2026年生物技術(shù)認證考試題庫：生物實驗與數(shù)據(jù)分析一、選擇題（每題2分，共20題）說明：請選擇最符合題意的選項。1.在進行基因克隆實驗時，以下哪種質(zhì)粒載體最適合用于表達分泌型蛋白？A.pET-28aB.pGEX-4T-1C.pYES2D.pCI-neo2.RNA測序（RNA-Seq）技術(shù)中，哪個步驟是去除RNA樣本中的rRNA？A.文庫構(gòu)建B.反轉(zhuǎn)錄C.適配子連接D.ribodepletion3.在微生物培養(yǎng)實驗中，若要檢測菌株對某種抗生素的敏感性，常用的稀釋法是？A.系列梯度稀釋法B.連續(xù)傳代法C.平板劃線法D.顯微鏡計數(shù)法4.蛋白質(zhì)印跡（WesternBlot）實驗中，一級抗體和二級抗體的主要作用是什么？A.封閉非特異性位點B.檢測目標蛋白C.增強信號強度D.固定目標蛋白5.在高通量測序數(shù)據(jù)分析中，SAMtools主要用于？A.質(zhì)量控制B.序列比對C.變異檢測D.基因注釋6.基因編輯技術(shù)CRISPR-Cas9中，gRNA的作用是？A.切割DNA雙鏈B.識別靶向位點C.修復(fù)斷裂的DNAD.擴增目標基因7.細胞培養(yǎng)過程中，若培養(yǎng)基pH值過低，可能導(dǎo)致？A.細胞增殖加快B.細胞代謝減緩C.酶活性降低D.培養(yǎng)基渾濁8.在酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）中，辣根過氧化物酶（HRP）主要用于？A.信號放大B.封閉抗體結(jié)合位點C.固定抗原D.淬滅背景熒光9.流式細胞術(shù)（FlowCytometry）中，常用的熒光染料是？A.蘇木精B.伊紅C.異硫氰酸熒光素（FITC）D.結(jié)晶紫10.在微生物基因組測序中，Illumina測序技術(shù)的優(yōu)勢是？A.長讀長B.高通量C.低錯誤率D.快速測序二、填空題（每空1分，共10空）說明：請根據(jù)題意填寫正確答案。1.在PCR實驗中，引物退火溫度通常根據(jù)______和______的Tm值來設(shè)定。2.細胞計數(shù)常用的方法是______和______。3.生物信息學(xué)中，k-mer是指______。4.WesternBlot實驗中，封閉劑的常用成分是______和______。5.CRISPR-Cas9系統(tǒng)中，Cas蛋白負責(zé)______。6.RNA-Seq數(shù)據(jù)分析的第一步是______。7.培養(yǎng)基中添加______可以抑制細菌污染。8.流式細胞術(shù)通過______和______對細胞進行單細胞分析。9.基因芯片技術(shù)主要用于______和______。10.基因敲除常用的方法是______和______。三、簡答題（每題5分，共4題）說明：請簡要回答下列問題。1.簡述逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）的原理及其應(yīng)用場景。2.解釋什么是生物信息學(xué)中的“序列比對”，并列舉兩種常用的比對算法。3.在細胞培養(yǎng)實驗中，如何避免培養(yǎng)基污染？請列舉三種方法。4.RNA-Seq數(shù)據(jù)分析中，差異表達基因的篩選標準是什么？四、實驗設(shè)計題（每題10分，共2題）說明：請根據(jù)題意設(shè)計實驗方案。1.某研究團隊需要檢測某藥物對腫瘤細胞凋亡的影響，請設(shè)計一個基于流式細胞術(shù)的實驗方案，并說明關(guān)鍵步驟。2.假設(shè)你需要通過基因編輯技術(shù)敲除某種細菌的毒力基因，請設(shè)計實驗步驟，并說明如何驗證基因敲除成功。五、數(shù)據(jù)分析題（每題15分，共2題）說明：請根據(jù)題意分析數(shù)據(jù)并回答問題。1.某RNA-Seq實驗獲得了以下基因表達量數(shù)據(jù)（部分）：|基因ID|對照組表達量|處理組表達量||--|--|--||Gene1|10.2|25.6||Gene2|8.5|12.3||Gene3|15.7|20.1||Gene4|5.3|5.2|請計算每個基因的倍數(shù)變化（FoldChange），并判斷哪些基因可能受到顯著調(diào)控（設(shè)FoldChange>2為顯著）。2.某基因測序?qū)嶒灚@得了以下序列比對結(jié)果（部分）：|序列ID|靶向序列匹配度(%)||--|-||S1|95||S2|88||S3|72||S4|60|請解釋這些數(shù)據(jù)可能意味著什么，并說明如何進一步驗證實驗結(jié)果。答案與解析一、選擇題答案1.B（pGEX-4T-1是常用的分泌型蛋白表達載體）2.D（ribodepletion用于去除rRNA）3.A（系列梯度稀釋法用于檢測抗生素敏感性）4.B（一級抗體檢測目標蛋白，二級抗體放大信號）5.B（SAMtools用于序列比對）6.B（gRNA識別靶向位點）7.C（pH過低會導(dǎo)致酶活性降低）8.A（HRP用于信號放大）9.C（FITC是常用熒光染料）10.B（Illumina測序技術(shù)高通量）二、填空題答案1.引物，退火溫度2.血細胞計數(shù)板，血球計數(shù)儀3.序列中的連續(xù)k個核苷酸4.牛血清白蛋白（BSA），脫脂奶粉5.切割DNA雙鏈6.質(zhì)量控制7.酚紅8.激光散射，熒光檢測9.基因表達分析，疾病診斷10.CRISPR-Cas9，TALEN三、簡答題答案1.RT-PCR原理：通過逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA，再利用PCR技術(shù)擴增目標片段。應(yīng)用場景包括檢測病毒RNA、研究基因表達調(diào)控等。2.序列比對：將兩個或多個序列進行對齊，以發(fā)現(xiàn)保守區(qū)域和功能位點。常用算法：Smith-Waterman（局部比對），Needleman-Wunsch（全局比對）。3.避免污染方法：-使用無菌操作臺和一次性吸頭；-定期更換培養(yǎng)基；-使用抗生素（如青霉素）防腐。4.差異表達基因篩選標準：FoldChange>2且p值<0.05。四、實驗設(shè)計題答案1.流式細胞術(shù)實驗方案：-細胞培養(yǎng)：分為對照組和處理組，藥物處理一定時間；-染色：使用AnnexinV-FITC/PI染色檢測凋亡細胞；-流式檢測：設(shè)門區(qū)區(qū)分凋亡細胞、壞死細胞和正常細胞，計算凋亡率。2.基因編輯實驗方案：-設(shè)計gRNA靶向毒力基因；-轉(zhuǎn)染Cas9/gRNA復(fù)合物；-驗證：PCR檢測基因敲除（如出現(xiàn)嵌合體），測序確認突變位點。五、數(shù)據(jù)分析題答案1.FoldChange計算：-Gene1:25.6/10.2≈2.51（顯著）-Gene2:12.3/8.5≈1.45（不顯著）-Gene3:20.1/15.7≈1.28（不顯著