慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響及機(jī)制探究：基于海馬神經(jīng)分子與神經(jīng)可塑性的研究一、引言1.1研究背景在當(dāng)今快節(jié)奏的現(xiàn)代社會中，慢性應(yīng)激已然成為一種極為普遍的現(xiàn)象，其對人類健康的不良影響愈發(fā)凸顯，嚴(yán)重威脅著人們的身心健康。所謂慢性應(yīng)激，是指機(jī)體在長期持續(xù)的壓力刺激下所產(chǎn)生的非特異性反應(yīng)。這些壓力源涵蓋生活、工作、學(xué)習(xí)等多個方面，如長期的工作壓力、人際關(guān)系緊張、經(jīng)濟(jì)困難、學(xué)業(yè)負(fù)擔(dān)過重等。長期處于慢性應(yīng)激狀態(tài)下，人體的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)以及心血管系統(tǒng)等都會受到不同程度的影響，進(jìn)而誘發(fā)多種軀體和精神疾病，如高血壓、糖尿病、心血管疾病、抑郁癥、焦慮癥等。學(xué)習(xí)記憶能力作為人類認(rèn)知功能的核心組成部分，對個體的生存與發(fā)展起著舉足輕重的作用。從日常生活中的衣食住行，到工作學(xué)習(xí)中的知識獲取、技能掌握以及問題解決，無一不需要學(xué)習(xí)記憶能力的參與。良好的學(xué)習(xí)記憶能力能夠幫助人們更好地適應(yīng)環(huán)境變化、積累經(jīng)驗、提升自身素質(zhì)，從而在社會競爭中占據(jù)優(yōu)勢。然而，慢性應(yīng)激卻如同隱藏在暗處的“殺手”，悄然對學(xué)習(xí)記憶能力造成損害，導(dǎo)致記憶力減退、學(xué)習(xí)效率降低、注意力不集中等問題，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量和工作學(xué)習(xí)表現(xiàn)。在基礎(chǔ)研究領(lǐng)域，由于大鼠的生理結(jié)構(gòu)和神經(jīng)生物學(xué)特性與人類具有一定的相似性，且其繁殖周期短、飼養(yǎng)成本低、實驗操作相對簡便，因此大鼠成為了研究慢性應(yīng)激對學(xué)習(xí)記憶影響機(jī)制的理想動物模型。通過對大鼠進(jìn)行慢性應(yīng)激處理，模擬人類在現(xiàn)實生活中面臨的長期壓力情境，能夠深入探究慢性應(yīng)激在細(xì)胞、分子、神經(jīng)環(huán)路等多個層面上對空間學(xué)習(xí)記憶產(chǎn)生影響的具體機(jī)制，為揭示慢性應(yīng)激相關(guān)認(rèn)知障礙的發(fā)病機(jī)制提供關(guān)鍵線索。綜上所述，深入研究慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響機(jī)制具有重要的現(xiàn)實意義和理論價值。它不僅能夠為臨床上治療慢性應(yīng)激相關(guān)的認(rèn)知功能障礙提供堅實的理論依據(jù)和潛在的治療靶點(diǎn)，還能為改善人類的認(rèn)知健康、提高生活質(zhì)量提供新的思路和方法，幫助人們更好地應(yīng)對慢性應(yīng)激帶來的挑戰(zhàn)，預(yù)防和治療相關(guān)疾病，具有廣闊的應(yīng)用前景和社會效益。1.2研究目的與意義本研究旨在深入揭示慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶影響的內(nèi)在機(jī)制。通過構(gòu)建科學(xué)合理的慢性應(yīng)激大鼠模型，運(yùn)用行為學(xué)測試、神經(jīng)生物學(xué)檢測等多種先進(jìn)技術(shù)手段，從神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)可塑性、信號通路等多個層面，系統(tǒng)分析慢性應(yīng)激作用下大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的變化情況，以及大腦相關(guān)區(qū)域在結(jié)構(gòu)和功能上的改變，明確關(guān)鍵的影響因素和作用環(huán)節(jié)，為深入理解慢性應(yīng)激相關(guān)認(rèn)知障礙的發(fā)病機(jī)制提供重要的實驗依據(jù)。慢性應(yīng)激對人類認(rèn)知功能的負(fù)面影響不容忽視，其引發(fā)的認(rèn)知障礙給患者的生活和社會帶來了沉重負(fù)擔(dān)。深入探究慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶影響的機(jī)制，具有重要的理論和現(xiàn)實意義。在理論層面，有助于深化對學(xué)習(xí)記憶神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制的理解，豐富和完善慢性應(yīng)激相關(guān)的神經(jīng)科學(xué)理論體系，為進(jìn)一步探索大腦的認(rèn)知功能提供新的視角和思路。在現(xiàn)實應(yīng)用中，為臨床上治療慢性應(yīng)激相關(guān)的認(rèn)知功能障礙提供了堅實的理論基礎(chǔ)和潛在的治療靶點(diǎn)。這不僅能夠幫助醫(yī)生更準(zhǔn)確地診斷和治療此類疾病，還能為研發(fā)新型治療藥物和干預(yù)措施提供方向，提高治療效果，改善患者的生活質(zhì)量。此外，本研究成果還有助于推動相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展，如心理學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、醫(yī)學(xué)等，促進(jìn)多學(xué)科之間的交叉融合，為解決其他與認(rèn)知功能相關(guān)的問題提供借鑒和啟示。1.3國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在慢性應(yīng)激與學(xué)習(xí)記憶領(lǐng)域，國內(nèi)外學(xué)者已開展了大量研究，并取得了一系列重要成果。國外方面，早在20世紀(jì)70年代，就有研究關(guān)注到應(yīng)激對動物行為的影響。此后，隨著神經(jīng)科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，研究逐漸深入到細(xì)胞和分子層面。例如，有研究通過構(gòu)建慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激（CUMS）大鼠模型，發(fā)現(xiàn)慢性應(yīng)激會導(dǎo)致大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元萎縮，突觸數(shù)量減少，進(jìn)而損害空間學(xué)習(xí)記憶能力。進(jìn)一步的分子機(jī)制研究表明，慢性應(yīng)激可引起海馬區(qū)神經(jīng)遞質(zhì)如谷氨酸、γ-氨基丁酸等失衡，干擾神經(jīng)信號傳遞，影響學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的長時程增強(qiáng)（LTP）和長時程抑制（LTD）過程。在信號通路方面，絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號通路等被發(fā)現(xiàn)參與了慢性應(yīng)激對學(xué)習(xí)記憶的調(diào)控過程。此外，國外研究還涉及慢性應(yīng)激與其他因素如基因、環(huán)境等的交互作用對學(xué)習(xí)記憶的影響。國內(nèi)學(xué)者在該領(lǐng)域也做出了重要貢獻(xiàn)。研究內(nèi)容涵蓋慢性應(yīng)激模型的優(yōu)化、中藥及天然產(chǎn)物對慢性應(yīng)激所致學(xué)習(xí)記憶障礙的干預(yù)作用及機(jī)制等多個方面。在模型構(gòu)建上，除了借鑒國外經(jīng)典的CUMS模型外，還結(jié)合中醫(yī)理論，建立了如慢性束縛應(yīng)激、勞倦過度應(yīng)激等具有中醫(yī)特色的動物模型，為從中醫(yī)角度研究慢性應(yīng)激對學(xué)習(xí)記憶的影響提供了有力工具。在干預(yù)研究中，眾多研究表明，中藥復(fù)方如逍遙散、歸脾湯等以及天然產(chǎn)物如葛根素、人參皂苷等能夠改善慢性應(yīng)激大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，其作用機(jī)制與調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)水平、抗氧化應(yīng)激、抑制神經(jīng)炎癥、促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化等有關(guān)。同時，國內(nèi)研究還注重從整體觀念出發(fā)，探討心理干預(yù)、運(yùn)動干預(yù)等綜合措施對慢性應(yīng)激相關(guān)學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用，為臨床防治提供了新思路。然而，當(dāng)前研究仍存在一些不足之處。首先，雖然對慢性應(yīng)激影響學(xué)習(xí)記憶的機(jī)制有了一定認(rèn)識，但不同機(jī)制之間的相互聯(lián)系和協(xié)同作用尚未完全闡明，尤其是神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)可塑性和信號通路等多個層面之間的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)關(guān)系仍有待深入研究。其次，現(xiàn)有的研究多集中在單一因素對慢性應(yīng)激所致學(xué)習(xí)記憶障礙的影響，而現(xiàn)實生活中慢性應(yīng)激往往是多種因素共同作用的結(jié)果，因此多因素交互作用下的研究相對匱乏。此外，目前的動物模型雖然能夠在一定程度上模擬人類慢性應(yīng)激狀態(tài)，但與真實情況仍存在差異，如何進(jìn)一步優(yōu)化動物模型，使其更準(zhǔn)確地反映人類慢性應(yīng)激的病理生理過程，也是需要解決的問題之一。最后，針對慢性應(yīng)激相關(guān)學(xué)習(xí)記憶障礙的治療方法，目前仍以藥物治療為主，且部分藥物存在副作用大、療效不理想等問題，因此開發(fā)安全有效的新型治療策略迫在眉睫。本研究將在現(xiàn)有研究基礎(chǔ)上，深入探討慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響機(jī)制，通過多層面、多角度的研究，揭示慢性應(yīng)激作用下神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)可塑性及信號通路之間的內(nèi)在聯(lián)系，為解決當(dāng)前研究的不足提供新的思路和方法，具有一定的創(chuàng)新性和重要的研究價值。二、慢性應(yīng)激與大鼠空間學(xué)習(xí)記憶相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1慢性應(yīng)激概述2.1.1慢性應(yīng)激的定義與特點(diǎn)慢性應(yīng)激在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域被視作長期應(yīng)激，是指個體在長時間內(nèi)持續(xù)暴露于應(yīng)激源之下，進(jìn)而引發(fā)的身體和心理層面的持續(xù)性反應(yīng)。