腫瘤干細胞微環(huán)境中的免疫檢查點調(diào)控新機制演講人CONTENTS腫瘤干細胞微環(huán)境中的免疫檢查點調(diào)控新機制腫瘤干細胞微環(huán)境的特征：免疫逃逸的“土壤”傳統(tǒng)免疫檢查點在CSC微環(huán)境中的作用與局限性腫瘤干細胞微環(huán)境中免疫檢查點調(diào)控的新機制基于新機制的靶向治療策略與挑戰(zhàn)目錄01腫瘤干細胞微環(huán)境中的免疫檢查點調(diào)控新機制腫瘤干細胞微環(huán)境中的免疫檢查點調(diào)控新機制作為長期致力于腫瘤免疫微環(huán)境研究的科研工作者，我始終認為，腫瘤干細胞（CancerStemCells,CSCs）與免疫系統(tǒng)的博弈是腫瘤治療領(lǐng)域最前沿的戰(zhàn)場之一。傳統(tǒng)免疫檢查點抑制劑（ImmuneCheckpointInhibitors,ICIs）雖在部分腫瘤中取得突破，但對CSCs的清除效果有限，其根源在于CSCs獨特的微環(huán)境（TumorMicroenvironment,TME）通過多重機制重塑免疫檢查點網(wǎng)絡(luò)，形成“免疫逃逸堡壘”。近年來，隨著單細胞測序、空間轉(zhuǎn)錄組、代謝組學等技術(shù)的革新，我們對CSCs微環(huán)境中免疫檢查點的調(diào)控機制有了更深刻的認識——這不僅是基礎(chǔ)理論的突破，更是開發(fā)新型聯(lián)合治療策略的關(guān)鍵鑰匙。本文將從CSCs微環(huán)境的特征入手，系統(tǒng)闡述傳統(tǒng)免疫檢查點調(diào)控的局限性，重點剖析近年來揭示的新機制，并探討其臨床轉(zhuǎn)化前景，以期為攻克腫瘤耐藥與復(fù)發(fā)提供新思路。02腫瘤干細胞微環(huán)境的特征：免疫逃逸的“土壤”腫瘤干細胞微環(huán)境的特征：免疫逃逸的“土壤”腫瘤干細胞微環(huán)境并非普通TME的簡單subset，而是通過細胞間互作、代謝重編程、信號通路交叉調(diào)控等形成的“特權(quán)生態(tài)位”，為CSCs的自我更新、免疫逃逸和治療抵抗提供核心支持。理解其特征，是解析免疫檢查點調(diào)控機制的基礎(chǔ)。CSCs的生物學特性：免疫逃逸的“先天優(yōu)勢”CSCs是腫瘤中具有自我更新、多向分化能力和無限增殖潛能的細胞亞群，其表型特征（如CD44+/CD24-、ALDH1高表達、EpCAM+等）與干細胞信號通路（Wnt/β-catenin、Notch、Hedgehog）的異常激活密切相關(guān)。相較于普通腫瘤細胞，CSCs具有獨特的免疫學特性：1.低免疫原性：CSCs常通過下調(diào)MHCI類分子、抗原加工相關(guān)分子（如TAP1、LMP2）以及腫瘤抗原（如NY-ESO-1、MAGE-A3）的表達，減少T細胞識別。例如，在乳腺癌CSCs中，干細胞轉(zhuǎn)錄因子OCT4可直接抑制MHCI類分子的轉(zhuǎn)錄，形成“免疫沉默”表型。CSCs的生物學特性：免疫逃逸的“先天優(yōu)勢”2.免疫抑制性分子高表達：CSCs表面高表達免疫檢查點分子（如PD-L1、CD47、CTLA-4），其中PD-L1不僅通過PD-1/PD-L1軸抑制T細胞活化，還可通過反向信號促進CSCs的自我更新。研究顯示，結(jié)直腸癌CSCs中PD-L1的表達水平是普通腫瘤細胞的3-5倍，且與患者預(yù)后不良顯著相關(guān)。3.抗凋亡能力增強：CSCs高表達BCL-2、Survivin等抗凋亡蛋白，對免疫細胞殺傷（如CTL顆粒酶、Fas/FasL通路）具有天然抵抗。CSCs微環(huán)境的細胞組分：免疫抑制網(wǎng)絡(luò)的“構(gòu)建者”CSCs通過分泌細胞因子、趨化因子主動招募并極化免疫抑制細胞，形成以CSCs為核心的“免疫抑制微生態(tài)”：1.