生物制藥層析柱裝填工藝工程師崗位招聘考試試卷及答案試題部分一、填空題（10題，每題1分）1.生物制藥中常用的層析填料類(lèi)型包括離子交換、疏水相互作用、______和凝膠過(guò)濾等。2.瓊脂糖凝膠填料的商品名通常以______開(kāi)頭（如Sepharose）。3.層析柱裝填的兩種主要方法是重力沉降法和______法。4.評(píng)價(jià)層析柱柱效的核心指標(biāo)是______（理論塔板數(shù)）。5.層析柱裝填后需用______緩沖液平衡柱床，使填料達(dá)到目標(biāo)吸附狀態(tài)。6.導(dǎo)致柱床塌陷的常見(jiàn)原因之一是______（如流速過(guò)快或緩沖液pH變化過(guò)大）。7.預(yù)裝柱的優(yōu)勢(shì)之一是______（無(wú)需現(xiàn)場(chǎng)裝填，穩(wěn)定性高）。8.裝填過(guò)程中需使用______泵控制緩沖液流速，避免壓力波動(dòng)。9.層析柱驗(yàn)證的關(guān)鍵參數(shù)包括動(dòng)態(tài)載量（DBC）、柱效和______。10.層析填料通常需在______℃避光保存，防止降解。二、單項(xiàng)選擇題（10題，每題2分）1.下列哪種填料屬于離子交換層析填料？A.SephadexG-25B.DEAE-SepharoseC.PhenylSepharoseD.ProteinASepharose2.層析柱裝填時(shí)，加壓的壓力范圍一般不超過(guò)多少M(fèi)Pa？A.0.1B.0.3C.0.5D.1.03.下列哪項(xiàng)不是層析柱裝填前的準(zhǔn)備工作？A.填料溶脹B.柱體清洗C.樣品制備D.緩沖液配制4.評(píng)價(jià)柱床均勻性的直觀方法是：A.測(cè)定理論塔板數(shù)B.觀察柱床有無(wú)溝流C.檢測(cè)動(dòng)態(tài)載量D.測(cè)量柱床高度5.動(dòng)態(tài)載量（DBC）是指：A.單位體積填料靜態(tài)結(jié)合目標(biāo)蛋白量B.單位體積填料動(dòng)態(tài)流速下結(jié)合目標(biāo)蛋白量C.填料容納的最大樣品體積D.柱床最大承受壓力6.疏水層析填料平衡時(shí)應(yīng)使用：A.低鹽緩沖液B.高鹽緩沖液C.去離子水D.有機(jī)溶液7.下列哪種情況會(huì)導(dǎo)致柱效下降？A.柱床高度均勻B.流速穩(wěn)定C.填料顆粒破碎D.平衡充分8.預(yù)裝柱的使用壽命一般受限于：A.填料再生次數(shù)B.柱體材質(zhì)C.緩沖液pHD.環(huán)境溫度9.離子交換層析中，緩沖液pH應(yīng)：A.與目標(biāo)蛋白等電點(diǎn)一致B.高于等電點(diǎn)2個(gè)單位C.低于等電點(diǎn)2個(gè)單位D.無(wú)特定要求10.層析柱裝填后若柱床有氣泡，應(yīng)采取的措施是：A.直接使用B.反向沖洗C.增加流速D.更換填料三、多項(xiàng)選擇題（10題，每題2分）1.影響層析柱柱效的因素包括：A.填料顆粒大小B.柱床高度C.流速D.緩沖液粘度2.層析柱裝填常見(jiàn)缺陷有：A.柱床塌陷B.溝流C.氣泡殘留D.填料流失3.層析柱驗(yàn)證需檢測(cè)的項(xiàng)目包括：A.柱效（N）B.動(dòng)態(tài)載量（DBC）C.分離度（R）D.填料純度4.填料再生的常用試劑包括：A.NaOH溶液B.鹽酸胍C.乙醇D.去離子水5.層析柱維護(hù)的要點(diǎn)包括：A.避免壓力波動(dòng)B.定期再生填料C.防止微生物污染D.保存時(shí)填充緩沖液6.重力沉降法裝填的適用場(chǎng)景是：A.小體積填料B.低粘度緩沖液C.大柱徑層析柱D.高流速需求7.親和層析填料的特點(diǎn)包括：A.特異性結(jié)合目標(biāo)蛋白B.需配體偶聯(lián)C.載量較高D.