資料內(nèi)容僅供您學(xué)習(xí)參考，如有不當(dāng)或者侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系改正或者刪除。復(fù)習(xí)思考題及答案第一章微生物與工業(yè)微生物學(xué)1.什么是微生物?廣義的微生物和工業(yè)微生物主要包括哪幾大類(lèi)?答:微生物是指所有形體微小,單細(xì)胞或結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的多細(xì)胞,或沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的一群最低等的生物。整個(gè)微生物家族的成員包括三大類(lèi):(1)非細(xì)胞類(lèi)微生物(真病毒、亞病毒);(2)原核細(xì)胞類(lèi)微生物(細(xì)菌、放線菌、藍(lán)細(xì)菌、支原體、立克次氏體、衣原體);(3)真核細(xì)胞類(lèi)微生物(酵母菌、霉菌、蕈菌、藻類(lèi)、原生動(dòng)物)。以上三大類(lèi)微生物中,原核生物中的細(xì)菌、放線菌,真核生物中的酵母菌、霉菌和蕈菌,以及非細(xì)胞生物中的噬菌體,是在工業(yè)上有重要用途或關(guān)系密切的微生物。2.微生物具有哪些主要特性?試簡(jiǎn)要說(shuō)明之。答:微生物,除了具有一般大型生物的共性外,還帶來(lái)了以下這些任何其它生物所不能比擬的特性:(1)種類(lèi)多到當(dāng)前為止,人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并已認(rèn)識(shí)的微生物種類(lèi)大約有20萬(wàn)種,其中絕大多數(shù)為較容易觀察和培養(yǎng)的真菌、藻類(lèi)和原生動(dòng)物等大型微生物。據(jù)粗略估計(jì),微生物的種類(lèi)約為幾百萬(wàn)種。人類(lèi)已經(jīng)開(kāi)發(fā)利用的微生物則僅占已發(fā)現(xiàn)微生物種的約1%,都是與人類(lèi)的生活、生產(chǎn)關(guān)系最密切的那些種類(lèi)。另外,在現(xiàn)有環(huán)境中還存在著極其大量的”不可培養(yǎng)的”(unculturable)微生物。微生物種類(lèi)多,一方面還表現(xiàn)在微生物的生理代謝類(lèi)型多,另一方面還表現(xiàn)在微生物能產(chǎn)生和積累的代謝產(chǎn)物種類(lèi)繁多。(2)分布廣微生物因其形體微小、重量輕,故能夠隨著風(fēng)和水流到處傳播。在空氣、水、土壤和動(dòng)植物體表體內(nèi),到處都充滿了大量的各種微生物。能夠說(shuō)微生物是無(wú)處不有,無(wú)孔不入,幾乎到處都是微生物活動(dòng)的場(chǎng)所。只要環(huán)境條件合適,它們就能夠在那里大量地繁殖起來(lái)。凡是有動(dòng)植物生存的地方都有微生物存在,而沒(méi)有動(dòng)植物生存的地方也有微生物存在。因?yàn)橐徊糠治⑸锞哂刑厥獾目鼓嫘?它們能夠在某些惡劣的極端環(huán)境條件下生活,被人們認(rèn)為是生物圈上下限的開(kāi)拓者和各種世界記錄的保持者。(3)繁殖快微生物驚人的生長(zhǎng)繁殖速度是其它任何生物都望塵莫及的。在最適宜的培養(yǎng)條件下,人們最熟悉的大腸桿菌每13～20分鐘就可分裂出新的一代。微生物繁殖速度快這一特性,在發(fā)酵工業(yè)上有著重要的實(shí)踐意義。(4)代謝強(qiáng)微生物的代謝強(qiáng)度比起高等生物要高出幾百至幾萬(wàn)倍。微生物代謝能力強(qiáng)主要表現(xiàn)在吸收多,轉(zhuǎn)化快。吸收多即”胃口大”。微生物代謝能力強(qiáng)這個(gè)特性,為它們的高速生長(zhǎng)繁殖和產(chǎn)生大量代謝產(chǎn)物提供了充分的物質(zhì)基礎(chǔ)。其代謝能力強(qiáng)的主要原因是由于個(gè)體小,比表面積大,因此它們能夠在細(xì)胞與環(huán)境之間迅速交換營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物。同時(shí),它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)也會(huì)不斷合成具有高活性的代謝酶類(lèi)以適應(yīng)自身迅速生長(zhǎng)繁殖的需要。(5)易變異微生物容易發(fā)生變異的主要原因,是個(gè)體多為單細(xì)胞或結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的多細(xì)胞,甚至非細(xì)胞結(jié)構(gòu)。因而在受到外界物理或化學(xué)因素影響后,很容易引起細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)發(fā)生突變,結(jié)果導(dǎo)致遺傳性狀,包括形態(tài)或生理表型上的變異。微生物易變異的另一個(gè)原因是細(xì)胞增殖速度快,細(xì)胞數(shù)量多,因而盡管其自發(fā)突變率很低,也會(huì)造成在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生較多的變異后代。很顯然,微生物容易變異的特性對(duì)人類(lèi)而言既有益又有害。3.何謂微生物的分類(lèi)、鑒定和命名?微生物的主要分類(lèi)單位有哪些?其命名法則怎樣?答:微生物分類(lèi)學(xué)的內(nèi)容包括分類(lèi)、鑒定和命名三個(gè)部分。分類(lèi)是根據(jù)微生物表型特征的相似性或系統(tǒng)發(fā)育的相關(guān)性進(jìn)行分群歸類(lèi),編排成系統(tǒng);鑒定是依據(jù)現(xiàn)有的微生物分類(lèi)系統(tǒng),經(jīng)過(guò)各種特征描述和測(cè)試,確定一個(gè)未知名微生物所應(yīng)歸屬分類(lèi)群的過(guò)程;命名則是根據(jù)國(guó)際統(tǒng)一命名法則,給予每個(gè)新發(fā)現(xiàn)的微生物一個(gè)特有的專(zhuān)用名稱,即學(xué)名。微生物種以上的分類(lèi)單位自上而下依次分為域、界、門(mén)、綱、目、科、屬、種共8級(jí),這是主要的分類(lèi)單位。另外,在兩個(gè)主要分類(lèi)單位之間,還可添加亞門(mén)、亞綱、亞目、亞科、亞屬、亞種等次要分類(lèi)單位。微生物與其它生物一樣,按國(guó)際命名法規(guī)命名,即采用雙名法或三名法,給每一種微生物取一個(gè)國(guó)際學(xué)術(shù)界都公認(rèn)的科學(xué)名稱,即學(xué)名(scientificname)。每一個(gè)微生物的學(xué)名均由拉丁詞、希臘詞或拉丁化的外來(lái)詞組成,在出版物中應(yīng)排成斜體字。4.若按六界系統(tǒng)分類(lèi),生物可分為哪六界?工業(yè)微生物在該分類(lèi)系統(tǒng)中的位置怎樣?答:若按1977年中國(guó)學(xué)者王大耜等在魏塔克(R.H.Whittaker)主張五界系統(tǒng)的基礎(chǔ)上再增加一個(gè)病毒界而形成的六界系統(tǒng),那么微生物在該分類(lèi)系統(tǒng)中應(yīng)分別屬于病毒界、原核生物界、真核原生生物界和真菌界。工業(yè)微生物在該分類(lèi)系統(tǒng)中的位于:動(dòng)物界植物界蕈菌真菌門(mén)霉菌真菌界酵母菌粘菌門(mén)—粘菌原生動(dòng)物生物分類(lèi)系統(tǒng)真核原生生物界微生物單細(xì)胞藻類(lèi)藍(lán)色光合菌門(mén)—藍(lán)細(xì)菌原核生物界放線菌細(xì)菌門(mén)細(xì)菌病毒界—病毒(噬菌體)5.微生物分類(lèi)鑒定的主要依據(jù)是什么?微生物的分類(lèi)鑒定方法和技術(shù)可歸納為哪幾種?答:微生物的分類(lèi)是以它們的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理生化反應(yīng)和遺傳性等特征的異同為依據(jù),根據(jù)生物進(jìn)化的規(guī)律,將微生物進(jìn)行分門(mén)別類(lèi),并根據(jù)相似性或相關(guān)性水平編排成系統(tǒng)。微生物分類(lèi)鑒定的主要依據(jù)包括:(1)經(jīng)典的分類(lèi)鑒定依據(jù)微生物的形態(tài)特征、微生物的生理生化特性、微生物的生態(tài)特性、血清學(xué)反應(yīng);(2)現(xiàn)代的分類(lèi)鑒定依據(jù)細(xì)胞壁的化學(xué)成分、細(xì)胞的其它化學(xué)成分、DNA堿基比例(GC比)、DNA雜交率、rRNA寡核昔酸序列同源性、微生物全基因組序列。6.現(xiàn)代工業(yè)微生物學(xué)的新發(fā)展主要表現(xiàn)在哪幾方面?展望新世紀(jì)的工業(yè)微生物學(xué),有哪些發(fā)展趨勢(shì)?答:現(xiàn)代工業(yè)微生物學(xué)的新發(fā)展主要表現(xiàn)在:(1)20世紀(jì)50、60年代,受抗生素工業(yè)迅猛發(fā)展的影響,工業(yè)微生物學(xué)史上開(kāi)始出現(xiàn)尋找各種有益微生物代謝產(chǎn)物的熱潮,而且工業(yè)微生物產(chǎn)品逐步向生產(chǎn)少量而貴重的生物藥物新產(chǎn)品的方向發(fā)展。在此期間,工業(yè)微生物學(xué)在應(yīng)用研究方面,則向著更自覺(jué)更有效和可人為控制的方向發(fā)展。人們開(kāi)始采用新的育種方法定向選育優(yōu)良菌種,以達(dá)到提高產(chǎn)品產(chǎn)量的目的。(2)從70年代初開(kāi)始,固定化酶和固定化菌體技術(shù)已逐步發(fā)展起來(lái)并應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn),它的優(yōu)越性在于可連續(xù)、穩(wěn)定、長(zhǎng)時(shí)間地重復(fù)進(jìn)行生物催化反應(yīng),生產(chǎn)效率高,易于控制、節(jié)省原料和能源,它使傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵工藝產(chǎn)生革命性的變化。(3)從80年代初開(kāi)始,各種微生物細(xì)胞的原生質(zhì)體和原生質(zhì)體之間的融合再生技術(shù)得到迅猛發(fā)展,并已成為微生物發(fā)酵工業(yè)中的另一種重要而有效的育種手段。微生物種內(nèi)、異種間或異屬間的細(xì)胞融合的結(jié)果形成了各種類(lèi)型的重組融合體,賦予了微生物新的遺傳性狀,從而能產(chǎn)生新的組分,新的代謝產(chǎn)物或提高某種產(chǎn)物的產(chǎn)量等。(4)隨著分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的發(fā)展,一門(mén)新興的綜合性的應(yīng)用學(xué)科—生物工程學(xué)(又稱生物技術(shù))在世界范圍內(nèi)迅速地發(fā)展起來(lái)。生物工程技術(shù)體系主要包括基因工程、細(xì)胞工程、酶工程、發(fā)酵工程(微生物工程)和生化工程?，F(xiàn)代工業(yè)微生物學(xué)已經(jīng)與基因工程、細(xì)胞工程和酶工程等緊密結(jié)合起來(lái),在生物工程這個(gè)高科技前沿帶中充分發(fā)揮其主角的作用并得到新的發(fā)展。