生物樣本核酸提取技術(shù)員崗位招聘考試試卷及答案一、填空題（每題1分，共10分）1.核酸提取的核心步驟包括樣本裂解、______、核酸純化和______。2.提取RNA時需避免______污染，常用抑制劑是______。3.蛋白酶K的作用是降解______，釋放核酸。4.苯酚-氯仿抽提法中，DNA主要位于______相。5.常用核酸沉淀試劑是______和異丙醇。6.組織樣本提取前常需______處理破碎細胞。7.DNA的基本組成單位是______。8.離心機轉(zhuǎn)速單位常用______（非rpm）。9.全血提取DNA前需去除______減少雜質(zhì)。10.qPCR可用于核酸的______分析。二、單項選擇題（每題2分，共20分）1.去除RNA中DNA污染的試劑是？A.RNaseAB.DNaseIC.蛋白酶KD.DEPC2.RNA樣本保存最佳溫度是？A.4℃B.-20℃C.-80℃D.室溫3.異丙醇沉淀核酸的優(yōu)點是？A.沉淀量少B.體積大C.快速沉淀D.不影響酶反應(yīng)4.需先裂解紅細胞再提DNA的樣本是？A.血清B.全血C.唾液D.組織5.蛋白酶K最適作用溫度是？A.37℃B.56℃C.65℃D.95℃6.苯酚-氯仿抽提后上層水相主要含？A.DNA/RNAB.蛋白質(zhì)C.多糖D.脂類7.核酸純度檢測常用方法是？A.電泳B.A260/A280C.比色法D.質(zhì)譜8.導(dǎo)致RNA降解的情況是？A.立即凍存B.RNase-free試劑C.戴手套D.室溫放1小時9.磁珠法提取核酸的原理是？A.核酸與磁珠特異性結(jié)合B.磁珠吸附蛋白C.磁珠溶解核酸D.磁珠沉淀雜質(zhì)10.DNA提取中加RNaseA的目的是？A.去RNA污染B.降解蛋白C.沉淀核酸D.抑制DNase三、多項選擇題（每題2分，共20分）1.核酸提取常用方法包括？A.苯酚-氯仿法B.磁珠法C.硅膠膜法D.煮沸法2.RNA提取注意事項有？A.避免RNase污染B.快速處理C.RNase-free容器D.加β-巰基乙醇3.核酸沉淀試劑有？A.無水乙醇B.異丙醇C.醋酸鈉D.氯化鈉4.組織樣本預(yù)處理步驟包括？A.研磨B.勻漿C.液氮冷凍D.過濾5.A260/A280比值異常的原因是？A.蛋白污染（<1.8）B.RNA污染（>2.0）C.多糖污染D.酚污染6.蛋白酶K的特點是？A.耐高溫B.降解多種蛋白C.需Ca2+激活D.不降解核酸7.全血裂解紅細胞的試劑是？A.ACK液B.蒸餾水C.75%乙醇D.生理鹽水8.磁珠法優(yōu)勢是？A.自動化高B.純度高C.耗時短D.成本低9.適合提取核酸的樣本是？A.新鮮組織B.凍存組織C.FFPE組織D.腐敗樣本10.核酸濃度檢測方法是？A.分光光度法B.瓊脂糖電泳C.qPCRD.比色法四、判斷題（每題2分，共20分）1.DEPC處理的水可直接溶解RNA。（）2.蛋白酶K在95℃仍有活性。（）3.苯酚-氯仿抽提后中間層是變性蛋白。（）4.異丙醇沉淀量為樣本的0.5-1倍。（）5.RNA的A260/A280正常范圍1.8-2.0。（）6.磁珠法無需離心。（）7.全血可直接提DNA無需處理紅細胞。（）8.樣本裂解越充分，核酸得率越高。（）9.DNaseI37℃作用30分鐘去DNA污染。（）10.FFPE組織需先脫蠟再提核酸。（）五、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述苯酚-氯仿法提取DNA的主要步驟。2.提取RNA時如何避免RNase污染？3.磁珠法提取核酸的基本原理是什么？4.A260/A280比值異常（<1.8或>2.0）的原因及解決方法？六、討論題（每題5分，共10分）1.全血DNA提取得率低、純度差，分析原因及改進措施。2.如何根據(jù)樣本類型（新鮮組織、FFPE、唾液）選擇核酸提取方法？---答案部分一、填空題1.蛋白去除；核酸沉淀2.RNase；DEPC（或RNA酶抑制劑）3.蛋白質(zhì)（或結(jié)合蛋白）4.水5.無水乙醇6.勻漿（或研磨）7.脫氧核苷酸8.相對離心力（g）9.紅細胞10.定量二、單項選擇題1.B2.C3.C4.B5.B6.A7.B8.D9.A10.A三、多項選擇題1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABC5.ABCD6.ABD7.AB8.ABC9.ABC10.ABCD四、判斷題1.√2.×3.√4.×5.√6.×7.×8.√9.√10.√五、簡答題1.苯酚-氯仿法提DNA步驟：①樣本裂解（加SDS+蛋白酶K，56℃孵育）；②蛋白去除（加苯酚-氯仿-異戊醇，振蕩離心取上層水相）；③重復(fù)抽提（若污染重，再用氯仿抽提）；④核酸沉淀（加2倍無水乙醇或1倍異丙醇，-20℃放置）；⑤洗滌（75%乙醇洗2次，晾干）；⑥溶解（TE緩沖液溶解保存）。2.避免RNase污染措施：①試劑用DEPC處理并滅菌；②耗材用RNase-free或DEPC處理；③戴手套、超凈臺操作；④新鮮樣本立即-80℃凍存，避免反復(fù)凍融；⑤裂解液加β-巰基乙醇、RNase抑制劑；⑥超凈臺定期用RNase去除劑擦拭。3.磁珠法原理：核酸與磁珠表面特異性基團（羧基、硅羥基等）在特定條件下結(jié)合，雜質(zhì)不結(jié)合。步驟：①裂解釋放核酸；②結(jié)合（加磁珠+結(jié)合液，調(diào)整條件使核酸吸附）；③洗滌（去除未結(jié)合雜質(zhì)）；④洗脫（調(diào)整條件使核酸解離）；⑤磁架分離磁珠，取上清得純化核酸。4.A260/A280異常原因及解決：①<1.8（蛋白污染）：重復(fù)苯酚-氯仿抽提或蛋白酶K處理；②>2.0（RNA污染/酚污染）：DNA提取得加RNaseA；酚污染則增加氯仿抽提；③多糖污染：用含醋酸鈉的乙醇洗滌。六、討論題1.全血DNA得率低、純度差的原因及改進：原因：①紅細胞未充分裂解（殘留血紅蛋白）；②裂解不充分（蛋白酶K活性不足）；③沉淀不完全（乙醇量不夠）；④洗滌不充分（殘留鹽離子）。改進：①先加ACK液裂解紅細胞，離心去上清；②調(diào)整蛋白酶K孵育條件（56℃延長至1-2小時）；③加2倍無水乙醇，-20℃放1小時；④75%乙醇洗2次，充分振蕩離心。2.不同樣本的提取方法選擇：①新鮮組織：優(yōu)先磁珠法/硅膠膜法（簡便得率高），也可用苯酚-