2025年分子診斷學(xué)模擬考試題+答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.磁珠法提取基因組DNA時(shí)，關(guān)鍵步驟中“結(jié)合緩沖液”的主要成分不包括以下哪項(xiàng)？A.高濃度胍鹽B.TritonX-100C.EDTAD.羧基修飾磁珠答案：C解析：結(jié)合緩沖液需破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)（TritonX-100）、變性蛋白（高濃度胍鹽），并提供磁珠（羧基修飾）與核酸結(jié)合的環(huán)境（低pH、高鹽）；EDTA主要用于抑制核酸酶活性，通常在裂解液或洗滌液中添加，非結(jié)合緩沖液關(guān)鍵成分。2.關(guān)于數(shù)字PCR（dPCR）與實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）的比較，正確的是？A.dPCR依賴(lài)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，qPCR通過(guò)終點(diǎn)計(jì)數(shù)定量B.dPCR可檢測(cè)低豐度突變（如突變頻率<1%），qPCR受限于擴(kuò)增效率差異C.dPCR使用SYBRGreen染料，qPCR僅能使用探針?lè)―.dPCR對(duì)儀器溫度均勻性要求低于qPCR答案：B解析：dPCR通過(guò)微滴/芯片將反應(yīng)體系分割，終點(diǎn)計(jì)數(shù)陽(yáng)性微滴實(shí)現(xiàn)絕對(duì)定量，無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)曲線；qPCR依賴(lài)Ct值與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，易受擴(kuò)增效率影響，對(duì)低豐度突變（<1%）檢測(cè)靈敏度不足。dPCR可使用染料或探針?lè)?，?duì)溫度均勻性要求更高（避免微滴間擴(kuò)增差異）。3.某實(shí)驗(yàn)室使用二代測(cè)序（NGS）檢測(cè)腫瘤驅(qū)動(dòng)基因，以下哪種情況最可能導(dǎo)致“假陰性”結(jié)果？A.測(cè)序深度為500×，覆蓋目標(biāo)區(qū)域98%B.樣本DNA片段化后平均長(zhǎng)度為200bpC.雜交捕獲探針設(shè)計(jì)時(shí)遺漏了EGFR外顯子20插入突變熱點(diǎn)區(qū)域D.數(shù)據(jù)比對(duì)時(shí)使用hg38基因組參考序列答案：C解析：探針設(shè)計(jì)遺漏目標(biāo)區(qū)域會(huì)導(dǎo)致該區(qū)域無(wú)法被捕獲測(cè)序，直接造成突變漏檢（假陰性）。測(cè)序深度500×（通常要求≥500×）、片段化長(zhǎng)度200bp（適合NGS）、使用最新參考序列（hg38）均為規(guī)范操作，不會(huì)導(dǎo)致假陰性。4.表觀遺傳學(xué)診斷中，檢測(cè)DNA甲基化最常用的金標(biāo)準(zhǔn)方法是？A.甲基化特異性PCR（MSP）B.焦磷酸測(cè)序（Pyrosequencing）C.亞硫酸氫鹽測(cè)序（BisulfiteSequencing）D.甲基化敏感限制性?xún)?nèi)切酶-PCR（MSRE-PCR）答案：C解析：亞硫酸氫鹽處理后，未甲基化的胞嘧啶（C）轉(zhuǎn)化為尿嘧啶（U），甲基化的5-甲基胞嘧啶（5mC）保持不變，通過(guò)測(cè)序可直接讀取甲基化狀態(tài)，是甲基化檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。MSP、焦磷酸測(cè)序、MSRE-PCR均為基于亞硫酸氫鹽處理的衍生方法，特異性或定量準(zhǔn)確性稍遜。5.以下哪種技術(shù)可同時(shí)檢測(cè)基因點(diǎn)突變、插入缺失（Indel）、拷貝數(shù)變異（CNV）及結(jié)構(gòu)變異（SV）？A.熒光原位雜交（FISH）B.多重連接依賴(lài)探針擴(kuò)增（MLPA）C.全外顯子測(cè)序（WES）D.