新世紀(jì)的工業(yè)微生物學(xué)發(fā)展趨勢(shì):(1)新世紀(jì)微生物基因組學(xué)研究,將進(jìn)一步擴(kuò)大到與工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)境、資源等密切相關(guān)的重要微生物,將為進(jìn)一步利用和改造微生物菌種產(chǎn)生質(zhì)的飛躍,將為不斷地提高目標(biāo)產(chǎn)物的生產(chǎn)水平或生產(chǎn)新的產(chǎn)物提供了可能性。微生物將是新世紀(jì)進(jìn)一步解決資源和能源等實(shí)際應(yīng)用問(wèn)題的最理想材料。(2)新世紀(jì)的工業(yè)微生物學(xué)將更廣泛地與能源、信息、材料、計(jì)算機(jī)等多種學(xué)科交叉、滲透和結(jié)合。因此加強(qiáng)學(xué)科間的交流和合作具有特別重要的意義,它將開(kāi)辟新的研究和應(yīng)用領(lǐng)域,并獲得新的發(fā)展。微生物學(xué)的研究技術(shù)和方法,將會(huì)在吸收其它學(xué)科的先進(jìn)技術(shù)的基礎(chǔ)上,向自動(dòng)化、定向化和定量化發(fā)展。(3)21世紀(jì),微生物產(chǎn)業(yè)將呈現(xiàn)全新的局面,除了更廣泛地利用和挖掘不同生境(包括極端環(huán)境)的自然資源微生物外,基因工程菌將形成一批強(qiáng)大的工業(yè)生產(chǎn)菌,生產(chǎn)外源基因表示的產(chǎn)物,特別是藥物的生產(chǎn)將出現(xiàn)前所未有的新局面。結(jié)合基因組學(xué)在藥物設(shè)計(jì)上的新策略,將出現(xiàn)以核酸為靶標(biāo)的新藥物的大量生產(chǎn),微生物制藥工業(yè)的生產(chǎn)水平將進(jìn)一步提高。在新世紀(jì)人類(lèi)將完全征服癌癥、艾滋病以及其它特殊的疾病。(4)在21世紀(jì),隨著工業(yè)生物技術(shù)高潮的到來(lái),將出現(xiàn)一批嶄新的微生物工業(yè),將生產(chǎn)出各種各樣的新產(chǎn)品,例如降解性塑料、DNA芯片、生物能源、精細(xì)化學(xué)品等,為全世界的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展作出更大貢獻(xiàn)。第二章重要的工業(yè)微生物1.細(xì)菌有哪幾種基本形態(tài)?其大小及繁殖方式如何?答:細(xì)菌按其個(gè)體形態(tài),基本上可分為球狀、桿狀、螺旋狀三種,分別稱為球菌、桿菌和螺旋菌。球菌大小以其直徑表示,大多數(shù)球菌的直徑為0.51μm;桿菌大小以其寬度和長(zhǎng)度表示,多數(shù)桿菌的寬度與球菌直徑相近,其長(zhǎng)度則為寬度的1倍至幾倍(約0.5~5μm);螺旋菌大小也以其寬度和長(zhǎng)度表示,但長(zhǎng)度一般是指菌體兩端點(diǎn)間的距離,并非真正的長(zhǎng)度。多數(shù)螺旋菌大小為0.31150μm。細(xì)菌一般進(jìn)行無(wú)性繁殖,最主要的無(wú)性繁殖方式是裂殖,即一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)分裂(二分分裂或折斷分裂),結(jié)果由一個(gè)母細(xì)胞形成大小基本相等的兩個(gè)子細(xì)胞。有少數(shù)芽生細(xì)菌能象酵母菌一樣進(jìn)行芽殖,即在母細(xì)胞一端先形成一個(gè)小突起,待其長(zhǎng)大后再與母細(xì)胞分離的一種繁殖方式。另外,還有極少數(shù)細(xì)菌種類(lèi)(主要是大腸桿菌),在實(shí)驗(yàn)室條件下能經(jīng)過(guò)性菌毛進(jìn)行有性接合。2.試述細(xì)菌細(xì)胞的一般結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及其主要生理功能。答:一般結(jié)構(gòu)是指一般細(xì)菌細(xì)胞共同具有的結(jié)構(gòu),包括細(xì)胞壁、細(xì)胞質(zhì)膜、核質(zhì)體和細(xì)胞質(zhì)等。(1)細(xì)胞壁革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌細(xì)胞壁較厚(20~80nm),機(jī)械強(qiáng)度較高,化學(xué)組成較簡(jiǎn)單,主要含肽聚糖和磷壁酸;革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁較薄,機(jī)械強(qiáng)度較低,但層次較多,成分較復(fù)雜,主要成分除蛋白質(zhì)、肽聚糖和脂多糖外,還有磷脂質(zhì)、脂蛋白等。細(xì)胞壁的主要功能是:①維持細(xì)胞外形,保護(hù)細(xì)胞免受外力(機(jī)械性或滲透壓)的損傷;②作為鞭毛運(yùn)動(dòng)的支點(diǎn);③為細(xì)胞的正常分裂增殖所必須;④具有一定屏障作用,對(duì)大分子或有害物質(zhì)起阻攔作用;⑤與細(xì)菌的抗原性、致病性及對(duì)噬菌體的敏感性密切相關(guān)。(2)細(xì)胞質(zhì)膜細(xì)胞質(zhì)膜的結(jié)構(gòu)可表述為液態(tài)鑲嵌模型(fluidmosaicmodel),即由具有高度定向性的磷脂雙分子層中鑲嵌著可移動(dòng)的膜蛋白構(gòu)成。其化學(xué)組成主要是蛋白質(zhì)(占50%~70%)和脂類(lèi)(占20%~30%),還有少量的核酸和糖類(lèi)。脂類(lèi)主要是磷脂,每一個(gè)磷脂分子由一個(gè)帶正電荷的親水極性頭(含氮堿、磷酸、甘油)和兩條不帶電荷的疏水非極性尾(長(zhǎng)鏈飽和與不飽和脂肪酸)組成。非極性尾的長(zhǎng)度和飽和度因細(xì)菌種類(lèi)和生長(zhǎng)溫度而異。細(xì)胞質(zhì)膜的生理功能主要是:=1\*GB3①具有高度的選擇透性,控制營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收及代謝產(chǎn)物的排除,是維持細(xì)胞內(nèi)正常滲透壓的結(jié)構(gòu)屏障;=2\*GB3②含有各種呼吸酶系,是氧化磷酸化或光合磷酸化產(chǎn)生ATP的部位;=3\*GB3③是細(xì)胞壁和糖被的各種組分生物合成的場(chǎng)所;=4\*GB3④質(zhì)膜上的間體與DNA復(fù)制分離及細(xì)胞間隔形成密切相關(guān);=5\*GB3⑤是鞭毛的著生點(diǎn)并為其運(yùn)動(dòng)提供能量。(3)核質(zhì)體核質(zhì)體實(shí)際上是一條很長(zhǎng)的環(huán)狀雙鏈DNA與少量類(lèi)組蛋白及RNA結(jié)合,經(jīng)有組織地高度壓縮纏繞而成的一團(tuán)絲狀結(jié)構(gòu),一般稱之為細(xì)菌染色體(圖2–12)。細(xì)菌染色體中心有膜蛋白核心構(gòu)架,構(gòu)架上結(jié)合著幾十個(gè)超螺旋結(jié)構(gòu)的DNA環(huán),而類(lèi)核小體環(huán)不規(guī)則分布在DNA鏈上。其功能是起貯存遺傳信息和傳遞遺傳性狀的重要作用。(4)細(xì)胞質(zhì)主要化學(xué)成分是水(約占80%)、蛋白質(zhì)、核酸、脂類(lèi),少量糖類(lèi)及無(wú)機(jī)鹽類(lèi)。一般細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中主要含有核糖體、貯藏物、酶類(lèi)、中間代謝物、質(zhì)粒、各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和大分子的單體等。少數(shù)細(xì)菌還含有磁小體、羧酶體、氣泡等組分。其中,核糖體是由核糖核酸和蛋白質(zhì)組成的微粒,由50S大亞基和30S小亞基組成,每個(gè)細(xì)菌細(xì)胞約含1萬(wàn)個(gè),是合成蛋白質(zhì)(酶)的場(chǎng)所。貯藏物是一類(lèi)由不同化學(xué)成分累積而成的不溶性顆粒,主要功能是貯存營(yíng)養(yǎng)物和提供碳源、能源、氮源和磷源等,其種類(lèi)主要有:糖原顆粒、聚-羥基丁酸顆粒、硫顆粒、藻青蛋白、異染粒等。3.細(xì)菌細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)包括哪些部分?各有哪些生理功能?答:特殊結(jié)構(gòu)是指僅在某些細(xì)菌細(xì)胞才具有的或僅在特殊條件下才能形成的結(jié)構(gòu),包括糖被、鞭毛、菌毛和芽孢等。(1)糖被糖被的生理功能主要是:①起保護(hù)作用,使細(xì)菌能抗干燥、抗噬菌體吸附、抗白細(xì)胞吞噬;②是菌體外的貯存物質(zhì),營(yíng)養(yǎng)缺乏時(shí)可作為碳源和能源利用;③可使菌體附著于某些物體表面;④作為透性屏障,使細(xì)菌免受重金屬離子毒害。(2)鞭毛鞭毛的生理功能是運(yùn)動(dòng),鞭毛的運(yùn)動(dòng)引起菌體的運(yùn)動(dòng),以實(shí)現(xiàn)其趨性(包括趨化性、趨氧性、趨光性等),其運(yùn)動(dòng)方式有泳動(dòng)、滑動(dòng)、滾動(dòng)或旋轉(zhuǎn)。(3)菌毛普通菌毛的主要功能是使細(xì)菌較牢固地粘附在動(dòng)植物細(xì)胞或組織的表面,即作為細(xì)菌感染動(dòng)植物組織(如呼吸道、消化道和泌尿生殖道等的粘膜)的粘附器官。性菌毛是雄性菌株(供體菌)在有性接合過(guò)程中,向雌性菌株(受體菌)傳遞遺傳物質(zhì)的通道。另外,某些RNA噬菌體(如M13)以性菌毛作為特異性吸附受體。(4)芽孢一個(gè)細(xì)菌只形成一個(gè)芽孢,一個(gè)芽孢萌發(fā)為一個(gè)營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞,故細(xì)菌產(chǎn)芽孢并無(wú)繁殖功能,而是產(chǎn)芽孢細(xì)菌生存的一種形式。與營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞相比,休眠狀態(tài)的生芽孢細(xì)胞對(duì)熱、輻射、干燥和化學(xué)藥品等惡劣環(huán)境具有極強(qiáng)的抵抗能力。4.簡(jiǎn)單表述肽聚糖的組成和結(jié)構(gòu)。革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和組成有何不同?答:每一肽聚糖單體由3部分組成:①雙糖:由N—乙酰葡萄糖胺(NAG)與N—乙酰胞壁酸(NAM)經(jīng)過(guò)β-1,4-糖昔鍵相連形成雙糖單位(易被溶菌酶水解);(圖2–7)②短肽(四肽尾):由4個(gè)氨基酸分子按L型與D型交替方式連接而成,短肽接在N—乙酰胞壁酸(NAM)上;③肽橋(肽間橋):起著連接前后2個(gè)短肽分子的作用,其組成分具有多樣性,如金黃色葡萄球菌的肽橋?yàn)椋?Gly)5－,而大腸桿菌的肽橋?yàn)椋瑿O·NH－。肽聚糖的結(jié)構(gòu)可簡(jiǎn)單表述為:由N—乙酰葡萄糖胺(NAG)與N—乙酰胞壁酸(NAM)重復(fù)交替連接構(gòu)成骨架,接在N—乙酰胞壁酸上的相鄰短肽由肽橋再交叉相聯(lián),形成致密的多層網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。