2026年第31屆全國中學(xué)生生物學(xué)競賽聯(lián)賽試題及答案1.（單選）在擬南芥中，TFL1基因編碼一種含磷脂酰乙醇胺結(jié)合域的小蛋白，其功能缺失突變體表現(xiàn)為花序提前終止。若將TFL1第84位組氨酸突變?yōu)槔野彼?，發(fā)現(xiàn)突變蛋白仍可與FD形成復(fù)合體，但無法被激酶SnRK1磷酸化。下列敘述正確的是（）A.TFL1是轉(zhuǎn)錄因子，直接抑制花分生組織基因表達(dá)B.第84位組氨酸位于蛋白的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域C.該突變體花序表型與野生型一致D.SnRK1介導(dǎo)的磷酸化可能通過調(diào)控TFL1蛋白穩(wěn)定性影響花序維持答案：D解析：TFL1為磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白，非轉(zhuǎn)錄因子，A錯；第84位殘基參與磷酸化而非DNA結(jié)合，B錯；無法磷酸化導(dǎo)致蛋白功能缺失，花序提前終止，C錯；SnRK1磷酸化通常促進(jìn)蛋白降解或改變亞細(xì)胞定位，D正確。2.（單選）研究人員利用CRISPR-Cas9在斑馬魚基因組中插入loxP位點，構(gòu)建條件性敲除模型。若將攜帶loxP的F0代與表達(dá)Cre的轉(zhuǎn)基因魚雜交，發(fā)現(xiàn)部分胚胎出現(xiàn)心臟發(fā)育不全。為驗證心臟表型確由目的基因敲除引起，最佳對照組應(yīng)為（）A.F0代自交后代中不攜帶Cre的個體B.野生型AB品系與Cre轉(zhuǎn)基因魚雜交后代C.攜帶loxP但Cre表達(dá)被四環(huán)素抑制的個體D.注射Cas9mRNA但無sgRNA的胚胎答案：C解析：四環(huán)素系統(tǒng)可關(guān)閉Cre，排除Cre本身毒性或脫靶效應(yīng)，同時保持遺傳背景一致，C最佳。3.（單選）線粒體ATP合酶在植物逆境響應(yīng)中可發(fā)生寡聚化。用BN分離擬南芥葉片線粒體復(fù)合體，發(fā)現(xiàn)干旱處理后~1000kDa處條帶增強。若用抗F1-β抗體進(jìn)行免疫雜交，該條帶可被識別，且經(jīng)ATP水解后消失。據(jù)此推斷該條帶最可能是（）A.F1Fo-ATP合酶二聚體B.呼吸鏈超復(fù)合體I+IIIC.線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔D.熱激蛋白60寡聚體答案：A解析：分子量與ATP合酶二聚體相符，且可被F1-β抗體識別，ATP水解導(dǎo)致解離，A正確。4.（單選）某單細(xì)胞綠藻在持續(xù)光照下培養(yǎng)，突然轉(zhuǎn)入黑暗并補充14C-碳酸氫鹽。30s后提取脂類，發(fā)現(xiàn)放射性主要出現(xiàn)在（）A.甘油三酯sn-2位B.單半乳糖二酰甘油MGDGC.磷脂酰甘油PGD.硫代異鼠李糖二酰甘油SQDG答案：B解析：黑暗條件下CO2固定停止，但葉綠體中MGDG合成仍可利用預(yù)合成的UDP-半乳糖與?；?，30s內(nèi)最快標(biāo)記。5.（單選）在果蠅翅原基發(fā)育中，Dppmorphogen梯度激活靶基因vestigial(vg)。若將vg增強子中所有Smad結(jié)合位點突變?yōu)殡S機序列，克隆到lacZ報告系統(tǒng)并轉(zhuǎn)入野生型胚胎，預(yù)期lacZ表達(dá)模式為（）A.翅原基均勻表達(dá)B.僅翅原基最外側(cè)表達(dá)C.完全不表達(dá)D.翅原基中央高兩側(cè)低答案：C解析：Smad為Dpp信號必需轉(zhuǎn)導(dǎo)因子，結(jié)合位點缺失導(dǎo)致報告基因無法響應(yīng)梯度，C正確。