2026年生物醫(yī)藥研究員細胞培養(yǎng)與基因表達測試題202X一、單選題（共10題，每題2分，合計20分）1.在細胞培養(yǎng)過程中，以下哪種培養(yǎng)基成分對于貼壁細胞的生長至關(guān)重要？A.甘露醇B.胰蛋白酶C.胰島素D.乙二胺四乙酸（EDTA）2.當(dāng)細胞培養(yǎng)皿中出現(xiàn)微生物污染時，以下哪種方法最能有效區(qū)分細菌和真菌污染？A.直接觀察菌落形態(tài)B.染色鏡檢（革蘭染色）C.培養(yǎng)基抗生素測試D.細胞計數(shù)法3.在基因表達分析中，Northernblotting主要用于檢測以下哪種分子？A.蛋白質(zhì)B.mRNAC.DNAD.脫氧核糖核酸酶4.以下哪種質(zhì)粒載體常用于原核表達系統(tǒng)？A.pCDNA3.1B.pET28aC.pGL3D.pEGFP-C15.在細胞培養(yǎng)過程中，以下哪種方法可有效防止細胞接觸抑制？A.限制培養(yǎng)基體積B.使用低密度培養(yǎng)板C.添加血清D.提高CO?濃度6.以下哪種試劑常用于細胞裂解以提取總RNA？A.SDSB.Tris-HClC.EDTAD.β-巰基乙醇7.在基因敲除實驗中，以下哪種技術(shù)最為常用？A.RNA干擾（RNAi）B.CRISPR-Cas9C.亞克隆技術(shù)D.基因轉(zhuǎn)染8.細胞培養(yǎng)過程中，以下哪種現(xiàn)象可能由缺氧引起？A.細胞凋亡B.細胞增殖加快C.膠原蛋白分泌增加D.細胞形態(tài)改變9.在基因表達調(diào)控中，以下哪種轉(zhuǎn)錄因子屬于缺氧誘導(dǎo)因子（HIF）家族？A.NF-κBB.AP-1C.HIF-1αD.STAT310.以下哪種方法常用于檢測基因表達產(chǎn)物的翻譯后修飾？A.WesternblottingB.NorthernblottingC.PCRD.Southernblotting二、多選題（共5題，每題3分，合計15分）1.細胞培養(yǎng)過程中，以下哪些因素可能導(dǎo)致細胞老化？A.DNA損傷B.氧化應(yīng)激C.細胞營養(yǎng)耗盡D.激素刺激E.細胞接觸抑制2.在基因克隆過程中，以下哪些步驟是必要的？A.PCR擴增目標基因B.限制性內(nèi)切酶消化C.連接酶處理D.轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.基因測序驗證3.細胞培養(yǎng)基中，以下哪些成分屬于天然成分？A.絲裂原B.乙醇胺C.胰蛋白酶抑制劑D.胰島素E.乳酸4.在基因表達分析中，以下哪些方法可用于半定量檢測？A.qRT-PCRB.RNA印跡法C.熒光定量PCRD.數(shù)字PCRE.Northernblotting5.細胞培養(yǎng)過程中，以下哪些措施可有效防止微生物污染？A.無菌操作B.培養(yǎng)基滅菌C.空氣過濾系統(tǒng)D.抗生素添加E.細胞凍存三、判斷題（共10題，每題1分，合計10分）1.細胞培養(yǎng)過程中，完全培養(yǎng)基通常包含血清、氨基酸和生長因子。（√）2.真空抽濾法可用于去除細胞培養(yǎng)基中的氣泡。（×）3.在基因表達分析中，RT-PCR可檢測到全長mRNA和剪接異構(gòu)體。（√）4.細胞接觸抑制是正常細胞行為，而癌細胞則不受此限制。（√）5.乙醇胺是細胞培養(yǎng)基中的必需成分。（×）6.原核表達系統(tǒng)通常比真核表達系統(tǒng)具有更高的翻譯效率。（√）7.基因敲除實驗可通過RNA干擾技術(shù)實現(xiàn)。（×）8.細胞培養(yǎng)過程中，CO?濃度通常維持在5%。（√）9.HIF-1α在正常細胞中表達水平極低。（×）10.Westernblotting主要用于檢測DNA。（×）四、簡答題（共5題，每題5分，合計25分）1.簡述細胞培養(yǎng)過程中無菌操作的要點。2.解釋基因敲除實驗的基本原理。3.描述Northernblotting的實驗步驟。4.分析細胞培養(yǎng)基中血清的作用及其局限性。5.比較原核表達系統(tǒng)與真核表達系統(tǒng)的優(yōu)缺點。五、論述題（共2題，每題10分，合計20分）1.論述缺氧對細胞基因表達的影響及其生物學(xué)意義。2.結(jié)合實際案例，分析基因編輯技術(shù)在生物醫(yī)藥研究中的應(yīng)用前景。答案與解析一、單選題答案與解析1.C解析：胰島素是細胞培養(yǎng)中重要的生長因子，對貼壁細胞的增殖和分化至關(guān)重要。