短肽和肽橋的組成分及聯(lián)接方式依不同種類(lèi)細(xì)菌而異。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌細(xì)胞壁較厚(20~80nm),機(jī)械強(qiáng)度較高,化學(xué)組成較簡(jiǎn)單,主要含肽聚糖和磷壁酸;革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁較薄,機(jī)械強(qiáng)度較低,但層次較多,成分較復(fù)雜,主要成分除蛋白質(zhì)、肽聚糖和脂多糖外,還有磷脂質(zhì)、脂蛋白等。5.什么是革蘭氏染色法?其基本原理及操作步驟怎樣?答:1884年,丹麥醫(yī)生革蘭氏(Gram)創(chuàng)造了一種重要的細(xì)菌鑒別染色法稱革蘭氏染色法(Gramstain)。該染色法的步驟是:(1)先用結(jié)晶紫液初染;(2)再用碘液媒染(與結(jié)晶紫形成不溶于水的復(fù)合物);(3)接著用95%乙醇進(jìn)行脫色;(4)最后再用番紅(沙黃)液復(fù)染。經(jīng)過(guò)這種染色方法能夠?qū)⑺屑?xì)菌基本上區(qū)分為兩大類(lèi):革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌(Grampositivebacteria):原經(jīng)(1)(2)步已染上的紫色復(fù)合物不被乙醇洗脫仍保持紫色,稱革蘭氏陽(yáng)性(G+)。革蘭氏陰性細(xì)菌(Gramnegativebacteria):原已染上的紫色復(fù)合物易被乙醇洗脫,又變成無(wú)色菌體最后則被番紅復(fù)染而呈紅色,稱革蘭氏陰性(G—)。革蘭氏染色反應(yīng)機(jī)理:一般認(rèn)為,革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌細(xì)胞壁較厚而緊密,肽聚糖網(wǎng)層次多、交聯(lián)致密,不含類(lèi)脂質(zhì)。當(dāng)用乙醇脫色時(shí),因失水而引起肽聚糖層網(wǎng)格結(jié)構(gòu)的孔徑縮小乃至關(guān)閉,阻止了結(jié)晶紫—碘復(fù)合物的洗脫,故菌體最后仍呈紫色或紫紅色;相反,革蘭氏陰性細(xì)菌因其細(xì)胞壁薄,外膜層的類(lèi)脂含量高,而肽聚糖層薄和交聯(lián)度差,當(dāng)乙醇脫色時(shí),外膜層的物質(zhì)迅速被溶解,通透性增大,結(jié)晶紫—碘復(fù)合物被抽提洗脫,細(xì)胞褪成無(wú)色,再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染,結(jié)果陰性菌呈現(xiàn)紅色。6.什么是原核生物?哪些微生物屬于原核生物?答:原核微生物—這類(lèi)微生物細(xì)胞中的核比較原始簡(jiǎn)單,沒(méi)有核膜包圍,不具核仁和典型的染色體,也沒(méi)有固定形態(tài)。主要包括:細(xì)菌、放線菌、藍(lán)細(xì)菌、支原體、立克次氏體和衣原體等,在工業(yè)上有重要作用的原核微生物主要是細(xì)菌、放線菌和藍(lán)細(xì)菌。7.請(qǐng)解釋下列名詞:菌落、菌苔,單菌落、菌膜、菌落特征。菌落細(xì)菌接種在固體培養(yǎng)基后,在適宜的條件下以母細(xì)胞為中心迅速生長(zhǎng)繁殖所形成的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞堆團(tuán),稱為菌落(colony)。菌苔將某一純種細(xì)菌的大量細(xì)胞密集地劃線(直線或之字線)接種到瓊脂斜面上,培養(yǎng)2~4天后,每個(gè)細(xì)胞長(zhǎng)成的菌落相互聯(lián)接成一片,稱為菌苔(lawn)。單菌落由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成的菌落則稱之為單菌落,可認(rèn)為是細(xì)菌的純培養(yǎng)物即純種。菌膜好氧細(xì)菌在試管的液體培養(yǎng)基中靜置培養(yǎng)后,在液體表面的生長(zhǎng)狀態(tài)。菌落特征在一定的培養(yǎng)條件下,各種細(xì)菌在固體培養(yǎng)基表面所形成的菌落具有一定的形態(tài)、構(gòu)造等特征。8.試述工業(yè)上常見(jiàn)幾種細(xì)菌(大腸桿菌、谷氨酸棒狀桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌)的學(xué)名、用途及細(xì)胞形態(tài)特征。答:工業(yè)上常見(jiàn)幾種細(xì)菌的學(xué)名、用途及細(xì)胞形態(tài)特征:大腸桿菌(Escherichiacoli)大腸埃希氏菌,俗稱大腸桿菌。菌體呈短桿或長(zhǎng)桿狀,0.5～1.0×1.0～3.0μm,革蘭氏陰性,運(yùn)動(dòng)(周毛)或不運(yùn)動(dòng),無(wú)芽孢,一般無(wú)莢膜。菌落呈白色至黃白色,擴(kuò)展,光滑,閃光。大腸桿菌的用途主要有:制取氨基酸、制備多種酶、作為基因工程受體菌、作為水和食品中微生物學(xué)檢驗(yàn)的指示菌。谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacteriumglutamicum)為直到微彎的桿菌,常呈一端膨大的棒狀,行折斷分裂而成八字形排列或柵狀排列。大多數(shù)種不運(yùn)動(dòng)。革蘭氏陽(yáng)性。棒狀桿菌的用途主要有:高產(chǎn)谷氨酸、生產(chǎn)其它多種氨基酸、生產(chǎn)5′－核苷酸、水楊酸、棒狀桿菌素等。乳酸桿菌(LactobacillusSP.)為革蘭氏陽(yáng)性菌(老培養(yǎng)物中的細(xì)胞可能是陰性),大小一般為0.5～1×2～10μm,形成長(zhǎng)絲,單個(gè)或成鏈。無(wú)芽孢,多數(shù)不運(yùn)動(dòng)。乳酸桿菌的主要用途有:工業(yè)生產(chǎn)乳酸、發(fā)酵生產(chǎn)乳制品、生產(chǎn)其它乳酸發(fā)酵食品、生產(chǎn)藥用乳酸菌制劑、生產(chǎn)禽畜益生菌制劑。雙歧桿菌(BifidobacteriumSP.)菌體細(xì)胞呈現(xiàn)多形態(tài),有的呈較規(guī)則形短桿狀,有的為纖細(xì)桿狀帶有尖細(xì)末端,有的呈長(zhǎng)而彎曲狀,也有的呈各種分枝或分叉形、棍棒狀或匙形。單個(gè)或鏈狀,V形、柵狀排列,或聚集成星狀。革蘭氏陽(yáng)性、不形成芽孢、不運(yùn)動(dòng)。雙歧桿菌的主要用途有:生產(chǎn)微生態(tài)制劑、生產(chǎn)含活性雙歧桿菌的乳制品。以雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌為主、再輔以嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌等菌種,混種發(fā)酵生產(chǎn)而成的酸乳,是一種具有很好保健作用的功能性食品?？莶菅挎邨U菌(Bacillussubtilis)俗稱枯草桿菌。細(xì)胞0.7～1×2～3μm,直桿狀,單個(gè),著色均勻,無(wú)莢膜,運(yùn)動(dòng)(周生鞭毛),革蘭氏染色陽(yáng)性。芽孢小于或等于細(xì)胞寬,橢圓至圓柱狀,中生至近中生,壁薄。菌落粗糙,不透明,不閃光,擴(kuò)展,污白色或微黃色?？莶菅挎邨U菌的用途主要有:生產(chǎn)各種酶制劑、發(fā)酵生產(chǎn)核苷、生產(chǎn)某些抗生素、生產(chǎn)各種多肽、蛋白質(zhì)類(lèi)藥物和酶。9.試述放線菌的形態(tài)特征和細(xì)胞的結(jié)構(gòu)。答:放線菌菌體是由分枝狀菌絲組成的(圖2–29),菌絲細(xì)胞在培養(yǎng)生長(zhǎng)階段無(wú)橫隔膜,故一般都呈多核的單細(xì)胞狀態(tài)。以種類(lèi)最多(約500種)、形態(tài)特征最典型的鏈霉菌為例,其菌絲可分為營(yíng)養(yǎng)菌絲、氣生菌絲和孢子絲三種:基內(nèi)菌絲、氣生菌絲、孢子絲。孢子絲成熟后,可形成各種各樣形態(tài)不同的分生孢子。放線菌菌絲細(xì)胞的結(jié)構(gòu)基本上與細(xì)菌相似,細(xì)胞壁主要也由肽聚糖組成,但各種放線菌細(xì)胞壁所含肽聚糖的組成分有所不同。細(xì)胞壁化學(xué)組成中也含有原核生物所特有的胞壁酸和二氨基庚二酸,而不含幾丁質(zhì)或纖維素。在幼齡菌絲細(xì)胞中有明顯的核質(zhì)體(擬核),且為數(shù)眾多。菌絲細(xì)胞革蘭氏染色一般呈陽(yáng)性反應(yīng)。10.放線菌孢子形成的方式可歸納為哪幾種?答:放線菌孢子形成的方式可歸納為以下三種:(1)橫隔分裂形成分生孢子,如鏈霉菌、諾卡氏菌,;(2)形成孢子囊產(chǎn)生孢囊孢子,如鏈孢囊菌和游動(dòng)放線菌;(3)在菌絲頂端形成少量孢子,如小單孢菌。11.為什么說(shuō)放線菌是介于細(xì)菌和真菌之間而又更接近于細(xì)菌的一類(lèi)原核微生物?答:(1)放線菌與霉菌相似之處放線菌和霉菌都具有顯著分枝的菌絲,菌絲的生長(zhǎng)和分枝方式也很相似,而且多數(shù)都能產(chǎn)生分生孢子并以分生孢子進(jìn)行無(wú)性繁殖。很多放線菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀態(tài)(形成菌絲球)也與霉菌相似。在瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的老齡菌落與某些霉菌(如青霉)相似。(2)放線菌與細(xì)菌相同或相似之處放線菌的菌絲和孢子的寬度與桿菌的寬度很相仿(約1μm),但比霉菌菌絲細(xì)得多;幼齡放線菌的菌落大小和表面特征與某些細(xì)菌很相似。放線菌的菌絲細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本上與細(xì)菌細(xì)胞相同,都屬于原核生物,無(wú)核膜、核仁和典型染色體,細(xì)胞壁的主要成分是肽聚糖,含有原核細(xì)胞壁特有的胞壁酸和二氨基庚二酸,一般革蘭氏染色陽(yáng)性;放線菌噬菌體的形狀與細(xì)菌的相似;與細(xì)菌一樣對(duì)溶菌酶敏感。另外放線菌的最適生長(zhǎng)pH為中性至微堿性,與多數(shù)細(xì)菌基本相同。基于上述的比較,可見(jiàn)放線菌是一類(lèi)在形態(tài)上介于細(xì)菌和霉菌之間,但在分類(lèi)學(xué)上,在親緣關(guān)系上卻與細(xì)菌十分接近的原核微生物。12.放線菌有何用途?試舉例說(shuō)明放線菌在生物制藥工業(yè)上的重要性。放線菌的最突出特性是能產(chǎn)生各種各樣大量的抗生素?？股刈鳛樽钪饕目垢腥舅幬?使人類(lèi)基本上控制了傳染病的危害。至今已發(fā)現(xiàn)的約1萬(wàn)種抗生素中,由放線菌產(chǎn)生的就約占70%。放線菌的次生代謝產(chǎn)物可用于制備酶抑制劑、抗癌劑、免疫調(diào)節(jié)劑、受體拮抗劑等許多新的微生物藥物;有的放線菌在工業(yè)上還用于生產(chǎn)酶制劑和維生素。另外,放線菌在甾體轉(zhuǎn)化、石油脫臘、烴類(lèi)發(fā)酵、污水處理和環(huán)境保護(hù)等方面也有重要作用。例如鏈霉菌屬是放線菌中最大的一個(gè)屬,種類(lèi)繁多。而且其中有一半以上能產(chǎn)生抗生素。所有由放線菌產(chǎn)生的抗生素中。