生物制藥純化工藝工程師崗位招聘考試試卷及答案一、填空題（共10題，每題1分）1.生物制藥純化中最常用的層析技術(shù)包括親和層析、______、離子交換層析和疏水相互作用層析。2.GMP的核心是______。3.超濾技術(shù)在純化中主要用于______和脫鹽濃縮。4.單抗親和層析常用配體有ProteinA、______等。5.關(guān)鍵工藝參數(shù)（CPP）是影響______的參數(shù)。6.病毒滅活常用方法有低pH孵放、______和溶劑/去污劑法。7.層析柱裝填關(guān)鍵指標(biāo)是柱效和______。8.蛋白純度檢測常用SDS、______和HPLC。9.超濾膜截留分子量（MWCO）基于目標(biāo)蛋白與雜質(zhì)的______差異。10.樣品上柱前需______去除不溶性顆粒。答案：1.凝膠過濾層析（分子篩層析）2.防止污染、交叉污染、混淆和差錯3.蛋白分離（分子量截留分離）4.抗原（特定抗體）5.關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）6.巴氏消毒法7.對稱性（拖尾因子）8.毛細(xì)管電泳（CE）9.分子量10.過濾（離心）二、單項選擇題（共10題，每題2分）1.可用于去除內(nèi)毒素的層析技術(shù)是？A.親和層析B.離子交換層析C.凝膠過濾D.疏水層析2.GMP驗證“三要素”不包括？A.工藝B.設(shè)備C.人員D.物料3.ProteinA親和層析洗脫單抗的條件是？A.高鹽B.低pHC.高pHD.有機溶劑4.超濾TMP過高會導(dǎo)致？A.膜污染加重B.回收率提高C.通量增加D.雜質(zhì)去除率提高5.屬于病毒去除工藝的是？A.低pH孵放B.納濾C.巴氏消毒D.以上都是6.回收率計算公式是？A.（最終目標(biāo)蛋白量/初始量）×100%B.（雜質(zhì)最終量/初始量）×100%C.目標(biāo)蛋白/雜質(zhì)×100%D.以上都不對7.凝膠過濾中，分子量小的物質(zhì)洗脫體積？A.大B.小C.相同D.不確定8.屬于CQA的是？A.蛋白純度B.層析柱裝填時間C.超濾通量D.上樣速度9.常用脫鹽方法是？A.透析B.凝膠過濾C.離子交換D.以上都是10.設(shè)備最難清潔的部位是？A.表面B.管道死角C.閥門D.過濾器答案：1.B2.C3.B4.A5.B6.A7.A8.A9.D10.B三、多項選擇題（共10題，每題2分）1.親和層析組成包括？A.載體B.配體C.樣品D.洗脫液2.純化常見雜質(zhì)有？A.HCPB.HCDC.內(nèi)毒素D.蛋白聚體3.GMP要求純化文件包括？A.工藝規(guī)程B.驗證方案C.操作SOPD.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)4.超濾膜污染類型有？A.吸附污染B.濃差極化C.生物污染D.機械污染5.單抗純化主要步驟包括？A.捕獲層析B.精細(xì)層析C.病毒滅活/去除D.超濾濃縮6.層析柱裝填評價指標(biāo)有？A.理論塔板數(shù)B.拖尾因子C.柱壓D.回收率7.病毒驗證需考慮？A.滅活效率B.蛋白活性C.工藝穩(wěn)定性D.設(shè)備兼容性8.蛋白復(fù)性方法有？A.稀釋復(fù)性B.透析復(fù)性C.柱上復(fù)性D.以上都是9.HCP檢測常用方法？A.ELISAB.WesternBlotC.HPLCD.毛細(xì)管電泳10.屬于CPP的是？A.層析流速B.低pH孵放時間C.超濾TMPD.上樣量答案：1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.ABC7.ABCD8.ABCD9.AB10.ABCD四、判斷題（共10題，每題2分）1.