與急性應(yīng)激不同，急性應(yīng)激往往是由突發(fā)的、強(qiáng)烈的刺激所引發(fā)，其作用時間短暫，如遭遇突發(fā)的自然災(zāi)害、意外事故等，人體會在短時間內(nèi)產(chǎn)生心跳加速、呼吸急促、血壓升高等強(qiáng)烈的生理反應(yīng)，以及恐懼、焦慮等情緒反應(yīng)，但這些反應(yīng)通常會隨著應(yīng)激源的消失而迅速緩解。而慢性應(yīng)激的刺激源長期存在，其作用過程呈現(xiàn)出長期性、持續(xù)性和漸進(jìn)性的特點(diǎn)。從長期性來看，慢性應(yīng)激的影響可能持續(xù)數(shù)周、數(shù)月甚至數(shù)年之久。以長期處于高壓力工作環(huán)境中的人群為例，他們每天面臨著繁重的工作任務(wù)、緊迫的時間期限以及激烈的職場競爭，這種工作壓力會日復(fù)一日地持續(xù)作用于他們身上，長期累積，難以在短期內(nèi)得到有效緩解。持續(xù)性則體現(xiàn)在慢性應(yīng)激對個體的影響是不間斷的，應(yīng)激源始終對個體的身心狀態(tài)產(chǎn)生作用，使得個體持續(xù)處于應(yīng)激狀態(tài)之中。例如，長期遭受慢性疾病困擾的患者，疾病所帶來的身體不適、治療過程的痛苦以及對健康狀況的擔(dān)憂，會時刻影響著他們的心理和生理狀態(tài)，這種影響貫穿于疾病治療的整個過程，不會因為時間的推移而自動停止。漸進(jìn)性表現(xiàn)為慢性應(yīng)激對個體的影響是逐漸加深的，隨著時間的延長，應(yīng)激源對個體身心的損害不斷累積，最終可能導(dǎo)致嚴(yán)重的身心疾病。最初，個體可能只是出現(xiàn)一些輕微的癥狀，如疲勞、失眠、情緒波動等，但隨著慢性應(yīng)激的持續(xù)，這些癥狀會逐漸加重，進(jìn)而引發(fā)更為嚴(yán)重的問題，如抑郁癥、焦慮癥、高血壓、糖尿病等。慢性應(yīng)激對個體的影響更為深遠(yuǎn)，它不僅會對個體的心理狀態(tài)造成負(fù)面影響，導(dǎo)致情緒障礙、認(rèn)知功能下降等問題，還會對身體的各個生理系統(tǒng)產(chǎn)生不良影響，增加患病風(fēng)險，嚴(yán)重威脅個體的身心健康和生活質(zhì)量。了解慢性應(yīng)激的定義與特點(diǎn)，有助于深入認(rèn)識其對機(jī)體的危害，為后續(xù)研究慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響機(jī)制奠定基礎(chǔ)。2.1.2慢性應(yīng)激的發(fā)生機(jī)制慢性應(yīng)激的發(fā)生是一個涉及神經(jīng)內(nèi)分泌、神經(jīng)遞質(zhì)、免疫等多個系統(tǒng)復(fù)雜交互作用的過程。在神經(jīng)內(nèi)分泌方面，下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸在慢性應(yīng)激反應(yīng)中起著核心作用。當(dāng)機(jī)體感知到應(yīng)激源時，下丘腦室旁核分泌促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH），CRH刺激垂體前葉釋放促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH），ACTH進(jìn)而作用于腎上腺皮質(zhì)，促使其分泌糖皮質(zhì)激素（GC）。在急性應(yīng)激時，GC的分泌增加有助于機(jī)體應(yīng)對緊急情況，如提高血糖水平為機(jī)體提供能量、增強(qiáng)心血管功能等。然而，在慢性應(yīng)激狀態(tài)下，HPA軸持續(xù)被激活，GC持續(xù)高水平分泌。長期高濃度的GC會對機(jī)體產(chǎn)生一系列不良影響，它可以通過負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制抑制下丘腦和垂體的功能，導(dǎo)致HPA軸功能紊亂。GC還會對大腦中的多個區(qū)域產(chǎn)生影響，如海馬、前額葉皮質(zhì)等，抑制神經(jīng)發(fā)生，導(dǎo)致神經(jīng)元萎縮、凋亡，破壞神經(jīng)環(huán)路的正常功能，進(jìn)而影響學(xué)習(xí)記憶、情緒調(diào)節(jié)等認(rèn)知和心理功能。神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)在慢性應(yīng)激的發(fā)生發(fā)展中也扮演著重要角色。多巴胺（DA）、5-羥色胺（5-HT）、γ-氨基丁酸（GABA）等神經(jīng)遞質(zhì)的失衡與慢性應(yīng)激密切相關(guān)。慢性應(yīng)激會導(dǎo)致中腦邊緣多巴胺系統(tǒng)功能異常，使DA的合成、釋放和代謝發(fā)生改變，影響?yīng)勝p機(jī)制和動機(jī)行為，導(dǎo)致個體出現(xiàn)快感缺失、興趣減退等癥狀。5-HT作為一種重要的神經(jīng)調(diào)質(zhì)，參與調(diào)節(jié)情緒、睡眠、食欲等多種生理心理過程。慢性應(yīng)激會使5-HT水平降低，其受體功能也會發(fā)生改變，從而引發(fā)焦慮、抑郁等情緒障礙。GABA是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，慢性應(yīng)激可導(dǎo)致GABA能神經(jīng)元功能受損，使GABA的釋放減少，抑制性神經(jīng)傳遞減弱，導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性增高，引發(fā)焦慮、緊張等情緒反應(yīng)。免疫系統(tǒng)在慢性應(yīng)激過程中也會發(fā)生顯著變化。慢性應(yīng)激會導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂，一方面，應(yīng)激引起的HPA軸激活和交感神經(jīng)系統(tǒng)興奮會釋放大量的GC和兒茶酚胺等激素，這些激素可以抑制免疫細(xì)胞的活性，降低機(jī)體的免疫防御能力，使個體更容易受到病原體的侵襲，增加感染性疾病的發(fā)生風(fēng)險。另一方面，慢性應(yīng)激還會誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，使機(jī)體產(chǎn)生大量的炎癥因子，如白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等。這些炎癥因子不僅會對免疫系統(tǒng)本身產(chǎn)生影響，還會通過血液循環(huán)進(jìn)入大腦，作用于神經(jīng)細(xì)胞，影響神經(jīng)遞質(zhì)的代謝和神經(jīng)可塑性，進(jìn)而對學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能造成損害。此外，炎癥反應(yīng)還會與神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)和神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)相互作用，形成惡性循環(huán)，進(jìn)一步加重慢性應(yīng)激對機(jī)體的損害。2.1.3慢性應(yīng)激的常見應(yīng)激源在日常生活中，存在著眾多可能導(dǎo)致慢性應(yīng)激的應(yīng)激源，這些應(yīng)激源廣泛涉及工作、家庭、人際關(guān)系、經(jīng)濟(jì)等多個方面，對個體的身心健康產(chǎn)生著深遠(yuǎn)的影響。工作相關(guān)的應(yīng)激源是較為常見的一類，長期從事高強(qiáng)度、高壓力的工作，如長時間加班、承擔(dān)過重的工作任務(wù)、面臨嚴(yán)格的工作考核和職業(yè)晉升壓力等，都可能使個體處于慢性應(yīng)激狀態(tài)。在一些競爭激烈的行業(yè)，員工常常需要長時間連續(xù)工作，精神高度緊張，不僅身體疲勞，心理上也承受著巨大的壓力，長期如此，容易引發(fā)慢性應(yīng)激反應(yīng)。工作環(huán)境的不良因素，如噪音、高溫、低溫、高輻射等，以及工作中的人際關(guān)系緊張，與同事、領(lǐng)導(dǎo)之間存在矛盾沖突等，也會成為慢性應(yīng)激的來源。家庭方面，諸多因素也可導(dǎo)致慢性應(yīng)激。夫妻關(guān)系不和諧，頻繁的爭吵、冷戰(zhàn)，或者面臨離婚等婚姻危機(jī)，會給個體帶來極大的心理壓力。子女的教育問題，如子女學(xué)習(xí)成績不佳、行為問題、親子關(guān)系緊張等，也是許多家長面臨的困擾，長期為子女的事情操心焦慮，容易引發(fā)慢性應(yīng)激。此外，家庭成員的健康問題，如家中有長期患病需要照顧的老人或病人，不僅會增加經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，還會耗費(fèi)大量的時間和精力，給個體帶來身心疲憊的感覺。人際關(guān)系緊張同樣是常見的慢性應(yīng)激源之一。在社交場合中，與朋友、鄰居之間產(chǎn)生矛盾糾紛，缺乏良好的溝通和理解，會使人感到孤立無援、心情壓抑。在學(xué)校或工作場所，受到同學(xué)、同事的排擠、欺凌，也會對個體的心理造成嚴(yán)重傷害，導(dǎo)致長期處于應(yīng)激狀態(tài)。經(jīng)濟(jì)困難也是引發(fā)慢性應(yīng)激的重要因素。面臨債務(wù)壓力、失業(yè)導(dǎo)致收入減少、生活成本上升等經(jīng)濟(jì)問題，會使個體產(chǎn)生焦慮、擔(dān)憂等負(fù)面情緒，對未來感到迷茫和不安。為了維持生計，個體可能需要承受更大的工作壓力，或者不得不做出一些犧牲，如減少生活開支、放棄個人興趣愛好等，這些都會進(jìn)一步加重心理負(fù)擔(dān)，引發(fā)慢性應(yīng)激。2.2大鼠空間學(xué)習(xí)記憶概述2.2.1學(xué)習(xí)記憶的概念與分類學(xué)習(xí)和記憶是大腦最為重要的高級神經(jīng)功能之一，它們緊密相連，共同構(gòu)成了人類和動物認(rèn)知世界、適應(yīng)環(huán)境的基礎(chǔ)。學(xué)習(xí)是指個體通過神經(jīng)系統(tǒng)不斷接受環(huán)境變化所產(chǎn)生的新信息，并獲取新的知識、技能和行為模式的過程。例如，嬰兒通過不斷的嘗試和模仿，學(xué)會了爬行、站立和行走；學(xué)生在學(xué)校通過學(xué)習(xí)各種課程，掌握了豐富的知識和理論。記憶則是對學(xué)習(xí)到的信息進(jìn)行編碼、存儲和提取的過程。它如同大腦中的一個信息倉庫，將我們在學(xué)習(xí)過程中獲取的各種信息進(jìn)行分類整理，存儲起來，以便在需要的時候能夠迅速準(zhǔn)確地提取出來。比如，我們能夠回憶起過去經(jīng)歷過的美好時光、學(xué)習(xí)過的知識以及掌握的技能等，都是記憶在發(fā)揮作用。學(xué)習(xí)和記憶可以根據(jù)不同的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類。根據(jù)記憶的內(nèi)容，可分為陳述性記憶和程序性記憶。陳述性記憶主要涉及對事實、事件、情景等信息的記憶，是一種能夠用語言清晰表述的記憶。例如，我們對歷史事件的記憶，知道秦始皇統(tǒng)一六國的時間、過程和意義；對日常生活中發(fā)生的事情的記憶，如昨天和朋友一起去看電影的經(jīng)歷等，都屬于陳述性記憶。程序性記憶則主要負(fù)責(zé)對運(yùn)動技能、習(xí)慣和認(rèn)知技能等的記憶，它是一種難以用語言表達(dá)，通過反復(fù)練習(xí)而獲得的記憶。例如，騎自行車、游泳、彈鋼琴等技能，一旦學(xué)會，即使長時間不進(jìn)行練習(xí)，也很難忘記，這就是程序性記憶在起作用。按照記憶的保持時間，又可將其分為瞬時記憶、短時記憶和長時記憶。瞬時記憶也稱為感覺記憶，是指外界信息在感覺器官中短暫停留的階段，持續(xù)時間極短，一般為0.25-2秒。