ICS65.020.30DB43DB43/T895—2014鮰類腸敗血癥檢疫技術(shù)規(guī)程2014-06-10發(fā)布2014-08-10實(shí)施湖南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB43/T895—2014前言 Ⅱ 2規(guī)范性引用文件 3試劑和培養(yǎng)基 4設(shè)備和器械 5檢疫方法 6無害化處理 附錄A（資料性附錄）鮰愛德華氏菌生化特性檢測 DB43/T895—2014本標(biāo)準(zhǔn)由湖南省畜牧水產(chǎn)局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：肖克宇、鐘蕾、戴振炎、江輝、何艷林、文祝友、譚情。DB43/T895—2014鮰類腸敗血癥檢疫技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了鮰類腸敗血癥(EntericSepticaemiaofCatfish，ESC)檢疫的試劑和培養(yǎng)基、設(shè)備和器械、檢疫方法和無害化處理。本標(biāo)準(zhǔn)適用于我省鮰類腸敗血癥的檢疫。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T4789.28食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)染色法、培養(yǎng)基和試劑SC/T7014水生動(dòng)物檢疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)規(guī)范SC/T7103水生動(dòng)物產(chǎn)地檢疫采樣技術(shù)規(guī)范SC/T7105染疫水生動(dòng)物無害化處理規(guī)程SC/T7214魚類愛德華氏菌檢測方法3試劑和培養(yǎng)基檢驗(yàn)所需試劑、培養(yǎng)基的配制按GB/T4789.28、SC/T7014和SC/T7214的規(guī)定執(zhí)行。4設(shè)備和器械檢驗(yàn)所需設(shè)備和器械等按SC/T7214的規(guī)定執(zhí)行。5檢疫方法5.1流行病學(xué)調(diào)查鮰類腸敗血癥主要危害斑點(diǎn)叉尾鮰，黑鱸、鰻鱺、鮭鱒魚等也可感染發(fā)病。鮰從魚苗到成魚均可發(fā)病，春、秋季水溫（l8～28）℃為發(fā)病高峰期。飼養(yǎng)密度和環(huán)境脅迫等因素都會(huì)影響病原菌的致病性。鮰類腸敗血癥康復(fù)魚體可檢測到血清抗體。菌體可在魚體內(nèi)存活4個(gè)月以上，呈無癥狀帶菌狀態(tài)，并可通過糞便釋放到水體，在水體沉積物中可存活很長時(shí)間，引起同群易感魚發(fā)病。5.2臨床檢查5.2.1群體檢查可見發(fā)病魚池水質(zhì)差，病魚沿池邊離群獨(dú)游，反應(yīng)遲鈍，攝食量下降或不攝食，有的病魚頭朝上、尾向下呈垂直狀游動(dòng)，部分病魚有時(shí)呈痙攣式的螺旋狀游動(dòng)。 DB43/T895—20145.2.2個(gè)體檢查本病分“腸道敗血型”和“頭蓋穿孔型”兩種類型，以前者多見。5.2.2.1腸道敗血型：病魚鰓絲蒼白而有出血點(diǎn)，頜部、鰓蓋和鰭基部皮膚出現(xiàn)淤斑和出血，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)彌漫出血點(diǎn)或出血斑，有時(shí)則出現(xiàn)白色斑點(diǎn)；后期病魚全身性水腫，腹部膨大，有的頭部和軀體皮膚潰瘍，一側(cè)或兩側(cè)眼球突出，肌肉有點(diǎn)狀出血或出血斑。5.2.2.2頭蓋穿孔型：病魚出現(xiàn)不規(guī)則游動(dòng)或呆滯；后期頭背顱側(cè)部潰爛成深孔，腦組織裸露。5.2.2.3解剖檢查病魚體表出現(xiàn)潰瘍，頭蓋穿孔。