約有90%是由鏈霉菌屬產(chǎn)生的。鏈霉菌在生物制藥工業(yè)上的主要用途有:生產(chǎn)多種重要的抗生素、生產(chǎn)多種酶類(lèi)、生產(chǎn)各種酶抑制劑、生產(chǎn)維生素。13.酵母菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)與細(xì)菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)主要有哪些不同?答:酵母菌的細(xì)胞主要由細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、液泡和線粒體等構(gòu)成。酵母細(xì)胞壁與細(xì)菌細(xì)胞壁相比,在堅(jiān)韌性上較差,在結(jié)構(gòu)和組成分上也大不相同。酵母細(xì)胞壁可分三層:外層的組成分是甘露聚糖(mannan)和磷酸甘露聚糖,約占40%~45%;中間層是蛋白質(zhì),約占5%~10%,其中有些是與甘露聚糖相結(jié)合的各種酶類(lèi)(如葡聚糖酶、蔗糖酶、脂酶等);內(nèi)層的組成分是葡聚糖(glucan),約占35%~45%,為分枝狀聚合物,是維持細(xì)胞壁機(jī)械強(qiáng)度的主要成分。另外,細(xì)胞壁中還含有酯類(lèi)(3%~8%)、少量幾丁質(zhì)(1%~2%)和灰分。酵母菌為真核微生物,其細(xì)胞核由雙層多孔核膜包裹著,膜孔直徑約為80~100nm,用以增大膜的透性和膜內(nèi)外的物質(zhì)交換。細(xì)胞核中含有由DNA和組蛋白結(jié)合而成的線狀典型染色體。在有氧時(shí)生長(zhǎng)的酵母細(xì)胞質(zhì)中,分布有一種數(shù)目較多,棒狀或圓筒狀,大小為0.3~1×0.5~3μm的細(xì)胞器—線粒體(mitochondrion)。在老齡的酵母細(xì)胞質(zhì)中,出現(xiàn)一個(gè)被單層膜包圍的液泡(vacuole)。14.真核生物與原核生物在細(xì)胞核結(jié)構(gòu)上有何不同?哪些微生物屬于真核生物?答:原核微生物—這類(lèi)微生物細(xì)胞中的核比較原始簡(jiǎn)單,沒(méi)有核膜包圍,不具核仁和典型的染色體,也沒(méi)有固定形態(tài)。主要包括:細(xì)菌、放線菌、藍(lán)細(xì)菌、支原體、立克次氏體和衣原體等,在工業(yè)上有重要作用的原核微生物主要是細(xì)菌、放線菌和藍(lán)細(xì)菌。真核微生物—該類(lèi)微生物的細(xì)胞具有真正的核,細(xì)胞核有核膜包圍,核內(nèi)有核仁和染色體,細(xì)胞質(zhì)中存在線粒體或同時(shí)存在葉綠體等細(xì)胞器。主要的真核微生物有:酵母菌、霉菌(絲狀真菌)、蕈菌(大型真菌)、藻類(lèi)和原生動(dòng)物。本章將著重介紹在工業(yè)上用途最廣的酵母菌、霉菌和蕈菌。15.酵母菌的繁殖方式與細(xì)菌有何不同?答:酵母菌的繁殖方式可分為無(wú)性繁殖和有性繁殖兩種方式。無(wú)性繁殖主要有芽殖、裂殖、產(chǎn)無(wú)性孢子(節(jié)孢子、擲孢子、厚垣孢子)等三種方式,而有性繁殖則以產(chǎn)生有性孢子—子囊孢子的方式進(jìn)行繁殖。其中,最典型和最主要的繁殖方式是芽殖、裂殖和產(chǎn)子囊孢子細(xì)菌一般進(jìn)行無(wú)性繁殖,最主要的無(wú)性繁殖方式是裂殖,即一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)分裂(二分分裂或折斷分裂),結(jié)果由一個(gè)母細(xì)胞形成大小基本相等的兩個(gè)子細(xì)胞。有少數(shù)芽生細(xì)菌能象酵母菌一樣進(jìn)行芽殖,。16.工業(yè)上常見(jiàn)的酵母菌主要有哪些?它們各有何特性和用途?答:工業(yè)上常見(jiàn)的酵母菌主要有:(1)釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)主要用途有:用于生產(chǎn)酒精(乙醇)、用于生產(chǎn)白酒和其它飲料酒、用于食品工業(yè)生產(chǎn)多種食品、用于醫(yī)藥工業(yè)生產(chǎn)各種醫(yī)藥品。(2)卡爾斯伯酵母(Saccharomycescarlsbergensis)主要用途有:用于生產(chǎn)啤酒、生產(chǎn)食用藥用和飼料酵母、提取麥角固醇(含量較高)、作為維生素測(cè)定菌等。(3)異常漢遜氏酵母(Hansenulaanomala)用途主要有:用于增加食品的味、生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白、某些藥物、制造發(fā)酵食品等。(4)假絲酵母(Candidasp.)用途主要有:生產(chǎn)酵母蛋白作為人畜可食的蛋白質(zhì)、石油發(fā)酵脫蠟并制取飼料蛋白、由烷烴發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸等有機(jī)酸。17.鑒別啤酒酵母菌種質(zhì)量的指標(biāo)主要有哪幾項(xiàng)?答:(1)酵母細(xì)胞數(shù)一般約為1億/ml,是反映酵母繁殖能力和培養(yǎng)成熟的指標(biāo);(2)酵母出芽率要求在15%~30%,是衡量繁殖是否旺盛的指標(biāo);(3)酵母死亡率應(yīng)在1%以下,正常培養(yǎng)的酒母不應(yīng)有死亡現(xiàn)象。18.列表比較根霉、曲霉和青霉形態(tài)結(jié)構(gòu)的異同?答:根霉、曲霉和青霉形態(tài)結(jié)構(gòu)的異同(由學(xué)生自行列表比較):根霉(rhizopus)的菌絲無(wú)橫膈膜,單細(xì)胞。菌絲體白色,氣生性強(qiáng),在固體培養(yǎng)基上迅速生長(zhǎng)交織成疏松的棉絮狀菌落,可蔓延充滿整個(gè)培養(yǎng)皿。根霉在固體培養(yǎng)基上或自然培養(yǎng)物上生長(zhǎng)時(shí),由營(yíng)養(yǎng)菌絲體產(chǎn)生具有延伸功能的弧形匍匐菌絲(stolon),在培養(yǎng)基表面向四周蔓延生長(zhǎng)。由匍匐菌絲分化出分枝狀的假根(rhizoid),接觸基質(zhì)并吸取養(yǎng)分。在與假根相正確方向上生出孢囊梗(柄),頂端膨大形成孢子囊,內(nèi)生孢子囊孢子。孢子囊內(nèi)有一近球形的囊軸,囊軸莖部與梗相連處有囊托。孢子囊成熟后,孢子囊壁消解或破裂,可釋放出大量的孢子囊孢子。曲霉(aspergillus)的菌絲有橫膈膜,為多細(xì)胞絲狀真菌。某些菌絲細(xì)胞特化膨大成為厚壁的足細(xì)胞,由足細(xì)胞生出直立的分生孢子梗(無(wú)橫隔),頂部膨大形成球形的頂囊。在頂囊的表面以放射狀生出一層或兩層小梗(初生小梗、次生小梗),小梗的頂端著生成串的分生孢子。頂囊、小梗及分生孢子鏈一起構(gòu)成分生孢子穗(或分生孢子頭),分生孢子穗具有各種不同的顏色和形狀。青霉(penicillium)的菌絲與曲霉相似,有橫隔,多細(xì)胞,但無(wú)足細(xì)胞。分生孢子梗(也有橫隔)直接由氣生菌絲生出,頂端不膨大成為頂囊,而是經(jīng)過(guò)多次分枝成為帚狀枝(孢子穗)。帚狀枝是由單輪、二輪或多輪分枝構(gòu)成,對(duì)稱或不對(duì)稱。最后一輪分枝稱為小梗,在小梗頂端產(chǎn)生成串的藍(lán)綠色分生孢子。有極少數(shù)青霉能產(chǎn)生閉囊殼,內(nèi)生子囊和子囊孢子。19.霉菌的繁殖方式怎樣?霉菌可產(chǎn)生哪些無(wú)性孢子和有性孢子?答:在正常自然條件下,霉菌是經(jīng)過(guò)氣生菌絲分化出各種形態(tài)的子實(shí)體,如孢子囊、分生孢子穗、分生孢子器和子囊果等,再產(chǎn)生各種無(wú)性孢子(孢子囊孢子、分生孢子、厚垣孢子、節(jié)孢子、芽孢子等)和有性孢子(接合孢子、子囊孢子、卵孢子等)分別進(jìn)行無(wú)性和有性兩種繁殖方式。20.試述工業(yè)上常見(jiàn)幾種霉菌的主要特性、用途及分類(lèi)位置。答:工業(yè)上常見(jiàn)幾種霉菌的主要特性、用途及分類(lèi)位置:(1)根霉根霉具有活力強(qiáng)大的淀粉酶,其中糖化型淀粉酶與液化型淀粉酶的比例約為3.3:1,可見(jiàn)其糖化型淀粉酶特別豐富,活力強(qiáng)大,能將淀粉結(jié)構(gòu)中的α―1,4糖苷鍵和α―1,6糖苷鍵打斷,最終較完全地將淀粉轉(zhuǎn)化為純度較高的葡萄糖。根霉除具有糖化作用外,還能產(chǎn)生少量乙醇和乳酸。根霉的主要用途有:用于制曲釀酒、生產(chǎn)葡萄糖、生產(chǎn)酶制劑、生產(chǎn)有機(jī)酸、生產(chǎn)發(fā)酵食品、用于醫(yī)藥工業(yè)。(2)毛霉毛霉大都能生產(chǎn)活力強(qiáng)大的蛋白酶,有很強(qiáng)的分解大豆的能力。毛霉可產(chǎn)生多種酶類(lèi)和各種有機(jī)酸。毛霉的用途主要有:發(fā)酵生產(chǎn)大豆制品、生產(chǎn)多種酶類(lèi)、生產(chǎn)有機(jī)酸、轉(zhuǎn)化甾體化合物。(3)曲霉曲霉屬的菌種具有很多活力強(qiáng)大的酶,如淀粉酶、蛋白酶、果膠酶、葡萄糖氧化酶、纖維素酶和半纖維素酶、柚苷酶和橙皮苷酶、脫氧核糖核酸酶等。曲霉是一類(lèi)具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值而被廣泛應(yīng)用的真菌,主要用途有:生產(chǎn)傳統(tǒng)發(fā)酵食品、生產(chǎn)多種重要的酶制劑、工業(yè)化大量生產(chǎn)檸檬酸、生產(chǎn)多種其它有機(jī)酸、生產(chǎn)多種真菌類(lèi)抗生素、生產(chǎn)真菌毒素、甾體化合物的轉(zhuǎn)化等。(4)青霉青霉屬中的點(diǎn)青霉(P.notatum)又稱音符型青霉,是第一個(gè)用于生產(chǎn)青霉素的菌種。1943年開(kāi)始改用產(chǎn)黃青霉(P.chrysogenum),又稱橄欖型青霉,進(jìn)行工業(yè)化大量生產(chǎn)青霉素。青霉還可生產(chǎn)其它抗生素(灰黃霉素、桔霉素、島青霉肽、蘋(píng)果菌素和擴(kuò)展霉素等),生產(chǎn)有機(jī)酸(葡萄糖酸、檸檬酸、抗壞血酸等),生產(chǎn)多種酶類(lèi)(葡萄糖氧化酶、中性堿性蛋白酶、?；?、5′―磷酸二酯酶、脂肪酶、凝乳酶、真菌細(xì)胞壁溶解酶)等。(5)頭孢霉頭孢霉(cephalosporium)的主要用途有:發(fā)酵生產(chǎn)頭孢菌素C、生產(chǎn)半合成新頭孢菌素類(lèi)抗生素。21.畫(huà)出根霉、曲霉和青霉形態(tài)簡(jiǎn)圖,并注明各部分的名稱。答:青霉根霉曲霉22.列表比較細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌的個(gè)體形態(tài)、細(xì)胞結(jié)構(gòu)、繁殖方式的特點(diǎn)。答:由學(xué)生自行填入下表:細(xì)菌放線菌酵母菌霉菌個(gè)體形態(tài)細(xì)胞結(jié)構(gòu)繁殖方式23.如何在顯微鏡下區(qū)分上述四大類(lèi)微生物?答:細(xì)菌菌體微小透明,一般要經(jīng)染色并用油鏡((1000~1500倍))才能看清其個(gè)體形態(tài)(球狀、桿菌、螺旋狀);酵母菌菌體細(xì)胞較大,可直接制成水浸片用高倍鏡(400~600倍)觀察其活細(xì)胞(橢園或卵園形,往往有芽細(xì)胞);放線菌一般要經(jīng)染色,用油鏡或高倍鏡觀察其微小分枝的菌絲體;霉菌一般不必經(jīng)染色,用低倍鏡(100~150倍)就可觀察其較粗且分枝的菌絲體和子實(shí)體(孢子頭)。