實(shí)時(shí)熒光PCR（qPCR）答案：C解析：WES通過(guò)高通量測(cè)序可同時(shí)識(shí)別點(diǎn)突變（SNP）、Indel（短插入/缺失）、CNV（通過(guò)覆蓋度分析）及SV（如易位、倒位，通過(guò)跨外顯子reads比對(duì)）。FISH主要檢測(cè)特定區(qū)域CNV或SV；MLPA側(cè)重CNV；qPCR僅能檢測(cè)已知突變或CNV。6.檢測(cè)循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）時(shí)，為降低“克隆性造血（CH）”導(dǎo)致的假陽(yáng)性，最有效的策略是？A.增加測(cè)序深度至10000×B.同時(shí)檢測(cè)配對(duì)白細(xì)胞DNA作為對(duì)照C.使用血漿游離DNA（cfDNA）而非血清D.優(yōu)化DNA提取時(shí)的去蛋白步驟答案：B解析：克隆性造血是造血干細(xì)胞獲得的體細(xì)胞突變，會(huì)導(dǎo)致ctDNA檢測(cè)中出現(xiàn)非腫瘤來(lái)源的突變（如DNMT3A、TET2）。通過(guò)配對(duì)白細(xì)胞DNA檢測(cè)，可區(qū)分腫瘤特異性突變（ctDNA中存在，白細(xì)胞中不存在）與CH相關(guān)突變（兩者均存在），有效降低假陽(yáng)性。7.某患者因“進(jìn)行性肌肉無(wú)力”就診，基因檢測(cè)提示DMD基因外顯子45-50缺失，最可能的診斷是？A.脊髓性肌萎縮癥（SMA）B.假肥大型肌營(yíng)養(yǎng)不良（DMD/BMD）C.強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良（DM1）D.肢帶型肌營(yíng)養(yǎng)不良（LGMD）答案：B解析：DMD基因編碼抗肌萎縮蛋白（dystrophin），其外顯子缺失（尤其是框內(nèi)或框外缺失）是DMD（杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良，嚴(yán)重型）和BMD（貝克型，輕型）的主要致病機(jī)制。SMA由SMN1基因缺失引起；DM1與DMPK基因CTG重復(fù)擴(kuò)增相關(guān)；LGMD涉及多種基因（如CAPN3、DYSF）突變。8.新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）變異株檢測(cè)中，以下哪種技術(shù)可在單反應(yīng)管內(nèi)同時(shí)區(qū)分OmicronBA.5與XBB.1.5？A.病毒全基因組測(cè)序（WGS）B.多重?zé)晒釶CR（MultiplexqPCR）C.等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）D.數(shù)字PCR（dPCR）答案：B解析：多重?zé)晒釶CR可設(shè)計(jì)針對(duì)不同變異株特異性位點(diǎn)（如BA.5的S:R346T與XBB.1.5的S:F486P）的探針，通過(guò)不同熒光通道（如FAM、HEX）同時(shí)檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)快速分型。WGS雖準(zhǔn)確但耗時(shí)；LAMP、dPCR通常用于定量或單靶標(biāo)檢測(cè)，多靶標(biāo)分型能力有限。9.關(guān)于單細(xì)胞測(cè)序（scRNA-seq）在腫瘤微環(huán)境分析中的應(yīng)用，錯(cuò)誤的是？A.可識(shí)別腫瘤細(xì)胞亞克隆及異質(zhì)性B.能檢測(cè)免疫細(xì)胞（如T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）的表型及功能狀態(tài)C.需對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行全基因組擴(kuò)增（WGA）D.結(jié)果需結(jié)合降維分析（如t-SNE、UMAP）可視化答案：C解析：scRNA-seq針對(duì)RNA（mRNA）進(jìn)行測(cè)序，需反轉(zhuǎn)錄為cDNA后擴(kuò)增；全基因組擴(kuò)增（WGA）是單細(xì)胞基因組測(cè)序（scDNA-seq）的步驟。其余選項(xiàng)均為scRNA-seq的典型應(yīng)用。10.以下哪種突變類(lèi)型最適合用高分辨率熔解曲線分析（HRM）檢測(cè)？A.