質(zhì)量控制部檢驗(yàn)員培訓(xùn)考試試題(微生物)(附答案)一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.下列微生物中，屬于革蘭氏陽性菌的是（）。A.大腸桿菌B.沙門氏菌C.金黃色葡萄球菌D.銅綠假單胞菌2.高壓蒸汽滅菌時，常用的溫度和時間組合是（）。A.100℃、30分鐘B.115℃、15分鐘C.121℃、15-20分鐘D.135℃、5分鐘3.微生物限度檢查中，口服固體制劑需控制的主要菌屬不包括（）。A.大腸埃希菌B.金黃色葡萄球菌C.銅綠假單胞菌D.白色念珠菌4.配制營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基時，調(diào)節(jié)pH值應(yīng)使用（）。A.鹽酸和氫氧化鈉B.硫酸和氫氧化鉀C.醋酸和氨水D.硝酸和碳酸鈉5.進(jìn)行無菌檢查時，需在（）環(huán)境下操作。A.100級潔凈區(qū)B.1000級潔凈區(qū)C.10000級潔凈區(qū)D.300000級潔凈區(qū)6.平皿計(jì)數(shù)法中，若稀釋度10?3的平板菌落數(shù)為285，10??的平板菌落數(shù)為32，則樣品的菌落總數(shù)應(yīng)報告為（）。A.2.85×10?CFU/gB.3.2×10?CFU/gC.2.85×10?CFU/gD.3.2×10?CFU/g7.下列培養(yǎng)基中，屬于選擇性培養(yǎng)基的是（）。A.營養(yǎng)瓊脂B.麥康凱瓊脂C.血瓊脂D.沙氏葡萄糖瓊脂8.微生物檢測用培養(yǎng)箱的溫度偏差應(yīng)控制在（）。A.±0.5℃B.±1℃C.±2℃D.±3℃9.革蘭氏染色的正確步驟是（）。A.結(jié)晶紫→碘液→95%乙醇→沙黃B.碘液→結(jié)晶紫→95%乙醇→沙黃C.結(jié)晶紫→95%乙醇→碘液→沙黃D.沙黃→碘液→95%乙醇→結(jié)晶紫10.檢測樣品中霉菌和酵母菌時，應(yīng)選擇的培養(yǎng)基是（）。A.營養(yǎng)瓊脂B.玫瑰紅鈉瓊脂C.伊紅美藍(lán)瓊脂D.甘露醇高鹽瓊脂11.進(jìn)行微生物限度檢查時，供試液的制備若需用到中和劑，其目的是（）。A.調(diào)節(jié)pH值B.滅活樣品中的防腐劑C.促進(jìn)微生物生長D.抑制雜菌污染12.下列關(guān)于超凈工作臺使用的說法，錯誤的是（）。A.使用前需開啟紫外燈照射30分鐘B.操作時手臂應(yīng)緩慢移動，避免擾動氣流C.物品應(yīng)盡量擺滿工作臺，提高效率D.操作結(jié)束后需清理臺面并登記使用記錄13.沙門氏菌檢驗(yàn)中，前增菌培養(yǎng)基通常選擇（）。A.緩沖蛋白胨水（BPW）B.四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）C.亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）D.麥康凱瓊脂（MAC）14.微生物實(shí)驗(yàn)室廢棄的培養(yǎng)物需經(jīng)（）處理后再按醫(yī)療廢物處置。A.紫外線照射B.高壓蒸汽滅菌C.酒精浸泡D.直接焚燒15.進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)時，若平板上有片狀菌落生長，正確的處理方式是（）。A.記錄為“多不可計(jì)”B.選擇無片狀菌落的區(qū)域計(jì)數(shù)并換算C.判定該稀釋度無效，取相鄰稀釋度計(jì)數(shù)D.重新制備供試液并檢測二、填空題（每空1分，共20分）1.微生物檢驗(yàn)中，常用的滅菌方法包括______、______、______（至少寫3種）。2.