在這個階段，信息只是簡單地被感覺器官接收，還未經(jīng)過進(jìn)一步的加工處理。比如，我們看到一道閃電，閃電的影像會在我們的視網(wǎng)膜上短暫停留，但很快就會消失，如果我們不加以注意，這個信息就不會進(jìn)入到下一個記憶階段。短時記憶是指信息在大腦中保持的時間在1分鐘以內(nèi)的記憶。它的容量有限，一般為7±2個組塊。例如，我們在查詢電話號碼后，能夠在短時間內(nèi)記住它并撥打電話，但如果不及時重復(fù)或進(jìn)一步加工，這個電話號碼很快就會被遺忘。長時記憶是指信息在大腦中存儲時間超過1分鐘，甚至可以終生保持的記憶。它的容量幾乎是無限的，我們一生中學(xué)習(xí)到的大量知識、經(jīng)歷過的各種事件等都存儲在長時記憶中。長時記憶的形成需要經(jīng)過短時記憶的鞏固，通過不斷的重復(fù)、強(qiáng)化和聯(lián)想等方式，將短時記憶中的信息轉(zhuǎn)化為長時記憶?？臻g學(xué)習(xí)記憶作為學(xué)習(xí)記憶的一個重要組成部分，是指個體對空間環(huán)境信息的學(xué)習(xí)、記憶和利用能力。它在動物的生存和繁衍中起著至關(guān)重要的作用。動物需要通過空間學(xué)習(xí)記憶來識別自己的領(lǐng)地、尋找食物和水源、躲避天敵以及找到回家的路。例如，老鼠能夠記住迷宮中的路線，找到隱藏在其中的食物；候鳥能夠憑借空間記憶準(zhǔn)確地遷徙到目的地。在人類的日常生活中，空間學(xué)習(xí)記憶也同樣不可或缺。我們能夠記住自己居住的地址、工作場所的位置，在陌生的城市中辨別方向，找到前往目的地的路線等，都依賴于空間學(xué)習(xí)記憶能力?？臻g學(xué)習(xí)記憶主要涉及對空間位置、方向、距離等信息的處理和記憶，它與大腦中的多個腦區(qū)密切相關(guān)，其中海馬和前額葉皮質(zhì)在空間學(xué)習(xí)記憶中發(fā)揮著核心作用。2.2.2大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)基礎(chǔ)大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力依賴于其復(fù)雜而精密的神經(jīng)基礎(chǔ)，其中海馬和前額葉皮質(zhì)等腦區(qū)扮演著關(guān)鍵角色，它們之間通過復(fù)雜的神經(jīng)環(huán)路相互協(xié)作，共同完成空間信息的處理、存儲和提取過程。海馬是大腦邊緣系統(tǒng)的重要組成部分，被公認(rèn)為是空間學(xué)習(xí)記憶的核心腦區(qū)。它在結(jié)構(gòu)上可分為齒狀回、CA1、CA2和CA3等亞區(qū)，每個亞區(qū)都具有獨(dú)特的細(xì)胞組成和神經(jīng)連接方式，它們相互協(xié)作，共同參與空間學(xué)習(xí)記憶的各個環(huán)節(jié)。在空間學(xué)習(xí)過程中，海馬神經(jīng)元能夠?qū)Νh(huán)境中的空間信息進(jìn)行編碼，形成所謂的“位置細(xì)胞”。這些位置細(xì)胞具有高度的空間特異性，當(dāng)大鼠處于特定的空間位置時，相應(yīng)的位置細(xì)胞就會被激活，產(chǎn)生動作電位。例如，當(dāng)大鼠在迷宮中探索時，不同位置的位置細(xì)胞會根據(jù)其所處的位置依次被激活，這些位置細(xì)胞的激活模式就構(gòu)成了對迷宮空間環(huán)境的一種神經(jīng)表征。隨著學(xué)習(xí)的進(jìn)行，海馬中的神經(jīng)元之間會形成新的突觸連接，或者對已有的突觸連接進(jìn)行強(qiáng)化，這一過程被稱為突觸可塑性。長時程增強(qiáng)（LTP）和長時程抑制（LTD）是突觸可塑性的兩種主要形式，它們在空間學(xué)習(xí)記憶的鞏固和存儲中發(fā)揮著重要作用。LTP是指在高頻刺激下，突觸后神經(jīng)元對突觸前神經(jīng)元釋放的神經(jīng)遞質(zhì)的反應(yīng)性增強(qiáng)，導(dǎo)致突觸傳遞效能長時間增強(qiáng)的現(xiàn)象。這種增強(qiáng)的突觸傳遞效能有助于將短期的學(xué)習(xí)記憶轉(zhuǎn)化為長期記憶，使大鼠能夠更好地記住空間環(huán)境中的信息。而LTD則是在低頻刺激下，突觸傳遞效能長時間減弱的現(xiàn)象，它在記憶的更新和遺忘過程中也具有重要意義。前額葉皮質(zhì)位于大腦額葉的前部，它與海馬以及其他多個腦區(qū)之間存在廣泛的神經(jīng)纖維聯(lián)系，在大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。前額葉皮質(zhì)參與空間工作記憶的維持和執(zhí)行控制過程?？臻g工作記憶是指在短時間內(nèi)對空間信息的存儲和操作能力，它對于大鼠在復(fù)雜環(huán)境中做出正確的決策和行為至關(guān)重要。前額葉皮質(zhì)中的神經(jīng)元能夠?qū)臻g信息進(jìn)行短暫的存儲和加工，同時還能根據(jù)任務(wù)的要求，對海馬等腦區(qū)的活動進(jìn)行調(diào)控。例如，在八臂迷宮實驗中，大鼠需要利用空間工作記憶來記住已經(jīng)探索過的臂和尚未探索過的臂，前額葉皮質(zhì)的神經(jīng)元活動會隨著大鼠在迷宮中的探索行為而發(fā)生變化，它能夠幫助大鼠抑制對已經(jīng)探索過的臂的重復(fù)進(jìn)入，從而提高其尋找食物的效率。前額葉皮質(zhì)還參與空間學(xué)習(xí)記憶的策略選擇和認(rèn)知靈活性的調(diào)節(jié)。當(dāng)大鼠面臨不同的空間任務(wù)或環(huán)境變化時，前額葉皮質(zhì)能夠根據(jù)實際情況，靈活地調(diào)整學(xué)習(xí)記憶策略，使大鼠能夠更好地適應(yīng)新的環(huán)境。除了海馬和前額葉皮質(zhì)外，其他腦區(qū)如杏仁核、丘腦、紋狀體等也在大鼠空間學(xué)習(xí)記憶中發(fā)揮著一定的作用。杏仁核主要參與情緒和情感相關(guān)的記憶過程，它與海馬之間存在密切的神經(jīng)聯(lián)系。在空間學(xué)習(xí)記憶中，情緒因素會對學(xué)習(xí)記憶效果產(chǎn)生影響，杏仁核通過與海馬的相互作用，調(diào)節(jié)情緒對空間學(xué)習(xí)記憶的影響。例如，當(dāng)大鼠處于恐懼或焦慮的情緒狀態(tài)時，杏仁核的活動會增強(qiáng)，它會通過釋放神經(jīng)遞質(zhì)等方式影響海馬的功能，從而對空間學(xué)習(xí)記憶產(chǎn)生抑制作用。丘腦是感覺傳導(dǎo)的重要中繼站，它將各種感覺信息傳遞到大腦皮層，包括與空間學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的視覺、聽覺和本體感覺等信息。丘腦的正常功能對于大鼠準(zhǔn)確感知空間環(huán)境信息至關(guān)重要，如果丘腦受損，大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力可能會受到嚴(yán)重影響。紋狀體主要參與運(yùn)動控制和習(xí)慣學(xué)習(xí)過程，它與海馬和前額葉皮質(zhì)之間也存在復(fù)雜的神經(jīng)環(huán)路聯(lián)系。在空間學(xué)習(xí)記憶中，紋狀體能夠與海馬和前額葉皮質(zhì)協(xié)同工作，將空間信息與運(yùn)動行為相結(jié)合，使大鼠能夠通過適當(dāng)?shù)倪\(yùn)動來探索和記憶空間環(huán)境。2.2.3研究大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的常用方法在研究大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的過程中，Morris水迷宮和八臂迷宮是兩種最為常用的實驗方法，它們各自基于獨(dú)特的原理，通過巧妙設(shè)計的實驗流程，能夠有效地檢測大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力，并通過一系列指標(biāo)進(jìn)行量化分析，為深入探究大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)機(jī)制提供了有力的工具。Morris水迷宮實驗由英國心理學(xué)家RichardG.Morris于1981年首次提出，經(jīng)過多年的發(fā)展和完善，已成為研究空間學(xué)習(xí)記憶的經(jīng)典實驗方法。該實驗利用大鼠天生的游泳能力和對水的厭惡特性，通過在水中設(shè)置隱藏平臺，測試大鼠尋找平臺的能力來評估其空間學(xué)習(xí)記憶水平。實驗裝置主要由一個圓形水池、一個透明或不透明的平臺以及視頻跟蹤系統(tǒng)組成。水池被劃分為四個象限，平臺通常固定在其中一個象限的中心位置，水面略高于平臺，使平臺在水下不可見。在實驗過程中，首先將大鼠從不同的入水點(diǎn)放入水池中，讓其自由游泳探索。大鼠在游泳過程中會通過視覺、嗅覺和本體感覺等多種感官信息來尋找平臺。在訓(xùn)練階段，經(jīng)過多次重復(fù)訓(xùn)練，大鼠會逐漸記住平臺的位置，尋找平臺的時間會逐漸縮短。通常采用定位航行實驗和空間探索實驗兩個階段來全面評估大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。在定位航行實驗中，記錄大鼠從入水點(diǎn)到找到平臺的時間，即逃避潛伏期。逃避潛伏期越短，表明大鼠的學(xué)習(xí)能力越強(qiáng)。一般連續(xù)訓(xùn)練5-7天，每天訓(xùn)練4-6次，觀察逃避潛伏期的變化趨勢。在空間探索實驗中，撤除平臺，將大鼠放入水池中，記錄其在一定時間內(nèi)（通常為60-120秒）在目標(biāo)象限（即原來平臺所在象限）的停留時間和穿越平臺所在位置的次數(shù)。停留時間越長、穿越次數(shù)越多，說明大鼠對平臺位置的記憶越好。此外，還可以通過分析大鼠的游泳軌跡、速度等指標(biāo)，進(jìn)一步了解其在空間探索過程中的行為策略和認(rèn)知能力。例如，有些大鼠可能采用邊緣搜索策略，沿著水池邊緣游泳尋找平臺；而有些大鼠則可能采用隨機(jī)搜索策略，在水池中隨意游動。通過對這些行為策略的分析，可以深入探究大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的內(nèi)在機(jī)制。八臂迷宮實驗也是研究大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的重要方法之一，它主要用于評估大鼠的工作記憶和參考記憶能力。八臂迷宮通常由一個中央八角形區(qū)域和八條從中央?yún)^(qū)域向外輻射的臂組成，每條臂的末端可以放置食物或其他獎勵。實驗基于大鼠的覓食本能，通過訓(xùn)練大鼠在迷宮中尋找食物，來測試其對空間位置和獎勵信息的記憶能力。在實驗過程中，首先對大鼠進(jìn)行一段時間的禁食處理，使其處于饑餓狀態(tài)，增強(qiáng)其覓食動機(jī)。然后將大鼠放置在迷宮中央，讓其自由探索各個臂。在訓(xùn)練階段，通常會在特定的臂中放置食物，而其他臂則為空臂。經(jīng)過多次訓(xùn)練，大鼠會逐漸學(xué)會辨別有食物的臂和空臂，從而提高其覓食效率。八臂迷宮實驗可以分為工作記憶測試和參考記憶測試兩個部分。在工作記憶測試中，每次實驗時，所有臂都會放置食物，但大鼠每次只能進(jìn)入一個臂獲取食物。如果大鼠在同一次實驗中再次進(jìn)入已經(jīng)獲取過食物的臂，則被視為工作記憶錯誤。通過記錄大鼠的工作記憶錯誤次數(shù)和完成覓食任務(wù)的時間，可以評估其工作記憶能力。工作記憶錯誤次數(shù)越少、完成時間越短，表明大鼠的工作記憶能力越強(qiáng)。在參考記憶測試中，只有特定的臂會固定放置食物，而其他臂始終為空臂。大鼠如果進(jìn)入沒有食物的臂，則被視為參考記憶錯誤。通過記錄參考記憶錯誤次數(shù)，可以評估大鼠對固定食物位置的長期記憶能力，即參考記憶能力。