前言溶出度試驗是一種模擬口服固體制劑在胃腸道中崩解和溶出的體外實驗方法REF_Ref24053\r\h[1]，藥物的吸收與其在人體中的溶解度密切相關(guān)，同時，溶出度也在影響藥物的生物利用度和療效，并且，其在指導(dǎo)制劑的高效開發(fā)和評價口服固體制劑內(nèi)在品質(zhì)方面發(fā)揮著舉足輕重的作用。所以，在諸多國家的藥典中都收錄了溶出度試驗的操作條件、試驗方法以及裝置等內(nèi)容，用來規(guī)范相關(guān)質(zhì)量標準并進行嚴格的質(zhì)量控制。鑒于溶出度對于藥品質(zhì)量評價具有非常重要的意義，美國FDA早已建立了相關(guān)的指導(dǎo)原則，為溶出度的研究進展提供了寶貴的參考意見和重要的信息。生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)（BCS）REF_Ref24161\r\h[2]充分考慮了溶解性、胃腸道的滲透性和溶出度三個關(guān)鍵因素，其中，對于BCSⅠ與BCSⅡ類藥物，溶出度試驗是預(yù)測藥物體內(nèi)吸收的主要方法REF_Ref24354\r\h[3]，所以，各國藥典將其作為制定體外溶出度質(zhì)量標準的依據(jù)，也將其應(yīng)用于預(yù)測能否建立良好的體內(nèi)外相關(guān)性。為此，各國藥典對許多藥物制劑都規(guī)定了溶出度的項目，我國近年來所批復(fù)的藥物固體制劑的質(zhì)量標準都盡可能多的制定了溶出度檢查項目REF_Ref24981\r\h[3]。1溶出度試驗方法溶出度試驗是在實驗的基礎(chǔ)上，以一種體外檢測方法作為理論的，其目的在于控制藥物制劑質(zhì)量，借助數(shù)學(xué)方法去分析并處理溶出度試驗數(shù)據(jù)，是研究制劑中所含有主藥的處方、晶型、粒度及其組成等對制劑質(zhì)量統(tǒng)一的方法REF_Ref13675\r\h[4]。各國藥典均規(guī)定：溶出度試驗均是在滿足“漏槽”的前提下進行，也就是溶出介質(zhì)和藥物的表面會形成一個不斷更新的接觸層。只有滿足這一重要條件，才可以控制制劑的溶出行為。溶出裝置對溶解度具有明顯的區(qū)分度，對于具有不同溶解度的藥物，該裝置測得的溶出度不同，而且溶出快慢排序和溶解度大小排序也是不一致的。溶出度測定方法根據(jù)溶出介質(zhì)混合的類型和藥物者主要分為兩類REF_Ref25298\r\h[6]，一類是因為攪拌或者旋轉(zhuǎn)而在溶出介質(zhì)中產(chǎn)生的強制對流導(dǎo)致二者混合,如槳法、轉(zhuǎn)篩法等等;第二類是因為溶出介質(zhì)的自然對致其混合,使樣品長期暴露在均勻的無渦流的新鮮溶出介質(zhì)中,使其前提條件得到保證。藥典中規(guī)定的溶出度試驗方法有籃法、槳法、小杯法等，槳法和籃法最為常用REF_Ref15288\r\h[7]。美國藥典起初將這兩種方法定為法定方法，后來陸續(xù)在前兩種方法的基礎(chǔ)上增加了小杯法和槳碟法等。1.1籃法（第一法）1970年，籃法成為第一個被美國藥典所收載的法定方法，具體來說，就是通過調(diào)節(jié)藥物在轉(zhuǎn)籃中的位置使其盡可能多的得到重現(xiàn)的液-固接觸層。迄今為止，籃法已被應(yīng)用于多種劑型中溶出度的測定，但是目前它仍存在幾個不足的地方。其明顯缺點是樣品可能上浮,對于溶解度低而且在溶出介質(zhì)中迅速達到飽和的藥物或劑量大的藥物而言,采用轉(zhuǎn)籃法，往往難以保持溶出介質(zhì)的漏槽條件。在籃法試驗中，存在一個最關(guān)鍵的問題就是轉(zhuǎn)籃里不能裝的太滿，如果內(nèi)容物較多，不能使籃內(nèi)容物全部與溶出介質(zhì)接觸，更不能反映溶出性質(zhì)的一般規(guī)律。