴增過程中，DNA聚合酶延伸的方向是A.3'→5'B.5'→3'C.雙向延伸D.隨機延伸7.下列哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)所必需的A.Mg2?B.緩沖液C.限制性內(nèi)切酶D.TaqDNA聚合酶8.PCR技術(shù)可用于A.基因克隆B.蛋白質(zhì)合成C.細胞培養(yǎng)D.組織切片9.關(guān)于PCR引物設(shè)計，下列說法正確的是A.引物長度越長越好B.引物GC含量無要求C.引物自身不能形成互補配對D.引物之間可以互補配對10.PCR反應(yīng)中退火的目的是A.使DNA雙鏈解開B.使引物與模板結(jié)合C.使DNA聚合酶發(fā)揮作用D.合成新的DNA鏈11.以下哪種情況可能導致PCR擴增失敗A.引物濃度過高B.dNTP濃度過低C.模板DNA量過少D.以上都有可能12.PCR技術(shù)中，模板DNA的純度要求是A.越高越好B.只要有就行C.有一定雜質(zhì)也可D.無所謂13.用于PCR反應(yīng)的DNA聚合酶通常具有A.5'→3'外切酶活性B.3'→5'外切酶活性C.5'→3'聚合酶活性D.以上都是14.PCR反應(yīng)體系中，緩沖液的作用不包括A.維持pH穩(wěn)定B.提供反應(yīng)所需離子C.激活DNA聚合酶D.促進引物與模板結(jié)合15.在PCR擴增特定基因時，引物的特異性取決于A.引物長度B.引物與模板結(jié)合的互補程度C.引物的濃度D.反應(yīng)溫度16.PCR技術(shù)的發(fā)明者是A.MullisB.WatsonC.CrickD.Franklin17.PCR擴增后的產(chǎn)物一般通過什么方法進行檢測A.電泳B.質(zhì)譜C.色譜D.比色法18.以下哪種不是常見的PCR反應(yīng)類型A.普通PCRB.巢式PCRC.反轉(zhuǎn)錄PCRD.蛋白質(zhì)PCR19.PCR反應(yīng)中，dNTP的作用是A.提供能量B.作為合成DNA的原料C.穩(wěn)定反應(yīng)體系D.激活引物20.進行PCR反應(yīng)時，一般使用的儀器是A.離心機B.培養(yǎng)箱C.PCR儀D.顯微鏡第II卷（非選擇題，共60分）簡答題（共20分）(總共4題，每題5分，簡要回答問題)1.簡述PCR擴增技術(shù)的基本原理。2.請說明PCR反應(yīng)體系中各成分的作用。3.影響PCR擴增效果的因素有哪些？4.PCR技術(shù)在分子生物學研究中有哪些應(yīng)用？分析題（共15分）(總共3題，每題5分，分析所給材料并回答問題)材料：在進行某基因的PCR擴增實驗時，設(shè)置了三個平行反應(yīng)管，反應(yīng)體系和條件完全相同，但最終擴增結(jié)果卻不同。A管擴增產(chǎn)物條帶清晰且亮度適中；B管擴增產(chǎn)物條帶模糊，亮度較弱；C管幾乎沒有擴增產(chǎn)物。1.請分析B管擴增產(chǎn)物條帶模糊、亮度較弱的可能原因。2.推測C管幾乎沒有擴增產(chǎn)物的原因。3.如何改進實驗以提高PCR擴增的成功率和效果一致性？實驗設(shè)計題（共15分）(總共1題，15分，根據(jù)要求設(shè)計實驗)請設(shè)計一個利用PCR技術(shù)擴增某特定基因的實驗方案，包括實驗材料、反應(yīng)體系的組成、反應(yīng)條件以及結(jié)果檢測方法。論述題（共10分）(總共1題，10分，結(jié)合所學知識進行論述)論述PCR技術(shù)的發(fā)展歷程及其對分子生物學研究的重要意義。答案：第I卷選擇題答案：1.D2.B3.D4.C5.C6.B7.C8.A9.C10.B11.D12.A13.C14.D15.B16.A17.A18.D19.B20.C第II卷簡答題答案：1.PCR擴增技術(shù)基本原理：以擬擴增的DNA分子為模板，以一對分別與模板5'末端和3'末端相互補的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復制的機制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成，重復這一過程，即可使目的DNA片段得到擴增。2.DNA模板：提供擴增的原始模板。引物：引導DNA合成起始位置。dNTP：作為合成DNA的原料。DNA聚合酶：催化DNA合成。緩沖液：維持pH穩(wěn)定，提供反應(yīng)所需離子。Mg2?：激活DNA聚合酶。3.引物設(shè)計、模板質(zhì)量與濃度、dNTP濃度、DNA聚合酶活性、反應(yīng)溫度與循環(huán)次數(shù)、緩沖液成分、Mg2?濃度等。4.基因克隆、基因表達分析、基因突變檢測、遺傳疾病診斷、病原體檢測、法醫(yī)鑒定等。分析題答案：1.B管可能原因：引物濃度不合適、模板DNA量不足、dNTP濃度不足、DNA聚合酶活性降低等。2.C管可能原因：引物設(shè)計不合理，與模板不匹配；模板DNA降解嚴重；反應(yīng)體系中存在抑制物；PCR儀溫度控制不準確等。3.改進方法：優(yōu)化引物設(shè)計；確保模板DNA質(zhì)量和濃度合適；檢查dNTP和DNA聚合酶質(zhì)量；校準PCR儀溫度；設(shè)置陽性對照和陰性對照。實驗設(shè)計題答案：實驗材料：模板DNA、引物、dNTP、TaqDNA聚合酶、緩沖液、Mg2?、PCR儀。反應(yīng)體系組成：適量模板DNA、合適濃度引物、適量dNTP、適量TaqDNA聚合酶、緩沖液、適量Mg2?，加水至合適體積。反應(yīng)條件：95℃變性若干時間，55℃左右退火若干時間，72℃延伸若干時間，進行20-30個循環(huán)。結(jié)果檢測方法：通過瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物。論述題答案：PCR技術(shù)發(fā)展歷程：由Mullis發(fā)明，最初技術(shù)條件有限，經(jīng)過不斷改進，如優(yōu)