腫瘤相關(guān)巨噬細胞（TAMs）：CSCs分泌CCL2、CSF-1等因子，招募單核細胞分化為M2型TAMs。M2型TAMs高表達PD-L1、IL-10、TGF-β，一方面通過PD-L1/PD-1軸抑制T細胞活性，另一方面通過分泌TGF-β誘導Treg分化，形成“免疫抑制閉環(huán)”。在膠質(zhì)母細胞瘤中，CSCs來源的CXCL12可招募CXCR4+TAMs，后者通過PD-L1介導的旁路抑制效應(yīng)，使CD8+T細胞失能。CSCs微環(huán)境的細胞組分：免疫抑制網(wǎng)絡(luò)的“構(gòu)建者”2.髓系來源抑制細胞（MDSCs）：CSCs分泌GM-CSF、IL-6等因子，擴增MDSCs。MDSCs通過精氨酸酶1（ARG1）、誘導型一氧化氮合酶（iNOS）消耗微環(huán)境中的精氨酸和L-精氨酸，抑制T細胞增殖；同時，MDSCs高表達PD-L1，直接抑制CTL活性。在胰腺癌模型中，清除MDSCs可顯著增強抗PD-1抗體對CSCs的清除效果。3.調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）：CSCs分泌TGF-β、IL-10，促進初始T細胞分化為Treg。Treg通過CTLA-4競爭性結(jié)合抗原呈遞細胞（APC）表面的CD80/CD86，分泌IL-35抑制效應(yīng)T細胞功能，同時高表達PD-1形成“免疫抑制盾牌”。在卵巢癌中，CSCs周圍Treg浸潤密度與PD-L1表達呈正相關(guān)，且與患者化療耐藥直接相關(guān)。CSCs微環(huán)境的細胞組分：免疫抑制網(wǎng)絡(luò)的“構(gòu)建者”4.髓系來源抑制性樹突狀細胞（DCs）：CSCs分泌VEGF、IL-10，抑制DCs成熟，使其低表達MHCII類分子和共刺激分子（CD80/CD86），高表達PD-L1，無法有效激活T細胞，反而誘導T細胞耐受。CSCs微環(huán)境的代謝特征：免疫檢查點調(diào)控的“幕后推手”CSCs通過代謝重編程塑造獨特的微環(huán)境代謝特征，直接影響免疫細胞功能及免疫檢查點表達：1.糖酵解增強與乳酸積累：CSCs即使在常氧條件下也傾向于糖酵解（Warburg效應(yīng)），大量分泌乳酸。乳酸不僅通過酸化微環(huán)境抑制CTL、NK細胞活性，還可通過抑制組蛋白去乙?；福℉DAC）活性，上調(diào)PD-L1、CTLA-4等免疫檢查點基因的表達。例如，在黑色素瘤中，乳酸可通過GPR81受體激活CSCs內(nèi)的cAMP/PKA信號，促進PD-L1的轉(zhuǎn)錄后修飾，增強其穩(wěn)定性。2.腺苷積累：CSCs高表達CD39和CD73，將ATP分解為腺苷。腺苷通過與T細胞、NK細胞上的A2AR受體結(jié)合，抑制cAMP信號通路，降低IFN-γ分泌，并上調(diào)PD-1、LAG-3等抑制性受體表達。在肺癌CSCs中，CD73敲除可顯著增強抗PD-1抗體的療效。CSCs微環(huán)境的代謝特征：免疫檢查點調(diào)控的“幕后推手”3.色氨酸代謝異常：CSCs高表達吲胺2,3-雙加氧酶（IDO），將色氨酸分解為犬尿氨酸。犬尿氨酸不僅通過芳香烴受體（AhR）抑制T細胞增殖，還可誘導Treg分化，同時促進DCs高表達PD-L1。CSCs微環(huán)境的基質(zhì)成分：免疫檢查點調(diào)控的“物理屏障”CSCs常定位于“干細胞龕”（StemCellNiche），由成纖維細胞、內(nèi)皮細胞、細胞外基質(zhì)（ECM）等構(gòu)成，形成物理和化學屏障：1.癌癥相關(guān)成纖維細胞（CAFs）：CAFs被CSCs分泌的TGF-β、PDGF激活，分泌大量ECM成分（如I型膠原、纖維連接蛋白），形成致密的纖維化基質(zhì)，阻礙免疫細胞浸潤。