一般情況下,籃法多用于膠囊或漂浮的制劑REF_Ref25451\r\h[8]。1.2槳法（第二法）槳法是在籃法的基礎(chǔ)上進行改進的，籃法中所使用的轉(zhuǎn)籃在槳法中被攪拌槳所替代，這種改進方法在很大程度上克服了籃法的許多不足，但也有其不可取之處，如要求實驗中所用到的溶出杯和槳有較高的精度，如果槳稍有些松動或槳的方向有所變動，溶出結(jié)果就會出現(xiàn)較大的偏差，不過，這些誤差均是在可預(yù)測范圍內(nèi)的。最重要的是，槳法有一個明顯的缺點，就是樣品極易上浮,而且和籃法有一個共同的缺點，就是難以保證溶解度低而劑量大的藥物難的漏槽條件，因而使測定的結(jié)果不準確。國內(nèi)片劑溶出試驗多選擇槳法，少數(shù)使用籃法，比如磷酸西格列汀片REF_Ref5638\r\h[9]。1.3小杯法（第三法）在中國的藥典中，小杯法是相對的，是相對于和槳法籃法而言的，前兩種方法所用的溶出杯均是一升，而小杯法分別采用一百毫升、二百毫升或者二百五十毫升的小型溶出杯，其所用的攪拌槳或轉(zhuǎn)籃也相對應(yīng)采用小型的裝置，所以，小杯法實際上為縮小容積的槳法或籃法。小杯法比較適用于檢查小劑量固體制劑的溶出度，在一定程度上能夠提高溶出藥物的濃度，不過小杯法也有其自身的局限性。首先，與普通杯的槳法相比，其攪拌時產(chǎn)生的試驗過程中的一些物理參數(shù)和剪切應(yīng)力有較大的差異，其攪拌程度要比槳法更為劇烈，這實際上相對降低了體外溶出要求的門檻，但不能有效的建立起體內(nèi)體外相關(guān)性REF_Ref5745\r\h[10]，同樣，由于攪拌時物理參數(shù)的改變，會導(dǎo)致小杯法體外溶出試驗可能不會很好的起到區(qū)分藥品品質(zhì)的目的。1.4其他方法往復(fù)筒法：這種裝置是由一排平底玻璃管組成，數(shù)量為六個或七個，其中，玻璃管里裝有溶出介質(zhì)并且置于恒溫水浴中，另一部分是玻璃圓筒，可以進行往復(fù)運動來調(diào)節(jié)筒的高度。取樣時，往復(fù)筒應(yīng)該升起到玻璃容器底部和液面中間。這種方法被美國藥典中緩釋制劑釋放度的測定收載。槳碟法REF_Ref9393\r\h[11]：這種裝置是在槳法的基礎(chǔ)上改進而來，在第二法的基礎(chǔ)上加了一個支持透皮貼片的碟片，并將貼片平整地固定在碟片上，釋藥面與槳下沿也應(yīng)該保持平行，利用黏合劑固定透皮貼片。美國藥典應(yīng)用此方法測定透皮吸收制劑的釋放度。筒法：此方法所用的儀器類似于籃法裝置，與籃法明顯的區(qū)別是其主要裝置為不銹鋼圓筒。將透皮貼片在規(guī)定的時間內(nèi)放入杯中進行實驗并按時取樣，這種方法也被收載于美國藥典，用來做透皮給藥系統(tǒng)的藥物釋放試驗。此外，英國藥典中轉(zhuǎn)筒法的裝置與其裝置相同。2影響溶出度結(jié)果的因素2.1溶出儀的調(diào)試在做溶出度試驗之前,為了保證實驗結(jié)果的準確性，必須要檢查溶出儀的相關(guān)參數(shù)是否符合規(guī)定，如水平度、垂直度、槳軸同軸度和轉(zhuǎn)速，也就是溶出儀的機械校正。