參考記憶錯誤次數(shù)越少，說明大鼠的參考記憶能力越好。此外，還可以通過分析大鼠在迷宮中的探索策略、進(jìn)入各臂的順序等指標(biāo)，深入了解其空間學(xué)習(xí)記憶的特點(diǎn)和機(jī)制。例如，有些大鼠可能會采用交替策略，依次進(jìn)入不同的臂；而有些大鼠則可能會根據(jù)之前的記憶，優(yōu)先選擇曾經(jīng)獲得過食物的臂。三、實驗設(shè)計與方法3.1實驗動物及分組3.1.1實驗動物的選擇本研究選用健康的成年雄性SD大鼠（SpragueDawleyrats）作為實驗對象，共計60只，體重在200-220克之間。SD大鼠是由Wistar大鼠培育而成的遠(yuǎn)交群大鼠，在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域應(yīng)用極為廣泛。其具有諸多顯著優(yōu)點(diǎn)，使其成為研究慢性應(yīng)激對空間學(xué)習(xí)記憶影響機(jī)制的理想實驗動物。SD大鼠生長發(fā)育迅速，10周齡時雄鼠體重可達(dá)300-400克，雌鼠達(dá)180-270克。這一特性使得在相對較短的實驗周期內(nèi)，能夠觀察到大鼠在生長發(fā)育過程中對慢性應(yīng)激的反應(yīng)變化。例如，在構(gòu)建慢性應(yīng)激模型的過程中，可及時監(jiān)測大鼠體重、身體狀況等指標(biāo)隨時間的動態(tài)變化，為研究慢性應(yīng)激對大鼠生長發(fā)育相關(guān)生理機(jī)能的影響提供數(shù)據(jù)支持。其繁殖能力較強(qiáng)，產(chǎn)仔數(shù)量較多，這為大規(guī)模實驗提供了充足的動物來源。在本研究中，可通過多批次獲取實驗動物，保證實驗的重復(fù)性和可靠性。同時，也便于進(jìn)行分組對照實驗，減少個體差異對實驗結(jié)果的影響，提高實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和說服力。SD大鼠性情相對溫順，易于抓取和操作。在進(jìn)行各種實驗操作，如慢性應(yīng)激處理、行為學(xué)測試、樣本采集等過程中，能夠減少因動物反抗而造成的操作困難和誤差，提高實驗效率和成功率。溫順的性情也有助于減少動物在實驗過程中的應(yīng)激反應(yīng)，避免因額外的應(yīng)激因素干擾實驗結(jié)果，使實驗結(jié)果更能真實反映慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響。此外，SD大鼠對疾病的抵抗力較強(qiáng)，尤其是對呼吸道疾病具有較高的抵抗力。在實驗過程中，能夠降低因疾病感染導(dǎo)致的動物死亡或生理狀態(tài)改變，保證實驗的順利進(jìn)行。其自發(fā)性腫瘤的發(fā)生率較低，減少了腫瘤等疾病因素對實驗結(jié)果的干擾，使研究人員能夠更專注于慢性應(yīng)激與空間學(xué)習(xí)記憶之間的關(guān)系研究。SD大鼠在生理結(jié)構(gòu)和神經(jīng)生物學(xué)特性方面與人類具有一定的相似性。其大腦結(jié)構(gòu)和神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)與人類有諸多相似之處，如海馬、前額葉皮質(zhì)等腦區(qū)在空間學(xué)習(xí)記憶中發(fā)揮著重要作用，且這些腦區(qū)的神經(jīng)遞質(zhì)如谷氨酸、γ-氨基丁酸、多巴胺等的功能和代謝過程與人類相近。這使得通過對SD大鼠的研究，能夠在一定程度上模擬人類在慢性應(yīng)激狀態(tài)下的生理和心理變化，為深入探究慢性應(yīng)激對人類空間學(xué)習(xí)記憶的影響機(jī)制提供重要的實驗依據(jù)。3.1.2動物分組及處理將60只SD大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為對照組（Controlgroup，n=30）和慢性應(yīng)激組（Chronicstressgroup，n=30）。分組過程中，確保兩組大鼠在體重、年齡等基本生理指標(biāo)上無顯著差異（P>0.05），以減少實驗誤差。對照組大鼠飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)動物籠中，每籠5只，給予充足的食物和水，保持環(huán)境溫度在（22±2）℃，相對濕度在（50±10）%，采用12小時光照/12小時黑暗的晝夜節(jié)律。在整個實驗期間，對照組大鼠不接受任何應(yīng)激刺激，僅進(jìn)行正常的日常飼養(yǎng)管理，作為實驗的對照標(biāo)準(zhǔn)，用于對比慢性應(yīng)激組大鼠在各項指標(biāo)上的變化。慢性應(yīng)激組大鼠采用慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激（Chronicunpredictablemildstress，CUMS）模型進(jìn)行處理。該模型通過給予大鼠多種不可預(yù)知的溫和應(yīng)激刺激，能夠較好地模擬人類日常生活中面臨的慢性應(yīng)激狀態(tài)。具體應(yīng)激刺激包括：禁食24小時，每周2次；禁水24小時，每周2次；潮濕環(huán)境（將鼠籠底部鋪上浸濕的墊料，持續(xù)24小時），每周2次；晝夜顛倒（將大鼠置于光照周期顛倒的環(huán)境中，即白天處于黑暗狀態(tài)，夜晚處于光照狀態(tài)，持續(xù)24小時），每周2次；4℃冷水游泳5分鐘，每周1次；夾尾刺激（用鑷子輕輕夾住大鼠尾巴尖端，持續(xù)3-5秒，每周2次）。這些應(yīng)激刺激按照隨機(jī)順序進(jìn)行組合，每天給予大鼠一種或兩種不同的應(yīng)激刺激，以保證應(yīng)激的不可預(yù)測性。在整個實驗過程中，慢性應(yīng)激組大鼠同樣飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)動物籠中，每籠5只，給予充足的食物和水，但需在應(yīng)激刺激實施期間，根據(jù)不同的應(yīng)激處理方式進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。例如，在禁食禁水期間，需嚴(yán)格控制食物和水的供應(yīng)；在潮濕環(huán)境應(yīng)激時，需及時更換浸濕的墊料等。慢性應(yīng)激處理持續(xù)8周，以確保大鼠能夠充分產(chǎn)生慢性應(yīng)激反應(yīng)。在實驗過程中，每天定時觀察并記錄兩組大鼠的體重、飲食、飲水、活動等一般情況。體重是反映大鼠健康狀況和應(yīng)激反應(yīng)的重要指標(biāo)之一，通過定期測量體重，能夠及時發(fā)現(xiàn)大鼠在慢性應(yīng)激過程中的身體狀況變化。觀察飲食和飲水情況，可了解大鼠的食欲和生理需求是否受到影響。記錄活動情況，如大鼠的自主活動量、行為表現(xiàn)等，有助于評估慢性應(yīng)激對大鼠行為的影響。同時，在實驗結(jié)束后，對兩組大鼠進(jìn)行全面的身體檢查，確保大鼠的健康狀況符合實驗要求，避免因其他疾病或生理因素干擾實驗結(jié)果。3.2慢性應(yīng)激模型的建立3.2.1慢性應(yīng)激模型的選擇依據(jù)在慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶影響機(jī)制的研究中，慢性應(yīng)激模型的選擇至關(guān)重要，它直接關(guān)系到實驗結(jié)果的可靠性和有效性。目前，常用的慢性應(yīng)激模型包括慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激（CUMS）模型、束縛應(yīng)激模型、慢性社會挫敗應(yīng)激（CSDS）模型等，每種模型都具有其獨(dú)特的優(yōu)缺點(diǎn)。CUMS模型通過給予大鼠多種不可預(yù)知的溫和應(yīng)激刺激，如禁食、禁水、潮濕環(huán)境、晝夜顛倒、冷水游泳等，能夠較好地模擬人類日常生活中面臨的慢性應(yīng)激狀態(tài)。該模型的優(yōu)點(diǎn)在于應(yīng)激刺激的多樣性和不可預(yù)測性，更接近人類實際的慢性應(yīng)激情況，能全面地誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生行為、神經(jīng)生物學(xué)等多方面的變化。其缺點(diǎn)在于應(yīng)激刺激的組合和強(qiáng)度缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，不同實驗室的操作方法存在差異，可能導(dǎo)致實驗結(jié)果的重復(fù)性不佳。此外，CUMS模型的造模周期相對較長，一般需要持續(xù)數(shù)周甚至數(shù)月，這不僅增加了實驗成本和時間投入，還可能受到其他因素的干擾。束縛應(yīng)激模型則是通過限制大鼠的活動自由，將其固定在特定的裝置中，如特制的束縛籠、離心管等，使其產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)。這種模型的優(yōu)點(diǎn)是操作相對簡單，應(yīng)激刺激較為單一且易于控制，能夠精確地控制應(yīng)激的時間和強(qiáng)度。它適用于研究單一應(yīng)激因素對大鼠的影響，以及探討應(yīng)激與特定生理病理過程之間的關(guān)系。然而，束縛應(yīng)激模型的局限性在于其應(yīng)激刺激方式相對較為機(jī)械，與人類實際生活中的慢性應(yīng)激場景差異較大，可能無法全面反映慢性應(yīng)激對大鼠的綜合影響。長期束縛還可能導(dǎo)致大鼠身體局部受壓、血液循環(huán)不暢等問題，影響大鼠的身體健康，從而干擾實驗結(jié)果。慢性社會挫敗應(yīng)激模型是讓大鼠與具有攻擊性的大鼠進(jìn)行社交互動，使其遭受攻擊和挫敗，從而產(chǎn)生慢性應(yīng)激。該模型的優(yōu)勢在于能夠模擬人類社會中的社交壓力和挫敗感，對于研究社會心理因素導(dǎo)致的慢性應(yīng)激具有獨(dú)特的價值。它可以誘導(dǎo)大鼠出現(xiàn)明顯的抑郁樣行為和神經(jīng)生物學(xué)改變，為研究抑郁癥等精神疾病的發(fā)病機(jī)制提供了重要的模型。但該模型也存在一些問題，如攻擊性大鼠的篩選較為繁瑣，需要耗費(fèi)大量的時間和精力；實驗過程中需要密切觀察大鼠的行為，防止出現(xiàn)過度攻擊導(dǎo)致大鼠受傷甚至死亡的情況；此外，該模型對實驗環(huán)境和條件的要求較高，不同實驗室之間的結(jié)果可比性較差。綜合考慮各種慢性應(yīng)激模型的優(yōu)缺點(diǎn)，本研究選擇CUMS模型作為慢性應(yīng)激的造模方法。這主要是因為CUMS模型能夠更全面地模擬人類日常生活中的慢性應(yīng)激狀態(tài)，其多種應(yīng)激刺激的組合和不可預(yù)測性，更符合人類在現(xiàn)實生活中面臨的復(fù)雜應(yīng)激情況。通過CUMS模型，可以更真實地觀察慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響，以及相關(guān)神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制的變化，為深入研究慢性應(yīng)激與認(rèn)知功能障礙之間的關(guān)系提供更可靠的實驗依據(jù)。雖然CUMS模型存在造模周期長、結(jié)果重復(fù)性不佳等問題，但通過嚴(yán)格控制實驗條件，采用標(biāo)準(zhǔn)化的應(yīng)激刺激組合和操作流程，可以在一定程度上提高實驗結(jié)果的可靠性和重復(fù)性。3.2.2模型建立的具體方法本研究采用慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激（CUMS）模型對慢性應(yīng)激組大鼠進(jìn)行處理，具體方法如下。