6.（單選）用YFP標(biāo)記擬南芥水通道蛋白PIP2;1，在保衛(wèi)細(xì)胞中觀察到黑暗處理后YFP-PIP2;1由質(zhì)膜遷移至胞內(nèi)顆粒。若用1μM微絲解聚劑LatB預(yù)處理，遷移現(xiàn)象消失。下列蛋白可能參與該過程的是（）A.ARF-GEFGNOMB.網(wǎng)格蛋白重鏈CHC1C.微管結(jié)合蛋白MAP65D.肌球蛋白XI-i答案：D解析：LatB抑制微絲聚合，提示依賴肌球蛋白的囊泡運輸，D正確。7.（單選）某真菌含一條長90kb的線性線粒體質(zhì)粒，兩端有同向重復(fù)序列TIR(1.2kb)。若用脈沖場凝膠電泳分離總DNA，經(jīng)線粒體DNA特異性探針雜交后，發(fā)現(xiàn)除主帶外還有一條45kb弱帶。下列解釋合理的是（）A.質(zhì)粒發(fā)生同源重組形成環(huán)狀分子B.質(zhì)粒在TIR處發(fā)生分子內(nèi)重組形成缺失型C.質(zhì)粒被限制性內(nèi)切酶隨機切斷D.電泳過程中DNA降解答案：B解析：45kb≈90-2×1.2kb，提示TIR介導(dǎo)分子內(nèi)重組缺失中間區(qū)段，B正確。8.（單選）將大腸桿菌在含乳糖的培養(yǎng)基中連續(xù)傳代100代，發(fā)現(xiàn)lac操縱子啟動子區(qū)-10位T→A突變頻率升高至15%。若將該突變lac片段克隆到體外轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)，測得轉(zhuǎn)錄起始效率為野生型120%。下列說法正確的是（）A.該突變降低cAMP-CRP復(fù)合物結(jié)合B.突變可能提高RNA聚合酶封閉復(fù)合體穩(wěn)定性C.突變導(dǎo)致lac阻遏蛋白無法結(jié)合D.突變使操縱子對葡萄糖抑制超敏感答案：B解析：-10區(qū)突變可提高封閉復(fù)合體穩(wěn)定性，增強轉(zhuǎn)錄，B正確；與CRP或阻遏蛋白無關(guān)。9.（單選）在哺乳動物精子發(fā)生中，PIWI蛋白MILI結(jié)合一類26nt的piRNA。若構(gòu)建MILI催化失活突變體小鼠，發(fā)現(xiàn)精子發(fā)生停滯在圓形精子階段，且基因組中L1轉(zhuǎn)座子甲基化水平顯著降低。下列實驗可進(jìn)一步證明L1去甲基化直接導(dǎo)致表型的是（）A.在MILI突變背景中敲除L1主要拷貝，觀察精子發(fā)生是否恢復(fù)B.用5-aza-dC處理野生型精母細(xì)胞，檢測L1甲基化C.將L1啟動子甲基化報告基因轉(zhuǎn)入突變體睪丸D.比較突變與野生型睪丸中L1ORF1蛋白含量答案：A解析：遺傳挽救實驗最直接，A正確。10.（單選）植物葉片光合作用產(chǎn)生的蔗糖通過韌皮部運輸，需經(jīng)胞間連絲。用CFDA標(biāo)記胞質(zhì)，發(fā)現(xiàn)野生型煙草葉脈裝載速率是tms1突變體（過表達(dá)IAA合成酶）的2倍。若用質(zhì)膜H+-ATPase抑制劑釩酸鹽處理野生型，裝載速率降至與tms1相同。下列推斷正確的是（）A.tms1突變體胞間連絲通透性降低B.IAA通過促進(jìn)H+-ATPase磷酸化提高蔗糖裝載C.釩酸鹽阻斷IAA極性運輸D.tms1中蔗糖合成酶活性下降答案：B解析：IAA可激活H+-ATPase，維持質(zhì)膜電化學(xué)梯度驅(qū)動共運輸，B正確。11.（單選）在酵母中，Sec61translocon負(fù)責(zé)將分泌蛋白插入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。