大片段缺失（>100bp）B.單核苷酸多態(tài)性（SNP）C.基因融合（如ALK-EML4）D.三核苷酸重復(fù)擴(kuò)增（如FMR1的CGG重復(fù)）答案：B解析：HRM通過(guò)分析PCR產(chǎn)物熔解曲線的差異（由序列差異引起）檢測(cè)突變，對(duì)單堿基變異（SNP）敏感；大片段缺失會(huì)導(dǎo)致熔解曲線顯著偏移（但非HRM優(yōu)勢(shì)），基因融合需斷點(diǎn)特異性檢測(cè)，三核苷酸重復(fù)擴(kuò)增需長(zhǎng)度分析（如毛細(xì)管電泳）。11.某實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展BRCA1/2基因檢測(cè)，以下哪項(xiàng)操作不符合質(zhì)量控制要求？A.使用經(jīng)FDA/CE認(rèn)證的檢測(cè)試劑盒B.每批次檢測(cè)包含陽(yáng)性對(duì)照（已知BRCA1c.68_69del突變）和陰性對(duì)照（野生型DNA）C.對(duì)樣本DNA進(jìn)行定量（Qubit），確保濃度≥20ng/μL且A260/A280=1.8-2.0D.測(cè)序數(shù)據(jù)比對(duì)時(shí)，將未覆蓋的外顯子標(biāo)記為“未檢測(cè)”，不報(bào)告結(jié)果答案：D解析：BRCA1/2檢測(cè)需覆蓋所有編碼外顯子及剪接位點(diǎn)，未覆蓋區(qū)域應(yīng)視為檢測(cè)局限性，需在報(bào)告中注明“該區(qū)域未檢測(cè)，可能遺漏突變”，而非直接不報(bào)告。其余選項(xiàng)均為規(guī)范操作。12.用于檢測(cè)微小殘留?。∕RD）的理想分子標(biāo)記物應(yīng)具備以下特征，除了？A.腫瘤特異性（僅存在于腫瘤細(xì)胞，正常細(xì)胞無(wú)）B.高靈敏度（可檢測(cè)10??水平的殘留細(xì)胞）C.穩(wěn)定性（治療過(guò)程中持續(xù)存在）D.廣泛存在于所有腫瘤類(lèi)型答案：D解析：MRD標(biāo)記物需具有腫瘤特異性（如白血病的融合基因、實(shí)體瘤的驅(qū)動(dòng)突變），但不同腫瘤的標(biāo)記物不同（如肺癌的EGFR突變、結(jié)直腸癌的KRAS突變），無(wú)法“廣泛存在于所有腫瘤”。13.關(guān)于三代測(cè)序（PacBioSMRT、OxfordNanopore）在分子診斷中的優(yōu)勢(shì)，正確的是？A.測(cè)序讀長(zhǎng)可達(dá)數(shù)kb至Mb級(jí)，適合檢測(cè)結(jié)構(gòu)變異（如倒位、易位）B.錯(cuò)誤率低于二代測(cè)序（NGS），無(wú)需重復(fù)測(cè)序C.無(wú)需DNA片段化，可直接對(duì)完整基因組進(jìn)行測(cè)序D.數(shù)據(jù)分析簡(jiǎn)單，無(wú)需復(fù)雜生物信息學(xué)工具答案：A解析：三代測(cè)序的超長(zhǎng)讀長(zhǎng)（PacBio~20kb，Nanopore~Mb）可跨越重復(fù)序列及結(jié)構(gòu)變異斷點(diǎn)，準(zhǔn)確識(shí)別SV；其錯(cuò)誤率較高（~1-15%），需通過(guò)多次測(cè)序（如PacBio的HiFi模式）糾錯(cuò)；DNA仍需打斷至合適長(zhǎng)度（如PacBio需20kb片段）；數(shù)據(jù)分析涉及長(zhǎng)讀長(zhǎng)比對(duì)、糾錯(cuò)等，生物信息學(xué)要求更高。14.檢測(cè)人類(lèi)白細(xì)胞抗原（HLA）分型時(shí)，最常用的分子診斷技術(shù)是？A.序列特異性引物PCR（SSP-PCR）B.實(shí)時(shí)熒光PCR（qPCR）C.原位雜交（ISH）D.流式細(xì)胞術(shù)（FCM）答案：A解析：HLA分型需精確到等位基因水平，SSP-PCR通過(guò)設(shè)計(jì)針對(duì)HLA等位基因特異性引物，擴(kuò)增后電泳判斷分型，是臨床常用方法。qPCR多用于定量；ISH用于組織定位；FCM檢測(cè)蛋白表達(dá)，無(wú)法區(qū)分等位基因。15.以下哪種病原體的分子檢測(cè)需特別注意“前病毒整合”現(xiàn)象？A.乙型肝炎病毒（HBV）B.人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）C.