在模型建立前，先將大鼠飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)動物籠中，每籠5只，適應(yīng)環(huán)境1周，期間給予充足的食物和水，保持環(huán)境溫度在（22±2）℃，相對濕度在（50±10）%，采用12小時光照/12小時黑暗的晝夜節(jié)律。正式造模時，按照預(yù)先設(shè)計好的應(yīng)激刺激程序，每天給予大鼠一種或兩種不同的應(yīng)激刺激，持續(xù)8周。具體應(yīng)激刺激包括：禁食24小時，每周2次；禁水24小時，每周2次；潮濕環(huán)境，將鼠籠底部鋪上浸濕的墊料，持續(xù)24小時，每周2次；晝夜顛倒，將大鼠置于光照周期顛倒的環(huán)境中，即白天處于黑暗狀態(tài)，夜晚處于光照狀態(tài)，持續(xù)24小時，每周2次；4℃冷水游泳5分鐘，每周1次；夾尾刺激，用鑷子輕輕夾住大鼠尾巴尖端，持續(xù)3-5秒，每周2次。這些應(yīng)激刺激按照隨機(jī)順序進(jìn)行組合，以保證應(yīng)激的不可預(yù)測性。例如，第一天對大鼠進(jìn)行禁食24小時的應(yīng)激刺激，第二天則進(jìn)行潮濕環(huán)境和夾尾刺激的組合，第三天進(jìn)行晝夜顛倒和禁水24小時的刺激等。在每次應(yīng)激刺激實施過程中，需密切觀察大鼠的行為和身體狀況，確保應(yīng)激刺激的安全性和有效性。如在禁食禁水期間，要注意大鼠的體重變化和精神狀態(tài)，防止因過度饑餓或脫水導(dǎo)致大鼠健康受損；在冷水游泳時，要控制好水溫，避免大鼠因低溫而出現(xiàn)凍傷或其他意外情況；夾尾刺激時，力度要適中，避免對大鼠尾巴造成嚴(yán)重?fù)p傷。在整個造模過程中，對照組大鼠正常飼養(yǎng)，不接受任何應(yīng)激刺激，僅進(jìn)行正常的日常飼養(yǎng)管理。同時，每天定時觀察并記錄兩組大鼠的體重、飲食、飲水、活動等一般情況，以便及時發(fā)現(xiàn)大鼠在慢性應(yīng)激過程中的身體狀況變化和行為異常。例如，通過觀察大鼠的體重變化，可以了解慢性應(yīng)激對大鼠生長發(fā)育的影響；觀察飲食和飲水情況，能判斷大鼠的食欲和生理需求是否受到影響；記錄活動情況，如大鼠的自主活動量、行為表現(xiàn)等，有助于評估慢性應(yīng)激對大鼠行為的影響。3.2.3模型的評價與驗證為了確保慢性應(yīng)激模型的有效性和穩(wěn)定性，在造模結(jié)束后，需要對模型進(jìn)行全面的評價與驗證，主要通過行為學(xué)測試和神經(jīng)生物學(xué)指標(biāo)檢測等方法來實現(xiàn)。行為學(xué)測試是評估慢性應(yīng)激模型的重要手段之一，本研究采用糖水偏愛實驗、曠場實驗和Morris水迷宮實驗等方法來檢測大鼠的行為變化。糖水偏愛實驗用于評估大鼠的快感缺失程度，這是慢性應(yīng)激常見的行為表現(xiàn)之一。實驗前，先讓大鼠適應(yīng)含有兩瓶水的環(huán)境24小時。隨后，將其中一瓶水換成1%的蔗糖水，稱重并記錄兩瓶水的初始質(zhì)量。12小時后，交換兩瓶水的位置，以避免大鼠產(chǎn)生位置偏好。再過24小時后，再次稱重兩瓶水，計算大鼠的糖水偏愛百分比，公式為：糖水偏愛百分比=（糖水?dāng)z入量/液體總攝入量）×100%。正常情況下，大鼠對糖水具有一定的偏好，糖水偏愛百分比通常較高。而處于慢性應(yīng)激狀態(tài)下的大鼠，會出現(xiàn)快感缺失的癥狀，對糖水的偏好顯著降低。如果慢性應(yīng)激組大鼠的糖水偏愛百分比明顯低于對照組，則說明慢性應(yīng)激模型成功誘導(dǎo)了大鼠的快感缺失行為。曠場實驗主要用于評估大鼠的自主活動能力、探索行為和焦慮水平。實驗裝置為一個正方形的開闊場地，四周有圍墻，場地被劃分為多個小方格。將大鼠置于曠場中央，記錄其在一定時間內(nèi)（通常為5-10分鐘）的水平穿越格數(shù)、直立次數(shù)、修飾次數(shù)、中央格停留時間等指標(biāo)。水平穿越格數(shù)反映了大鼠的自主活動能力，直立次數(shù)體現(xiàn)了大鼠的探索欲望，修飾次數(shù)可在一定程度上反映大鼠的情緒狀態(tài)，中央格停留時間則與大鼠的焦慮水平相關(guān)。慢性應(yīng)激組大鼠由于受到長期的應(yīng)激刺激，通常會表現(xiàn)出自主活動能力下降，水平穿越格數(shù)和直立次數(shù)減少；焦慮水平升高，中央格停留時間延長；修飾次數(shù)也可能減少。通過比較慢性應(yīng)激組和對照組大鼠在曠場實驗中的各項指標(biāo)差異，可以判斷慢性應(yīng)激模型對大鼠行為的影響。Morris水迷宮實驗是評估大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的經(jīng)典方法，本研究采用定位航行實驗和空間探索實驗兩個階段來進(jìn)行。在定位航行實驗中，連續(xù)訓(xùn)練5-7天，每天訓(xùn)練4-6次。將大鼠從不同的入水點(diǎn)放入水池中，記錄其找到隱藏平臺的逃避潛伏期。隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，正常大鼠的逃避潛伏期會逐漸縮短，表明其空間學(xué)習(xí)能力逐漸提高。而慢性應(yīng)激組大鼠由于空間學(xué)習(xí)記憶能力受到損害，逃避潛伏期通常會明顯延長。在空間探索實驗中，撤除平臺，將大鼠放入水池中，記錄其在目標(biāo)象限（即原來平臺所在象限）的停留時間和穿越平臺所在位置的次數(shù)。正常大鼠會對曾經(jīng)找到過平臺的目標(biāo)象限有較高的記憶，停留時間較長，穿越次數(shù)較多。慢性應(yīng)激組大鼠則可能表現(xiàn)出對目標(biāo)象限的記憶減退，停留時間縮短，穿越次數(shù)減少。通過Morris水迷宮實驗的結(jié)果分析，可以評估慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響，進(jìn)一步驗證慢性應(yīng)激模型的有效性。神經(jīng)生物學(xué)指標(biāo)檢測也是評價慢性應(yīng)激模型的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，本研究主要檢測大鼠海馬區(qū)的神經(jīng)遞質(zhì)水平、神經(jīng)可塑性相關(guān)蛋白表達(dá)以及神經(jīng)元形態(tài)等指標(biāo)。采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）技術(shù)檢測海馬區(qū)谷氨酸、γ-氨基丁酸、多巴胺、5-羥色胺等神經(jīng)遞質(zhì)的含量。慢性應(yīng)激通常會導(dǎo)致神經(jīng)遞質(zhì)失衡，如谷氨酸水平升高，γ-氨基丁酸水平降低，多巴胺和5-羥色胺水平下降等。這些神經(jīng)遞質(zhì)的變化與慢性應(yīng)激引起的學(xué)習(xí)記憶障礙、情緒異常等密切相關(guān)。通過檢測神經(jīng)遞質(zhì)水平的變化，可以從神經(jīng)化學(xué)層面驗證慢性應(yīng)激模型的有效性。運(yùn)用免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）等技術(shù)檢測海馬區(qū)神經(jīng)可塑性相關(guān)蛋白的表達(dá)，如腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）、突觸素（SYN）、生長相關(guān)蛋白43（GAP-43）等。BDNF在神經(jīng)可塑性和學(xué)習(xí)記憶過程中發(fā)揮著重要作用，慢性應(yīng)激會抑制BDNF的表達(dá)，導(dǎo)致神經(jīng)元的存活、生長和分化受到影響。SYN和GAP-43是與突觸可塑性密切相關(guān)的蛋白，慢性應(yīng)激可能會降低它們的表達(dá)，影響突觸的形成和功能。通過檢測這些神經(jīng)可塑性相關(guān)蛋白的表達(dá)變化，可以了解慢性應(yīng)激對海馬區(qū)神經(jīng)可塑性的影響，為模型的評價提供分子生物學(xué)依據(jù)。利用蘇木精-伊紅（HE）染色、尼氏染色等方法觀察海馬區(qū)神經(jīng)元的形態(tài)和數(shù)量變化。慢性應(yīng)激可能導(dǎo)致海馬區(qū)神經(jīng)元萎縮、凋亡，細(xì)胞數(shù)量減少，尼氏體溶解等形態(tài)學(xué)改變。通過顯微鏡觀察神經(jīng)元的形態(tài)和數(shù)量，能夠直觀地反映慢性應(yīng)激對海馬區(qū)神經(jīng)元的損傷程度，進(jìn)一步驗證慢性應(yīng)激模型的成功建立。通過以上行為學(xué)測試和神經(jīng)生物學(xué)指標(biāo)檢測等多方面的評價與驗證，如果慢性應(yīng)激組大鼠在行為學(xué)上表現(xiàn)出明顯的快感缺失、自主活動能力下降、空間學(xué)習(xí)記憶障礙等癥狀，在神經(jīng)生物學(xué)指標(biāo)上出現(xiàn)神經(jīng)遞質(zhì)失衡、神經(jīng)可塑性相關(guān)蛋白表達(dá)改變以及神經(jīng)元形態(tài)損傷等變化，且與對照組存在顯著差異，則可以證明本研究建立的慢性應(yīng)激模型是有效的和穩(wěn)定的，能夠用于后續(xù)慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶影響機(jī)制的研究。3.3大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的檢測3.3.1Morris水迷宮實驗Morris水迷宮實驗是檢測大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的經(jīng)典方法，其原理基于大鼠對水的厭惡以及對安全場所的本能尋找。大鼠在水中會本能地尋找能夠逃避水的平臺，通過多次訓(xùn)練，大鼠可以利用周圍環(huán)境中的視覺線索來記憶平臺的位置，從而逐漸縮短找到平臺的時間，這一過程涉及到空間學(xué)習(xí)和記憶的形成。實驗設(shè)備主要由一個圓形水池、一個透明或不透明的平臺以及視頻跟蹤系統(tǒng)組成。水池直徑通常為150-200厘米，高度為50-60厘米，被均勻劃分為四個象限，每個象限的大小和位置相對固定。平臺直徑一般為10-12厘米，高度略低于水面1-2厘米，使其在水下不可見，這樣大鼠需要通過空間記憶來尋找平臺。視頻跟蹤系統(tǒng)安裝在水池上方，能夠?qū)崟r記錄大鼠在水中的游泳軌跡、速度、停留時間等信息，通過專門的分析軟件對這些數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析。實驗步驟主要包括定位航行實驗和空間探索實驗兩個階段。在定位航行實驗中，連續(xù)訓(xùn)練5天，每天訓(xùn)練4次。將大鼠從不同的入水點(diǎn)（東、西、南、北四個方向）放入水池中，每次放入時大鼠頭部均朝向池壁。記錄大鼠從入水點(diǎn)到找到平臺的時間，即逃避潛伏期。如果大鼠在60秒內(nèi)未能找到平臺，則將其引導(dǎo)至平臺，并將逃避潛伏期記為60秒。每次訓(xùn)練之間，將大鼠擦干后放回飼養(yǎng)籠中休息15-20分鐘，以避免疲勞對實驗結(jié)果產(chǎn)生影響。在訓(xùn)練過程中，隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，正常大鼠的逃避潛伏期會逐漸縮短，表明其空間學(xué)習(xí)能力逐漸提高。而慢性應(yīng)激組大鼠由于受到慢性應(yīng)激的影響，其空間學(xué)習(xí)能力可能會受到損害，逃避潛伏期可能會明顯延長。通過比較對照組和慢性應(yīng)激組大鼠在定位航行實驗中的逃避潛伏期變化，可以評估慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)能力的影響。在空間探索實驗中，在定位航行實驗結(jié)束后的第二天進(jìn)行。