凝膠過濾可用于蛋白分子量測定。2.親和層析配體與目標(biāo)蛋白結(jié)合不可逆。3.GMP要求純化工藝全生命周期驗證。4.超濾通量隨TMP線性增加。5.病毒滅活與去除是同一概念。6.層析柱效越高越好。7.凝膠過濾可有效去除內(nèi)毒素。8.驗證需確認(rèn)CPP可接受范圍。9.疏水層析可去除蛋白聚體。10.清潔驗證殘留限度基于安全劑量。答案：1.對2.錯3.對4.錯5.錯6.對7.錯8.對9.對10.對五、簡答題（共4題，每題5分）1.簡述ProteinA親和層析在單抗純化中的作用及關(guān)鍵步驟。答案：ProteinA親和層析是單抗捕獲核心，利用ProteinA與Fc段特異性結(jié)合富集目標(biāo)蛋白。關(guān)鍵步驟：①柱平衡：用PBS等緩沖液平衡至基線穩(wěn)定；②上樣：澄清后的細(xì)胞培養(yǎng)液以上樣流速上柱；③洗滌：用平衡緩沖液（或含低濃度鹽/表面活性劑）洗去未結(jié)合雜質(zhì)；④洗脫：低pH緩沖液（如0.1M檸檬酸，pH3.0-3.5）洗脫；⑤中和：洗脫液立即調(diào)至中性防變性；⑥柱再生：NaOH或高鹽緩沖液再生柱，恢復(fù)結(jié)合能力。2.什么是CQA？列舉單抗純化3個CQA。答案：CQA是影響藥品安全有效性的屬性，超出范圍則質(zhì)量不合格。單抗純化CQA包括：①純度：單體純度≥95%，聚體/碎片含量；②雜質(zhì)殘留：HCP≤100ppm、HCD≤10pg/劑量、內(nèi)毒素≤0.5EU/劑量；③生物活性：單抗與抗原結(jié)合活性符合標(biāo)準(zhǔn)；④回收率：目標(biāo)蛋白回收率滿足經(jīng)濟性要求。3.簡述超濾在純化中的應(yīng)用及注意事項。答案：超濾基于分子量截留，應(yīng)用：①濃縮目標(biāo)蛋白；②脫鹽/緩沖液置換；③澄清不溶性顆粒。注意事項：①膜選擇：選目標(biāo)蛋白分子量1/3-1/2的MWCO膜；②TMP控制：10-30psi，避免過高導(dǎo)致污染/變性；③通量維護(hù)：定期反沖洗/化學(xué)清洗；④回收率：避免過度濃縮導(dǎo)致聚集；⑤無菌要求：無菌制品需用無菌膜，操作在無菌環(huán)境。4.簡述純化工藝驗證的內(nèi)容及目的。答案：驗證是證明工藝穩(wěn)定生產(chǎn)合格產(chǎn)品的過程，內(nèi)容：①工藝設(shè)計：確定CPP、CQA及范圍；②PPQ：連續(xù)3批驗證工藝穩(wěn)定性；③清潔驗證：確認(rèn)設(shè)備殘留符合限度；④病毒驗證：證明滅活/去除有效性。目的：①確保工藝可控、產(chǎn)品質(zhì)量一致；②符合GMP要求支持上市；③降低生產(chǎn)風(fēng)險；④明確參數(shù)范圍指導(dǎo)生產(chǎn)。六、討論題（共2題，每題5分）1.如何有效控制HCP殘留？答案：控制HCP需多環(huán)節(jié)優(yōu)化：①捕獲層析：用高特異性配體（ProteinA），優(yōu)化洗滌緩沖液（含鹽/表面活性劑）去除弱結(jié)合HCP；②精細(xì)層析：離子交換/疏水層析利用電荷/疏水性差異分離；③參數(shù)優(yōu)化：調(diào)整上樣量、流速、洗滌次數(shù)提高去除效率；④質(zhì)量控制：ELISA實時監(jiān)測殘留；⑤源頭控制：優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)減少初始HCP含量；⑥病毒步驟：低pH孵放輔助去除部分HCP。2.蛋白回收率低如何排查？答案：從上下游逐一排查：①上游：細(xì)胞上清是否澄清（過濾/離心不徹底）、表達(dá)量是否穩(wěn)定；②捕獲層析：配體結(jié)合能力下降（再生