首先，在儀器開始運轉(zhuǎn)的時候,應(yīng)該保證整套裝置的平穩(wěn),切不可出現(xiàn)明顯的振動或晃動；其次，要檢查儀器專用的百分表所顯示數(shù)據(jù)與儀器的實際轉(zhuǎn)速是否一致，這點可以通過經(jīng)過校驗的秒表進行計算和測量，查看數(shù)據(jù)是否一致，如果不一致，則需要重新調(diào)節(jié)溶出度儀機體底部的支撐螺絲或者更換電池及檢查百分表測量桿螺絲是否松動；另外，在溶出杯內(nèi)未加入溶出介質(zhì)時，按照藥典中規(guī)定的槳軸深度要求安裝并調(diào)節(jié)好轉(zhuǎn)軸，必須在符合規(guī)定之后方可投入使用；最后，要測定所用溶出儀的杯溫，應(yīng)該用規(guī)定專用的溫度計進行測量介質(zhì)的溫度，將其控制在36.5℃到37.5℃,而且，幾個溶出杯內(nèi)溫度差異應(yīng)小于±0.5℃，如結(jié)果不理想，則需在溶出度儀界面進行校準，縮小溫度偏差；并且必須保證溶出儀外圍的水浴高度高于溶出介質(zhì)液面。當進行籃法試驗時，要對轉(zhuǎn)籃選擇合適的處理方法，必須嚴格防止轉(zhuǎn)籃中有堵塞現(xiàn)象，并定時對轉(zhuǎn)籃進行清潔。如果存在堵塞，則首先需要選用超聲的方法進行處理，后續(xù)可以采用水中煮沸進行清理。同時，轉(zhuǎn)籃必須保持干燥，否則會影響實驗數(shù)據(jù)的準確性。2.2配制溶出介質(zhì)的試劑和試液藥物的種類影響著溶出介質(zhì)的選擇。若溶出介質(zhì)為無機鹽，如磷酸鹽緩沖液，是常用的溶出介質(zhì)，配制緩沖液所用的水也應(yīng)為經(jīng)過脫氣之后的純化水，水的來源也會影響實驗的結(jié)果，使pH值存在差異。如果溶出介質(zhì)為鹽酸等酸溶液時，則需要在將水脫氣之后再降溫至37℃左右再進行配制，否則加熱脫氣會破壞其酸堿度。由于溶出度試驗必須滿足“漏槽條件”，所以溶出介質(zhì)的體積一般為900或1000mlREF_Ref16542\r\h[12]。若有特別要求，可以選取常用體積的二分之一到四分之三。2.3取樣時間和取樣量取樣應(yīng)該嚴格控制時間,從幾個溶出杯取樣的總用時應(yīng)小于60s，取樣到過濾的間隔不能超過30s。而且，我國藥典對于取樣位置也有嚴格的規(guī)定，例如：槳法的取樣位置應(yīng)該位于槳葉頂端到液面的中點，離溶出杯6mm處。原因是藥物溶解這一過程存在濃度梯度，即靠近溶出槳攪拌的位置藥物濃度較高，反之，遠離槳攪拌的位置藥物濃度則較低。因此，在取樣過程中，應(yīng)該避開極端處取樣，以免實驗中得到的數(shù)值與真實值相差較大。同時，多次取樣會使實驗中所得的數(shù)據(jù)誤差增大，為了減小誤差，在測定溶出曲線時，應(yīng)該使取樣點保持在五到六個點，不能過多或過少。2.4溶出液的過濾與濾膜的吸附在進行溶出度試驗中的過程中，最重要且最關(guān)鍵的步驟就是得到澄清的濾液，因為只有得到澄明的液體才可以進行后續(xù)操作。所以，必須使用濾膜濾過溶出液。濾膜的選擇對于溶出度的測定影響較大，必須針對溶出介質(zhì)的性質(zhì)或所加入的試劑以及有機溶劑來選擇合適的濾膜，而且，濾膜的性質(zhì)應(yīng)該穩(wěn)定，既不應(yīng)該受溶出介質(zhì)的干擾，也不應(yīng)該吸附介質(zhì)中的活性藥物成分。另外，濾膜的吸附也會干擾溶出度的結(jié)果，如果在實驗過程中均采用一個濾膜過濾，結(jié)果往往是第一個數(shù)據(jù)偏低，所以需要更換濾膜的頻率高一些或者在沸水中將其煮沸一個小時。2.5轉(zhuǎn)速的選擇藥物的溶出度和轉(zhuǎn)速密切相關(guān)，不同的藥物品種其選擇的轉(zhuǎn)速也不盡相同，目前，各個國家藥典收錄的溶出度測定方法中規(guī)定的轉(zhuǎn)速大部分都在每分鐘50轉(zhuǎn)到每分鐘100轉(zhuǎn)。一般來說，轉(zhuǎn)速與藥物的溶出速率呈正相關(guān)，轉(zhuǎn)速越快，其溶出速率越快，藥物的溶出量也越多。