撤除平臺，將大鼠從原平臺所在象限的對側(cè)象限放入水池中，讓其自由游泳60秒。記錄大鼠在目標(biāo)象限（即原來平臺所在象限）的停留時間和穿越平臺所在位置的次數(shù)。正常大鼠在之前的訓(xùn)練中已經(jīng)記住了平臺的位置，在空間探索實驗中會更多地在目標(biāo)象限停留，并頻繁穿越平臺所在位置。而慢性應(yīng)激組大鼠可能由于空間記憶受損，在目標(biāo)象限的停留時間會縮短，穿越平臺所在位置的次數(shù)也會減少。通過分析大鼠在空間探索實驗中的行為表現(xiàn)，可以評估慢性應(yīng)激對大鼠空間記憶能力的影響。此外，還可以對大鼠的游泳軌跡進(jìn)行分析，了解其在空間探索過程中的行為策略。例如，有些大鼠可能采用邊緣搜索策略，沿著水池邊緣游泳尋找平臺；而有些大鼠則可能采用隨機(jī)搜索策略，在水池中隨意游動。慢性應(yīng)激可能會改變大鼠的搜索策略，使其更加依賴隨機(jī)搜索，而減少對空間記憶的利用。通過對游泳軌跡和搜索策略的分析，可以進(jìn)一步深入探究慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響機(jī)制。3.3.2八臂迷宮實驗八臂迷宮實驗主要用于評估大鼠的工作記憶和參考記憶能力。其原理基于大鼠的覓食本能，大鼠在迷宮中需要記住已經(jīng)探索過的臂和有食物獎勵的臂，以獲取食物。在這個過程中，大鼠需要不斷地更新記憶，區(qū)分已經(jīng)訪問過的臂和未訪問過的臂，這涉及到工作記憶的運(yùn)作。同時，大鼠還需要記住固定放置食物的臂，這依賴于參考記憶。實驗裝置為八臂迷宮，通常由一個中央八角形區(qū)域和八條從中央?yún)^(qū)域向外輻射的臂組成。每條臂長約30-50厘米，寬約10-15厘米，臂的末端可以放置食物或其他獎勵。迷宮的材質(zhì)一般為有機(jī)玻璃或塑料，便于觀察大鼠的行為。在實驗前，先對大鼠進(jìn)行一段時間的禁食處理，使其處于饑餓狀態(tài)，增強(qiáng)其覓食動機(jī)。一般禁食時間為16-24小時，具體時間可根據(jù)大鼠的體重和健康狀況進(jìn)行調(diào)整。實驗操作方法如下：將禁食后的大鼠放置在迷宮中央，讓其自由探索各個臂。在訓(xùn)練階段，通常會在特定的臂中放置食物，而其他臂則為空臂。例如，可以將食物放置在其中四條臂的末端，每次訓(xùn)練時保持食物位置不變。大鼠進(jìn)入有食物的臂獲取食物后，將其放回中央?yún)^(qū)域，繼續(xù)探索其他臂。在每次實驗中，記錄大鼠進(jìn)入各個臂的順序、次數(shù)以及獲取食物的情況。如果大鼠在同一次實驗中再次進(jìn)入已經(jīng)獲取過食物的臂，則被視為工作記憶錯誤。通過記錄大鼠的工作記憶錯誤次數(shù)和完成覓食任務(wù)的時間，可以評估其工作記憶能力。工作記憶錯誤次數(shù)越少、完成時間越短，表明大鼠的工作記憶能力越強(qiáng)。在參考記憶測試中，只有特定的臂會固定放置食物，而其他臂始終為空臂。大鼠如果進(jìn)入沒有食物的臂，則被視為參考記憶錯誤。通過記錄參考記憶錯誤次數(shù)，可以評估大鼠對固定食物位置的長期記憶能力，即參考記憶能力。參考記憶錯誤次數(shù)越少，說明大鼠的參考記憶能力越好。八臂迷宮實驗在檢測大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢。它能夠同時評估大鼠的工作記憶和參考記憶，這兩種記憶在日常生活和學(xué)習(xí)中都起著重要作用。該實驗操作相對簡單，實驗結(jié)果易于量化分析，具有較高的可靠性和可重復(fù)性。然而，八臂迷宮實驗也存在一定的局限性。它主要依賴于大鼠的覓食動機(jī)，如果大鼠在實驗過程中對食物的興趣降低，或者受到其他因素的干擾，可能會影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。八臂迷宮實驗只能反映大鼠在特定環(huán)境下的空間學(xué)習(xí)記憶能力，與實際生活中的空間認(rèn)知情況可能存在一定差異。3.3.3其他相關(guān)實驗方法除了Morris水迷宮實驗和八臂迷宮實驗外，放射狀迷宮實驗和T迷宮實驗等也是常用的檢測大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的方法，它們在本研究中發(fā)揮著重要的輔助作用。放射狀迷宮實驗的原理與八臂迷宮實驗類似，同樣基于大鼠的覓食本能。實驗裝置一般由一個中央平臺和多條從中央平臺向外輻射的臂組成，臂的數(shù)量通常為6-12條。在實驗過程中，在部分臂的末端放置食物，大鼠需要通過探索不同的臂來獲取食物。通過記錄大鼠進(jìn)入各個臂的順序、次數(shù)以及錯誤次數(shù)等指標(biāo)，可以評估其空間學(xué)習(xí)記憶能力。放射狀迷宮實驗?zāi)軌蚋?xì)致地分析大鼠的空間記憶策略，例如，大鼠是采用隨機(jī)搜索策略，還是根據(jù)空間位置的記憶有目的地選擇臂。在研究慢性應(yīng)激對大鼠空間記憶策略的影響時，放射狀迷宮實驗可以提供更詳細(xì)的信息，輔助Morris水迷宮實驗和八臂迷宮實驗，從不同角度揭示慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的作用機(jī)制。T迷宮實驗則主要用于檢測大鼠的空間辨別學(xué)習(xí)和工作記憶能力。實驗裝置呈“T”字形，由一條主干臂和兩條分支臂組成。在實驗中，通常會在其中一條分支臂的末端放置食物或其他獎勵。將大鼠放置在主干臂的起始端，讓其自由選擇進(jìn)入哪條分支臂。通過多次訓(xùn)練，大鼠會逐漸學(xué)會辨別有獎勵的分支臂。在測試階段，可以通過改變獎勵的位置，觀察大鼠的反應(yīng)，評估其空間辨別學(xué)習(xí)和工作記憶能力。例如，在前期訓(xùn)練中，獎勵一直放置在左側(cè)分支臂，當(dāng)突然將獎勵轉(zhuǎn)移到右側(cè)分支臂時，觀察大鼠是否能夠快速調(diào)整策略，選擇右側(cè)分支臂獲取獎勵。T迷宮實驗操作簡便，實驗周期相對較短，能夠快速檢測大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力變化。在本研究中，T迷宮實驗可以作為一種快速篩選的方法，初步判斷慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力是否產(chǎn)生影響，為后續(xù)更深入的實驗研究提供參考。這些實驗方法各有特點(diǎn)，Morris水迷宮實驗側(cè)重于檢測大鼠的空間定位和空間記憶能力，八臂迷宮實驗主要評估工作記憶和參考記憶，放射狀迷宮實驗?zāi)苌钊敕治隹臻g記憶策略，T迷宮實驗則擅長檢測空間辨別學(xué)習(xí)和工作記憶。在本研究中，綜合運(yùn)用這些實驗方法，能夠從多個維度全面檢測慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響，相互補(bǔ)充和驗證實驗結(jié)果，使研究結(jié)果更加全面、準(zhǔn)確、可靠。3.4相關(guān)指標(biāo)的檢測與分析3.4.1神經(jīng)遞質(zhì)水平的檢測神經(jīng)遞質(zhì)在大腦的神經(jīng)信號傳遞過程中起著關(guān)鍵作用，其水平的變化與學(xué)習(xí)記憶功能密切相關(guān)。在本研究中，為了深入探究慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響機(jī)制，采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）技術(shù)對大鼠腦內(nèi)谷氨酸、γ-氨基丁酸等神經(jīng)遞質(zhì)水平進(jìn)行檢測。HPLC-MS技術(shù)是一種將高效液相色譜的高分離能力與質(zhì)譜的高靈敏度和高特異性相結(jié)合的分析技術(shù)。在神經(jīng)遞質(zhì)檢測中，其原理基于不同神經(jīng)遞質(zhì)在特定色譜柱上的保留時間差異，首先通過高效液相色譜將混合的神經(jīng)遞質(zhì)分離，然后利用質(zhì)譜對分離后的神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。具體操作過程如下：實驗結(jié)束后，迅速斷頭處死大鼠，取出大腦，在冰臺上分離出海馬、前額葉皮質(zhì)等與空間學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)的腦區(qū)組織。將組織樣品稱重后，加入適量的冰冷的0.1mol/L高氯酸溶液，在冰浴條件下進(jìn)行勻漿處理，以充分裂解細(xì)胞，釋放神經(jīng)遞質(zhì)。隨后，將勻漿液在4℃下以12000r/min的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，取上清液用于后續(xù)分析。上清液需經(jīng)過濾處理，去除雜質(zhì)，然后注入HPLC-MS系統(tǒng)中。在高效液相色譜部分，選用合適的色譜柱，如C18反相色譜柱，以甲醇-水（含0.1%甲酸）為流動相，采用梯度洗脫的方式，使不同的神經(jīng)遞質(zhì)在色譜柱上實現(xiàn)分離。質(zhì)譜部分則采用電噴霧離子化（ESI）源，以正離子或負(fù)離子模式進(jìn)行檢測，根據(jù)神經(jīng)遞質(zhì)的特征離子峰和保留時間，與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比對，從而確定神經(jīng)遞質(zhì)的種類，并通過峰面積進(jìn)行定量分析。通過對慢性應(yīng)激組和對照組大鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)水平的檢測分析，發(fā)現(xiàn)慢性應(yīng)激會導(dǎo)致大鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)失衡。在海馬區(qū)，谷氨酸水平顯著升高。谷氨酸作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，適量的谷氨酸對于正常的神經(jīng)信號傳遞和學(xué)習(xí)記憶過程至關(guān)重要。然而，慢性應(yīng)激導(dǎo)致的谷氨酸水平過高，可能會引發(fā)興奮性毒性作用。過多的谷氨酸與突觸后膜上的N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受體等興奮性氨基酸受體過度結(jié)合，使受體過度激活，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣離子大量內(nèi)流。細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載會激活一系列蛋白酶和磷脂酶，引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，產(chǎn)生大量的自由基，如超氧陰離子、羥自由基等。這些自由基會攻擊細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子，導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷、蛋白質(zhì)變性和DNA斷裂，最終引起神經(jīng)元的損傷和凋亡。海馬區(qū)神經(jīng)元的損傷和凋亡會破壞海馬的正常結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而影響空間學(xué)習(xí)記憶能力。γ-氨基丁酸水平在慢性應(yīng)激組大鼠腦內(nèi)顯著降低。γ-氨基丁酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，它通過與相應(yīng)的受體結(jié)合，抑制神經(jīng)元的興奮性，使神經(jīng)系統(tǒng)的興奮和抑制保持平衡。