生物樣本RNA提取技術(shù)員崗位招聘考試試卷及答案一、填空題（每題1分，共10分）1.RNA提取的核心挑戰(zhàn)是防止____污染。2.常用的RNA變性劑是____。3.酚氯仿法中，氯仿的主要作用是抽提____。4.真核RNA電泳可見28S、18S和____三條清晰條帶。5.檢測(cè)RNA濃度的常用方法是____分光光度法。6.RNA完整性常用____值評(píng)估（Agilent技術(shù)）。7.實(shí)驗(yàn)用水需經(jīng)____處理以滅活RNase。8.反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的模板是____。9.RNA長(zhǎng)期保存應(yīng)置于____℃或液氮中。10.硅柱法提取RNA依賴____條件下的吸附作用。二、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.以下能有效抑制RNase的試劑是？A.SDSB.異硫氰酸胍C.乙醇D.Tris2.RNA電泳中18S亮度高于28S，提示？A.RNA降解B.上樣量不足C.電泳時(shí)間短D.膠濃度高3.純RNA的A260/A280比值約為？A.1.5B.1.8-2.0C.2.5D.1.04.加入異丙醇的目的是？A.沉淀RNAB.抽提蛋白C.溶解RNAD.抑制RNase5.提取難度最大的樣本是？A.新鮮組織B.凍存細(xì)胞C.FFPE樣本D.新鮮血液6.DEPC處理水的作用是？A.穩(wěn)定RNAB.滅活RNaseC.沉淀雜質(zhì)D.溶解蛋白7.反轉(zhuǎn)錄引物不包括？A.OligodTB.RandomprimerC.GSPD.BamHI引物8.RNA保存應(yīng)避免？A.低溫B.反復(fù)凍融C.加RNase抑制劑D.避光9.硅柱法洗滌常用試劑是？A.75%乙醇B.異丙醇C.酚氯仿D.DEPC水10.導(dǎo)致RNA提取量低的原因是？A.樣本充足B.裂解充分C.洗脫體積過大D.無RNase污染三、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.防RNase污染的措施包括？A.戴手套B.DEPC處理試劑C.滅菌耗材D.避免交叉污染2.RNA提取常用方法有？A.酚氯仿法B.硅柱法C.CTAB法D.堿裂解法3.影響RNA完整性的因素是？A.RNase污染B.緩沖液陳舊C.上樣量過多D.膠濃度不當(dāng)4.RNA濃度檢測(cè)方法有？A.NanodropB.QubitC.瓊脂糖電泳D.Bradford法5.樣本預(yù)處理注意事項(xiàng)是？A.新鮮樣本快速處理B.凍存樣本避免反復(fù)凍融C.組織充分研磨D.血液加抗凝劑6.影響RNA純度的雜質(zhì)是？A.蛋白B.DNAC.酚D.胍鹽7.反轉(zhuǎn)錄前RNA處理包括？A.DNaseI去基因組DNAB.加熱變性C.加RNase抑制劑D.濃縮RNA8.硅柱法步驟包括？A.樣本裂解B.上柱吸附C.洗滌雜質(zhì)D.洗脫RNA9.適合提取RNA的樣本是？A.新鮮葉片B.凍存細(xì)胞沉淀C.FFPE切片D.甲醛固定樣本10.RNA提取失敗的常見原因是？A.RNase污染B.裂解不充分C.試劑過期D.洗脫不徹底四、判斷題（每題2分，共20分）1.異硫氰酸胍僅抑制RNase活性。（×）2.瓊脂糖電泳可同時(shí)檢測(cè)RNA濃度和完整性。（√）3.A260/A230比值越低，RNA純度越高。（×）4.凍存組織需液氮研磨提取RNA。（√）5.硅柱法比酚氯仿法純度更高。（√）6.反轉(zhuǎn)錄必須用OligodT引物。（×）7.DEPC水可直接用于RNA提取。（√）8.血液提取RNA需先去除紅細(xì)胞。（√）9.RNA在-20℃可長(zhǎng)期保存。（×）10.異丙醇用于沉淀RNA。（√）五、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1.簡(jiǎn)述RNA提取防RNase污染的核心措施？答：①操作戴無菌手套，避免皮膚接觸；②試劑/耗材經(jīng)DEPC處理或滅菌；③實(shí)驗(yàn)區(qū)用RNase去除劑清潔；④新鮮樣本30min內(nèi)處理，凍存樣本避免反復(fù)凍融；⑤裂解液含變性劑（如異硫氰酸胍）；⑥避免交叉污染，試劑專用；⑦電泳用無RNase緩沖液。2.硅柱法RNA提取的基本步驟？答：①樣本裂解：加變性劑裂解，釋放RNA并抑制RNase；②上柱吸附：高鹽下RNA結(jié)合硅柱；③洗滌：用洗滌液去除蛋白、DNA等雜質(zhì)；④干燥：離心除殘留洗滌液；⑤洗脫：低鹽DEPC水洗脫RNA，收集即得純化產(chǎn)物。3.如何通過瓊脂糖電泳判斷RNA完整性？答：①觀察條帶：完整RNA可見清晰28S（亮度約為18S的2倍）、18S、5S；②若28S模糊/亮度<18S，提示降解；③若只有smear無條帶，嚴(yán)重降解；④需用新鮮MOPS緩沖液、1%瓊脂糖膠，電壓5-8V/cm。4.RNA純度檢測(cè)的常用指標(biāo)及意義？答：①A260/A280：1.8-2.0為純RNA，<1.8提示蛋白/酚污染，>2.0提示DNA污染；②A260/A230：>1.8為純，<1.8提示鹽/小分子雜質(zhì)；③濃度=A260×稀釋倍數(shù)×40μg/mL，反映RNA含量。六、討論題（每題5分，共10分）1.若RNAA260/A280=1.5，可能原因及解決方法？答：原因：蛋白殘留（裂解不充分）、酚污染（抽提時(shí)觸碰有機(jī)相）、RNase降解。解決：①重新抽提時(shí)充分研磨組織；②酚氯仿抽提后小心吸取上層水相；③若酚殘留，再次氯仿抽提；④確認(rèn)耗材/試劑無RNase，戴手套操作；⑤更換新鮮樣本，避免反復(fù)凍融。2.不同樣本RNA提取的注意事項(xiàng)差異？答：①新鮮組織：快速處理，液氮研磨或直接加裂解液；②凍存組織：液氮研磨，避免融化激活RNase；③血液：加EDTA抗凝，紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞；④FFPE樣本：二甲苯脫蠟，蛋白酶K消化，用專用試劑盒，注意脫蠟徹底。---答案部分一、填空題1.RNase2.異硫氰酸胍3.蛋白質(zhì)4.5S5.Nanodrop（分光光度法）6.RIN7.DEPC8.RNA9.-8010.高鹽二、單項(xiàng)選擇題1.B2.A3.B4.A5.C6.B7.D8.B9.A10.C三