24.列表比較細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌菌落的形態(tài)特點(diǎn)。答:由學(xué)生自行填入下表:細(xì)菌菌落酵母菌菌落放線菌菌落霉菌菌落25.如何從平板上區(qū)分上述四大類(lèi)微生物?其菌落形態(tài)與細(xì)胞形態(tài)有何聯(lián)系?答:按上表列出的細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌菌落的形態(tài)特點(diǎn)的不同回答第一個(gè)問(wèn)題。個(gè)體形態(tài)與群體形態(tài)之間存在的明顯相關(guān)性。以細(xì)菌為例,多數(shù)細(xì)菌的菌落一般呈現(xiàn)濕潤(rùn)、光滑、粘稠、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻、顏色較一致等共同特征。但由于不同細(xì)菌細(xì)胞在個(gè)體形態(tài)結(jié)構(gòu)上和生理類(lèi)型上的各種差別,因此必然會(huì)極其密切地反映在上述各種菌落特征上。例如,生有粘液層的細(xì)菌菌落,一般較大型,呈透明的蛋清狀;生芽孢細(xì)菌的菌落往往外觀不透明,表面干燥粗糙;無(wú)鞭毛、不能運(yùn)動(dòng)的球菌一般都形成小而厚、邊緣整齊的半球形菌落;長(zhǎng)有鞭毛、有運(yùn)動(dòng)性的細(xì)菌一般都長(zhǎng)成大而平、邊緣缺刻的不規(guī)則形菌落等等。細(xì)菌這種在個(gè)體形態(tài)與群體形態(tài)之間存在的明顯相關(guān)性,對(duì)許多微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和研究工作很有參考價(jià)值。26.蕈菌在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中,菌絲的分化可分成哪四個(gè)階段?答:可分成下列四個(gè)階段:(1)形成由單核細(xì)胞構(gòu)成的菌絲(一級(jí)菌絲);(2)形成由雙核細(xì)胞構(gòu)成的菌絲(二級(jí)菌絲);(3)分化形成菌絲束或菌絲球(三級(jí)菌絲);(4)形成大型肉質(zhì)子實(shí)體。27.試述蕈菌雙核菌絲的鎖狀聯(lián)合形成過(guò)程。答:鎖狀聯(lián)合方式發(fā)生在菌絲頂端雙核細(xì)胞的兩核之間,其過(guò)程是:①?gòu)碾p核之間的細(xì)胞壁向外側(cè)生出一個(gè)突起,并逐步伸長(zhǎng)和向下彎曲形成鉤;②兩核之一移入突鉤之中;③兩核同時(shí)進(jìn)行一次有絲分裂,產(chǎn)生4個(gè)子核;④突鉤中分裂核的兩個(gè)子核,一個(gè)留在突鉤之中,另一個(gè)進(jìn)入菌絲細(xì)胞頂端,另一個(gè)分裂核的兩個(gè)子核也同時(shí)分開(kāi);⑤突鉤頂端彎到細(xì)胞之上并與細(xì)胞相連形成一個(gè)橋,其中子核經(jīng)過(guò)橋到達(dá)細(xì)胞另一端;⑥在突起產(chǎn)生的起點(diǎn)形成一隔膜,又在橋的下方垂直形成另一隔膜,結(jié)果把雙核母細(xì)胞分成兩個(gè)雙核子細(xì)胞并各具兩個(gè)不同的子核。28.簡(jiǎn)述蕈菌有性繁殖產(chǎn)生擔(dān)子及擔(dān)孢子的過(guò)程。答:產(chǎn)生擔(dān)孢子進(jìn)行有性繁殖是蕈菌獨(dú)有的特征。擔(dān)孢子是著生在擔(dān)子上的一種外生孢子,其形成過(guò)程為:①子實(shí)體成熟后,雙核菌絲的頂端膨大成為擔(dān)子細(xì)胞;②其中的兩個(gè)核融合(核配),形成一個(gè)二倍體新核;③此新核經(jīng)過(guò)二次分裂,其中一次為減數(shù)分裂,產(chǎn)生四個(gè)單倍體子核;④與此同時(shí),擔(dān)子細(xì)胞頂端產(chǎn)生四個(gè)小梗,小梗頂端稍微膨大;⑤四個(gè)子核分別各進(jìn)入四個(gè)小梗內(nèi);⑥此后每核各發(fā)育成為一個(gè)有性孢子,即擔(dān)孢子。典型擔(dān)子菌的擔(dān)子上都有四個(gè)擔(dān)孢子。29.試簡(jiǎn)述藍(lán)細(xì)菌的形態(tài)特征、生理特性及主要用途。答:藍(lán)細(xì)菌的形態(tài)差別很大,概括起來(lái)有球狀或桿狀的單細(xì)胞和絲狀的細(xì)胞鏈兩種形態(tài)。根據(jù)它們的形態(tài)特征,可進(jìn)一步分成下列五類(lèi):(1)由二分裂形成的單細(xì)胞;(2)由復(fù)分裂形成的單細(xì)胞;(3)無(wú)異形胞菌絲狀;(4)有異形胞菌絲狀;(5)有異形胞分枝菌絲狀。藍(lán)細(xì)菌只有少數(shù)為化能異養(yǎng)型生物,多數(shù)為專(zhuān)性光能自養(yǎng)型生物,能象高等綠色植物和高等藻類(lèi)一樣進(jìn)行產(chǎn)氧光合作用,同化二氧化碳為有機(jī)物質(zhì),加之許多種還具有固氮作用。因此,藍(lán)細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求很簡(jiǎn)單,不需要維生素,只要有空氣、陽(yáng)光、水分和少量無(wú)機(jī)鹽類(lèi),便能大量地生長(zhǎng)繁殖。由于某些細(xì)胞能轉(zhuǎn)化形成異形胞、靜息孢子和鏈絲段,而且菌體外面還包有能保持水分、抗干燥的膠黏質(zhì)層,因此,使藍(lán)細(xì)菌的生活和繁殖力更強(qiáng)。上述這些生理特性,正是藍(lán)細(xì)菌能廣泛分布于各種自然條件下的主要原因。藍(lán)細(xì)菌的主要用途有:固氮作用、作為食物和營(yíng)養(yǎng)品、用于提取各種生物藥物。30.什么是噬菌體?試述噬菌體的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生長(zhǎng)繁殖過(guò)程。答:噬菌體(phage)是侵染原核生物(細(xì)菌、放線菌和藍(lán)細(xì)菌)的病毒,它是一種超顯微的,沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的,專(zhuān)性活細(xì)胞寄生的大分子微生物。噬菌體的基本形態(tài)有蝌蚪形、微球形和纖線形三種類(lèi)型,又可再細(xì)分為六種不同形態(tài):(1)尾部長(zhǎng)而直,有尾鞘,能收縮,雙鏈DNA;尾部長(zhǎng)而易彎,無(wú)尾鞘,不能收縮,雙鏈DNA;(3)尾部比頭部短,無(wú)尾鞘,不能收縮,雙鏈DNA;(4)六角形頭部的頂角各有一個(gè)較大的衣殼粒,單鏈DNA;(5)六角形頭部的頂角無(wú)衣殼?；蛴行∫職ち?單鏈RNA;(6)絲狀噬菌體,無(wú)頭部和尾部,為一條長(zhǎng)而略彎的纖線,單鏈DNA。以典型的蝌蚪形噬菌體E.coliT4為例,其基本結(jié)構(gòu)由頭部、尾部和頸部三個(gè)部分組成:(1)頭部呈二十面體對(duì)稱結(jié)構(gòu),其衣殼由衣殼粒組成。頭部衣殼內(nèi),一條線狀雙鏈DNA分子折疊盤(pán)繞其中;(2)尾部呈螺旋對(duì)稱結(jié)構(gòu),由尾鞘、尾髓(尾管)、基板、刺突和尾絲五個(gè)部分組成;(3)頭部與尾部相連處有一構(gòu)造簡(jiǎn)單的頸部,由頸環(huán)和頸須構(gòu)成。31.解釋名詞﹕潛伏期、平均裂解量、溫和噬菌體、溶源性細(xì)菌。答:潛伏期從噬菌體吸附并將DNA注入宿主細(xì)胞至第一個(gè)成熟的子代噬菌體從宿主細(xì)胞中釋放出來(lái)之前這段時(shí)間,稱為潛伏期。平均裂解量平均每個(gè)宿主細(xì)胞裂解后所釋放出的子代噬菌體的數(shù)量稱為平均裂解量。裂解量應(yīng)該等于裂解期所測(cè)得的最高噬菌斑數(shù)除以潛伏期測(cè)得的噬菌斑數(shù)(實(shí)為被感染的宿主細(xì)胞數(shù))。溫和噬菌體當(dāng)噬菌體吸附并侵入宿主細(xì)胞后,能將其DNA插入(整合)到宿主細(xì)胞核DNA的一定位置上成為前(原)噬菌體(prophage),并可長(zhǎng)期隨宿主DNA的復(fù)制而同步復(fù)制,因而在一般情況下不進(jìn)行增殖和引起宿主細(xì)胞的裂解,這一類(lèi)型的噬菌體稱為溫和噬菌體(temperatephage)。溶源性細(xì)菌受到溫和噬菌體侵染而帶有原噬菌體卻又沒(méi)有形態(tài)上可見(jiàn)到的噬菌體粒子的宿主菌,稱為溶源性細(xì)菌,簡(jiǎn)稱溶源菌(lysogen或lysogenicbacteria)。32.什么是噬菌斑?檢查噬菌體常見(jiàn)哪幾種方法?答:當(dāng)噬菌體與敏感宿主菌混合于瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí),噬菌體便侵染宿主細(xì)胞,釋放出子代噬菌體并經(jīng)過(guò)瓊脂再擴(kuò)散到周?chē)募?xì)胞中,繼續(xù)侵染引起更多的細(xì)胞裂解,從而在平板的菌苔上形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的無(wú)菌、透亮、近圓形的空斑,稱為噬菌斑。噬菌體檢查的方法有多種,如載玻片快速法、平板點(diǎn)滴法、單層瓊脂法、雙層瓊脂法、離心分離加熱法等,其中雙層瓊脂法和單層瓊脂法也可用于噬菌體的效價(jià)測(cè)定,其具體操作方法詳見(jiàn)第四章。33.谷氨酸發(fā)酵感染噬菌體時(shí)有何異?，F(xiàn)象?預(yù)防噬菌體感染可采取哪些措施?答:以谷氨酸發(fā)酵時(shí)感染噬菌體的異?，F(xiàn)象為例:(1)菌體不增長(zhǎng)或溶菌,表現(xiàn)為光密度(OD)不升或回降;(2)pH升高達(dá)8.0以上,且不下降;(3)不耗糖或耗糖極慢;(4)發(fā)酵液泡沫多、粘性大,色澤深;(5)鏡檢菌體初期脹大變粗,邊緣不整齊;后期細(xì)胞破碎呈云霧狀,革蘭氏染色呈紅色碎片;(6)不產(chǎn)或極少產(chǎn)谷氨酸。工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)中,必須貫徹”以防為主,防重于治”的積極措施,這些措施主要有:(1)消滅噬菌體及其寄主菌。污染了噬菌體的發(fā)酵液或種子液必須加熱徹底殺滅后才能排放;嚴(yán)禁活菌體(如取樣液)到處排放散布;加強(qiáng)對(duì)環(huán)境(如車(chē)間空氣)的噬檢和消毒工作;加強(qiáng)車(chē)間環(huán)境的清潔衛(wèi)生;(2)保證無(wú)菌空氣凈化系統(tǒng)的嚴(yán)密有效。包括保證空氣過(guò)慮器的裝填嚴(yán)格合理,保證壓縮空氣有足夠的冷卻面積,以便充分去除油水等;(3)徹底消除設(shè)備死角及滲漏,排除隱患;(4)嚴(yán)防種子攜帶噬菌體進(jìn)入發(fā)酵罐(種子液要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格噬檢);(5)備有不同噬菌體類(lèi)型的生產(chǎn)菌,定期輪換使用菌種;(6)選育抗噬菌體突變菌株;(7)必要時(shí)可考慮添加某些噬菌體抑制劑。34.簡(jiǎn)述λ溫和噬菌體的形態(tài)結(jié)構(gòu)。λ噬菌體侵染細(xì)菌時(shí),能以哪兩種狀態(tài)存在?