但是，轉(zhuǎn)速不是越快越好，因為其可能會降低不同制劑溶出行為的區(qū)分能力，因此，通常高轉(zhuǎn)速不是溶出試驗的首選，除非有些特殊實驗的需要，也應(yīng)該在大量實驗驗證的基礎(chǔ)上進行。2.6其他原因?qū)τ谟H脂性藥物，膽汁鹽濃度和脂肪水平在很大程度上會影響溶出速率REF_Ref6049\r\h[13]。溶出介質(zhì)的表面張力、緩沖容量、黏度、滲透壓均是影響藥物溶出的重要因素REF_Ref6150\r\h[14]。3溶出度的測定方法溶出度測定法是將某種固體制劑的定量分別置于溶出杯或溶出儀的轉(zhuǎn)籃中,在(37.0±0.5)攝氏度恒溫下,在規(guī)定的溶出介質(zhì)和轉(zhuǎn)速中依法操作,在規(guī)定時間內(nèi)取樣并測定其溶出量REF_Ref6288\r\h[15]。要想對藥物的質(zhì)量進行控制，最關(guān)鍵的步驟就是測定其溶出度。溶出度試驗可以生動地模擬口服藥物在胃腸道環(huán)境中的崩解、溶出和吸收，因此，測定溶出度顯得尤為重要。而在溶出度試驗中，溶出度的測定以及計算是最關(guān)鍵的一環(huán)，其中，最常使用的是高效液相色譜法和紫外分光光度法。3.1紫外分光光度法從溶出杯中得到的樣品，需要通過紫外分光光度法來對檢測結(jié)果進行分析和總結(jié)。因此，可以通過含有某種藥物的溶液在特定波長處有最大吸收來進行其溶出度的測定。其最突出的優(yōu)點是準確度高和具有較強的專屬性。其次，紫外的操作方法比較簡便，容易進行。最后，具有較高的靈敏度，消耗的檢品少,是一種高效安全的分析方法。因此，在現(xiàn)代藥物分析中已漸漸取代了許多經(jīng)典的化學(xué)滴定方法REF_Ref6421\r\h[16]。3.2高效液相色譜法高效液相色譜法，即高速液相色譜，是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上，引用了氣相色譜的理論REF_Ref10690\r\h[17]以液體為流動相，與氣相色譜技術(shù)結(jié)合后得到迅速發(fā)展的一項色譜技術(shù)。高效液相色譜技術(shù)所需儀器設(shè)備主要有色譜柱、進樣器、檢測器、高壓泵等REF_Ref6990\r\h[18]。其中，每個設(shè)備所起的作用都是獨一無二的。如高壓輸液泵是將樣品和流動相輸入到檢測器和色譜柱中，樣品才能得以分析。由于高壓輸液泵會影響整個儀器結(jié)果的可靠性，因此，對其要求比較高。其耐腐蝕性比較突出，可以對抗緩沖液、酸、堿的腐蝕；實驗過程中所用到的流動相在整個裝置及色譜分離過程中發(fā)揮動力作用；色譜柱與檢測器相結(jié)合，不僅可以使不同的物質(zhì)實現(xiàn)分離，同時，可以將藥物在溶出介質(zhì)中濃度的變化轉(zhuǎn)變成電學(xué)以及光學(xué)信號。高效液相色譜法的使用范圍較廣，大部分有機化合物的色譜分析都是采用其進行分離分析的，尤其適用于沸點比較高或者分子量比較大的化合物，對熱不穩(wěn)定的藥物也可以使用。而且，其還具有分離效能高、靈敏度高和分析速度快的特點。另外，色譜柱可以重復(fù)使用，一根色譜柱的使用周期較長，還可以起到節(jié)約資源和成本的作用。4溶出儀的研究進展4.1國內(nèi)研究進展溶出度一定程度上能夠反映出有效成分從制劑中溶出的程度和速度REF_Ref7026\r\h[19]，因此，溶出儀被廣泛使用在藥物溶出度的測定中，它的準確性將直接影響測定的結(jié)果。現(xiàn)如今，它被我國藥檢所和藥廠投入廣泛地使用，并且在原來溶出裝置的基礎(chǔ)上慢慢發(fā)展出三種智能溶出度儀器，代表了國內(nèi)先進水平，其中包括:升降式八杯八桿溶出儀、一排式八杯六桿翻轉(zhuǎn)型溶出儀和兩排式八杯八桿翻轉(zhuǎn)型溶出儀。