同時，CAFs高表達PD-L1，通過直接接觸抑制T細胞活性。在肝癌中，CAF來源的HGF可通過c-MET信號上調(diào)CSCs的PD-L1表達。2.ECM剛度增加：CSCs通過激活CAFs和自身分泌ECM，增加微環(huán)境剛度。剛度可通過整合素αvβ3激活FAK/Src信號，上調(diào)PD-L1的表達；同時，剛度CSCs微環(huán)境的基質(zhì)成分：免疫檢查點調(diào)控的“物理屏障”抑制免疫細胞的遷移，形成“免疫排斥”微環(huán)境。綜上所述，CSCs微環(huán)境通過細胞互作、代謝重編程、基質(zhì)重塑等多維度機制，構(gòu)建了一個“免疫抑制性生態(tài)位”，為免疫檢查點的異常調(diào)控提供了土壤。這一生態(tài)位不僅限制了傳統(tǒng)ICIs對CSCs的清除，更成為腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的“策源地”。03傳統(tǒng)免疫檢查點在CSC微環(huán)境中的作用與局限性傳統(tǒng)免疫檢查點在CSC微環(huán)境中的作用與局限性在CSCs微環(huán)境中，PD-1/PD-L1、CTLA-4、LAG-3等傳統(tǒng)免疫檢查點分子的調(diào)控機制雖已有部分研究，但其作用效果和局限性逐漸凸顯，為探索新機制提供了方向。PD-1/PD-L1軸：CSCs免疫逃逸的“核心開關(guān)”PD-1/PD-L1軸是研究最深入的免疫檢查點通路，在CSCs微環(huán)境中呈現(xiàn)獨特的調(diào)控特點：1.PD-L1的表達調(diào)控：CSCs中PD-L1的表達受多重信號調(diào)控：①IFN-γ/JAK2/STAT3信號：IFN-γ可通過STAT3直接結(jié)合PD-L1啟動子；②PI3K/Akt/mTOR信號：Akt可通過mTORC1激活PD-L1的翻譯；③HIF-1α：在低氧條件下，HIF-1α可直接轉(zhuǎn)錄激活PD-L1。例如，在乳腺癌CSCs中，干細胞轉(zhuǎn)錄因子NANOG可通過激活HIF-1α/PD-L1軸介導免疫逃逸。2.PD-1的表達與功能：雖然CSCs本身PD-1表達較低，但其周圍的T細胞高表達PD-1。PD-L1+CSCs通過PD-1/PD-L1軸誘導T細胞耗竭，表現(xiàn)為IFN-γ分泌減少、顆粒酶B活性降低、增殖能力下降。PD-1/PD-L1軸：CSCs免疫逃逸的“核心開關(guān)”3.局限性：盡管抗PD-1/PD-L1抗體在部分腫瘤中有效，但對CSCs的清除效果有限。原因包括：①CSCs低表達MHCI類分子，T細胞識別不足，PD-1/PD-L1軸缺乏激活基礎(chǔ)；②CSCs微環(huán)境中TAMs、MDSCs等免疫抑制細胞高表達PD-L1，形成“免疫檢查點屏障”；③PD-L1在CSCs中的表達具有動態(tài)可逆性，治療壓力下可快速下調(diào)。CTLA-4通路：免疫檢查點網(wǎng)絡(luò)的“調(diào)節(jié)器”CTLA-4主要在Treg和活化的T細胞中表達，通過競爭性結(jié)合CD80/CD86抑制T細胞活化：1.CSCs與CTLA-4：CSCs本身不表達CTLA-4，但可通過TGF-β誘導Treg分化，高表達CTLA-4的Treg在CSCs周圍富集，抑制效應(yīng)T細胞的活化。在結(jié)直腸癌中，Treg來源的CTLA-4可抑制樹突狀細胞的成熟，間接促進CSCs的免疫逃逸。2.局限性：抗CTLA-4抗體（如伊匹木單抗）雖能部分耗竭Treg，但對CSCs微環(huán)境的滲透性較差，且易引起免疫相關(guān)不良反應(yīng)（irAEs），限制了其在CSCs靶向治療中的應(yīng)用。