ICS67.080.20CCSB31辣椒遠(yuǎn)緣雜交胚拯救技術(shù)操作規(guī)程TechnicalRegulationforembryorescueofDistantHybridinPepperIDB43/T2175—2021前言 Ⅲ 2術(shù)語(yǔ)和定義 3試劑和設(shè)備 4胚拯救培養(yǎng)基制備 25胚拯救技術(shù)流程 2附錄A（資料性）辣椒胚拯救培養(yǎng)基配方 3DB43/T2175—2021本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由湖南農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件主要起草單位：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)、湖南省蔬菜研究所。本文件主要起草人：楊博智、周書(shū)棟、鄭井元、馬艷青、戴雄澤、李雪峰、張竹青、陳文超、楊莎、梁成亮、李鑫、鄒學(xué)校。DB43/T2175—20211辣椒遠(yuǎn)緣雜交胚拯救技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了辣椒遠(yuǎn)緣雜交胚拯救的術(shù)語(yǔ)和定義、試劑和設(shè)備、培養(yǎng)基制備、胚拯救技術(shù)流程等操作規(guī)程。本文件適用于辣椒遠(yuǎn)緣雜交胚拯救。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2.1遠(yuǎn)緣雜交指不同種、屬或親緣關(guān)系更遠(yuǎn)的植物類(lèi)型間進(jìn)行的雜交。2.2胚拯救植物遠(yuǎn)緣雜交獲得的合子胚常在發(fā)育早起階段就敗育或退化，無(wú)法收獲雜交種子。胚拯救指采用組織培養(yǎng)技術(shù)，將合子胚轉(zhuǎn)至適合的培養(yǎng)基中離體培養(yǎng)，使其能正常發(fā)育成完整植株的方式。3試劑和設(shè)備3.1試劑所有試劑等級(jí)均為分析純，見(jiàn)表1。表1辣椒遠(yuǎn)緣雜交胚拯救技術(shù)所需試劑3.2儀器設(shè)備500mL）、移液槍?zhuān)砍谭謩e為100μL、1mL、10mL）、低溫冷藏冰箱（溫度范圍：0～10℃)、高壓蒸汽滅菌鍋2DB43/T2175—20214胚拯救培養(yǎng)基制備4.1培養(yǎng)基類(lèi)型培養(yǎng)基包括胚拯救培養(yǎng)基和幼胚分化成苗培養(yǎng)基，其配方見(jiàn)附錄A。4.2消毒和滅菌培養(yǎng)基配制好后，調(diào)pH值為5.8，置于高壓蒸汽滅菌鍋中121℃,1.05kg/cm2條件下滅菌15min。5胚拯救技術(shù)流程5.1授粉收集父本花粉，選取母本植株上將開(kāi)未開(kāi)的花苞，去除雄蕊，對(duì)其進(jìn)行人工授粉，授粉24h后用75mg/L的2,4-D溶液涂抹母本植株上授粉花苞的花梗。5.2幼胚培養(yǎng)選用辣椒為授粉后18d獲得的青果，流水下沖洗果實(shí)表面30s，在超凈工作臺(tái)中，用75％酒精棉球擦拭果實(shí)表面，用消毒后的解剖刀將果實(shí)豎切成兩半，再用無(wú)菌鑷子取出果實(shí)內(nèi)未成熟種胚，接種至胚拯救培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)至胚根產(chǎn)生。培養(yǎng)溫度為（28±1）℃。5.3幼胚分化成苗在超凈工作臺(tái)中，取出帶胚根的辣椒胚，剝離種皮，接種于幼胚分化成苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)至成苗。培養(yǎng)條件為光照階段（28±1）℃,黑暗階段（20±1）℃,光照時(shí)間16h/d，光照強(qiáng)度2000lx。5.4煉苗與移栽待再生苗長(zhǎng)至（4～7）片真葉時(shí)，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶蓋，置光照培養(yǎng)室中適應(yīng)外界環(huán)境2d～3d后。將組培苗取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移栽至基質(zhì)中黑暗條件下煉苗，溫度為（28±1）℃,濕度90％。煉苗5d后，將室內(nèi)環(huán)境逐步調(diào)整到與辣椒苗在外界生長(zhǎng)的環(huán)境相近，繼續(xù)培養(yǎng)15d，移栽幼苗至室外。 DB43/T2175—20213辣椒胚拯救培養(yǎng)基配方1650mg/L硝酸銨、1900mg/L硝酸鉀、磷酸二氫鉀、0.83m/Lg碘化鉀、6.2mg/L硼酸、22.3mg/L四水硫酸錳、8.6mg/L七水硫酸鋅、0.25m/Lg鉬酸鈉、0.025mg/L硫酸銅