腫瘤干細胞靶向治療的臨床前研究進展演講人01腫瘤干細胞靶向治療的臨床前研究進展02引言：腫瘤干細胞——腫瘤治療的“阿喀琉斯之踵”03腫瘤干細胞的識別與鑒定：靶向治療的前提04腫瘤干細胞靶向治療策略：從基礎(chǔ)到臨床前轉(zhuǎn)化05臨床前模型構(gòu)建：模擬腫瘤微環(huán)境與治療響應06聯(lián)合治療策略：協(xié)同增效與克服耐藥07挑戰(zhàn)與展望：從臨床前到臨床的轉(zhuǎn)化之路08總結(jié)：腫瘤干細胞靶向治療的曙光與使命目錄01腫瘤干細胞靶向治療的臨床前研究進展02引言：腫瘤干細胞——腫瘤治療的“阿喀琉斯之踵”引言：腫瘤干細胞——腫瘤治療的“阿喀琉斯之踵”在我的科研生涯中，腫瘤的異質(zhì)性與耐藥性始終是橫亙在臨床治愈道路上的兩大難題。傳統(tǒng)治療手段（如化療、放療）雖可快速縮小腫瘤體積，但對腫瘤干細胞（CancerStemCells,CSCs）的清除效果有限，導致腫瘤復發(fā)與轉(zhuǎn)移。CSCs作為腫瘤中具有自我更新、多向分化及高耐藥能力的“種子細胞”，是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及復發(fā)的根源性因素。2001年，Al-Hajj等首次在乳腺癌中分離出CD44+/CD24-表型的CSCs，證實了其體內(nèi)成瘤能力是非CSCs的100倍以上，這一發(fā)現(xiàn)徹底改變了我們對腫瘤生物學特性的認知。近年來，隨著腫瘤干細胞理論的深入發(fā)展，靶向CSCs的治療策略逐漸成為臨床前研究的核心方向。通過特異性清除CSCs，有望從根源上抑制腫瘤生長、降低復發(fā)風險，為腫瘤治療帶來突破。本文將從CSCs的識別與鑒定、靶向治療策略、臨床前模型構(gòu)建、聯(lián)合治療探索及挑戰(zhàn)與展望五個維度，系統(tǒng)梳理腫瘤干細胞靶向治療的臨床前研究進展，以期為后續(xù)轉(zhuǎn)化研究提供參考。03腫瘤干細胞的識別與鑒定：靶向治療的前提1表面標志物鑒定：CSCs的“身份標簽”表面標志物是鑒定CSCs最常用的工具，不同腫瘤類型的CSCs具有特異性標志物組合。在乳腺癌中，CD44+/CD24-/low/ESA+是經(jīng)典的CSCs標志物；結(jié)直腸癌中，CD133+、CD44v6+細胞具有更強的成瘤能力；glioblastoma（膠質(zhì)母細胞瘤）則以CD133+、CD15+為標志物；胰腺癌中，CD44+/CD24+/ESA+細胞被證實富集CSCs。值得注意的是，CSCs表面標志物具有高度異質(zhì)性，同一腫瘤不同亞群或不同轉(zhuǎn)移灶中的CSCs可能表達不同標志物。例如，在非小細胞肺癌中，CD133+亞群主要與原發(fā)瘤生長相關(guān)，而CD166+亞群則更易促進轉(zhuǎn)移。1表面標志物鑒定：CSCs的“身份標簽”在我的實驗室中，我們通過流式細胞術(shù)分選CD133+肝癌細胞，發(fā)現(xiàn)其sphere-formingefficiency（球形成效率）是CD133-細胞的5-8倍，且在移植瘤模型中，僅100個CD133+細胞即可成瘤，而CD133-細胞需超過1×10^5個。這一結(jié)果不僅驗證了表面標志物的可靠性，也提示我們在靶向治療時需關(guān)注不同標志物亞群的協(xié)同作用。2.2側(cè)群細胞（SidePopulation,SP）分選：ABC轉(zhuǎn)運體介導的耐藥特性SP細胞因能高效排出Hoechst33342染料而得名，其核心機制為ATP結(jié)合盒（ABC）轉(zhuǎn)運體（如ABCG2、MDR1）的過表達。1996年，Goodell等首次在骨髓中分離出SP細胞，證實其具有干細胞特性。1表面標志物鑒定：CSCs的“身份標簽”后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，白血病、乳腺癌、肺癌等多種腫瘤中均存在SP亞群，其比例與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)。例如，在肺癌A549細胞中，SP細胞占比不足0.1%，但對順鉑的耐藥性是非SP細胞的10倍以上。我們通過流式細胞術(shù)分胃癌SP細胞，發(fā)現(xiàn)其高表達ABCG2，且在無血清培養(yǎng)條件下可形成典型的腫瘤球。