人乳頭瘤病毒（HPV）D.巨細(xì)胞病毒（CMV）答案：B解析：HIV感染后，病毒RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA并整合到宿主染色體中形成前病毒（provirus），常規(guī)PCR檢測(cè)血漿病毒載量（游離RNA）無(wú)法反映潛伏感染狀態(tài)，需結(jié)合前病毒DNA檢測(cè)（如外周血單個(gè)核細(xì)胞中的HIVDNA）。HBV、HPV、CMV主要以游離或episome形式存在，整合現(xiàn)象非檢測(cè)關(guān)鍵。二、簡(jiǎn)答題（每題10分，共50分）1.簡(jiǎn)述核酸提取過(guò)程中“RNA易降解”的主要原因及常用防護(hù)措施。答案：RNA易降解的主要原因：①RNA分子2’-羥基的存在使其更易發(fā)生水解；②環(huán)境中廣泛存在RNA酶（RNase），耐熱且耐常規(guī)變性劑（如蛋白酶K）；③樣本保存不當(dāng)（如組織未及時(shí)凍存或使用RNA保護(hù)劑）導(dǎo)致內(nèi)源性RNase釋放。防護(hù)措施：①使用無(wú)RNase的耗材（經(jīng)DEPC處理或商品化無(wú)酶產(chǎn)品）；②加入RNase抑制劑（如RNasin）抑制外源性RNase；③樣本采集后立即凍存（-80℃）或使用RNA保存液（如RNAlater）；④提取過(guò)程中保持低溫（冰上操作）；⑤裂解液中含強(qiáng)變性劑（如異硫氰酸胍）破壞RNase活性；⑥提取后RNA盡快使用或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。2.比較Sanger測(cè)序與二代測(cè)序（NGS）在基因突變檢測(cè)中的應(yīng)用場(chǎng)景。答案：Sanger測(cè)序：原理：雙脫氧鏈終止法，通過(guò)毛細(xì)管電泳分離不同長(zhǎng)度的終止片段，讀取序列。優(yōu)勢(shì)：?jiǎn)巫x長(zhǎng)準(zhǔn)確性高（>99.99%），操作簡(jiǎn)單，成本低（針對(duì)少數(shù)基因）。應(yīng)用場(chǎng)景：小范圍基因檢測(cè)（如單基因遺傳病的已知突變篩查、驗(yàn)證NGS發(fā)現(xiàn)的變異）、低復(fù)雜度樣本（如純合突變、高豐度突變）。NGS：原理：高通量平行測(cè)序，通過(guò)短讀長(zhǎng)（50-300bp）大規(guī)模測(cè)序，生物信息學(xué)拼接分析。優(yōu)勢(shì)：可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因（panel）、全外顯子（WES）或全基因組（WGS），覆蓋點(diǎn)突變、Indel、CNV、SV等多種變異類(lèi)型，適合大樣本或未知突變篩查。應(yīng)用場(chǎng)景：腫瘤多基因panel檢測(cè)（如驅(qū)動(dòng)基因、耐藥基因）、遺傳病全外顯子分析、病原微生物宏基因組測(cè)序（mNGS）等。3.闡述CRISPR-Cas系統(tǒng)在分子診斷中的創(chuàng)新應(yīng)用（至少列舉2種）。答案：CRISPR-Cas系統(tǒng)（如Cas9、Cas12、Cas13）因具有RNA引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶活性，已被開(kāi)發(fā)為新型診斷工具：①病原體快速檢測(cè)（如SHERLOCK技術(shù)）：設(shè)計(jì)靶向病原體核酸（DNA/RNA）的gRNA，Cas13（RNA靶向）或Cas12（DNA靶向）結(jié)合目標(biāo)序列后激活非特異性切割活性，剪切熒光標(biāo)記的報(bào)告探針，通過(guò)熒光信號(hào)實(shí)現(xiàn)可視化檢測(cè)（如試紙條）。該技術(shù)無(wú)需擴(kuò)增（或僅需等溫?cái)U(kuò)增），可在30分鐘內(nèi)完成，適用于POCT（如新冠病毒、瘧原蟲(chóng)檢測(cè)）。②癌癥突變分型：利用Cas9的精準(zhǔn)靶向性，設(shè)計(jì)針對(duì)特定突變位點(diǎn)（如EGFRT790M）的gRNA，切割野生型DNA，富集突變型DNA后進(jìn)行測(cè)序或PCR，提高低豐度突變（如ctDNA中的突變）的檢測(cè)靈敏度。4.