大腸埃希菌的典型生化反應(yīng)為：靛基質(zhì)試驗(yàn)______、甲基紅試驗(yàn)______、VP試驗(yàn)______、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)______（填“陽性”或“陰性”）。3.霉菌的基本形態(tài)包括______和______，其繁殖方式主要有______和______。4.微生物限度檢查中，口服液體劑需控制的細(xì)菌數(shù)不得過______CFU/mL，霉菌和酵母菌數(shù)不得過______CFU/mL，不得檢出______。5.高壓蒸汽滅菌效果的驗(yàn)證方法包括______、______和______（至少寫3種）。6.配制培養(yǎng)基時，若需調(diào)節(jié)pH值至7.2±0.2，應(yīng)使用______或______溶液逐滴調(diào)節(jié)，并用______校準(zhǔn)。三、判斷題（每題1分，共10分）1.革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁較薄，肽聚糖層少，因此染色后呈紅色。（）2.無菌檢查時，若陽性對照管未生長，說明實(shí)驗(yàn)失敗，需重新檢測。（）3.培養(yǎng)箱的溫度監(jiān)測應(yīng)在空載狀態(tài)下進(jìn)行，無需放置樣品。（）4.霉菌計(jì)數(shù)時，若平板上有蔓延菌落，可忽略不計(jì)。（）5.微生物檢測用吸管、試管等玻璃器皿需經(jīng)160℃干熱滅菌2小時。（）6.進(jìn)行沙門氏菌檢驗(yàn)時，增菌培養(yǎng)后需同時接種兩種選擇性培養(yǎng)基。（）7.樣品稀釋時，若吸取1mL原液至9mL稀釋液中，稀釋度為10?1。（）8.超凈工作臺的高效過濾器需每年檢測一次，確保過濾效率≥99.97%。（）9.微生物實(shí)驗(yàn)室的清潔消毒應(yīng)遵循“由潔到污”的原則，先清潔無菌區(qū)，再清潔污染區(qū)。（）10.若檢測結(jié)果超出標(biāo)準(zhǔn)限度，可直接報告“不合格”，無需復(fù)檢。（）四、簡答題（每題6分，共30分）1.簡述無菌操作的關(guān)鍵要點(diǎn)。2.培養(yǎng)基配制的主要步驟及注意事項(xiàng)有哪些？3.微生物限度檢查中，如何判斷供試液是否需要進(jìn)行方法適用性驗(yàn)證？4.革蘭氏染色時，若結(jié)果出現(xiàn)假陽性或假陰性，可能的原因有哪些？5.列舉5種常見的微生物檢測儀器，并說明其主要用途。五、綜合應(yīng)用題（每題10分，共10分）某企業(yè)生產(chǎn)的口服片劑進(jìn)行微生物限度檢測，檢測結(jié)果如下：-需氧菌總數(shù)（10?2稀釋度）：平板1為225CFU，平板2為240CFU；-霉菌和酵母菌總數(shù)（10?2稀釋度）：平板1為18CFU，平板2為22CFU；-大腸埃希菌檢測：陽性。根據(jù)《中國藥典》2020年版四部微生物限度標(biāo)準(zhǔn)（口服片劑：需氧菌總數(shù)≤103CFU/g，霉菌和酵母菌總數(shù)≤102CFU/g，不得檢出大腸埃希菌），請判斷該樣品是否合格，并說明理由；若不合格，應(yīng)如何處理？參考答案一、單項(xiàng)選擇題1.C2.C3.C4.A5.A6.B7.B8.B9.A10.B11.B12.C13.A14.B15.C二、填空題1.高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、紫外線滅菌（或過濾除菌）2.陽性、陽性、陰性、陰性3.菌絲、孢子、無性繁殖、有性繁殖4.1000、100、大腸埃希菌5.