答:λ噬菌體也由一個(gè)直徑約55nm的正20面體頭部和一條長(zhǎng)約150nm、粗約12nm的尾部構(gòu)成。頭部含有一條線狀的DNA分子,長(zhǎng)度約只有T偶數(shù)噬菌體的四分之一(約48Kb)。包裹在頭部外殼蛋白的這條DNA是經(jīng)過(guò)尾部注入到細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的。λ噬菌體侵染非溶源性細(xì)菌時(shí),能以兩種狀態(tài)存在,一種是自主的,即營(yíng)養(yǎng)體狀態(tài)。處在這種狀態(tài)時(shí),λDNA不依賴寄主DNA而自行繁殖;另一種是整合的,即原噬菌體狀態(tài)。處于這種狀態(tài)時(shí),λDNA成為寄主DNA的一部分,并與其同步繁殖。35.野生型λ噬菌體DNA如何改造才能用作基因工程中的克隆載體?答:野生型λ噬菌體DNA必須經(jīng)過(guò)改造才能適用于基因工程中運(yùn)載體的目的。改造主要集中在兩方面:(1)消除多余的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn);(2)去除λDNA中一些非必要區(qū)段。經(jīng)改造后構(gòu)建而成的λDNA載體能夠分為兩類(lèi):①插入型載體,如λgt系列載體;②替換型載體,如Charon系列載體和EMBL系列載體。這些載體及其衍生載體已在基因工程中得到廣泛的應(yīng)用。第三章微生物的生長(zhǎng)繁殖及其控制細(xì)菌/酵母菌等單細(xì)胞微生物群體生長(zhǎng)的典型曲線分哪幾個(gè)階段?各個(gè)階段有何特點(diǎn)?答案要點(diǎn):根據(jù)細(xì)菌/酵母菌生長(zhǎng)速率常數(shù)的不同,一般可把細(xì)菌的典型生長(zhǎng)曲線粗分為延遲期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期等四個(gè)時(shí)期。各個(gè)階段的特點(diǎn)教材中已有詳細(xì)論述。答題時(shí)注意細(xì)菌和酵母菌的不同之處。微生物生長(zhǎng)繁殖需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要有幾類(lèi)?各有何生理功能?答案要點(diǎn):微生物生長(zhǎng)繁殖需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子等五種。五種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的生理功能如下:(1)水是微生物最基本的組成分。微生物體內(nèi)和體外的絕大多數(shù)營(yíng)養(yǎng)成分經(jīng)過(guò)水來(lái)溶解和吸收,代謝廢物經(jīng)過(guò)水進(jìn)行排泄。水是細(xì)胞質(zhì)組分,直接參與各種代謝活動(dòng)。另外水的比熱高,傳熱快,有利于調(diào)節(jié)細(xì)胞溫度和保持環(huán)境溫度的穩(wěn)定。(2)碳源物質(zhì)經(jīng)過(guò)微生物的分解利用,不但為菌體本身的合成提供碳架來(lái)源,還可為生命活動(dòng)提供能量,碳源往往也可作能源。碳源物質(zhì)還是微生物細(xì)胞物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的重要組成部分。(3)氮源物質(zhì)為菌體本身的合成代謝提供氮素來(lái)源,還可為極少數(shù)微生物的生命活動(dòng)提供能量。氮源物質(zhì)是微生物細(xì)胞物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的重要組成部分。(4)無(wú)機(jī)鹽為微生物生長(zhǎng)提供必須的礦質(zhì)元素。礦質(zhì)元素參與酶的組成、構(gòu)成酶活性基、激活酶活性,維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓,控制細(xì)胞的氧化還原電位,有時(shí)可作某些微生物生長(zhǎng)的能源物質(zhì)。(5)絕大多數(shù)生長(zhǎng)因子以輔酶與輔基的形式參與代謝中的酶促反應(yīng)。分析營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基、察氏液體培養(yǎng)基中碳源、氮源、礦物質(zhì)和生長(zhǎng)因子的來(lái)源。答案要點(diǎn):營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基配方:蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,瓊脂15~20g,水1000ml。其中:碳源為蛋白胨;氮源為牛肉膏;礦物質(zhì)來(lái)自氯化鈉;生長(zhǎng)因子的來(lái)源為蛋白胨和牛肉膏。察氏培養(yǎng)基配方:蔗糖30g,K2HPO41g,MgSO4?7H2O0.5g,FeSO40.01g,KCl0.5g,NaNO33g,蒸餾水1000ml。其中:碳源為蔗糖;氮源為NaNO3,礦物質(zhì)來(lái)自K2HPO4、MgSO4?7H2O、FeSO4、KCl、NaNO3。由于是合成培養(yǎng)基,因此培養(yǎng)基中無(wú)生長(zhǎng)因子。高溫滅菌的方法有那些?適用范圍如何?答案要點(diǎn):高溫滅菌的方法從大類(lèi)上分為干熱滅菌法和濕熱滅菌法。主要的滅菌方法和適用范圍如下:(1)干熱空氣滅菌法:采用烘箱加熱的方法可對(duì)金屬制品或清潔玻璃、陶瓷器皿進(jìn)行滅菌。(2)灼燒滅菌法能用于接種環(huán)、接種針等少數(shù)對(duì)象的滅菌。(3)巴氏消毒法可用于牛奶、啤酒、果酒和醬油等不宜進(jìn)行高溫滅菌的液體的消毒。(4)煮沸消毒法一般用于飲用水的消毒。(5)間歇滅菌法適用于不耐熱培養(yǎng)基的滅菌。(6)常規(guī)加壓滅菌法適合于一切微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)或發(fā)酵工廠中對(duì)培養(yǎng)基及多種器材、物料的滅菌。連續(xù)加壓滅菌法在大規(guī)模的發(fā)酵工廠用作培養(yǎng)基的滅菌。簡(jiǎn)述消毒劑殺死微生物的原理。答案要點(diǎn):消毒劑殺死微生物的原理包括:(1)改變細(xì)胞膜的滲透性或損害細(xì)胞膜,影響正常的物質(zhì)交換,損傷細(xì)胞。(2)氧化作用,可使細(xì)胞物質(zhì)如酶氧化,使細(xì)胞物質(zhì)失去活性。(3)改變?cè)|(zhì)的膠體性質(zhì),使菌體蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生沉淀、變性或凝固。乙醇、新潔爾滅為什么可做消毒劑?答案要點(diǎn):70%~75%的乙醇可作為消毒劑。因?yàn)橐掖伎墒刮⑸镏械牡鞍踪|(zhì)變性,還能溶解類(lèi)脂,損傷細(xì)胞膜,又能使細(xì)胞脫水,從而造成細(xì)胞的死亡。0.05%0.1%新潔爾滅能使微生物的蛋白質(zhì)變性,還能破壞細(xì)胞膜,從而殺滅微生物,因此可作為消毒劑。溫度、pH對(duì)微生物的生長(zhǎng)繁殖有何影響?答案要點(diǎn):溫度對(duì)微生物的影響包括高溫殺菌、適宜的溫度培養(yǎng)微生物、低溫降低微生物的代謝活性。培養(yǎng)基或環(huán)境中的pH值與微生物的生命活動(dòng)有著密切的聯(lián)系。因?yàn)榄h(huán)境的pH值會(huì)影響到細(xì)胞膜所帶的電荷,從而引起細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收狀況的變化。pH值還能夠經(jīng)過(guò)改變培養(yǎng)基中有機(jī)化合物的離子化作用程度而對(duì)細(xì)胞施加間接的影響(多數(shù)非離子狀態(tài)化合物比離子狀態(tài)化合物更容易滲入細(xì)胞),改變某些化合物分子進(jìn)入細(xì)胞的狀況,從而促進(jìn)或抑制微生物的生長(zhǎng)。培養(yǎng)微生物的主要條件包括什么?答案要點(diǎn):(1)適宜的營(yíng)養(yǎng)條件;(2)適當(dāng)?shù)耐饨绛h(huán)境;(3)消除其它微生物的干擾。列表比較滅菌、消毒和防腐的異同,并舉例說(shuō)明。答案要點(diǎn):滅菌、消毒與防腐均為控制微生物生長(zhǎng)繁殖的方法,但程度不同。舉例包括:發(fā)酵滅菌、醫(yī)學(xué)消毒和食品防腐。簡(jiǎn)述控制微生物生長(zhǎng)繁殖的方法及其原理。答案要點(diǎn):同9。如何分離到能利用甲苯為碳源和能源的細(xì)菌純培養(yǎng)物?答案要點(diǎn):培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)中以甲苯為唯一碳源,適當(dāng)考慮添加真菌抑制劑。如果結(jié)合微生物的分離與篩選部分答題,則更佳。為什么微生物的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型多種多樣,而動(dòng)物、植物的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型相對(duì)單一?答案要點(diǎn):從營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用方面考慮,重點(diǎn)考慮碳源;結(jié)合微生物容易變異的特點(diǎn)答題更好。怎樣制備培養(yǎng)基?培養(yǎng)基制備過(guò)程中怎樣滿足微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、pH和無(wú)菌等方面的要求?答案要點(diǎn):實(shí)驗(yàn)室中經(jīng)過(guò)下列步驟可配制出培養(yǎng)基。①計(jì)算稱量;②加水溶解;③調(diào)節(jié)pH;④過(guò)濾分裝;⑤放塞包扎;⑥加壓滅菌。培養(yǎng)基制備過(guò)程中要嚴(yán)格按照配方配制,注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的加入次序,防止沉淀產(chǎn)生和營(yíng)養(yǎng)成分的破壞,可滿足微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求。培養(yǎng)基需要調(diào)整到適宜的pH值,并盡可能采用具有一定緩沖作用的物質(zhì),如天然物質(zhì)等,從而有利于微生物的培養(yǎng)。另外,還要采用適當(dāng)?shù)姆椒⒕?防止其它微生物的干擾。第四章工業(yè)微生物學(xué)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)1.用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)菌時(shí),為什么一般都需要先將細(xì)菌進(jìn)行染色?制作細(xì)菌染色標(biāo)本片時(shí),為什么必須先對(duì)涂在載玻片上的細(xì)菌樣品進(jìn)行固定?固定時(shí)應(yīng)注意什么問(wèn)題?