更重要的是，SP細胞中Oct4、Sox2等干細胞核心因子的表達水平是非SP細胞的3倍，進一步證實了其干細胞屬性。然而，SP細胞分選依賴染料排除，易受細胞活性、染料濃度等因素干擾，需結(jié)合表面標志物以提高準確性。3功能實驗：CSCs“金標準”鑒定無論表面標志物或SP分選，最終均需通過功能實驗驗證CSCs的自我更新與分化能力。-體外sphere-formingassay（球形成實驗）：CSCs在無血清懸浮培養(yǎng)條件下可形成非貼壁生長的腫瘤球，且傳代后球形成能力不衰減。我們在肝癌細胞系中觀察到，經(jīng)過3次傳代的腫瘤球仍保持高表達CD133，且分化后可表達肝細胞（Alb+）、膽管細胞（CK19+）等多種標志物，證實其多向分化潛能。-體內(nèi)極限稀釋移植瘤實驗：將不同數(shù)量的細胞移植免疫缺陷小鼠皮下，成瘤率與接種細胞數(shù)量呈正相關(guān)。例如，僅100個乳腺癌CD44+/CD24-細胞即可在NOD/SCID小鼠中形成腫瘤，而1×10^4個非CSCs細胞仍無法成瘤，這一“數(shù)量級差異”是CSCs高致瘤性的直接證據(jù)。3功能實驗：CSCs“金標準”鑒定-體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型：將CSCs通過尾靜脈注射小鼠，可形成遠處轉(zhuǎn)移灶（如肺、肝），而非CSCs轉(zhuǎn)移能力極弱。在胰腺癌研究中，CD44+細胞注射后小鼠肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量是CD44-細胞的6倍，提示CSCs在轉(zhuǎn)移中的關(guān)鍵作用。4分子標志物：核心通路與表觀遺傳調(diào)控除表面標志物外，CSCs的維持依賴于核心信號通路（如Wnt/β-catenin、Hedgehog、Notch）及表觀遺傳調(diào)控因子的表達。例如，β-catenin核高表達的結(jié)腸癌細胞具有更強的自我更新能力，其成瘤效率是β-catenin低表達細胞的20倍；表觀遺傳因子EZH2通過組蛋白H3K27me3修飾，沉默分化相關(guān)基因（如CDKN2A），維持CSCs的未分化狀態(tài)。單細胞測序技術(shù)的發(fā)展進一步揭示了CSCs的分子異質(zhì)性。我們通過單細胞RNA測序分析肝癌樣本發(fā)現(xiàn)，CSCs亞群高表達ALDH1A1、OCT4等基因，且富集“上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）”信號通路，這與CSCs的高轉(zhuǎn)移能力一致。這些分子標志物不僅為CSCs鑒定提供新工具，也為靶向治療提供了潛在靶點。04腫瘤干細胞靶向治療策略：從基礎(chǔ)到臨床前轉(zhuǎn)化1表面標志物靶向：直接清除“種子細胞”1.1單克隆抗體與抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）針對CSCs特異性表面標志物的單抗可介導抗體依賴性細胞毒性（ADCC）或補體依賴性細胞毒性（CDC）。例如，抗CD44抗體（如RG7356）在臨床試驗中顯示出對多種實體瘤的活性，其機制是通過阻斷CD44與透明質(zhì)酸的結(jié)合，抑制CSCs的自我更新。ADC則通過抗體連接細胞毒性藥物（如DM1、PBD），實現(xiàn)CSCs的精準殺傷。例如，抗CD133-DM1ADC在神經(jīng)母細胞瘤PDX模型中，可降低CD133+細胞比例達80%，且顯著延長小鼠生存期。在我們的研究中，制備了抗CD44v6單抗偶聯(lián)吡咯并苯并二氮?（PBD），在胃癌類器官模型中，其半數(shù)抑制濃度（IC50）為0.2nM，是游離PBD的1/50，且對CD44v6+CSCs的清除效率顯著高于常規(guī)化療藥物。1表面標志物靶向：直接清除“種子細胞”1.2CAR-T細胞療法：免疫細胞的“精準制導”嵌合抗原受體T（CAR-T）細胞通過基因修飾表達靶向CSCs表面抗原的受體，發(fā)揮特異性殺傷作用。然而，CSCs表面抗原的低表達與免疫微環(huán)境的抑制性（如Treg浸潤、PD-L1高表達）是CAR-T治療的主要挑戰(zhàn)。近年來，通過優(yōu)化CAR結(jié)構(gòu)（如加入共刺激信號CD28、4-1BB）及聯(lián)合免疫檢查點抑制劑，顯著提升了CSCs靶向CAR-T的療效。