若將Sec61α第66位天冬酰胺突變?yōu)楫惲涟彼?，發(fā)現(xiàn)體內(nèi)轉(zhuǎn)位效率下降60%，但體外脂質(zhì)體實驗顯示通道仍開放。下列解釋合理的是（）A.突變導(dǎo)致通道無法結(jié)合核糖體B.突變影響與Sec62/63復(fù)合物相互作用C.突變使通道對Ca2+通透性增加D.突變蛋白被ERAD系統(tǒng)降解答案：B解析：Sec62/63協(xié)助post-translational轉(zhuǎn)位，突變不影響通道本身但削弱輔助因子結(jié)合，B正確。12.（單選）用冷凍電鏡解析嗜熱菌RNA聚合酶全酶-啟動子復(fù)合體，發(fā)現(xiàn)σ因子第3.2螺旋插入RNAexitchannel。若將該螺旋中4個帶正電殘基同時突變?yōu)楸彼?，預(yù)測在體外轉(zhuǎn)錄實驗中的結(jié)果是（）A.轉(zhuǎn)錄起始頻率增加，延伸速率下降B.轉(zhuǎn)錄起始頻率下降，延伸速率不變C.起始與延伸均顯著下降D.起始不變，延伸速率增加答案：B解析：3.2螺旋穩(wěn)定起始復(fù)合體并阻礙延伸，正電突變削弱與RNA相互作用，導(dǎo)致起始下降，延伸不受直接影響，B正確。13.（單選）在斑馬魚胚胎發(fā)育中，Nodal信號通過Smad2/3激活下游靶基因。若將Smad3MH1結(jié)構(gòu)域中第53位精氨酸突變?yōu)楣劝滨０?，胚胎表現(xiàn)為背部組織缺失。下列實驗可驗證該突變顯性負(fù)效的是（）A.將突變mRNA注入野生型胚胎，觀察是否出現(xiàn)背部缺失B.將突變mRNA與Smad2MO共注射C.將突變mRNA注入smad3-/-突變體D.在體外pull-down實驗中檢測突變蛋白是否結(jié)合Smad4答案：A解析：顯性負(fù)效可在野生型背景中干擾正常信號，A正確。14.（單選）植物葉片衰老受WRKY53正調(diào)控。用ChIP-seq在衰老啟動葉片中鑒定到WRKY53結(jié)合位點富集于SAG12啟動子。若將SAG12啟動子中W-box元件突變?yōu)殡S機序列，并驅(qū)動GUS報告基因，在35S:WRKY53轉(zhuǎn)基因植株中GUS染色結(jié)果為（）A.全株均勻藍(lán)色B.僅衰老葉片邊緣藍(lán)色C.葉片無藍(lán)色D.幼葉藍(lán)色而老葉無色答案：C解析：W-box突變導(dǎo)致WRKY53無法結(jié)合，報告基因不激活，C正確。15.（單選）在哺乳動物細(xì)胞中，線粒體分裂由DRP1介導(dǎo)。若將DRP1第637位絲氨酸突變?yōu)樘於彼幔M磷酸化），并用Confocal觀察線粒體形態(tài)，發(fā)現(xiàn)呈高度碎片化。下列藥物處理可逆轉(zhuǎn)該表型的是（）A.線粒體分裂抑制劑Mdivi-1B.微管解聚劑NocodazoleC.肌球蛋白抑制劑BlebbistatinD.PI3K抑制劑LY294002答案：A解析：Mdivi-1直接抑制DRP1聚合，A正確。16.（單選）將大腸桿菌在含50μg/mL利福平培養(yǎng)基中培養(yǎng)，篩選到一株RNA聚合酶β亞基第146位苯丙氨酸→絲氨酸的突變體。該突變體在無助燃劑條件下可在LB平板形成紅色菌落（產(chǎn)靈菌紅素）。下列敘述正確的是（）A.突變降低rpoB轉(zhuǎn)錄效率B.突變使聚合酶對ppGpp親和力增加C.突變位于利福平結(jié)合口袋，導(dǎo)致抗生素耐受D.突變激活pig基因簇表達(dá)答案：C解析：146位位于利福結(jié)合口袋，突變導(dǎo)致耐藥，C正確；紅色菌落為次級代謝激活，與耐藥無直接因果。17.（單選）在擬南芥中，藍(lán)光受體Phot1自磷酸化后啟動向高爾基體轉(zhuǎn)運。