答:由于細(xì)菌細(xì)胞小且無(wú)色透明,直接用光學(xué)顯微鏡觀察時(shí),菌體和背景反差很小,難以看清細(xì)菌的形態(tài),更不易識(shí)別某些細(xì)胞結(jié)構(gòu),因此,一般都需要先將細(xì)菌進(jìn)行染色,借助于顏色的反襯作用,以提高觀察樣品不同部位的反差,能更清楚地進(jìn)行觀察和研究。另外,某些染色法還可用于鑒別不同類(lèi)群的細(xì)菌,故細(xì)菌的染色是工業(yè)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中重要的基本技術(shù)。染色前必須先對(duì)涂在載玻片上的細(xì)菌樣品進(jìn)行固定,固定的作用一是殺死細(xì)菌并使菌體粘附于玻片上,一是增加菌體對(duì)染料的親和力。一般常見(jiàn)酒精燈火焰加熱固定的方法,但應(yīng)注意防止細(xì)胞膨脹和收縮,盡量保持細(xì)胞原形。2.革蘭氏染色法包括哪幾個(gè)基本步驟?你認(rèn)為影響革蘭氏染色結(jié)果正確性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是什么?答:革蘭氏染色法的基本步驟是:先用初染劑草酸銨結(jié)晶紫進(jìn)行初染,再用媒染劑碘液媒染,然后用脫色劑乙醇處理,最后用復(fù)染劑石炭酸復(fù)紅或番紅進(jìn)行復(fù)染。經(jīng)此法染色后,若細(xì)菌不被酒精脫色,能保持結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物而呈現(xiàn)藍(lán)紫色,則該菌稱為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌(G+);反之,若細(xì)菌能被酒精脫色,而被復(fù)紅或番紅復(fù)染成紅色,則稱之為革蘭氏陰性細(xì)菌(G-)。被普遍采用的經(jīng)Hucker氏改良的革蘭氏染色法,其操作步驟為:制片→初染→媒染→脫色→復(fù)染→干燥→觀察。

影響革蘭氏染色結(jié)果正確性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是用脫色劑乙醇處理,為了保證革蘭氏染色結(jié)果的正確性,必須控制乙醇脫色時(shí)間,盡量采用規(guī)范的染色方法。3.放線菌、酵母菌和霉菌顯微標(biāo)本片的制作分別可采用哪些方法?各有什么特點(diǎn)?答:放線菌與細(xì)菌的單染色一樣,可用石炭酸復(fù)紅或呂氏美蘭等染料著色后,在顯微鏡下觀察其形態(tài)。但為了觀察放線菌在自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的形態(tài)特征,可應(yīng)用各種培養(yǎng)、制片和觀察方法,其中印片法、插片法和玻璃紙法是三種常見(jiàn)的方法。觀察酵母菌形態(tài)可制備水浸片,若加入一滴美蘭染色液,還可區(qū)別死活細(xì)胞(呈蘭色的為死細(xì)胞,無(wú)色的為活細(xì)胞),這是因?yàn)榛罴?xì)胞具有較強(qiáng)的還原能力,能使無(wú)毒性的美藍(lán)從藍(lán)色的氧化型變成無(wú)色的還原型。霉菌具有復(fù)雜分枝的菌絲體,分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲。由氣生菌絲分化產(chǎn)生繁殖菌絲,再由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲較粗大,制片時(shí)容易收縮變形,孢子也容易分散。為了得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的標(biāo)本片,常見(jiàn)載片培養(yǎng)法和玻璃紙培養(yǎng)法進(jìn)行制片觀察。4.簡(jiǎn)述透射電鏡微生物樣品的制備方法與操作步驟。答:透射電鏡采用覆蓋有支持膜的載網(wǎng)來(lái)承載被觀察的微生物樣品。最常見(jiàn)的載網(wǎng)是銅網(wǎng),而支持膜可用塑料膜(如火棉膠膜、聚乙烯甲醛膜等),也可用碳膜或金屬膜。透射電鏡樣品制備技術(shù)主要有下列三種:①負(fù)染技術(shù);②投影技術(shù);③超薄切片技術(shù)。透射電鏡的微生物樣品的簡(jiǎn)單制備步驟為:處理金屬載網(wǎng)→制備支持膜→轉(zhuǎn)移支持膜到載網(wǎng)上→制備微生物電鏡樣品。5.何謂微生物的純培養(yǎng)技術(shù)?主要包括哪些技術(shù)內(nèi)容?答:在微生物學(xué)中,一般只有純培養(yǎng)物才能被較好地進(jìn)行研究、利用和重復(fù)其結(jié)果;在工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)中,絕大多數(shù)情況下也只有采用純培養(yǎng)物,才能實(shí)施正常運(yùn)作和具有實(shí)用價(jià)值。因此,把特定的單一微生物從自然界(或含菌樣品)以混雜存在的狀態(tài)中分離出來(lái)、經(jīng)純化、轉(zhuǎn)接、繁殖、并以純培養(yǎng)物的形式保藏下來(lái)等一系列操作技術(shù),稱之為純培養(yǎng)技術(shù)。它是進(jìn)行微生物學(xué)研究和工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)最基本的技術(shù)。純培養(yǎng)技術(shù)主要包括:培養(yǎng)基的配制與滅菌技術(shù)、無(wú)菌操作技術(shù)、工業(yè)微生物分離與純化技術(shù)、厭氧微生物純培養(yǎng)技術(shù)、工業(yè)微生物菌種保藏技術(shù)等。6.試述一般培養(yǎng)基的配制方法和操作步驟。高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌的操作方法怎樣?應(yīng)注意哪些事項(xiàng)?答:一般培養(yǎng)基的配制方法如下(各種天然培養(yǎng)基的配制方法略有不同):l.按照配方的組分及用量先分別稱量并配成液體;2.根據(jù)要求調(diào)到一定的酸堿度(pH值);3.若要制成固體則加入2%瓊脂并加熱融化;4.根據(jù)需要的數(shù)量分裝入試管或三角瓶中,加上棉塞或蓋上紗布;5.包扎好滅菌后備用。配制斜面培養(yǎng)基為例,一般操作步驟為:稱量→溶解→調(diào)pH值→加瓊脂→過(guò)濾→分裝→加棉塞→包扎→滅菌→擺斜面→無(wú)菌檢查。高壓蒸汽滅菌法一般培養(yǎng)基、無(wú)菌水、耐熱藥物及玻璃器皿等常采用高壓蒸汽滅菌法。該法的優(yōu)點(diǎn)是時(shí)間短,滅菌效果好。它能夠殺滅所有的微生物,包括最耐熱的細(xì)菌芽孢及其它休眠體。一般培養(yǎng)基常見(jiàn)0.1MPa(1kg/cm2或15Ib/in2),約120℃維持15～20分鐘,便可達(dá)到徹底滅菌的目的;單獨(dú)玻璃器皿滅菌的溫度可高些,維持的時(shí)間可長(zhǎng)些。滅菌的溫度及維持的時(shí)間,應(yīng)隨滅菌物品的性質(zhì)和容量多少而靈活掌握。要注意滅菌的因素是高溫而不是高壓,故滅菌鍋內(nèi)的冷空氣要徹底排除(在排除冷空氣的條件下,蒸汽壓與溫度之間有一定關(guān)系),否則,壓力雖達(dá)到0.1Mpa(lkg/cm2),但溫度并沒(méi)有達(dá)到要求。干熱滅菌法常見(jiàn)玻璃器皿(培養(yǎng)皿、三角燒瓶、試管、吸管等)、金屬器皿及其它干燥耐熱物品,烘干后經(jīng)適當(dāng)包扎(勿裝液體),可采用干熱滅菌法。干熱滅菌一般在電烘箱內(nèi)利用干熱空氣滅菌。該法比濕熱滅菌法所需的溫度要高些(160～170℃),時(shí)間也要長(zhǎng)些(1～2h)。但滅菌溫度若超過(guò)180℃,包扎器皿的紙或棉塞就容易燒焦。7.為什么微生物菌種移接的所有操作,均應(yīng)在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作?什么是無(wú)菌的環(huán)境條件?什么是無(wú)菌操作技術(shù)?答:微生物無(wú)處不在,無(wú)孔不入,因此,在對(duì)微生物的研究和應(yīng)用過(guò)程中,必須隨時(shí)注意保持微生物純培養(yǎng)物的純潔性,防止乃至殺滅其它微生物(雜菌)的混入;在進(jìn)行分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)微生物純培養(yǎng)物時(shí),要采用嚴(yán)格的無(wú)菌操作技術(shù),防止被其它微生物所污染。在微生物學(xué)研究中,常需用接種環(huán)把微生物純培養(yǎng)物,由一個(gè)器皿移接到另一個(gè)培養(yǎng)容器中進(jìn)行培養(yǎng)。由于周?chē)h(huán)境(主要是空氣)中,存在著大量肉眼無(wú)法發(fā)現(xiàn)的各種微生物,只要一打開(kāi)器皿,就可能會(huì)引起器皿內(nèi)的培養(yǎng)基或培養(yǎng)物,被環(huán)境中其它微生物所污染。另外,實(shí)驗(yàn)室人員與所試驗(yàn)的微生物,應(yīng)保證沒(méi)有或最少直接接觸或氣霧接觸。因此,微生物菌種移接的所有操作,均應(yīng)在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作。無(wú)菌環(huán)境是指在無(wú)菌室、無(wú)菌箱、超凈工作室或超凈工作臺(tái)等無(wú)菌或相對(duì)無(wú)菌的環(huán)境條件下進(jìn)行操作。無(wú)菌操作技術(shù)的要點(diǎn)是要充分利用酒精燈焰周?chē)母邷貐^(qū)(無(wú)菌區(qū)),即接種時(shí),管口和瓶口始終保持在火焰(如酒精燈焰)旁邊,進(jìn)行熟練的移接種操作,以便保證微生物的純種培養(yǎng)。另外,挑取和移接微生物純培養(yǎng)物用的接種環(huán)及接種針,應(yīng)采用易于迅速加熱和冷卻的鎳鉻合金等金屬制備,使用時(shí)用火焰灼燒滅菌;轉(zhuǎn)移液體純培養(yǎng)物時(shí),應(yīng)采用無(wú)菌吸管或無(wú)菌移液槍。8.常見(jiàn)的微生物分離純化方法有哪些?這些方法各有什么優(yōu)缺點(diǎn)?答:常見(jiàn)的微生物分離純化方法有:稀釋混合倒平板法、稀釋涂布平板法、平板劃線分離法、稀釋搖管法、液體培養(yǎng)基分離法、單細(xì)胞分離法、選擇培養(yǎng)分離法等。其中前三種方法最為常見(jiàn),不需要特殊的儀器設(shè)備,分離純化效果好稀釋混合倒平板法有兩個(gè)缺點(diǎn),一是會(huì)使一些嚴(yán)格好氧菌因被固定在瓊脂中間,缺乏溶氧而生長(zhǎng)受影響,形成的菌落微小難于挑取;一是在傾入熔化瓊脂培養(yǎng)基時(shí),若溫度控制過(guò)高,易燙死某些熱敏感菌,過(guò)低則會(huì)引起瓊脂太快凝固,不能充分混勻。在微生物學(xué)研究中,更常見(jiàn)的純種分離方法是稀釋涂布平板法。另一種簡(jiǎn)單快速有效的涂布平板法,為玻璃涂棒連續(xù)涂布分離法。平板劃線分離法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便快速,但單個(gè)菌落并不一定是由單個(gè)細(xì)胞形成的,需再重復(fù)劃線1～2次,并結(jié)合顯微鏡檢測(cè)個(gè)體形態(tài)特征,才可獲得真正的純培養(yǎng)物。9.