其他傳統(tǒng)免疫檢查點：CSCs免疫逃逸的“輔助通路”除PD-1/PD-L1和CTLA-4外，LAG-3、TIM-3、TIGIT等檢查點分子也在CSCs微環(huán)境中發(fā)揮重要作用：1.LAG-3：CSCs微環(huán)境中的T細胞高表達LAG-3，其配體MHCII類分子在DCs和CAFs中高表達。LAG-3與配體結(jié)合后，抑制T細胞增殖和IFN-γ分泌，促進Treg分化。在黑色素瘤中，LAG-3與PD-1共表達于CSCs特異性T細胞，形成“雙重抑制”。2.TIM-3：CSCs高表達Galectin-9，與T細胞表面的TIM-3結(jié)合，誘導T細胞凋亡。同時，TIM-3可上調(diào)PD-L1的表達，形成“協(xié)同抑制”。在膠質(zhì)母細胞瘤中，TIM-3+T細胞浸潤與CSCs數(shù)量正相關(guān)，且與患者預(yù)后不良顯著相關(guān)。其他傳統(tǒng)免疫檢查點：CSCs免疫逃逸的“輔助通路”3.TIGIT：CSCs高表達CD155（TIGIT的配體），通過與T細胞表面的TIGIT結(jié)合，抑制NK細胞和T細胞的活性。在肺癌中，TIGIT與PD-1共阻斷可增強對CSCs的清除效果，但單獨應(yīng)用效果有限。傳統(tǒng)免疫檢查點調(diào)控的共性局限綜合來看，傳統(tǒng)免疫檢查點在CSCs微環(huán)境中的調(diào)控存在三大共性局限：①靶向性不足：現(xiàn)有ICIs主要針對效應(yīng)T細胞，對CSCs本身的直接作用有限；②微環(huán)境屏障：CSCs微環(huán)境中的物理屏障（如ECM）和化學屏障（如乳酸、腺苷）阻礙免疫細胞浸潤和ICIs滲透；③異質(zhì)性與動態(tài)性：CSCs亞群間免疫檢查點表達差異大，且微環(huán)境壓力下可快速調(diào)整檢查點表達，導致耐藥。這些局限性提示我們，必須跳出“單一靶點、單一細胞”的傳統(tǒng)思維，從系統(tǒng)生物學視角探索CSCs微環(huán)境中免疫檢查點的調(diào)控新機制。04腫瘤干細胞微環(huán)境中免疫檢查點調(diào)控的新機制腫瘤干細胞微環(huán)境中免疫檢查點調(diào)控的新機制近年來，隨著多組學技術(shù)和類器官模型的突破，CSCs微環(huán)境中免疫檢查點調(diào)控的新機制不斷被揭示，這些機制涉及表觀遺傳、代謝、信號通路交叉、細胞間通訊等多個層面，為靶向治療提供了全新靶點。表觀遺傳調(diào)控：免疫檢查點表達的“分子開關(guān)”表觀遺傳修飾通過DNA甲基化、組蛋白修飾、非編碼RNA調(diào)控等方式，在不改變DNA序列的前提下，動態(tài)調(diào)控免疫檢查點基因的表達，是CSCs維持免疫逃逸的關(guān)鍵機制。1.DNA甲基化：免疫檢查點基因的“沉默器”與“激活器”DNA甲基化由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）催化，通常抑制基因轉(zhuǎn)錄。在CSCs中，某些免疫檢查點基因的啟動子區(qū)域低甲基化，促進其表達：-PD-L1：在胰腺癌CSCs中，PD-L1啟動子區(qū)域的CpG島低甲基化，通過招募轉(zhuǎn)錄因子SP1和STAT3，增強PD-L1轉(zhuǎn)錄。DNMT抑制劑（如地西他濱）可逆轉(zhuǎn)這一過程，下調(diào)PD-L1表達，增強T細胞殺傷。-CD47：在白血病干細胞中，CD47啟動子區(qū)域低甲基化，使其高表達，通過SIRPα介導的“別吃我”信號逃逸巨噬細胞清除。表觀遺傳調(diào)控：免疫檢查點表達的“分子開關(guān)”相反，某些免疫激活基因（如IFN-γ、穿孔素）的高甲基化則抑制其表達，形成“免疫抑制表型”。表觀遺傳調(diào)控：免疫檢查點表達的“分子開關(guān)”組蛋白修飾：免疫檢查點基因的“表達調(diào)控器”組蛋白乙?