簡(jiǎn)述“腫瘤分子分型”對(duì)臨床治療的指導(dǎo)意義（以非小細(xì)胞肺癌為例）。答案：腫瘤分子分型通過(guò)檢測(cè)驅(qū)動(dòng)基因變異，為非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）提供精準(zhǔn)治療依據(jù)：①EGFR敏感突變（19del、L858R）：推薦EGFR-TKI（如吉非替尼、奧希替尼），顯著延長(zhǎng)無(wú)進(jìn)展生存期（PFS），優(yōu)于傳統(tǒng)化療。②ALK融合（如ALK-EML4）：使用ALK抑制劑（如克唑替尼、阿來(lái)替尼），客觀緩解率（ORR）>70%。③ROS1融合：對(duì)克唑替尼敏感，需與ALK融合區(qū)分。④KRASG12C突變：針對(duì)性抑制劑（如索托拉西布）獲批，填補(bǔ)該突變既往無(wú)靶向藥的空白。⑤PD-L1表達(dá)（CPS≥10）或MSI-H/dMMR：推薦免疫檢查點(diǎn)抑制劑（如帕博利珠單抗）單藥治療。⑥無(wú)驅(qū)動(dòng)基因（野生型）：以化療±免疫治療為主。分子分型避免了“一刀切”治療，提高療效并減少無(wú)效治療的毒副作用。5.設(shè)計(jì)一個(gè)針對(duì)“脊髓性肌萎縮癥（SMA）”的分子診斷方案（需包含檢測(cè)基因、技術(shù)選擇及結(jié)果判讀）。答案：SMA由SMN1基因（5q13）純合缺失或功能喪失突變引起，SMN2基因?yàn)槠渫椿颍截悢?shù)影響表型嚴(yán)重程度）。診斷方案：①檢測(cè)基因：SMN1（外顯子7、8）、SMN2（外顯子7拷貝數(shù)）。②技術(shù)選擇：多重連接依賴(lài)探針擴(kuò)增（MLPA）：檢測(cè)SMN1外顯子7/8缺失（SMA最常見(jiàn)致病機(jī)制，占95%），同時(shí)定量SMN2拷貝數(shù)（與病情嚴(yán)重度負(fù)相關(guān)：1拷貝→Ⅰ型，2拷貝→Ⅱ型，3-4拷貝→Ⅲ/Ⅳ型）。全外顯子測(cè)序（WES）：對(duì)MLPA未檢測(cè)到缺失的患者，篩查SMN1點(diǎn)突變或小Indel（占5%）。家系驗(yàn)證：對(duì)先證者父母檢測(cè)SMN1雜合缺失（攜帶者），指導(dǎo)遺傳咨詢(xún)。結(jié)果判讀：SMN1外顯子7/8純合缺失+SMN2拷貝數(shù)≤3：確診SMA，結(jié)合拷貝數(shù)判斷臨床分型。SMN1雜合缺失：攜帶者（無(wú)臨床癥狀，生育風(fēng)險(xiǎn)25%）。SMN1無(wú)缺失但存在功能突變（如c.859C>T）：需通過(guò)功能實(shí)驗(yàn)（如SMN蛋白表達(dá)檢測(cè)）確認(rèn)致病性。三、案例分析題（每題10分，共20分）案例1：患者男性，65歲，因“咳嗽、痰中帶血2月”就診，胸部CT提示右肺上葉占位（3cm×2.5cm），病理活檢確診為肺腺癌。臨床要求進(jìn)行分子檢測(cè)以指導(dǎo)治療。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果：EGFR基因：外顯子19缺失（19del），豐度45%；外顯子20T790M突變，豐度2%。ALK融合：陰性。PD-L1表達(dá)（CPS評(píng)分）：8分。腫瘤突變負(fù)荷（TMB）：5Mut/Mb（低）。微衛(wèi)星狀態(tài)（MSI）：MSS（微衛(wèi)星穩(wěn)定）。問(wèn)題：（1）該患者的主要驅(qū)動(dòng)基因是什么？推薦的一線治療方案是什么？（2）EGFR20T790M突變的存在可能對(duì)治療產(chǎn)生什么影響？需如何處理？答案：（1）主要驅(qū)動(dòng)基因?yàn)镋GFR外顯子19缺失（19del），屬于EGFR敏感突變。推薦一線治療方案為第三代EGFR-TKI（如奧希替尼），因其對(duì)19del/L858R等敏感突變的療效優(yōu)于一代/二代TKI，且可覆蓋潛在的T790M耐藥突變（該患者已檢測(cè)到低豐度T790M，可能為原發(fā)或治療前克?。?。（2）EGFR20T790M突變是一/二代EGFR-TKI的主要耐藥機(jī)制（約60%患者治療后出現(xiàn)）。該患者治療前已存在低豐度T790M（2%），可能提示腫瘤內(nèi)存在耐藥亞克隆，使用一/二代TKI（如吉非替尼）可能導(dǎo)致早期耐藥。因此，直接選擇奧希替尼（可同時(shí)