厭氧微生物常見(jiàn)哪些純培養(yǎng)技術(shù)?簡(jiǎn)述厭氧手套箱培養(yǎng)法的原理和操作過(guò)程。答:當(dāng)前,已發(fā)展了很多厭氧微生物培養(yǎng)技術(shù),有化學(xué)方法、物理方法、物理與化學(xué)相結(jié)合的方法,如真空干燥器化學(xué)吸氧法、厭氧罐培養(yǎng)法、厭氧手套箱培養(yǎng)法、厭氧發(fā)生袋培養(yǎng)法、庖肉培養(yǎng)基法、亨蓋特氏(Hungate)厭氧技術(shù)等。厭氧手套箱是利用通入的氫氣,在箱內(nèi)黑色鈀粒的催化下,與氧結(jié)合生成水的反應(yīng),達(dá)到除去箱內(nèi)氧的目的。厭氧箱可分為操作室和交換室兩部分。操作室用于進(jìn)行厭氧操作,前面有一對(duì)供操作用的套袖及膠皮手套。操作室內(nèi)的常溫鈀粒和干燥劑用鋼絲網(wǎng)分別裝著,并與電風(fēng)扇組裝在一起,不斷除去操作室內(nèi)的氧及所形成的水分。操作室內(nèi)還備有接種針和用于接種針滅菌的電熱器,有的還安裝有培養(yǎng)箱。交換室是用于室外物品的放入和室內(nèi)物品的取出。交換室又與真空泵及混合氣鋼瓶相連。混合氣體體積分?jǐn)?shù)一般為10%CO2、5%～10%H2和80%～85%高純N2。以平板法分離雙歧桿菌的純培養(yǎng)為例,厭氧手套箱的操作過(guò)程:厭氧箱的準(zhǔn)備→培養(yǎng)物的準(zhǔn)備→換混合氣培養(yǎng)→觀察挑取菌落。10.微生物菌種長(zhǎng)期保藏根據(jù)什么基本原理?常見(jiàn)哪些保藏菌種的方法?這些方法各有什么優(yōu)缺點(diǎn)?答:微生物菌種保藏共同的基本原理是:使微生物的新陳代謝處于最低或幾乎停止的狀態(tài),因而極少或不發(fā)生變異;保藏方法一般都是基于溫度、水分、氧氣、營(yíng)養(yǎng)成分和滲透壓等方面考慮;保藏條件都是人工方法創(chuàng)造的低溫、干燥、缺氧環(huán)境。當(dāng)前,已建立了許多種長(zhǎng)期保藏菌種的方法,包括:斜面冰箱保藏法、穿刺法、液體石蠟保藏法、沙土管保藏法、濾紙法、甘油低溫保藏法、冷凍干燥保藏法、低溫法、液氮超低溫保藏法等。斜面冰箱保藏法操作簡(jiǎn)單、使用方便,但保藏時(shí)間短、容易被污染;液體石蠟保藏法制作簡(jiǎn)單,不需經(jīng)常移種,實(shí)用且效果較好;沙土管保藏法操作一般比較簡(jiǎn)單,效果較好,可保存幾年時(shí)間,廣泛應(yīng)用于抗生素工業(yè)的生產(chǎn)菌種保藏中,但不能用于保藏營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞;甘油低溫保藏法簡(jiǎn)單易行,保藏時(shí)間可達(dá)1年至幾年;冷凍干燥保藏法綜合利用了各種有利于菌種保藏的因素(低溫、干燥和缺氧等),是當(dāng)前最有效的菌種保藏方法之一;液氮超低溫保藏法比其它任何保藏方法都要優(yōu)越,被世界公認(rèn)為防止菌種退化的最有效方法,適用于各種微生物菌種的保藏。11.了解并熟悉不同工業(yè)微生物的生理與發(fā)酵試驗(yàn)技術(shù)有什么實(shí)用意義?如何進(jìn)行微生物對(duì)碳源和氮源的利用試驗(yàn)?厭氧的酵母菌酒精發(fā)酵試驗(yàn)與好氧的短桿菌谷氨酸發(fā)酵試驗(yàn)有什么不同?答:了解不同工業(yè)微生物的生理特性,并熟悉其生理與發(fā)酵試驗(yàn)技術(shù)。使人們能利用這些不同的生理特性,作為不同微生物分類(lèi)鑒定和菌種選育的依據(jù);利用它們的多種發(fā)酵類(lèi)型和代謝產(chǎn)物,更有效地為發(fā)酵工業(yè)作貢獻(xiàn)。碳源的利用試驗(yàn):(1)糖類(lèi)發(fā)酵試驗(yàn)絕大多數(shù)細(xì)菌和酵母菌都能利用糖類(lèi)作為碳源和能源,但它們?cè)诜纸馓穷?lèi)物質(zhì)的能力上有很大差異,糖類(lèi)發(fā)酵試驗(yàn)主要是試驗(yàn)多種糖類(lèi)能否被利用作為碳源或能源。(2)淀粉水解試驗(yàn)淀粉酶能水解淀粉成為小分子的糊精、雙糖和單糖,此過(guò)程可經(jīng)過(guò)觀察細(xì)菌菌落周?chē)奈镔|(zhì)變化來(lái)證實(shí)。淀粉遇碘液會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色反應(yīng),但細(xì)菌水解淀粉后的周?chē)鷧^(qū)域,用碘測(cè)定不再顯示藍(lán)色,使平板上的菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈,表明該細(xì)菌能產(chǎn)生淀粉酶,以此鑒別不同細(xì)菌。(3)脂肪水解試驗(yàn)脂肪也是碳源之一。微生物對(duì)大分子的脂肪不能直接利用,必須依賴其胞外產(chǎn)生的脂肪酶,將脂肪分解成小分子的甘油和脂肪酸,才能被微生物所吸收利用。脂肪被脂肪酶水解后產(chǎn)生的脂肪酸,可改變培養(yǎng)基的pH.,使pH降低。加入培養(yǎng)基的中性紅指示劑,會(huì)使培養(yǎng)基從淡紅色變?yōu)樯罴t色,說(shuō)明微生物胞外能產(chǎn)生脂肪酶。氮源的利用試驗(yàn):工業(yè)微生物對(duì)于氮源的利用,主要是看其對(duì)蛋白質(zhì)、蛋白胨、氨基酸、銨鹽和硝酸鹽的利用能力,例如:(1)酵母菌對(duì)氮源利用試驗(yàn);(2)明膠液化試驗(yàn);(3)石蕊牛奶試驗(yàn);(4)尿素分解試驗(yàn);(5)硝酸鹽還原試驗(yàn)。酒精發(fā)酵試驗(yàn)是在無(wú)氧條件下,某些酵母菌(如釀酒酵母)能把己糖轉(zhuǎn)化為酒精和二氧化碳的作用,稱為酒精發(fā)酵。酵母菌由于其種類(lèi)不同,酒精發(fā)酵力的強(qiáng)弱也不同,工業(yè)生產(chǎn)上必須采用酒精發(fā)酵過(guò)程中所生成的二氧化碳和酒精的量,以及計(jì)算其發(fā)酵度來(lái)測(cè)定不同酵母菌種的發(fā)酵力。谷氨酸發(fā)酵試驗(yàn)是在有氧條件下,谷氨酸短桿菌在各種酶系的作用下,葡萄糖經(jīng)己糖酵解、單磷酸己糖、三羧酸循環(huán)和乙醛酸循環(huán)等途徑生物合成谷氨酸。因此,谷氨酸發(fā)酵是好氧性發(fā)酵。谷氨酸短桿菌是生物素營(yíng)養(yǎng)缺陷型,當(dāng)培養(yǎng)基中含有充分的生物素時(shí),菌體大量生長(zhǎng),但不積累谷氨酸產(chǎn)物,因此,發(fā)酵培養(yǎng)基中的生物素要控制在一個(gè)亞適量的水平(除非采用特殊的發(fā)酵工藝)。12.在科研和工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)實(shí)踐中,最常見(jiàn)的微生物檢測(cè)項(xiàng)目主要有哪些?各有什么實(shí)際意義?試舉例說(shuō)明之。答:在科研工作和生產(chǎn)實(shí)踐中,最常見(jiàn)的微生物檢測(cè)項(xiàng)目是細(xì)胞數(shù)或生長(zhǎng)量的測(cè)定。例如,在酒精、啤酒和白酒等的成熟酒母在鏡檢時(shí),除了要求菌體細(xì)胞飽滿肥大、細(xì)胞質(zhì)均勻、空泡小、出芽率高外,還要求酵母細(xì)胞數(shù)每毫升達(dá)到l億個(gè)以上,以此作為酵母菌繁殖能力和培養(yǎng)成熟的指標(biāo);又例如,在谷氨酸發(fā)酵生產(chǎn)中,每間隔2～4h,就要取樣用光電比濁法測(cè)定發(fā)酵液的光密度(OD),以此作為短桿菌增殖數(shù)量的指標(biāo),有助于指導(dǎo)發(fā)酵過(guò)程的工藝控制。13.簡(jiǎn)述水和食品中細(xì)菌菌落總數(shù)的測(cè)定程序。多管發(fā)酵法測(cè)定水與食品中大腸菌群數(shù)的操作過(guò)程有何異同?答:細(xì)菌菌落總數(shù)是指水或食品檢樣經(jīng)處理,在肉汁營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中,于37℃經(jīng)24h培養(yǎng)后,lml或lg檢樣中所生長(zhǎng)的嗜中溫需氧性細(xì)菌菌落總數(shù)。一般都采用平板菌落計(jì)數(shù)法進(jìn)行測(cè)定。它主要作為判定水和食品被污染程度的標(biāo)志,也可應(yīng)用這一方法觀察細(xì)菌在食品中繁殖的動(dòng)態(tài),以便對(duì)被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)提供依據(jù)。水和食品中細(xì)菌菌落總數(shù)的測(cè)定與前面的平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定活菌數(shù),在原理和方法上基本是相同的。其測(cè)定過(guò)程如下:培養(yǎng)基的制備→檢樣的采取→檢樣的稀釋→傾注平板及培養(yǎng)→菌落總數(shù)的計(jì)算→菌落總數(shù)的報(bào)告。食品中大腸菌群數(shù)是以每100毫升(克)檢樣中大腸菌群最可能數(shù)(MPN)表示的。多管發(fā)酵法檢測(cè)食品中大腸菌群數(shù)的操作過(guò)程為:培養(yǎng)基的制備→食品檢樣稀釋→乳糖初發(fā)酵試驗(yàn)→平板分離培養(yǎng)→證實(shí)試驗(yàn)→報(bào)告MPN。14.噬菌體的檢查根據(jù)什么原理?試述單層瓊脂平板法檢查噬菌體和雙層瓊脂平板法測(cè)定噬菌體效價(jià)的方法及操作過(guò)程。答:噬菌體侵染敏感寄主細(xì)胞后,釋放出子代噬菌體,經(jīng)過(guò)瓊脂再擴(kuò)散到周?chē)募?xì)胞中,繼續(xù)侵染引起更多細(xì)胞裂解,從而在平板上形成一個(gè)個(gè)肉眼可見(jiàn)的透亮無(wú)菌近圓形的空斑,稱為噬菌斑,它是噬菌體存在的一種特性標(biāo)志,由此檢出噬菌體的存在。單層瓊脂法將指示菌液和經(jīng)適當(dāng)稀釋的噬檢液與單層培養(yǎng)基一起傾注平板。充分混勻并凝固后,置適溫下培養(yǎng)約12h,觀察計(jì)數(shù)。此法較簡(jiǎn)便,可用于噬菌體的效價(jià)測(cè)定。但若培養(yǎng)基較厚易產(chǎn)生上下噬菌斑重疊現(xiàn)象,影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。雙層瓊脂法一般采用的效價(jià)測(cè)定方法。雙層瓊脂法是先用含2％瓊脂的固體培養(yǎng)基傾注底層平板,再在其上傾注一薄層半固體上層培養(yǎng)基,上層培養(yǎng)基事先已與對(duì)數(shù)期指示菌液和噬檢液混合均勻。經(jīng)適溫培養(yǎng)后,便可觀察計(jì)數(shù)。此法的優(yōu)點(diǎn)是所形成的全部噬菌斑基本處于同一平面上,因而各斑大小均勻,邊緣清晰易見(jiàn),不發(fā)生上下噬菌斑重疊現(xiàn)象。另外,因上層半固體培養(yǎng)基較稀,使形成的噬菌斑較大,也有利于計(jì)數(shù)。因此,該法是一種被普遍采用并能精確測(cè)定效價(jià)的方法。單層瓊脂法噬檢操作過(guò)程雙層瓊脂法測(cè)定噬菌體效價(jià)操作過(guò)程第五章微生物的代謝調(diào)節(jié)與控制1.什么叫生物氧化?微生物的生物氧化有哪3種方式?各有什么特點(diǎn)?答:生物氧化(biologicaloxi