剖開腹腔，內(nèi)有多量含血的或清亮的液體，不易凝固，肝水腫，質(zhì)脆，有出血點(diǎn)和灰白色的壞死灶，脾、腎腫大和出血，胃膨大，腸道擴(kuò)張、腸粘膜水腫、充血、發(fā)炎，腸腔內(nèi)充滿氣體和淡黃色的水樣液體。腦組織形成肉芽腫，肌肉具彌散性肉芽腫性炎癥。5.2.3臨床檢查判定在流行病學(xué)調(diào)查、群體、個(gè)體檢查中發(fā)現(xiàn)上述病癥，可判定為疑似鮰類腸敗血癥。5.3病原菌的分離與鑒定鮰類腸敗血癥的病原體為腸桿菌科愛德華氏菌屬的鮰愛德華氏菌(Edwardsiellaictalu)。5.3.1采樣與樣品處理采樣按SC/T7103的規(guī)定執(zhí)行，樣品處理按SC/T7214的規(guī)定執(zhí)行。5.3.2細(xì)菌的分離純化取病魚的肝、腎、腦組織按常規(guī)法劃線接種血液瓊脂平板，28℃培養(yǎng)48h。從中挑取灰白色、圓形、濕潤、呈半透明狀的單個(gè)優(yōu)勢菌落在普通營養(yǎng)瓊脂平板上再次劃線分離純化。5.3.3分離菌的腸桿菌科特性檢測5.3.3.1形態(tài)觀察及染色病料涂片美蘭染色：取病魚的肝、腎組織進(jìn)行常規(guī)法涂片，按SC/T7014和SC/T7214的規(guī)定美蘭染色。用光鏡觀察有否細(xì)菌及其形態(tài)特征。培養(yǎng)物涂片革蘭染色：從純化的分離菌培養(yǎng)物上挑取少許單菌落涂片，按SC/T7014和SC/T7214的規(guī)定革蘭染色，用光鏡觀察細(xì)菌的染色性和形態(tài)特征。5.3.3.2運(yùn)動(dòng)性試驗(yàn)按GB／T4789.28、SC／T7214的規(guī)定將分離菌穿刺接種于半固體瓊脂兩管，分別置28℃、37℃下培養(yǎng)24h。如分離菌由穿刺線向四周擴(kuò)散，其邊緣呈云霧狀，為運(yùn)動(dòng)性陽性；如分離菌只生長在穿刺線上，邊緣十分清晰，為運(yùn)動(dòng)性陰性。5.3.3.3氧化酶試驗(yàn)按SC／T7014和SC／T7214的規(guī)定，用毛細(xì)管吸取四甲基對(duì)苯二胺的1%水溶液滴在細(xì)菌的菌落上。菌落呈玫瑰紅色、深紫色為陽性，不變色為陰性。5.3.3.4葡萄糖氧化與發(fā)酵（O/F）試驗(yàn)DB43/T895—2014用接種針挑取分離菌菌落，穿刺并劃線于Hugh-Leifson培養(yǎng)基上，于28℃培養(yǎng)（18～24）h，如開口管和封口管內(nèi)的培養(yǎng)基都產(chǎn)酸（變黃）則分離菌為發(fā)酵型（F）、如開口管變黃色和封口管不變色則5.3.4分離菌的其它生化特性檢測鮰愛德華氏菌生化特性檢測見附錄A，相關(guān)檢測方法按GB／T4789.28、SC／T7014和SC／T7214的規(guī)定進(jìn)行。5.3.5分離菌檢測結(jié)果判定腸桿菌科特性判定：病魚肝、腎、腦組織接種的血液瓊脂培養(yǎng)基上有細(xì)菌生長，且菌落形態(tài)特征符合本標(biāo)準(zhǔn)5.3.3的要求；美藍(lán)染色的病料涂片中有藍(lán)色無莢膜、無芽胞的小桿菌；革蘭染色的純培養(yǎng)菌為陰性桿菌；運(yùn)動(dòng)性檢查，28℃下為陽性、37℃下為陰性；氧化酶試驗(yàn)為陰性；O/F試驗(yàn)為發(fā)酵型。分離菌即可歸屬于為腸桿菌科。其它生化特性結(jié)果判定：鮰愛德華氏菌的生化特性檢測參見附錄A。分離菌既符合腸桿菌科特性，又符合附錄A結(jié)果，則分離菌鑒定為鮰愛德華氏菌。5.4檢疫結(jié)果綜合判定流行病學(xué)調(diào)查符合本標(biāo)準(zhǔn)5.1的規(guī)定，臨床檢查符合本標(biāo)準(zhǔn)5.2的規(guī)定，病原菌的分離與鑒定符合本標(biāo)準(zhǔn)5.3.5的規(guī)定，可確診為鮰類腸敗血癥。6無害化處理診斷為鮰類腸敗血癥的病、死魚及其接觸的養(yǎng)殖水體、漁具等應(yīng)按SC/T7105的規(guī)定進(jìn)行處理。 DB43/T895—2014