再生簡(jiǎn)單8.裝填過(guò)程中需注意的事項(xiàng)有：A.避免填料干涸B.控制壓力穩(wěn)定C.檢查無(wú)氣泡D.柱體垂直放置9.離子交換層析填料選擇的依據(jù)包括：A.目標(biāo)蛋白電荷性質(zhì)B.緩沖液pHC.目標(biāo)蛋白濃度D.填料孔徑10.層析柱裝填后平衡的目的是：A.去除填料殘留溶劑B.使填料達(dá)到吸附平衡C.檢測(cè)柱效D.防止樣品降解四、判斷題（10題，每題2分）1.重力裝填比加壓裝填更適合大體積層析柱。（）2.柱效（N）越高，層析柱分離效果越好。（）3.填料裝填后若暫時(shí)不用，可直接保存于室溫。（）4.平衡緩沖液的pH和離子強(qiáng)度需與樣品一致。（）5.柱床塌陷的唯一原因是流速過(guò)快。（）6.預(yù)裝柱無(wú)需進(jìn)行柱效驗(yàn)證即可直接使用。（）7.動(dòng)態(tài)載量（DBC）比靜態(tài)載量更具生產(chǎn)指導(dǎo)價(jià)值。（）8.裝填過(guò)程中若出現(xiàn)氣泡，應(yīng)立即反向沖洗。（）9.疏水層析填料需用高鹽緩沖液平衡，低鹽洗脫。（）10.所有層析填料均可使用NaOH溶液再生。（）五、簡(jiǎn)答題（4題，每題5分）1.簡(jiǎn)述層析柱裝填的基本步驟。2.如何判斷層析柱裝填是否合格？3.層析柱裝填常見(jiàn)缺陷及解決方法。4.簡(jiǎn)述動(dòng)態(tài)載量（DBC）的定義及測(cè)定意義。六、討論題（2題，每題5分）1.比較重力裝填與加壓裝填的適用場(chǎng)景及優(yōu)缺點(diǎn)。2.如何根據(jù)目標(biāo)蛋白特性選擇合適的層析填料及裝填參數(shù)？---答案部分一、填空題答案1.親和層析2.Seph-3.加壓裝填4.N5.目標(biāo)（或平衡）6.流速過(guò)快（或緩沖液pH突變）7.無(wú)需現(xiàn)場(chǎng)裝填8.蠕動(dòng)9.分離度（R）10.4二、單項(xiàng)選擇題答案1.B2.B3.C4.B5.B6.B7.C8.A9.A10.B三、多項(xiàng)選擇題答案1.ABCD2.ABCD3.ABC4.ABC5.ABCD6.AB7.ABC8.ABCD9.ABD10.AB四、判斷題答案1.×2.√3.×4.√5.×6.×7.√8.√9.√10.×五、簡(jiǎn)答題答案1.①填料預(yù)處理：溶脹、清洗雜質(zhì)；②柱體準(zhǔn)備：清洗、安裝篩網(wǎng)、垂直固定；③裝填：重力/加壓法加入填料懸液；④柱床穩(wěn)定：沖洗至高度穩(wěn)定；⑤平衡：用目標(biāo)緩沖液沖洗至吸附平衡；⑥驗(yàn)證：檢測(cè)柱效、DBC等。2.①柱效：N≥說(shuō)明書(shū)要求（如≥1000/10cm柱高）；②柱床：無(wú)塌陷、溝流、氣泡，表面平整；③DBC：符合工藝要求（如≥50mg/mL）；④壓力穩(wěn)定：流速下無(wú)波動(dòng)；⑤分離度：目標(biāo)蛋白與雜質(zhì)R≥1.5。3.①塌陷：降流速、調(diào)緩沖液、重新裝填；②溝流：重新裝填（均勻懸液、柱垂直）；③氣泡：反向沖洗；④流失：換合適篩網(wǎng)、控壓力；⑤壓力高：降流速、換填料。4.定義：?jiǎn)挝惑w積填料在動(dòng)態(tài)流速下結(jié)合目標(biāo)蛋白的最大量（mg/mL）。意義：反映實(shí)際載量，指導(dǎo)填料體積計(jì)算，評(píng)估再生效果，驗(yàn)證工藝穩(wěn)定性。六、討論題答案1.重力裝填：適用小柱（<100mL）、低粘度；優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、壓力穩(wěn)；缺點(diǎn)：耗時(shí)、大柱不均。加壓裝填：適用大柱（>100mL）、高粘度；優(yōu)點(diǎn)：速度快、柱床勻；缺點(diǎn)