；?、甲基化等修飾通過改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)，調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄：-組蛋白乙?；航M蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（HATs）和組蛋白去乙?；福℉DACs）的平衡決定組蛋白乙?；健Ｔ诟伟〤SCs中，HDAC1/2高表達，去乙酰化組蛋白H3，抑制PD-L1轉(zhuǎn)錄的反義RNA表達，間接促進PD-L1轉(zhuǎn)錄；HDAC抑制劑（如伏立諾他）可增加組蛋白乙?；抡{(diào)PD-L1。-組蛋白甲基化：在黑色素瘤CSCs中，EZH2（組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶）催化H3K27me3修飾，抑制免疫檢查點抑制劑敏感基因（如CXCL9、CXCL10）的表達，同時促進PD-L1的轉(zhuǎn)錄。EZH2抑制劑（如Tazemetostat）可逆轉(zhuǎn)H3K27me3水平，增強抗PD-1抗體的療效。表觀遺傳調(diào)控：免疫檢查點表達的“分子開關(guān)”非編碼RNA：免疫檢查點網(wǎng)絡(luò)的“微調(diào)控器”非編碼RNA（ncRNA）包括miRNA、lncRNA、circRNA等，通過靶向免疫檢查點基因的mRNA或調(diào)控相關(guān)信號通路，參與CSCs免疫逃逸：-miRNA：在胃癌CSCs中，miR-200c低表達，其靶基因ZEB1（PD-L1轉(zhuǎn)錄抑制因子）高表達，導致PD-L1上調(diào)；過表達miR-200c可抑制ZEB1，降低PD-L1，增強T細胞活性。相反，miR-424在乳腺癌CSCs中高表達，直接靶向PD-L1mRNA的3'UTR，抑制其翻譯。-lncRNA：在結(jié)直腸癌CSCs中，lncRNAH19通過吸附miR-152，上調(diào)PD-L1表達；lncRNAPVT1則通過激活EGFR/Akt信號，促進PD-L1轉(zhuǎn)錄。表觀遺傳調(diào)控：免疫檢查點表達的“分子開關(guān)”非編碼RNA：免疫檢查點網(wǎng)絡(luò)的“微調(diào)控器”-circRNA：在膠質(zhì)母細胞瘤CSCs中，circRNA_0001178通過海綿化miR-152，解除對PD-L1mRNA的抑制，上調(diào)PD-L1表達。表觀遺傳調(diào)控的動態(tài)可逆性使其成為理想的藥物靶點。通過靶向DNMTs、HDACs、EZH2或ncRNA，有望逆轉(zhuǎn)CSCs的免疫抑制表型，為聯(lián)合免疫治療提供新策略。代謝重編程：免疫檢查點調(diào)控的“代謝傳感器”CSCs的代謝重編程不僅是其自身生存的基礎(chǔ)，更是通過代謝產(chǎn)物直接調(diào)控免疫檢查點表達的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。近年來，代謝-免疫檢查點軸的發(fā)現(xiàn)為理解CSCs免疫逃逸提供了新視角。1.乳酸：免疫檢查點調(diào)控的“酸性信使”乳酸是CSCs糖酵解的主要產(chǎn)物，通過多種方式調(diào)控免疫檢查點：-直接調(diào)控PD-L1：乳酸通過抑制HDAC活性，增加組蛋白H3乙?；せ頟D-L1轉(zhuǎn)錄；同時，乳酸可通過GPR81受體激活cAMP/PKA信號，促進PD-L1的磷酸化修飾，增強其穩(wěn)定性。-間接調(diào)控T細胞檢查點：乳酸誘導T細胞高表達PD-1、LAG-3、TIM-3等抑制性受體，同時降低IFN-γ、TNF-α等細胞因子分泌，形成“代謝性免疫檢查點上調(diào)”。