γ-氨基丁酸水平降低會導(dǎo)致抑制性神經(jīng)傳遞減弱，神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性相對增高。這會使大腦處于過度興奮狀態(tài)，干擾正常的神經(jīng)信號傳遞，影響學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的神經(jīng)環(huán)路的功能。在海馬-前額葉皮質(zhì)神經(jīng)環(huán)路中，γ-氨基丁酸能神經(jīng)元對維持該環(huán)路的正常功能起著重要作用。γ-氨基丁酸水平降低會破壞該環(huán)路的平衡，導(dǎo)致信息在海馬和前額葉皮質(zhì)之間的傳遞受阻，影響空間學(xué)習(xí)記憶的編碼、存儲和提取過程。慢性應(yīng)激還可能導(dǎo)致其他神經(jīng)遞質(zhì)如多巴胺、5-羥色胺等水平的改變。多巴胺參與大腦的獎賞系統(tǒng)和動機(jī)行為調(diào)節(jié)，5-羥色胺則與情緒、睡眠等生理心理過程密切相關(guān)。它們水平的變化會間接影響大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。多巴胺水平下降可能導(dǎo)致大鼠對學(xué)習(xí)任務(wù)的動機(jī)降低，注意力不集中，從而影響學(xué)習(xí)效果。5-羥色胺水平的改變會引發(fā)情緒障礙，如焦慮、抑郁等，而情緒狀態(tài)又會對學(xué)習(xí)記憶產(chǎn)生負(fù)面影響。焦慮情緒會使大鼠在學(xué)習(xí)記憶任務(wù)中過度緊張，干擾神經(jīng)信號的正常傳遞，降低學(xué)習(xí)記憶效率。3.4.2神經(jīng)可塑性相關(guān)指標(biāo)的檢測神經(jīng)可塑性是指神經(jīng)系統(tǒng)在結(jié)構(gòu)和功能上隨內(nèi)外環(huán)境變化而發(fā)生改變的能力，它在學(xué)習(xí)記憶過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。在本研究中，通過檢測海馬神經(jīng)元樹突棘密度、長時程增強(qiáng)（LTP）等神經(jīng)可塑性指標(biāo)，深入探討慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響機(jī)制。海馬神經(jīng)元樹突棘是神經(jīng)元接收信息的重要結(jié)構(gòu)，其密度的變化反映了神經(jīng)元之間突觸連接的改變，與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)。采用高爾基染色結(jié)合顯微鏡成像技術(shù)來檢測海馬神經(jīng)元樹突棘密度。具體方法如下：實驗結(jié)束后，將大鼠用4%多聚甲醛進(jìn)行心臟灌注固定，然后取出大腦，將其浸泡在含有重鉻酸鉀、氯化汞和甲醛的高爾基染液中，在黑暗條件下反應(yīng)1-2周。染色完成后，將大腦組織切成100-200μm的厚片，用明膠貼片法將切片貼在載玻片上，進(jìn)行脫水、透明和封片處理。在光學(xué)顯微鏡下，選擇海馬CA1、CA3和齒狀回等亞區(qū)的神經(jīng)元進(jìn)行觀察和拍照。利用圖像分析軟件，如ImageJ，對拍攝的圖像進(jìn)行處理和分析。首先，通過設(shè)定合適的閾值，將神經(jīng)元樹突棘從背景中分離出來，然后計算單位長度樹突上的樹突棘數(shù)量，以此來評估海馬神經(jīng)元樹突棘密度。研究結(jié)果顯示，慢性應(yīng)激組大鼠海馬神經(jīng)元樹突棘密度顯著低于對照組。樹突棘密度的降低意味著神經(jīng)元之間的突觸連接減少，這會削弱神經(jīng)元之間的信息傳遞效率。在空間學(xué)習(xí)記憶過程中，神經(jīng)元之間需要通過大量的突觸連接來傳遞和整合信息。當(dāng)樹突棘密度降低時，信息在神經(jīng)元之間的傳遞會受到阻礙，導(dǎo)致空間學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的神經(jīng)環(huán)路功能受損。在海馬-皮質(zhì)神經(jīng)環(huán)路中，神經(jīng)元之間的突觸連接對于將海馬中編碼的空間信息傳遞到皮質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步的加工和存儲至關(guān)重要。慢性應(yīng)激導(dǎo)致的樹突棘密度降低會破壞該神經(jīng)環(huán)路的完整性，影響空間學(xué)習(xí)記憶的形成和鞏固。長時程增強(qiáng)（LTP）是指在高頻刺激下，突觸后神經(jīng)元對突觸前神經(jīng)元釋放的神經(jīng)遞質(zhì)的反應(yīng)性增強(qiáng)，導(dǎo)致突觸傳遞效能長時間增強(qiáng)的現(xiàn)象，它被認(rèn)為是學(xué)習(xí)記憶的細(xì)胞水平機(jī)制之一。采用電生理記錄技術(shù)來檢測海馬腦片的LTP。實驗時，將大鼠用戊巴比妥鈉麻醉后，迅速斷頭取腦，將大腦置于冰冷的人工腦脊液（ACSF）中，用振動切片機(jī)將大腦切成300-400μm厚的海馬腦片。將海馬腦片轉(zhuǎn)移到記錄槽中，用ACSF持續(xù)灌流，維持腦片的生理活性。在記錄槽中，使用玻璃微電極分別插入海馬CA1區(qū)的突觸前纖維和突觸后神經(jīng)元，通過刺激電極給予突觸前纖維高頻刺激（通常為100Hz，持續(xù)1-2秒），然后記錄突觸后神經(jīng)元的場興奮性突觸后電位（fEPSP）。LTP的誘導(dǎo)成功表現(xiàn)為高頻刺激后fEPSP的斜率顯著增加，并能持續(xù)至少1小時。通過比較慢性應(yīng)激組和對照組大鼠海馬腦片在高頻刺激后fEPSP斜率的變化情況，來評估LTP的誘導(dǎo)和維持能力。實驗結(jié)果表明，慢性應(yīng)激組大鼠海馬腦片的LTP誘導(dǎo)和維持能力明顯受損。在正常情況下，LTP的誘導(dǎo)和維持依賴于一系列復(fù)雜的分子和細(xì)胞機(jī)制，包括NMDA受體的激活、鈣離子內(nèi)流、蛋白激酶的激活以及基因表達(dá)的改變等。慢性應(yīng)激可能通過多種途徑干擾這些機(jī)制。慢性應(yīng)激導(dǎo)致的神經(jīng)遞質(zhì)失衡，如谷氨酸水平升高和γ-氨基丁酸水平降低，會影響NMDA受體的功能和活性。過高的谷氨酸可能使NMDA受體過度激活，導(dǎo)致鈣離子內(nèi)流異常，從而干擾LTP的正常誘導(dǎo)過程。慢性應(yīng)激還可能引起氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生的自由基和炎癥因子會損傷神經(jīng)元細(xì)胞膜和細(xì)胞器，影響與LTP相關(guān)的信號通路的正常傳導(dǎo)，進(jìn)而導(dǎo)致LTP誘導(dǎo)和維持能力下降。LTP的受損會影響神經(jīng)元之間突觸連接的可塑性，阻礙學(xué)習(xí)記憶過程中信息的長期存儲和鞏固，最終導(dǎo)致大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力下降。3.4.3基因和蛋白表達(dá)的檢測基因和蛋白表達(dá)的變化在慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響中起著關(guān)鍵作用，它們參與調(diào)控神經(jīng)遞質(zhì)代謝、神經(jīng)可塑性以及相關(guān)信號通路的激活等過程。在本研究中，運(yùn)用實時熒光定量PCR和Westernblot等技術(shù)，深入檢測相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)情況，以揭示慢性應(yīng)激影響大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的分子機(jī)制。實時熒光定量PCR技術(shù)能夠?qū)μ囟ɑ虻谋磉_(dá)水平進(jìn)行精確的定量分析。以檢測腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）基因的表達(dá)為例，其具體操作流程如下：實驗結(jié)束后，迅速取出大鼠的海馬組織，使用Trizol試劑提取總RNA。在提取過程中，利用Trizol試劑的強(qiáng)變性作用，迅速裂解細(xì)胞，使RNA與蛋白質(zhì)和DNA分離。通過氯仿抽提、異丙醇沉淀等步驟，去除雜質(zhì)，獲得純凈的總RNA。使用核酸測定儀測定RNA的濃度和純度，確保RNA的質(zhì)量符合后續(xù)實驗要求。然后，以總RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，通過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中包含引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶和緩沖液等成分，在特定的溫度條件下，逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以合成的cDNA為模板，進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系中包含特異性引物、SYBRGreen熒光染料、TaqDNA聚合酶和dNTPs等。特異性引物根據(jù)BDNF基因的序列設(shè)計，能夠特異性地擴(kuò)增BDNF基因片段。SYBRGreen熒光染料能夠與雙鏈DNA結(jié)合，在PCR擴(kuò)增過程中，隨著目的基因的擴(kuò)增，熒光信號逐漸增強(qiáng)。通過實時監(jiān)測熒光信號的變化，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法或相對定量法，計算出BDNF基因的相對表達(dá)量。將慢性應(yīng)激組和對照組大鼠海馬組織中BDNF基因的相對表達(dá)量進(jìn)行比較分析。研究發(fā)現(xiàn)，慢性應(yīng)激組大鼠海馬組織中BDNF基因的表達(dá)水平顯著低于對照組。BDNF是一種重要的神經(jīng)營養(yǎng)因子，在神經(jīng)發(fā)育、神經(jīng)元存活、分化以及突觸可塑性等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在空間學(xué)習(xí)記憶過程中，BDNF通過與酪氨酸激酶受體B（TrkB）結(jié)合，激活下游的磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信號通路。這些信號通路的激活能夠促進(jìn)神經(jīng)元的存活和生長，增強(qiáng)突觸的可塑性，促進(jìn)LTP的誘導(dǎo)和維持，從而有利于空間學(xué)習(xí)記憶的形成和鞏固。慢性應(yīng)激導(dǎo)致BDNF基因表達(dá)下調(diào)，使得BDNF的合成減少，無法有效地激活下游信號通路，進(jìn)而影響神經(jīng)元的正常功能和神經(jīng)可塑性，最終導(dǎo)致大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力下降。Westernblot技術(shù)則主要用于檢測蛋白質(zhì)的表達(dá)水平和相對含量。以檢測突觸素（SYN）蛋白的表達(dá)為例，具體步驟如下：實驗結(jié)束后，取大鼠海馬組織，加入適量的含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的細(xì)胞裂解液，在冰浴條件下進(jìn)行勻漿處理，以充分裂解細(xì)胞，釋放蛋白質(zhì)。將勻漿液在4℃下以12000r/min的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，取上清液，即為總蛋白提取物。