標(biāo)本采集及處理流程制度第一章總則1.1目的為統(tǒng)一公司臨床與科研樣本采集、運(yùn)輸、前處理、儲存、銷毀全流程操作標(biāo)準(zhǔn)，確保樣本質(zhì)量、人員安全、數(shù)據(jù)完整與法規(guī)合規(guī)，特制定本制度。1.2適用范圍適用于××生物醫(yī)藥有限公司研發(fā)部、醫(yī)學(xué)事務(wù)部、質(zhì)量部、物流部、EHS部及所有外派采樣點（醫(yī)院、CRO、體檢中心）。1.3法規(guī)依據(jù)《人類遺傳資源管理條例》《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》《GB/T378722019臨床實驗室樣本采集與處理通用要求》《ISO20387:2018生物樣本庫通用要求》《危險化學(xué)品安全管理條例》《職業(yè)病防治法》《個人信息保護(hù)法》。1.4術(shù)語a)原始樣本：從受試者或供體直接獲得的血液、組織、唾液、尿液、糞便、腦脊液、拭子等。b)分裝樣本：經(jīng)前處理（離心、分裝、添加保護(hù)劑）后的次級樣本。c)關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）：樣本溫度、體積、溶血率、細(xì)胞活性、核酸完整性、蛋白濃度、微生物污染等級。d)冷鏈：2–8℃可控溫度區(qū)間；干冰：?78.5℃；液氮：≤?150℃。e)雙盲編碼：臨床信息與樣本編號通過兩層哈希加密，解碼權(quán)限僅數(shù)據(jù)管理員持有。第二章組織與職責(zé)2.1樣本管理委員會主任（研發(fā)VP兼任）a)審批年度采樣計劃、預(yù)算、偏差調(diào)查報告。b)對重大樣本事故（≥50例或涉及遺傳資源出境）24h內(nèi)向省級科技行政部門報告。2.2樣本管理員（SampleManager，SM）a)維護(hù)LIMS（LaboratoryInformationManagementSystem）主數(shù)據(jù)。b)每月第3個工作日出具樣本庫存質(zhì)量報告（溫度圖、異常率、銷毀預(yù)警）。2.3采樣護(hù)士/采血員a)持有效《護(hù)士執(zhí)業(yè)證》或《臨床醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)資格證》。b)年度再培訓(xùn)≥4h，考核通過率≥90%。2.4運(yùn)輸司機(jī)a)持《道路危險貨物運(yùn)輸從業(yè)資格證》，3年內(nèi)無重大交通事故記錄。b)接受冷鏈應(yīng)急演練≥2次/年。2.5質(zhì)量部QAa)每季度現(xiàn)場飛行檢查≥4次，出具CAPA（糾正預(yù)防措施）單。b)對采樣點進(jìn)行分級：A級（95–100分）、B級（85–94分）、C級（＜85分）。C級暫停委托直至整改完成。第三章采樣前準(zhǔn)備3.1受試者篩選與知情同意a)采用公司模板《知情同意書》V5.3，含樣本保存年限、未來研究范圍、遺傳資源出境可能性、受試者撤回權(quán)。b)電子簽署：使用“上上簽”平臺，PDF加密哈希值寫入?yún)^(qū)塊鏈存證。c)特殊人群（孕婦、未成年人、精神障礙）需額外監(jiān)護(hù)人簽字并公證。3.2采樣耗材采購與驗收a)采血管：BD367955（8mLEDTA）、367960（8mLSSTⅡ）；驗收抽檢1%做真空度、添加劑體積、無菌測試。b)糞便采集盒：含DNA保存液（TrisEDTA+0.05%NaN3），pH8.0±0.2，每批次做抑菌圈試驗。c)驗收不合格→紅色“REJECT”標(biāo)簽，3個工作日內(nèi)退貨并記錄于《耗材不合格臺賬》。3.3采樣環(huán)境要求a)醫(yī)院采樣點：獨(dú)立采血室，紫外線消毒30min，照度≥300lx，噪聲≤55dB。b)野外采樣：搭建臨時帳篷，地面鋪醫(yī)用藍(lán)色吸水墊，配置生物安全運(yùn)輸箱（UN2814）。