代謝重編程：免疫檢查點調(diào)控的“代謝傳感器”-靶向策略：靶向乳酸轉(zhuǎn)運體MCT1（如AZD3965）或乳酸脫氫酶A（LDHA，如FX11）可減少乳酸積累，下調(diào)PD-L1，增強抗PD-1抗體療效。代謝重編程：免疫檢查點調(diào)控的“代謝傳感器”腺苷：免疫檢查點調(diào)控的“抑制性遞質(zhì)”腺苷由CD39/CD73催化ATP生成，通過A2AR受體調(diào)控免疫檢查點：-上調(diào)PD-L1：腺苷通過A2AR激活cAMP/PKA信號，促進PD-L1的轉(zhuǎn)錄和翻譯；同時，腺苷可誘導T細胞高表達PD-1和CTLA-4，形成“雙向抑制”。-抑制T細胞功能：腺苷通過抑制T細胞的鈣離子內(nèi)流和NFAT信號，降低細胞毒活性，間接促進CSCs的免疫逃逸。-靶向策略：CD73抑制劑（如AB680）或A2AR拮抗劑（如Ciforadenant）可阻斷腺苷生成，恢復(fù)T細胞功能，增強對CSCs的清除。代謝重編程：免疫檢查點調(diào)控的“代謝傳感器”色氨酸代謝：免疫檢查點調(diào)控的“平衡器”色氨酸代謝產(chǎn)物犬尿氨酸通過AhR受體調(diào)控免疫檢查點：-上調(diào)PD-L1：犬尿氨酸激活A(yù)hR，促進STAT3磷酸化，直接轉(zhuǎn)錄激活PD-L1；同時，AhR可誘導Treg分化，間接上調(diào)CTLA-4表達。-抑制DC成熟：犬尿氨酸通過AhR抑制DCs的MHCII類分子和CD80/CD86表達，使其高表達PD-L1，無法有效激活T細胞。-靶向策略：IDO抑制劑（如Epacadostat）或AhR拮抗劑（如Vafidemstat）可阻斷色氨酸代謝，降低犬尿氨酸水平，下調(diào)PD-L1，增強免疫治療療效。代謝重編程與免疫檢查點的交叉調(diào)控提示我們，靶向CSCs的代謝通路可能是打破免疫抑制微環(huán)境的關(guān)鍵。聯(lián)合代謝調(diào)節(jié)劑與ICIs，有望實現(xiàn)“代謝-免疫”雙重打擊。信號通路交叉調(diào)控：免疫檢查點網(wǎng)絡(luò)的“中樞整合器”CSCs中的關(guān)鍵干細胞信號通路（Wnt/β-catenin、Notch、Hedgehog）與免疫檢查點調(diào)控存在密切的交叉對話，形成“干細胞信號-免疫檢查點”調(diào)控軸。1.Wnt/β-catenin信號：免疫檢查點調(diào)控的“經(jīng)典通路”Wnt/β-catenin信號是維持CSCs自我更新的核心通路，同時直接調(diào)控免疫檢查點表達：-上調(diào)PD-L1：β-catenin可直接結(jié)合PD-L1啟動子上的TCF/LEF結(jié)合位點，促進其轉(zhuǎn)錄；同時，β-catenin抑制DCs的成熟和T細胞的浸潤，形成“免疫排斥微環(huán)境”。信號通路交叉調(diào)控：免疫檢查點網(wǎng)絡(luò)的“中樞整合器”-限制T細胞浸潤：Wnt/β-catenin信號激活可誘導CSCs分泌CXCL12、CCL28等趨化因子，招募Treg和MDSCs，抑制CTL浸潤。在黑色素瘤中，β-catenin抑制劑（如PRI-724）可增加T細胞浸潤，增強抗PD-1抗體療效。信號通路交叉調(diào)控：免疫檢查點網(wǎng)絡(luò)的“中樞整合器”Notch信號：免疫檢查點調(diào)控的“分化調(diào)節(jié)器”Notch信號通過調(diào)控CSCs分化和免疫細胞極化，影響免疫檢查點表達：-調(diào)控CSCs分化：Notch信號維持CSCs未分化狀態(tài)，減少MHCI類分子和抗原表達，間接降低T細胞識別；同時，Notch信號可誘導CSCs高表達PD-L1，抑制T細胞活性。