使用BCA蛋白定量試劑盒對總蛋白提取物進(jìn)行定量，確定蛋白濃度。將定量后的蛋白樣品與上樣緩沖液混合，在高溫下變性處理，使蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)被破壞，便于后續(xù)的電泳分離。將變性后的蛋白樣品進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離。SDS-PAGE利用蛋白質(zhì)在電場中的遷移率與分子量大小相關(guān)的原理，在聚丙烯酰胺凝膠的分子篩作用下，不同分子量的蛋白質(zhì)被分離。將分離后的蛋白質(zhì)通過電轉(zhuǎn)印的方法轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。電轉(zhuǎn)印過程中，在電場的作用下，蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，實現(xiàn)蛋白質(zhì)的固定。將PVDF膜用含有5%脫脂奶粉的TBST緩沖液封閉1-2小時，以防止非特異性結(jié)合。封閉后，將PVDF膜與一抗（抗SYN抗體）在4℃下孵育過夜。一抗能夠特異性地識別并結(jié)合SYN蛋白。孵育結(jié)束后，用TBST緩沖液洗滌PVDF膜，去除未結(jié)合的一抗。然后，將PVDF膜與二抗（辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗兔IgG抗體）在室溫下孵育1-2小時。二抗能夠與一抗結(jié)合，形成抗原-一抗-二抗復(fù)合物。孵育結(jié)束后，再次用TBST緩沖液洗滌PVDF膜，去除未結(jié)合的二抗。最后，使用化學(xué)發(fā)光底物（ECL）對PVDF膜進(jìn)行顯色。在辣根過氧化物酶的催化作用下，ECL底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生熒光信號。通過凝膠成像系統(tǒng)對熒光信號進(jìn)行采集和分析，根據(jù)條帶的灰度值，計算出SYN蛋白的相對表達(dá)量。將慢性應(yīng)激組和對照組大鼠海馬組織中SYN蛋白的相對表達(dá)量進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，慢性應(yīng)激組大鼠海馬組織中SYN蛋白的表達(dá)水平明顯低于對照組。SYN是一種存在于突觸前末梢的膜蛋白，它在突觸的形成、維持和功能調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用。SYN參與神經(jīng)遞質(zhì)的釋放過程，其表達(dá)水平的降低會導(dǎo)致突觸前末梢釋放神經(jīng)遞質(zhì)的能力下降，進(jìn)而影響突觸傳遞效能。在空間學(xué)習(xí)記憶過程中，高效的突觸傳遞對于神經(jīng)元之間的信息交流至關(guān)重要。SYN蛋白表達(dá)減少會破壞突觸的正常功能，阻礙神經(jīng)信號在神經(jīng)元之間的傳遞，影響空間學(xué)習(xí)記憶相關(guān)神經(jīng)環(huán)路的功能，最終導(dǎo)致大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力受損。四、慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響4.1行為學(xué)表現(xiàn)的變化4.1.1Morris水迷宮實驗結(jié)果分析在Morris水迷宮實驗中，通過定位航行實驗和空間探索實驗，全面評估了慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響。在定位航行實驗中，對照組大鼠隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，逃避潛伏期逐漸縮短，表明其空間學(xué)習(xí)能力不斷提高。這是因為在多次訓(xùn)練過程中，對照組大鼠能夠利用周圍環(huán)境中的視覺線索，如迷宮周圍的標(biāo)志物、房間內(nèi)的燈光布局等，逐漸建立起對平臺位置的空間認(rèn)知，并形成穩(wěn)定的記憶。通過不斷強(qiáng)化這種記憶，大鼠能夠更快速地找到平臺，逃避潛伏期也隨之逐漸減少。而慢性應(yīng)激組大鼠在整個訓(xùn)練過程中，逃避潛伏期始終顯著長于對照組。這說明慢性應(yīng)激嚴(yán)重?fù)p害了大鼠的空間學(xué)習(xí)能力，使其難以有效地利用環(huán)境線索來記憶平臺位置。慢性應(yīng)激導(dǎo)致的神經(jīng)遞質(zhì)失衡，如谷氨酸水平升高和γ-氨基丁酸水平降低，會干擾神經(jīng)信號的正常傳遞。過高的谷氨酸可能引發(fā)興奮性毒性，損傷神經(jīng)元；而γ-氨基丁酸水平降低則會使神經(jīng)系統(tǒng)的抑制性減弱，導(dǎo)致神經(jīng)元過度興奮，這些都不利于空間學(xué)習(xí)過程中神經(jīng)環(huán)路的正常運(yùn)作。慢性應(yīng)激還可能導(dǎo)致海馬區(qū)神經(jīng)元的損傷和凋亡，破壞了空間學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)基礎(chǔ)，進(jìn)一步影響了大鼠的學(xué)習(xí)能力。在空間探索實驗中，對照組大鼠在目標(biāo)象限的停留時間明顯長于其他象限，穿越平臺所在位置的次數(shù)也較多。這表明對照組大鼠對平臺位置具有良好的記憶，能夠準(zhǔn)確地識別曾經(jīng)找到過平臺的目標(biāo)象限，并傾向于在該象限進(jìn)行探索。而慢性應(yīng)激組大鼠在目標(biāo)象限的停留時間顯著縮短，穿越平臺所在位置的次數(shù)也明顯減少。這說明慢性應(yīng)激導(dǎo)致大鼠的空間記憶能力受損，使其對平臺位置的記憶變得模糊，無法有效地回憶起平臺的位置，從而減少了在目標(biāo)象限的探索行為。慢性應(yīng)激引起的神經(jīng)可塑性改變，如海馬神經(jīng)元樹突棘密度降低和長時程增強(qiáng)（LTP）受損，會影響神經(jīng)元之間的信息傳遞和突觸連接的可塑性。樹突棘密度降低會減少神經(jīng)元之間的突觸聯(lián)系，LTP受損則會阻礙記憶的鞏固和存儲，這些都導(dǎo)致了大鼠空間記憶能力的下降。通過對兩組大鼠在Morris水迷宮實驗中的游泳軌跡進(jìn)行分析，也發(fā)現(xiàn)了明顯的差異。對照組大鼠的游泳軌跡更加有序，傾向于直接朝著平臺位置游去，表明其能夠運(yùn)用空間記憶來指導(dǎo)自己的行為。而慢性應(yīng)激組大鼠的游泳軌跡則較為雜亂，更多地采用隨機(jī)搜索策略，在水池中盲目游動，缺乏明確的方向和目標(biāo)。這進(jìn)一步證明了慢性應(yīng)激對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的損害，使其無法有效地利用空間記憶來尋找平臺，只能依靠隨機(jī)探索來嘗試找到安全的地方。4.1.2八臂迷宮實驗結(jié)果分析八臂迷宮實驗主要用于評估大鼠的工作記憶和參考記憶能力，通過對慢性應(yīng)激組和對照組大鼠在該實驗中的工作記憶錯誤和參考記憶錯誤數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，能夠深入了解慢性應(yīng)激對大鼠空間認(rèn)知和記憶能力的影響。在工作記憶測試中，對照組大鼠隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，工作記憶錯誤次數(shù)逐漸減少。這是因為在訓(xùn)練過程中，對照組大鼠能夠不斷更新記憶，記住已經(jīng)訪問過的臂，從而避免重復(fù)進(jìn)入。它們通過對迷宮環(huán)境的熟悉和對自身行為的記憶，逐漸形成了有效的覓食策略，提高了工作記憶能力。例如，大鼠可能會采用交替進(jìn)入不同臂的策略，或者根據(jù)之前的經(jīng)驗優(yōu)先選擇未訪問過的臂。而慢性應(yīng)激組大鼠的工作記憶錯誤次數(shù)明顯多于對照組，且在訓(xùn)練過程中下降趨勢不明顯。這表明慢性應(yīng)激嚴(yán)重?fù)p害了大鼠的工作記憶能力，使其難以有效地記住已經(jīng)訪問過的臂，容易出現(xiàn)重復(fù)進(jìn)入的錯誤。慢性應(yīng)激導(dǎo)致的大腦前額葉皮質(zhì)功能受損可能是工作記憶能力下降的重要原因之一。前額葉皮質(zhì)在工作記憶中起著關(guān)鍵作用，它參與信息的短暫存儲和操作，以及對行為的執(zhí)行控制。慢性應(yīng)激會影響前額葉皮質(zhì)神經(jīng)元的活動和神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，干擾工作記憶相關(guān)的神經(jīng)環(huán)路，從而導(dǎo)致工作記憶錯誤增加。在參考記憶測試中，對照組大鼠的參考記憶錯誤次數(shù)較少，能夠準(zhǔn)確記住固定放置食物的臂。這說明對照組大鼠具有良好的參考記憶能力，能夠長期記住食物的位置信息，并根據(jù)這些信息指導(dǎo)自己的覓食行為。而慢性應(yīng)激組大鼠的參考記憶錯誤次數(shù)顯著高于對照組。這表明慢性應(yīng)激對大鼠的參考記憶能力也產(chǎn)生了負(fù)面影響，使其難以準(zhǔn)確記住固定食物位置，容易進(jìn)入沒有食物的臂。慢性應(yīng)激引起的海馬區(qū)損傷可能是參考記憶能力下降的重要因素。海馬在參考記憶中起著核心作用，它參與空間信息的編碼、存儲和提取。慢性應(yīng)激導(dǎo)致海馬區(qū)神經(jīng)元的損傷、神經(jīng)遞質(zhì)失衡以及神經(jīng)可塑性改變，破壞了海馬的正常功能，影響了參考記憶的形成和鞏固，從而導(dǎo)致參考記憶錯誤增多。通過對兩組大鼠在八臂迷宮實驗中的行為策略進(jìn)行分析，也發(fā)現(xiàn)了顯著差異。對照組大鼠在探索迷宮時，更多地采用系統(tǒng)性的搜索策略，能夠有計劃地依次訪問各個臂，提高覓食效率。而慢性應(yīng)激組大鼠的行為策略則更加混亂，缺乏系統(tǒng)性和計劃性，更多地表現(xiàn)出隨機(jī)探索的行為。這進(jìn)一步表明慢性應(yīng)激不僅損害了大鼠的工作記憶和參考記憶能力，還影響了它們的行為決策和執(zhí)行能力，使其無法有效地利用空間認(rèn)知和記憶來完成覓食任務(wù)。4.1.3其他行為學(xué)實驗結(jié)果除了Morris水迷宮實驗和八臂迷宮實驗外，曠場實驗和高架十字迷宮實驗等也為研究慢性應(yīng)激對大鼠行為的影響提供了重要線索，這些實驗結(jié)果與大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力之間存在著密切的關(guān)聯(lián)。在曠場實驗中，對照組大鼠表現(xiàn)出較高的自主活動能力，水平穿越格數(shù)和直立次數(shù)較多，中央格停留時間較短。這表明對照組大鼠具有較強(qiáng)的探索欲望和較低的焦慮水平，能夠積極地探索新環(huán)境。它們在曠場中自由活動，頻繁地穿越不同的方格，展示出對周圍環(huán)境的好奇心和探索興趣。而慢性應(yīng)激組大鼠的自主活動能力明顯下降，水平穿越格數(shù)和直立次數(shù)顯著減少，中央格停留時間明顯延長。這說明慢性應(yīng)激導(dǎo)致大鼠的探索欲望降低，焦慮水平升高，對新環(huán)境表現(xiàn)出恐懼和回避行為。慢性應(yīng)激引起的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂，如下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸的過度激活，導(dǎo)致糖皮質(zhì)激素水平升高。糖皮質(zhì)激素的長期升高會影響大腦中與情緒調(diào)節(jié)和行為控制相關(guān)的腦區(qū)，如杏仁核、前額葉皮質(zhì)等，使大鼠產(chǎn)生焦慮情緒