3.4采樣前信息系統(tǒng)錄入a)登錄LIMS→項目編號→受試者隨機(jī)號→打印三聯(lián)條碼（Code128C，含校驗位）。b)條碼粘貼位置：采血管標(biāo)簽區(qū)正中，不可覆蓋刻度；糞便管貼在管身1/2處，避免冷凍后脫落。第四章采集標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOPBIO0104）4.1靜脈血采集a)受試者靜坐5min，選擇肘正中靜脈，止血帶綁扎≤1min。b)皮膚消毒：70%異丙醇+2%氯己定，螺旋消毒，直徑≥5cm，自然干燥30s。c)采血順序：血培養(yǎng)→EDTA→SST→肝素→氟化鈉，防止交叉污染。d)采集量：成人EDTA4mL、SST4mL；兒童≤1mL/kg。e)立即輕顛倒180°×8次，避免溶血；30min內(nèi)放入2–8℃便攜冷藏盒。4.2糞便采集a)受試者晨起排便，使用一次性無菌勺，取中段內(nèi)部樣本≥2g。b)放入含保存液糞便管，液面沒過樣本，旋緊后上下?lián)u勻20次。c)室溫運(yùn)輸≤48h；若＞48h，需?20℃冷凍，避免反復(fù)凍融。4.3組織活檢a)手術(shù)離體30s內(nèi)放入預(yù)冷生理鹽水沖洗血跡，再置入2mL凍存管（含OCT或RNAlater）。b)液氮預(yù)冷金屬鑷子夾取，避免擠壓；樣本厚度≤0.5cm，確保冷凍均勻。4.4唾液采集a)使用DNAGenotekOGD500，受試者禁食、禁煙、禁嚼口香糖1h。b)采集量≥2mL，目測無食物殘渣；若＜1mL，通知重采。第五章運(yùn)輸與交接5.1包裝分級a)UN3373CategoryB：血清、血漿、唾液、糞便。b)UN2814CategoryA：HIV、HBV、結(jié)核陽性樣本。5.2三層包裝a)主容器：螺口管+O型圈，100%密封測試（水下加壓50kPa30min無氣泡）。b)次級容器：95kPa壓力測試通過樣本袋，內(nèi)置吸水墊≥5g/管。c)外箱：ESP保溫箱+6面2cm厚聚氨酯，配GPS溫度記錄儀（SensirionSHT35，±0.1℃）。5.3運(yùn)輸時限a)同城：2h內(nèi)送達(dá)；冷鏈車設(shè)定4℃，允許偏差±1℃。b)跨?。焊杀\(yùn)輸，每5kg干冰配1kg樣本，72h內(nèi)補(bǔ)充干冰一次。5.4交接清單a)紙質(zhì)《樣本交接單》一式兩份，含項目號、數(shù)量、溫度記錄、異常說明。b)掃碼槍掃描條碼，LIMS自動比對，差異＞1%觸發(fā)二級報警。第六章實驗室前處理6.1離心a)溫度：4℃預(yù)冷；轉(zhuǎn)速：1800g×10min（EDTA血）；3000g×15min（SST）。b)加速/減速檔：9檔中的5檔，避免紅細(xì)胞破裂。6.2分裝a)使用電動移液器（EppendorfXplorer1–10mL），Tips帶濾芯，防止氣溶膠。b)血漿分裝5份：1mL/管，用于NGS、蛋白組、代謝組、備份、外部質(zhì)控。6.3核酸提取a)血液gDNA：QIAampDSPDNABloodMiniKit，200μL起始，洗脫體積100μL，A260/2801.8–2.0。b)糞便微生物DNA：使用QiagenPowerSoilProKit，增加70℃預(yù)熱裂解10min，提高革蘭陽性菌得率。6.4質(zhì)檢a)瓊脂糖凝膠：1%瓊脂糖，120V25min，條帶≥23kb判定完整。b)Qubit4.0定量，CV≤5%；若＜10ng/μL，標(biāo)記“低濃度”并郵件通知項目負(fù)責(zé)人。第七章儲存與銷毀7.1分級儲存a)短期：4℃冰箱（SanyoMPR720），存放≤7天。b)中期：?80℃超低溫冰箱（Thermo907），存放≤5年，雙壓縮機(jī)，配CO2后備制冷。c)長期：液氮?dú)庀啵ā?150℃），存放≥10年，使用CryoTube外旋管，250μL/管，盒裝二維碼掃描入庫。7.2庫存巡檢a)每日06:00–22:00自動記錄溫度，間隔≤5min；斷電短信報警至值班手機(jī)。b)每周一人工巡檢，抽查10盒，核對數(shù)量、位置、結(jié)霜情況。