-調(diào)控TAMs極化：Notch配體（如Jagged1）在CSCs高表達，與TAMs表面的Notch受體結(jié)合，誘導其向M2型極化，高表達PD-L1和IL-10。在乳腺癌中，Notch抑制劑（如DAPT）可減少M2型TAMs浸潤，下調(diào)PD-L1，增強免疫治療療效。信號通路交叉調(diào)控：免疫檢查點網(wǎng)絡(luò)的“中樞整合器”Hedgehog信號：免疫檢查點調(diào)控的“微環(huán)境修飾器”Hedgehog信號通過調(diào)控CAFs和ECM重塑，間接影響免疫檢查點：-激活CAFs：Hedgehog信號可誘導CAFs分泌PDGF、TGF-β，促進ECM沉積和纖維化，形成物理屏障，阻礙免疫細胞浸潤；同時，CAFs高表達PD-L1，通過旁路抑制效應(yīng)抑制T細胞活性。-上調(diào)CSCsPD-L1：Hedgehog信號下游轉(zhuǎn)錄因子GLI1可直接激活PD-L1轉(zhuǎn)錄，在胰腺癌中，GLI1抑制劑（如GANT61）可下調(diào)PD-L1，增強CTL殺傷。信號通路的交叉調(diào)控提示我們，靶向干細胞信號通路可能是逆轉(zhuǎn)CSCs免疫抑制微環(huán)境的“上游策略”。聯(lián)合干細胞信號抑制劑與ICIs，有望從源頭阻斷免疫逃逸。細胞間通訊新方式：免疫檢查點調(diào)控的“遠距離指揮官”CSCs通過外泌體、細胞間直接接觸等方式與免疫細胞通訊，傳遞免疫檢查點相關(guān)分子，實現(xiàn)“系統(tǒng)性免疫抑制”。細胞間通訊新方式：免疫檢查點調(diào)控的“遠距離指揮官”外泌體：免疫檢查點分子的“運輸載體”CSCs來源的外泌體攜帶PD-L1、PD-L2、CTLA-4等免疫檢查點分子，以及miRNA、lncRNA等ncRNA，傳遞到免疫細胞，調(diào)控其功能：-PD-L1外泌體：在黑色素瘤中，CSCs來源的外泌體PD-L1可通過PD-1/PD-L1軸抑制T細胞活性，促進CSCs肺轉(zhuǎn)移。-免疫抑制性ncRNA：CSCs外泌體攜帶的lncRNAH19可被巨噬細胞攝取，通過吸附miR-152，上調(diào)PD-L1表達，誘導M2型極化。-靶向策略：中和外泌體PD-L1的抗體或阻斷外泌體釋放的抑制劑（如GW4869）可減少免疫抑制性分子的傳遞，增強免疫治療效果。3214細胞間通訊新方式：免疫檢查點調(diào)控的“遠距離指揮官”細胞間直接接觸：免疫檢查點分子的“瞬時激活”CSCs與免疫細胞通過直接接觸，激活免疫檢查點信號：-CD47-SIRPα軸：CSCs高表達CD47，與巨噬細胞表面的SIRPα結(jié)合，傳遞“別吃我”信號，同時誘導巨噬細胞高表達PD-L1，抑制T細胞活性。-CD155-TIGIT軸：CSCs高表達CD155，與NK細胞和T細胞表面的TIGIT結(jié)合，抑制其活性，同時上調(diào)PD-1表達，形成“雙重抑制”。細胞間通訊的新方式揭示了CSCs免疫逃逸的“系統(tǒng)性”特征。阻斷外泌體傳遞或細胞間直接接觸，可能是打破免疫抑制網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵。（五）免疫檢查點分子的異質(zhì)性與動態(tài)性：CSCs免疫逃逸的“適應(yīng)性策略”CSCs亞群間免疫檢查點表達存在顯著異質(zhì)性，且微環(huán)境壓力下可動態(tài)調(diào)整檢查點表達，形成“適應(yīng)性免疫逃逸”。細胞間通訊新方式：免疫檢查點調(diào)控的“遠距離指揮官”細胞間直接接觸：免疫檢查點分子的“瞬時激活”1.異質(zhì)性：免疫檢查點表達的“亞群差異”通過單細胞測序技術(shù)，研究發(fā)現(xiàn)CSCs亞群間免疫檢查點表達存在差異：-在結(jié)直腸癌中，CD133+CSCs亞群高表達PD-L1，而CD44+CSCs亞群高表達CD47，提示不同亞群依賴不同的免疫逃逸機制。