用BrefeldinA（BFA）處理表達(dá)Phot1-GFP的幼苗，發(fā)現(xiàn)GFP信號在胞質(zhì)形成大量顆粒，且與ARF1共定位。下列蛋白可能參與Phot1回收的是（）A.retromer亞基VPS29B.外被體COPⅠ亞基γ-COPC.外被體COPⅡ亞基Sec13D.網(wǎng)格蛋白AP-1μ亞基答案：B解析：BFA抑制ARF1-GTP形成，阻斷COPⅠ回收，Phot1顆粒與ARF1共定位提示COPⅠ途徑，B正確。18.（單選）用單分子FRET研究大腸桿菌UvrD解旋酶，發(fā)現(xiàn)當(dāng)DNA3'端突出12nt時，UvrD以約10bp/s速率解旋；若3'端僅突出4nt，速率降至<1bp/s。下列突變可恢復(fù)短突出速率的是（）A.將UvrD第184位亮氨酸→精氨酸（位于2B亞域）B.刪除C端40個氨基酸C.將ATP結(jié)合位點第224位甘氨酸→谷氨酸D.將DNA結(jié)合位點第308位賴氨酸→丙氨酸答案：A解析：2B亞域調(diào)控構(gòu)象變化，L→R突變降低對ssDNA長度依賴，A正確。19.（單選）在酵母中，端粒酶活性受Rif1/2負(fù)調(diào)控。若構(gòu)建Cdc13-est2融合蛋白（將端粒酶催化亞基Est2靶向端粒），并敲除RIF1，測得端粒長度較野生型增加約200bp。下列實驗可證明延長確由端粒酶活性升高引起的是（）A.在融合菌株中再敲除EST1，檢測端粒長度B.用TRAPassay比較突變與野生型端粒酶活性C.將cdc13-est2突變體與rif1Δ雜交D.Southernblot檢測亞端粒Y'元件拷貝數(shù)答案：B解析：TRAP直接測端粒酶活性，B正確。20.（單選）將GFP標(biāo)記的擬南芥過氧化物酶體靶向信號PTS1（SKL）融合蛋白在葉肉細(xì)胞中表達(dá)，用激光共聚焦觀察發(fā)現(xiàn)黑暗處理后GFP顆粒與葉綠體發(fā)生緊密接觸。若將肌動蛋白抑制劑LatB預(yù)處理，接觸頻率下降70%。下列蛋白可能介導(dǎo)該接觸的是（）A.外周膜蛋白PEX11B.肌球蛋白XI-2C.微管馬達(dá)kinesin-13AD.葉綠體外膜Toc159答案：B解析：肌球蛋白XI-2負(fù)責(zé)過氧化物酶體沿微絲運動，B正確。21.（多選）在哺乳動物細(xì)胞中，mTORC1通過磷酸化自噬起始蛋白ULK1第757位絲氨酸抑制自噬。若將ULK1第757位突變?yōu)楸彼?，并饑餓處理2h，下列現(xiàn)象正確的是（）A.內(nèi)源LC3-II/LC3-I比值升高B.電鏡下自噬體數(shù)量增加C.磷酸化S6K1(T389)水平下降D.與ATG13相互作用增強答案：ABD解析：757A突變解除mTORC1抑制，自噬激活，LC3-II升高，自噬體增多，ULK1與ATG13結(jié)合增強；S6K1磷酸化由mTORC1直接調(diào)控，饑餓已使其下降，與ULK1突變無關(guān)，C不選。22.（多選）在果蠅胚胎中，Bicoid梯度激活hunchback(hb)表達(dá)。若將hb啟動子中所有Bcd結(jié)合位點替換為低親和力序列，并驅(qū)動lacZ，預(yù)期表達(dá)模式為（）A.anteriordomain寬度變窄B.posteriorectopicexpressionC.表達(dá)水平峰值下降D.對Bcd劑量變化更敏感答案：ACD解析：低親和力導(dǎo)致閾值升高，anterior域變窄，峰值下降，且更易受Bcd波動影響，ACD正確；posterior無Bcd，不會異位表達(dá)，B錯。23.（多選）在擬南芥中，光敏色素B(phyB)Pfr形式進(jìn)入核內(nèi)抑制PIF4。