其顯著差異為第二種形式的溶出儀由于使用頻率較高，難以保證其水平度和垂直度等技能參數(shù)在藥典規(guī)定范圍內(nèi)。對于第一種和第三種形式的溶出儀，由于機械精度較高，基本可以保證所用槳的深度、槳軸的同軸和儀器水平，不足之處是檢測的精度低。4.2國外研究進展升降式八杯八桿溶出儀和兩排式八杯八桿翻轉(zhuǎn)型溶出儀是國外較常用的溶出儀類型。這些溶出儀不僅可以保證測定結(jié)果的準確度，也可以使得所有的記錄具有可追朔性。然而，對于制藥行業(yè)和研發(fā)企業(yè)來說，不能光考慮儀器的精度而忽略儀器的成本，如果精度對于實驗測定結(jié)果的影響微乎其微的話，就不必為了精度而忽略其成本，但是這些都是基于大量實驗數(shù)據(jù)的支持。在過去的幾十年里，許多權(quán)威機構(gòu)陸續(xù)進行光纖藥物溶出度儀的研發(fā)，以實現(xiàn)對藥物的實時和原位技術(shù)分析。2002年，光纖藥物溶出度測定儀REF_Ref7071\r\h[20]由基礎(chǔ)理論研究逐步進入產(chǎn)品研制開發(fā)階段。標志著藥物溶出度的測定方法進入一個嶄新的階段。光纖藥物溶出度儀實現(xiàn)了雙重分析，在溶出度儀的基礎(chǔ)上又結(jié)合光譜分析儀進行操作，其主要由四大系統(tǒng)組成，分別為光學(xué)系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、計算機軟件系統(tǒng)溶出系統(tǒng)及控制系統(tǒng)。利用計算機技術(shù)結(jié)合光纖化學(xué)技術(shù)，不需要人工或手動取樣，可以將光直接導(dǎo)入樣品而避免多次取樣的損失。目前國外對溶出度儀的研制已經(jīng)進入生理模擬時代與數(shù)字化自動控制，人工胃腸系統(tǒng)的計算機控制的溶出度系統(tǒng)正在緊鑼密鼓地進行研究中，其可以生動的模擬胃腸蠕動和介質(zhì)，現(xiàn)已經(jīng)應(yīng)用于固體制劑的體外溶出研究，并取得了重要進展REF_Ref7911\r\h[21]，REF_Ref15418\r\h[22]。5.結(jié)語隨著人類科技的進步，隨著生物藥劑學(xué)的發(fā)展，體外溶出度的測定也受到人們越來越多人的高度重視，近年來,有相當一部分媒體期刊報道利用溶出度研究來篩選藥物處方和工藝，緩、控釋制劑和新的給藥系統(tǒng)的研究,體內(nèi)外相關(guān)性研究等REF_Ref7963\r\h[23]。體外溶出度的測定在很多領(lǐng)域中得到廣泛的應(yīng)用，比如控制對保健品中的功能性成分的質(zhì)量，這些措施均為控制制劑質(zhì)量、不同劑型的選擇和開發(fā)新劑型提供了巨大幫助和支持。需要關(guān)注的一點是，在進行溶出度的測定時，選用合適的溶出度試驗方法至關(guān)重要，故必須全面考慮藥物在體內(nèi)的溶出、分布和吸收規(guī)律。即便這樣，對于大多數(shù)口服固體制劑來說，單純應(yīng)用體外溶出的方法預(yù)測其在體內(nèi)是否具有生物等效性是有局限的REF_Ref8012\r\h[24]，其仍然不能完全模擬藥物在體內(nèi)的作用過程，更不能完全替代藥物的體內(nèi)試驗。同時，在溶出度的測定試驗中，還存在方法選擇不當、時間點和溶劑選擇不當及處理數(shù)據(jù)不當?shù)葐栴},都需要我們在藥物研發(fā)和評價過程中進一步規(guī)范和完善REF_Ref18279\r\h[25]。

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