生物指示劑法（如嗜熱脂肪芽孢桿菌）、化學(xué)指示劑法（如變色標(biāo)簽）、溫度記錄儀監(jiān)測6.0.1mol/L鹽酸、0.1mol/L氫氧化鈉、pH計(jì)三、判斷題1.√2.√3.×（需模擬負(fù)載狀態(tài)）4.×（需記錄并備注）5.√6.√7.√8.√9.√10.×（需復(fù)檢并排查原因）四、簡答題1.無菌操作的關(guān)鍵要點(diǎn)：（1）環(huán)境控制：在百級潔凈區(qū)或超凈工作臺內(nèi)操作，提前30分鐘開啟紫外燈消毒；（2）人員防護(hù)：穿戴滅菌工作服、口罩、手套，操作前用75%乙醇消毒手部；（3）物品處理：所有接觸樣品的器具需經(jīng)滅菌處理，避免交叉污染；（4）操作規(guī)范：動作輕緩，避免氣流擾動；瓶口、管口需經(jīng)火焰灼燒滅菌；（5）時間控制：操作過程盡量縮短，減少暴露時間。2.培養(yǎng)基配制步驟及注意事項(xiàng)：步驟：①稱量：按配方準(zhǔn)確稱取各成分；②溶解：用蒸餾水加熱溶解（需攪拌防止結(jié)塊）；③調(diào)pH：用0.1mol/L鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)至規(guī)定范圍（誤差≤0.2）；④分裝：根據(jù)需求分裝至試管或三角瓶（體積不超過容器2/3）；⑤滅菌：高壓蒸汽滅菌（121℃、15-20分鐘）；⑥質(zhì)量檢查：觀察有無沉淀、變色，滅菌后pH需復(fù)核；⑦保存：冷藏（2-8℃），有效期一般不超過2周。注意事項(xiàng)：避免過度加熱導(dǎo)致成分破壞；含瓊脂的培養(yǎng)基需在凝固前分裝；易分解成分（如葡萄糖）需單獨(dú)滅菌后加入。3.方法適用性驗(yàn)證的判斷依據(jù)：（1）當(dāng)供試品含有抑菌成分（如防腐劑、抗生素）時；（2）供試品的物理性狀改變（如黏度、pH顯著偏離中性）；（3）檢測方法變更（如培養(yǎng)基、稀釋液種類改變）；（4）首次使用新樣品或新檢測項(xiàng)目時；（5）連續(xù)3次檢測結(jié)果顯示方法有效性存疑時（如陽性菌回收率＜70%）。4.革蘭氏染色假陽性/假陰性的原因：假陽性（陰性菌染成紫色）：①乙醇脫色時間過短（未完全脫去結(jié)晶紫）；②菌體過厚（老齡菌細(xì)胞壁通透性改變）；③碘液作用時間不足（未形成穩(wěn)定復(fù)合物）。假陰性（陽性菌染成紅色）：①乙醇脫色時間過長（破壞細(xì)胞壁，結(jié)晶紫被洗脫）；②菌齡過老（細(xì)胞壁肽聚糖層斷裂）；③結(jié)晶紫染色時間過短（未充分著色）。5.常見微生物檢測儀器及用途：（1）高壓蒸汽滅菌器：用于培養(yǎng)基、玻璃器皿的濕熱滅菌；（2）超凈工作臺：提供局部百級潔凈環(huán)境，用于無菌操作；（3）生化培養(yǎng)箱：控制溫度（20-45℃），用于需氧菌培養(yǎng)；（4）霉菌培養(yǎng)箱：控制溫度（20-28℃）和濕度，用于霉菌、酵母菌培養(yǎng)；（5）生物安全柜：防止有害微生物氣溶膠擴(kuò)散，保護(hù)人員和環(huán)境（適用于病原微生物檢測）；（6）菌落計(jì)數(shù)器：自動或手動統(tǒng)計(jì)平板菌落數(shù)；（7）pH計(jì)：精確測量培養(yǎng)基、稀釋液的pH值；（8）顯微鏡：觀察微生物形態(tài)（如革蘭氏染色、芽胞觀察）。五、綜合應(yīng)用題判斷結(jié)果：不合格。理由：（1）需氧菌總數(shù)：（225+240）/2×102=23250CFU/g（即2.3×10?CFU/g），超過標(biāo)準(zhǔn)≤103CFU/g；（2）霉菌和酵母菌總數(shù)：（18+22）/2×102=2000CFU/g（即2.0×103CFU/g），超過標(biāo)準(zhǔn)≤102CFU/g；（3）大腸埃希菌檢測陽性，違反“不得檢出”的規(guī)定。處理措施：