-在膠質(zhì)母細胞瘤中，表達SOX2的CSCs亞群高表達LAG-3，而表達Nestin的CSCs亞群高表達TIM-3，形成“互補性免疫抑制”。細胞間通訊新方式：免疫檢查點調(diào)控的“遠距離指揮官”動態(tài)性：免疫檢查點表達的“可塑性”CSCs在治療壓力（如化療、放療、免疫治療）下可動態(tài)調(diào)整免疫檢查點表達：A-在黑色素瘤中，抗PD-1治療可篩選出PD-L1低表達但高表達LAG-3的CSCs亞群，形成“代償性免疫逃逸”。B-在乳腺癌中，化療可誘導CSCs高表達PD-L1和CD73，通過PD-1/PD-L1軸和腺苷通路增強免疫抑制，導致化療耐藥。C異質(zhì)性與動態(tài)性的存在要求我們必須開發(fā)針對CSCs亞群特異性免疫檢查點的靶向策略，并克服治療誘導的適應(yīng)性免疫逃逸。D05基于新機制的靶向治療策略與挑戰(zhàn)基于新機制的靶向治療策略與挑戰(zhàn)基于CSCs微環(huán)境中免疫檢查點調(diào)控的新機制，一系列靶向策略正在被開發(fā)，包括聯(lián)合治療、新型靶點探索、個體化治療等，但仍面臨諸多挑戰(zhàn)。聯(lián)合治療策略：打破免疫抑制網(wǎng)絡(luò)的“組合拳”針對多維度調(diào)控機制，聯(lián)合治療是提高CSCs清除效果的關(guān)鍵：1.表觀遺傳藥物+ICIs：DNMT抑制劑（地西他濱）或HDAC抑制劑（伏立諾他）可逆轉(zhuǎn)CSCs的免疫抑制表型，下調(diào)PD-L1，增強抗PD-1抗體療效。在臨床試驗中，地西他濱聯(lián)合帕博利珠單抗在晚期黑色素瘤中顯示出客觀緩解率（ORR）提升的趨勢。2.代謝調(diào)節(jié)劑+ICIs：LDHA抑制劑（FX11）或CD73抑制劑（AB680）可減少乳酸和腺苷積累，恢復(fù)T細胞功能，增強抗PD-1抗體療效。在肺癌模型中，F(xiàn)X11聯(lián)合抗PD-1抗體可顯著抑制CSCs生長。3.干細胞信號抑制劑+ICIs：Wnt抑制劑（PRI-724）或Notch抑制劑（DAPT）可阻斷干細胞信號通路，上調(diào)MHCI類分子和抗原表達，增強T細胞識別。在結(jié)直腸癌模型中，PRI-724聯(lián)合抗PD-1抗體可完全清除CSCs。聯(lián)合治療策略：打破免疫抑制網(wǎng)絡(luò)的“組合拳”4.外泌體抑制劑+ICIs：GW4869（外泌體釋放抑制劑）聯(lián)合抗PD-1抗體可減少外泌體PD-L1的傳遞，增強免疫治療效果。在乳腺癌模型中，聯(lián)合治療可顯著降低肺轉(zhuǎn)移率。新型靶點探索：CSCs特異性免疫檢查點傳統(tǒng)ICIs對CSCs效果有限，開發(fā)CSCs特異性免疫檢查點靶點是關(guān)鍵方向：1.CD47-SIRPα軸：抗CD47抗體（如Magrolimab）或SIRPα-Fc融合蛋白可阻斷“別吃我”信號，同時增強巨噬細胞的抗原呈遞功能，上調(diào)PD-L1表達，為聯(lián)合抗PD-1抗體提供基礎(chǔ)。在臨床試驗中，Magrolimab聯(lián)合利妥昔單抗在淋巴瘤中顯示出良好療效。2.TIGIT-CD155軸：抗TIGIT抗體（如Tiragolumab）可阻斷CD155/TIGIT信號，增強NK細胞和T細胞活性。在肺癌中，Tiragolumab聯(lián)合阿替利珠單抗可延長無進展生存期（PFS）。3.CSCs特異性抗原-免疫檢查點融合分子：如CD133-PD-L1、CD44-CTLA-4等，通過靶向CSCs特異性抗原，精準遞送免疫檢查點抑制劑，減少對正常組織的毒性。個體化治療策略：基于CSCs微環(huán)境分型的精準醫(yī)療CSCs微環(huán)境的異質(zhì)性要