一、基本概念1.(2020·新高考Ⅰ)通過PCR技術(shù)可在總cDNA中專一性的擴(kuò)增出

Wx基因的cDNA，原因是__________________________________________________2.(2022·全國乙卷)

為了確保新冠病毒核酸檢測的準(zhǔn)確性，在設(shè)計PCR引物時必須依據(jù)新冠病毒RNA中的__________________來進(jìn)行。PCR過程每次循環(huán)分為3步，其中溫度最低的一步是___________3.(2022·廣東)

研究者針對每個需要擴(kuò)增的酶基因設(shè)計一對______，利用PCR技術(shù)，在優(yōu)化反應(yīng)條件后擴(kuò)增得到目標(biāo)酶基因。4.(2022·山東)為構(gòu)建重組載體，需先設(shè)計引物，通過PCR特異性擴(kuò)增基因。用于擴(kuò)增基因的引物需滿足的條件是_______________________________5.(2021·全國)PCR技術(shù)可用于臨床的病原菌檢測。為檢測病人是否感染了某種病原菌，進(jìn)行了相關(guān)操作：①分析PCR擴(kuò)增結(jié)果；②從病人組織樣本中提取DNA；③利用PCR擴(kuò)增DNA片段；④采集病人組織樣本?；卮饐栴}(1)若要得到正確的檢測結(jié)果，正確的操作順序應(yīng)該是_________（用數(shù)字序號）。(2)操作③中使用的酶是_______________________，PCR

反應(yīng)中的每次循環(huán)可分為變性、復(fù)性、________三步，其中復(fù)性的結(jié)果是________。

(3)為了做出正確的診斷，PCR反應(yīng)所用的引物應(yīng)該能與____________特異性結(jié)合。

(4)PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是指____________________________________。該技術(shù)目前被廣泛地應(yīng)用于疾病診斷等方面。【參考答案】1.引物能與WX基因的cDNA特異性結(jié)合2.特異性核苷酸序列

復(fù)性3.引物4.兩種引物分別與兩條模板鏈3′端的堿基序列互補(bǔ)配對5.(1)

④②③①

(2)

耐高溫的DNA聚合酶

延伸

(3)

病原菌DNA(4)

在生物體外大量快速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)二、條件優(yōu)化1.(2021·湖北)某實驗利用PCR技術(shù)獲取目的基因，實驗結(jié)果顯示除目的基因條帶（引物與模板完全配對）外，還有2條非特異條帶（引物和模板不完全配對）。為了減少反應(yīng)非特異條帶的產(chǎn)生，以下措施中有效的是A.增加模板DNA的量

B.延長熱變性的時間C.延長延伸的時間

D.提高復(fù)性的溫度2.(2021·江蘇)熱啟動PCR可提高擴(kuò)增效率，方法之一是：先將除

TaqDNA聚合酶以外的各成分混合后，加熱到80℃以上再混入酶，然后直接從94℃開始PCR擴(kuò)增，下列敘述正確的有_____。A.Taq酶最適催化溫度范圍為50～60℃

B.與常規(guī)PCR相比，熱啟動PCR可減少反應(yīng)起始時引物錯配形成的產(chǎn)物C.兩條子鏈的合成一定都是從5′端向3′端延伸D.PCR產(chǎn)物DNA堿基序列的特異性體現(xiàn)了Taq酶的特異性3.(2017·江蘇)設(shè)計引物是

PCR

技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計的兩組引物（只標(biāo)注了部分堿基序列）都不合理（見圖），請分別說明理由。(1)第1組：

；(2)第2組：

?！緟⒖即鸢浮?.D

2.BC3.(1)引物Ⅰ與引物Ⅱ局部互補(bǔ)配對而失效

(2)引物Ⅰ′自身折疊后互補(bǔ)配對而失效三、應(yīng)用類型1.(2020·北京)為了對重金屬污染的土壤進(jìn)行生物修復(fù)，研究者將從楊樹中克隆的重金屬轉(zhuǎn)運蛋白HMA3基因與外源高效啟動子連接，導(dǎo)入楊樹基因組中（如圖）。為檢測獲得的轉(zhuǎn)基因楊樹苗中是否含有導(dǎo)入的HMA3基因，同時避免內(nèi)源HMA3基因的干擾，在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，應(yīng)選擇的引物組合是(

)。1.(2022·山東)為使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割，需在引物上添加相應(yīng)的限制酶識別序列，該限制酶識別序列應(yīng)添加在引物的______（填“

3′端”或“

5′端”）。2.(2023·模擬)限制酶識別序列應(yīng)添加在引物的______（填“

3′端”或“

5′端”），原因是________________________________________________3.融合PCR技術(shù)是采用具有互補(bǔ)末端的引物，將不同來源的擴(kuò)增片段連接起來的方法，其過程如圖所示.(1)第一階段中PCR至少進(jìn)行____次循環(huán)，才能獲得含引物2且雙鏈等長的DNA，第二階段中兩DNA能成功"搭橋"連接的原因___________________________________。(2)若通過融合PCR技術(shù)將啟動子、標(biāo)記基因、目的基因、終止子拼接起來，需要設(shè)計_____種引物，其中能夠起著"搭橋"作用的引物有____種.第二階段融合擴(kuò)增時____（需要