若構(gòu)建PIF4-GR（糖皮質(zhì)激素受體）融合蛋白，并用DEX誘導(dǎo)核定位，在紅光下幼苗表現(xiàn)為下胚軸伸長。下列實驗可證明PIF4為phyB下游唯一限速因子的是（）A.pifQ四突變體中表達(dá)PIF4-GR，DEX誘導(dǎo)后下胚軸伸長B.phyB-/-背景中表達(dá)PIF4-GR，紅光下DEX誘導(dǎo)伸長幅度與野生型相同C.在野生型中過表達(dá)phyB-YFP，DEX誘導(dǎo)后下胚軸不伸長D.用蛋白酶體抑制劑MG132處理，DEX誘導(dǎo)伸長被抑制答案：AB解析：A表明PIF4足夠，B表明phyB缺失不影響PIF4功能，二者聯(lián)合提示PIF4為唯一限速；C為phyB過表達(dá)抑制PIF4，與限速無關(guān)；D提示PIF4降解，但不能證明唯一性。24.（多選）在酵母中，端粒沉默由Sir復(fù)合物介導(dǎo)。若將Sir3第605位賴氨酸突變?yōu)楣劝彼幔M乙?；?，發(fā)現(xiàn)端粒沉默喪失，但Sir2HDAC活性不變。下列實驗可證明605位乙?；{(diào)控沉默的是（）A.將605位突變?yōu)榫彼幔M去乙?；?，檢測沉默恢復(fù)B.在H4K16A突變體中觀察Sir3-605E表型C.用抗Sir3-K605ac抗體檢測突變體乙?；紻.ChIP比較野生型與605E突變體Sir3在端粒結(jié)合量答案：ABD解析：A為功能挽救，B驗證與H4K16競爭，D檢測結(jié)合，均可；C無法檢測605E是否“乙酰化”，因無對應(yīng)抗體，C不選。25.（多選）在哺乳動物細(xì)胞中，線粒體自噬受體NIX介導(dǎo)衰老線粒體清除。若將NIX第24位亮氨酸→丙氨酸（突變LIRmotif），并誘導(dǎo)線粒體損傷（CCCP），下列現(xiàn)象正確的是（）A.Parkin招募至線粒體減少B.LC3-II與線粒體共定位下降C.線粒體膜電位下降更慢D.PINK1在線粒體累積增加答案：AB解析：LIR突變削弱NIX與LC3結(jié)合，導(dǎo)致Parkin招募及LC3共定位下降，AB正確；膜電位下降由CCCP直接引起，與NIX無關(guān)，C錯；PINK1累積為損傷早期事件，NIX突變不影響，D錯。26.（多選）在擬南芥中，ABA激活SnRK2.6激酶，磷酸化離子通道SLAC1。若將SLAC1第120位絲氨酸→天冬氨酸（模擬磷酸化），并在卵母細(xì)胞中表達(dá)，下列結(jié)果正確的是（）A.內(nèi)向K+電流增加B.外向Cl-電流增加C.電流對ABA不依賴D.電流被PP2C抑制劑拮抗答案：BC解析：SLAC1為Cl-通道，磷酸化激活，ABA非必需，BC正確；PP2C抑制劑解除抑制，但通道已磷酸化，電流不再受調(diào)控，D不選。27.（多選）在果蠅卵母細(xì)胞中，gurkenmRNA定位于背側(cè)前角，需依賴微管正端馬達(dá)。若將gurken3'UTR中一段含E2基序（含CU-rich）刪除，并驅(qū)動gfp報告基因，下列結(jié)果正確的是（）A.GFP信號在卵母細(xì)胞均勻分布B.卵殼背側(cè)化缺陷C.微管正端標(biāo)記CLIP-190與GFP共定位消失D.過表達(dá)Kinesin-β可部分恢復(fù)定位答案：ABCD解析：E2為Kinesin結(jié)合元件，刪除導(dǎo)致定位喪失，表型與馬達(dá)一致，ABCD均正確。28.（多選）在酵母中，核糖體蛋白RPL25缺失導(dǎo)致60S亞基組裝受阻，游離40S累積。若構(gòu)建RPL25-GFP并在rpl25Δ中表達(dá)，下列現(xiàn)象正確的是（）A.GFP信號主要位于細(xì)胞質(zhì)B.核仁標(biāo)記Fibrillarin與GFP共定位增加C.多聚核糖體譜中80S峰下降D.