生物制藥純化工藝優(yōu)化工程師崗位招聘考試試卷及答案生物制藥純化工藝優(yōu)化工程師崗位招聘考試試卷一、填空題（每題1分，共10分）1.抗體純化常用的親和層析配體是______。2.目標蛋白帶正電時，應(yīng)選擇______型離子交換柱。3.除菌過濾常用濾膜孔徑為______μm。4.凝膠過濾層析（SEC）分離依據(jù)是蛋白______。5.低pH處理屬于______（物理/化學）病毒滅活方法。6.HPLC分析蛋白純度常用______檢測器。7.凍干工藝中，冰晶升華的步驟是______。8.超濾膜截留分子量（MWCO）單位通常是______。9.層析柱裝填后需驗證______（如柱效）。10.離子交換層析中，高鹽濃度洗脫的原理是______。二、單項選擇題（每題2分，共20分）1.下列不屬于層析技術(shù)的是：A.親和層析B.離子交換層析C.電泳D.凝膠過濾2.緩沖液配制應(yīng)使用：A.自來水B.超純水C.蒸餾水D.礦泉水3.抗體純化第一步通常是：A.ProteinA層析B.澄清過濾C.超濾濃縮D.離子交換4.凍干預(yù)凍的核心目的是：A.滅活病毒B.形成冰晶C.去除水分D.提高純度5.超濾跨膜壓力（TMP）安全范圍是：A.<0.1barB.0.1-1barC.1-5barD.>5bar6.凝膠過濾中分子量最大的蛋白：A.最先洗脫B.最后洗脫C.無法通過D.與流速無關(guān)7.屬于物理病毒滅活的是：A.低pHB.巴氏消毒C.表面活性劑D.超濾8.HPLC分析蛋白濃度常用：A.蒸發(fā)光散射B.UV-VisC.熒光D.質(zhì)譜9.反向?qū)游龉潭ㄏ嗍牵篈.極性B.非極性C.中性D.離子型10.層析柱清洗不包括：A.去除殘留蛋白B.恢復(fù)柱效C.改變配體特性D.滅活微生物三、多項選擇題（每題2分，共20分，多選/少選不得分）1.影響離子交換分辨率的因素：A.緩沖液pHB.鹽濃度C.流速D.柱高2.純化工藝驗證內(nèi)容：A.重復(fù)性B.病毒去除率C.蛋白純度D.回收率3.病毒去除常用方法：A.超濾B.低pHC.巴氏消毒D.陰離子交換4.凍干優(yōu)化參數(shù)：A.預(yù)凍溫度B.升華溫度C.解析溫度D.樣品濃度5.超濾優(yōu)化要點：A.MWCO選擇B.流速C.壓力D.緩沖液pH6.親和層析優(yōu)點：A.特異性高B.回收率高C.步驟少D.成本低7.反向?qū)游鲞m合分離：A.疏水性蛋白片段B.極性小分子C.核酸D.親水性蛋白8.緩沖液配制注意事項：A.準確稱量B.pH調(diào)節(jié)C.過濾除菌D.避光9.層析柱清洗試劑：A.NaOHB.鹽酸胍C.乙醇D.去離子水10.ProteinA層析注意事項：A.控制上樣量B.優(yōu)化洗脫pHC.防蛋白聚集D.定期再生四、判斷題（每題2分，共20分，√/×）1.ProteinA僅結(jié)合IgG的Fc段。（）2.離子交換中，蛋白pI越接近緩沖液pH，結(jié)合越強。（）3.SEC可測定蛋白分子量。（）4.預(yù)凍溫度越低，凍干速度越快。（）5.MWCO越小，截留效果越好。（）6.病毒滅活需無菌環(huán)境。（）7.HPLC可分析蛋白純度。（）8.反向?qū)游隽鲃酉酁榉菢O性。（）9.層析柱用后可直接封存。（）10.低pH滅活適用于多數(shù)蛋白。（）五、簡答題（每題5分，共20分，≤200字）1.簡述離子交換層析原理及核心步驟。2.ProteinA親和層析的關(guān)鍵優(yōu)化參數(shù)。3.凍干工藝主要步驟及目的。4.病毒去除/滅活常用方法及驗證要求。六、討論題（每題5分，共10分，≤200字）1.重組蛋白回收率僅30%，分析原因并提優(yōu)化方案。2.如何延長ProteinA層析柱使用壽命？---答案一、填空題答案1.ProteinA（或ProteinG）2.陽離子3.0.224.分子量（或Stokes半徑）5.化學6.UV-Vis（紫外）7.升華8.kDa（道爾頓）9.柱效10.競爭離子交換位點二、單項選擇題答案1.C2.B3.B4.B5.B6.A7.B8.B9.B10.C三、多項選擇題答案1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.ABC7.AB8.ABCD9.ABCD10.ABCD四、判斷題答案1.×2.×3.√4.×5.×6.√7.√8.×9.×10.√五、簡答題答案1.原理：利用蛋白帶電性差異，與離子交換樹脂可逆結(jié)合，通過鹽濃度/pH變化洗脫目標蛋白。步驟：①樹脂平衡；②上樣結(jié)合；③低鹽洗雜；④高鹽/變pH洗脫；⑤樹脂再生。2.①上樣量：≤樹脂飽和容量的80%；②緩沖液pH：上樣中性（pH7.0），洗脫低pH（3.0-4.0）；③流速：0.5-1.0mL/min；④洗脫體積：確保完全洗脫；⑤再生：0.1-0.5MNaOH清洗。3.①預(yù)凍：-40℃以下形成冰晶，避免蛋白變性；②升華：低溫低壓下冰晶直接升華（去游離水）；③解析干燥：20-40℃去除結(jié)合水，提高穩(wěn)定性。4.方法：物理（超濾、巴氏消毒）、化學（低pH、表面活性劑）、層析（陰離子交換）。驗證：病毒去除率≥10?log10，工藝兼容性（不影響蛋白活性），重復(fù)性，無病毒殘留。六、討論題答案1.原因：①蛋白聚集（緩沖液pH不當）；②柱過載；③洗脫不充分；④超濾MWCO過大。優(yōu)化：①調(diào)整上樣pH遠離pI，加表面活性劑防聚集；②降低上樣量；③優(yōu)化洗脫pH/鹽濃度；④選擇MWCO略