7.3銷毀a)申請：項目結(jié)題或受試者書面撤回后，由PM填寫《樣本銷毀申請表》，經(jīng)樣本管理委員會主任簽字。b)方法：121℃高壓滅菌30min后，貼紅色“BIOHAZARD”標(biāo)簽，交由醫(yī)療廢物公司焚燒，爐溫≥850℃，留存焚燒聯(lián)單5年。第八章數(shù)據(jù)管理與隱私保護(hù)8.1雙盲編碼規(guī)則a)受試者真實姓名→哈希SHA256→取前8位+項目簡稱+4位隨機(jī)字母。b)解碼文件存放于加密硬盤（AES256），僅數(shù)據(jù)管理員與倫理委員會可訪問。8.2備份策略a)LIMS數(shù)據(jù)庫：每日02:00自動全量備份至阿里云OSS，保留30天；每月1日冷備至本地磁帶，保留10年。b)備份恢復(fù)演練：每半年隨機(jī)抽取一次，恢復(fù)時間目標(biāo)RTO≤4h，恢復(fù)點目標(biāo)RPO≤15min。8.3跨境傳輸a)遺傳資源出境：提前6個月向科技部“人類遺傳資源辦公室”申請，提交科學(xué)審查意見、倫理批件、合作協(xié)議。b)數(shù)據(jù)出境：采用國密SM4加密，密鑰長度128bit，通過VPN隧道傳輸，日志留存3年。第九章偏差與事故處理9.1偏差分級a)輕微：溫度偏離2–8℃區(qū)間＜30min，樣本量不足但可補(bǔ)足，溶血率1–2%。b)重大：溫度偏離＞4℃且＞2h，樣本污染，標(biāo)簽丟失＞5例。c)嚴(yán)重：運(yùn)輸箱破損、樣本泄漏、遺傳資源非法出境。9.2報告時限a)輕微：24h內(nèi)填寫《偏差記錄表》，部門內(nèi)部歸檔。b)重大：2h內(nèi)郵件+電話上報QA，72h內(nèi)完成根本原因分析（RCA）。c)嚴(yán)重：1h內(nèi)上報樣本管理委員會主任，24h內(nèi)向省級監(jiān)管部門提交初步報告，7d內(nèi)完成最終報告。9.3糾正預(yù)防措施（CAPA）a)輕微：修訂SOP，增加溫度報警閾值。b)重大：更換運(yùn)輸服務(wù)商，重新驗證冷鏈。c)嚴(yán)重：暫停項目，全面審計，相關(guān)責(zé)任人記過或解除勞動合同。第十章培訓(xùn)與考核10.1入職培訓(xùn)a)8學(xué)時理論：法規(guī)、倫理、生物安全。b)4學(xué)時實操：靜脈采血、分裝、凍存。c)考核≥85分方可上崗，試卷保存3年。10.2年度再培訓(xùn)a)新法規(guī)更新、偏差案例分享、應(yīng)急演練。b)采用“考培分離”原則，培訓(xùn)師與考官分設(shè)。10.3培訓(xùn)記錄a)使用“云學(xué)堂”系統(tǒng)，自動生成PDF證書，含姓名、日期、成績、電子簽章。第十一章監(jiān)督與審計11.1內(nèi)部審計a)質(zhì)量部每年制定《年度審計計劃》，覆蓋100%采樣點、100%運(yùn)輸線路。b)審計發(fā)現(xiàn)分級：Critical（0容忍）、Major（30天整改）、Minor（90天整改）。11.2外部審計a)每2年接受一次國家衛(wèi)健委臨檢中心現(xiàn)場評審。b)每3年接受一次ISO20387認(rèn)證審核。11.3績效掛鉤a)審計得分≥95分，部門績效系數(shù)+0.1；b)出現(xiàn)Critical項，績效系數(shù)?0.3，并取消年度評優(yōu)資格。第十二章應(yīng)急預(yù)案12.1冷鏈斷電a)超低溫冰箱配UPS10kVA，支撐30min；b)30min內(nèi)無法恢復(fù)，啟動移動干冰機(jī)（干冰產(chǎn)量50kg/h），將樣本轉(zhuǎn)移至備用冰箱。12.2運(yùn)輸車禍a)司機(jī)立即撥打122、120，并啟動《生物泄漏現(xiàn)場處置卡》。b)穿戴PPE：N95、護(hù)目鏡、雙層手套、防滲透圍裙。c)使用含1%有效氯消毒液覆蓋泄漏區(qū)域30min，吸附后裝入生物危害袋。12.3樣本丟失a)立即啟動“樣本追溯系統(tǒng)”，GPS軌跡回放，2h內(nèi)鎖定最