前體rRNA35S加工延遲答案：BCD解析：60S缺陷導(dǎo)致組裝中間體滯留核仁，B正確；80S及多聚體下降，C正確；35S加工需60S蛋白反饋，D正確；RPL25-GFP在核仁合成，A不選。29.（多選）在哺乳動物細(xì)胞中，DNA復(fù)制起始許可由CDT1調(diào)控。若過表達(dá)CDT1并同步化至G2期，下列現(xiàn)象正確的是（）A.基因組DNA含量>4NB.磷酸化H2AX焦點增加C.復(fù)制起點再點火D.CDT1被SCFSkp2降解答案：ABC解析：CDT1過表達(dá)導(dǎo)致再復(fù)制，ABC正確；G2期CDT1由Cul4-DDB1降解，D錯。30.（多選）在擬南芥中，葉綠體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑（retrograde）中，GENOMESUNCOUPLED1(GUN1)介導(dǎo)脅迫響應(yīng)。若構(gòu)建gun1-1突變體并用NF處理（抑制質(zhì)體轉(zhuǎn)錄），下列基因表達(dá)正確的是（）A.Lhcb1.2轉(zhuǎn)錄下降B.APX2轉(zhuǎn)錄升高C.PhANG基因表達(dá)恢復(fù)至野生型水平D.質(zhì)體編碼RNA聚合酶亞基rpoBmRNA下降答案：AB解析：NF抑制質(zhì)體轉(zhuǎn)錄，gun1突變削弱retrograde，Lhcb仍下降，A正確；APX2為脅迫響應(yīng)，升高，B正確；PhANG表達(dá)無法恢復(fù)，C錯；rpoB由核編碼，D錯。31.（實驗設(shè)計）某植物病毒含一條+ssRNA基因組，長8.5kb，5'端無帽子，3'端無poly(A)。研究人員發(fā)現(xiàn)病毒RNA可在體外利用宿主核糖體進(jìn)行不依賴帽子翻譯。請設(shè)計實驗鑒定其內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點（IRES）的最小功能序列，要求：（1）給出實驗流程；（2）說明關(guān)鍵對照；（3）提供結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)。答案：（1）流程：①以病毒cDNA為模板，設(shè)計5'端系列缺失片段（如F1:nt1–500,F2:200–700,…,Fn:700–1200），兩端引入XhoI/XbaI位點；②將片段克隆至雙順反子報告載體pRIR（上游cistron為螢火蟲熒光素酶Fluc，下游為海腎熒光素酶Rluc，中間含多克隆位點）；③經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化煙草葉片，48h后提取總蛋白；④雙熒光素酶試劑盒測定Fluc/Rluc活性，計算IRES效率E=(Rluc/Fluc)sample/(Rluc/Fluc)empty；⑤5'RACE驗證下游cistron起始位點是否位于IRES內(nèi)部。（2）關(guān)鍵對照：①空載體（無插入）設(shè)定背景；②載體中插入已知缺陷序列（如反向互補）作為陰性；③插入腦心肌炎病毒EMCV-IRES作為陽性；④單順反子Rluc載體校正轉(zhuǎn)錄差異；⑤Northernblot確認(rèn)雙順反子mRNA完整無剪切。（3）判讀：E≥陽性對照50%且單順反子校正后顯著高于背景（p<0.01），同時5'RACE顯示下游翻譯起始于IRES內(nèi)部即認(rèn)定該片段具備IRES活性；逐步5'端缺失至E<10%即為最小邊界。32.（計算）某二倍體植物含一對等位基因A/a，A完全顯性。初始群體D0:0.6AA,0.4Aa。