甘露醇是滲透壓調(diào)節(jié)劑，胰蛋白酶是消化酶，EDTA是螯合劑，均非貼壁細胞必需成分。2.B解析：革蘭染色可區(qū)分細菌（革蘭氏陽性/陰性）和真菌（通常呈陰性），直接觀察菌落形態(tài)難以精確區(qū)分，其他方法無法特異性鑒別。3.B解析：Northernblotting通過雜交技術(shù)檢測mRNA，是基因表達分析的經(jīng)典方法。其他方法分別針對蛋白質(zhì)、DNA和酶。4.B解析：pET28a是常用的原核表達載體，含T7啟動子，適合大腸桿菌表達。其他載體均為真核表達載體。5.B解析：低密度培養(yǎng)可避免細胞接觸抑制，限制培養(yǎng)基體積、添加血清或提高CO?濃度均無法解決此問題。6.A解析：SDS可裂解細胞并釋放總RNA，其他試劑作用不同：Tris-HCl是緩沖液，EDTA螯合金屬離子，β-巰基乙醇抑制蛋白酶。7.B解析：CRISPR-Cas9是目前最常用的基因敲除技術(shù)，通過引導(dǎo)RNA靶向切割DNA。其他方法各有局限。8.A解析：缺氧可誘導(dǎo)細胞凋亡，其他現(xiàn)象與缺氧關(guān)系不大或相反。9.C解析：HIF-1α是缺氧誘導(dǎo)因子，參與細胞對低氧的適應(yīng)性反應(yīng)。其他因子非缺氧特異性。10.A解析：Westernblotting檢測蛋白質(zhì)，可用于檢測翻譯后修飾（如磷酸化、乙?；?。其他方法分別檢測RNA、DNA或進行基因擴增。二、多選題答案與解析1.A、B、C、E解析：DNA損傷、氧化應(yīng)激、營養(yǎng)耗盡和接觸抑制均可導(dǎo)致細胞老化，激素刺激通常促進細胞生長。2.A、B、C、D、E解析：基因克隆需PCR擴增、限制性內(nèi)切酶消化、連接酶處理、轉(zhuǎn)化大腸桿菌及測序驗證。3.B、C、D解析：絲裂原（植物來源）、胰蛋白酶抑制劑和胰島素為天然成分，乙醇胺和乳酸非天然培養(yǎng)基成分。4.B、E解析：RNA印跡法和Northernblotting為半定量方法，其他為定量方法。5.A、B、C、D解析：無菌操作、培養(yǎng)基滅菌、空氣過濾和抗生素添加均能防止微生物污染，細胞凍存主要用于保存，非污染預(yù)防措施。三、判斷題答案與解析1.√解析：完全培養(yǎng)基通常含血清、氨基酸和生長因子，提供全面營養(yǎng)支持。2.×解析：真空抽濾法主要用于濃縮或純化，去除氣泡需使用注射器或氣泡吸收器。3.√解析：RT-PCR可檢測全長mRNA及剪接異構(gòu)體，因PCR擴增前需逆轉(zhuǎn)錄。4.√解析：正常細胞受接觸抑制，癌細胞則突破此限制，形成致密單層。5.×解析：乙醇胺非必需，常見于無血清培養(yǎng)基中，但非完全培養(yǎng)基必需成分。6.√解析：原核表達系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄翻譯偶聯(lián)，翻譯效率通常高于真核系統(tǒng)。7.×解析：基因敲除需CRISPR等技術(shù)，RNA干擾僅用于基因沉默。8.√解析：CO?濃度通常維持在5%，維持培養(yǎng)基pH穩(wěn)定。9.×解析：HIF-1α在正常細胞中低表達，但缺氧時大量誘導(dǎo)。10.×解析：Westernblotting檢測蛋白質(zhì)，Southernblotting檢測DNA。四、簡答題答案與解析1.細胞培養(yǎng)無菌操作要點-使用超凈工作臺或生物安全柜；-手部消毒并戴無菌手套；-培養(yǎng)基和器皿高壓滅菌；-避免空氣流動干擾；-操作前后酒精消毒臺面。2.基因敲除實驗原理-利用CRISPR-Cas9或鋅指核酸酶靶向切割基因；-DNA修復(fù)過程產(chǎn)生插入/缺失突變，導(dǎo)致基因失活；-通過篩選獲得敲除細胞系。3.Northernblotting步驟-RNA提取與電泳分離；-轉(zhuǎn)移至尼龍膜；-封膜雜交特異性探針；-顯色檢測雜交信號。4.細胞培養(yǎng)基中血清的作用及局限性-作用：提供生長因子、激素、氨基酸等；-局限性：批次差異大、免疫原性、可能含未知毒素。5.原核與真核表達系統(tǒng)比較-原核：高效、低成本、快速；缺點：無翻譯后修飾、蛋白折疊異常。-真核：支持修飾、正確折疊；缺點：耗時、成本高。五、論述題答案與解析1.缺氧對細胞基因表達的影響及其生物學(xué)意義缺氧誘導(dǎo)HIF-1α表達，調(diào)控血管生成、代謝重