若每代隨機淘汰50%隱性個體，求：（1）D1代基因型頻率；（2）D2代等位基因頻率；（3）達(dá)到p(A)≥0.95所需世代數(shù)。答案：（1）D0產(chǎn)生配子：A=0.6+0.2=0.8，a=0.2。隨機交配得D1合子：AA=0.64,Aa=0.32,aa=0.04。淘汰50%aa后，存活個體：AA=0.64/0.98≈0.6531,Aa=0.32/0.98≈0.3265,aa=0.02/0.98≈0.0204。（2）D1配子：A=0.6531+0.1633=0.8164,a=0.1836。D2合子：AA=0.6665,Aa=0.2997,aa=0.0337；淘汰50%aa后，a=0.2997/2+0.01685=0.1667→q2≈0.0278,q≈0.1667。（3）遞推：qn=qn-1/(1+qn-1)。解qn≤0.05得n≥ln(0.05/0.2)/ln(1/1.2)≈5.5→第6代p≥0.95。33.（綜合）閱讀材料：科學(xué)家發(fā)現(xiàn)深海熱液口古菌“CandidatusVulcanisaetamoutnovskyi”含一種新型CRISPR-Cas系統(tǒng)，稱CasΦ，僅含400aa單蛋白，可加工pre-crRNA并切割靶dsDNA。實驗表明：①CasΦ在50°C活性最高，Mg2+依賴；②靶向質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，30min后靶序列出現(xiàn)primarily8nt5'-overhang；③突變CasΦRuvC活性位點（D396A）喪失切割；④與SpCas9相比，CasΦPAM為5'-TBN-3'（B=C/G/T），寬容度更高。問題：（1）推測CasΦ切割機制；（2）設(shè)計一種利用CasΦ實現(xiàn)哺乳動物細(xì)胞大片段刪除（>10kb）的策略，要求僅轉(zhuǎn)染一次質(zhì)粒；（3）評估CasΦ在基因治療中的潛在優(yōu)勢與風(fēng)險。答案：（1）CasΦ為單RuvC核酸酶，形成不對稱二聚體切口，兩條鏈錯位切割產(chǎn)生8nt5'-overhang，類似typeV-F，但尺寸更小。（2）策略：①合成CasΦ-humanizedcodon并融合2×NLS，構(gòu)建pCAG-CasΦ-P2A-GFP；②設(shè)計雙crRNA陣列：crRNA1靶向5'端PAM(TAC)，spacer20nt；crRNA2靶向3'端PAM(TGC)，spacer20nt，間隔序列用tRNA-gly斷開，置于U6啟動子；③將crRNA陣列克隆至同一質(zhì)粒pU6-crArray；④共轉(zhuǎn)染HEK293，利用流式分選GFP+，48h后PCR跨越10kb區(qū)域，驗證片段缺失；⑤通過深度測序檢測脫靶，限定mismatch≤2且PAM不符。（3）優(yōu)勢：體積?。?lt;1.2kb）易包裝AAV；PAM寬松可靶向更多位點；熱穩(wěn)定性適合體外組裝RNP降低免疫原性。風(fēng)險：RuvC活性可能產(chǎn)生染色體易位；PAM寬容增加脫靶；長期表達(dá)潛在累積效應(yīng)；需優(yōu)化Spacer長度與遞送劑量。34.（綜合）植物根尖干細(xì)胞維持依賴PLT梯度。實驗發(fā)現(xiàn)：①35S:PLT3-GR轉(zhuǎn)基因擬南芥經(jīng)DEX誘導(dǎo)2h，QC特異性標(biāo)記WOX5表達(dá)升高；②ChIP-seq顯示PLT3結(jié)合于WOX5啟動子區(qū)含AACAmotif；③將AACA突變?yōu)镚AGC，驅(qū)動GFP報告基因在QC喪失表達(dá)；④酵母單雜交證實PLT3HD結(jié)構(gòu)域直接結(jié)合AACA。問題：（1）構(gòu)建plt1plt2plt3三突變