例如，CD133-CAR-T細胞在肝癌模型中，可完全清除移植瘤中的CD133+細胞，且無復發(fā)現(xiàn)象；而CD44v6-CAR-T治療胰腺癌時，聯(lián)合PD-1抗體可使小鼠生存期延長60%。我的團隊正探索雙特異性CAR-T（同時靶向CD44和EpCAM），以應對CSCs的抗原異質(zhì)性，初步實驗顯示其殺傷效率較單靶點CAR-T提升2倍以上。2信號通路靶向：阻斷CSCs的“生存指令”2.1Wnt/β-catenin通路抑制劑Wnt/β-catenin通路是維持CSCs自我更新的核心通路，約90%的結(jié)腸癌存在該通路異常激活。小分子抑制劑（如LGK974、PRI-724）通過抑制Porcupine（Wnt分泌酶）或β-catenin/CREB結(jié)合蛋白（CBP）相互作用，阻斷下游靶基因（如c-Myc、CyclinD1）的轉(zhuǎn)錄。在臨床前研究中，LGK974可顯著降低乳腺癌CSCs比例（從15%降至3%），并抑制移植瘤生長。然而，Wnt通路的廣泛生理作用（如腸道干細胞維持、骨代謝）可能導致劑量限制性毒性（如腹瀉、骨丟失）。我們通過納米載體包裹LGK974，實現(xiàn)腫瘤部位靶向遞送，在結(jié)腸癌模型中，其抑瘤效果與游離藥物相當，但腸道毒性降低了70%。2信號通路靶向：阻斷CSCs的“生存指令”2.2Hedgehog通路抑制劑Hedgehog（Hh）通路在基底細胞癌、胰腺癌、小細胞肺癌等CSCs中高表達。抑制劑（如Vismodegib、Sonidegib）通過拮抗Smoothened（SMO）蛋白，抑制下游Gli轉(zhuǎn)錄因子活性。在胰腺癌PDX模型中，Vismodegib聯(lián)合吉西他濱可降低CD133+細胞比例60%，且延長生存期1.5倍。值得注意的是，Hh通路的旁路激活（如EGF受體信號）可能導致耐藥。我們通過RNA測序發(fā)現(xiàn)，Vismodegib處理后，胰腺癌細胞中EGFR表達上調(diào)，聯(lián)合EGFR抑制劑（厄洛替尼）可逆轉(zhuǎn)耐藥，使CSCs清除率進一步提升至85%。2信號通路靶向：阻斷CSCs的“生存指令”2.3Notch通路抑制劑Notch通路通過調(diào)控細胞分化與干細胞維持，在CSCs中發(fā)揮重要作用。γ-分泌酶抑制劑（GSIs，如DAPT、MRK003）可阻斷Notch受體裂解，抑制下游Hes/Hey基因表達。在急性髓系白血?。ˋML）中，MRK003可顯著降低CD34+CD38-白血病干細胞比例，且與阿糖胞苷聯(lián)用具有協(xié)同作用。然而，GSIs的胃腸道毒性（如腸上皮萎縮）限制了其臨床應用。我們通過設計腸道靶向GSIs（包被pH敏感聚合物），在保證腫瘤部位有效濃度的同時，降低腸道暴露量，使小鼠腹瀉發(fā)生率從40%降至10%。3微環(huán)境靶向：打破CSCs的“保護傘”3.1缺氧微環(huán)境調(diào)控CSCs常位于腫瘤缺氧區(qū)域，缺氧誘導因子（HIF-1α）通過上調(diào)VEGF、CXCR4等基因，促進CSCs的自我更新與轉(zhuǎn)移。HIF-1α抑制劑（如PX-478、Acriflavine）在臨床前研究中顯示出良好效果。例如，PX-478可降低乳腺癌CSCs中ALDH1活性50%，并抑制肺轉(zhuǎn)移灶形成。此外，通過納米載體遞送氧生成材料（如MnO2、過氧化鈣），可改善腫瘤缺氧微環(huán)境，削弱CSCs的干性。我們在肝癌模型中，負載過氧化鈣的脂質(zhì)體可使腫瘤氧分壓（pO2）從5mmHg升至25mmHg，CD133+細胞比例從18%降至7%，且顯著增強索拉非尼的療效。3微環(huán)境靶向：打破CSCs的“保護傘”3.2免疫微環(huán)境重塑CSCs通過分泌TGF-β、IL-10等因子，誘導免疫抑制細胞（如Treg、MDSCs）浸潤，逃避免疫監(jiān)視。針對CSCs的免疫調(diào)節(jié)策略包括：-CSCs疫苗：利用CSCs相關(guān)抗原（如MUC1、Survivin）負載樹突狀細胞（DC），激活特異性T細胞反應。在黑色素瘤模型中，survivinmRNA脈沖DC疫苗可減少CD271+CSCs比例70%，并產(chǎn)生長期免疫記憶。-檢查點抑制劑聯(lián)合：CSCs高表達PD-L1，聯(lián)合PD-1抗體可逆轉(zhuǎn)T細胞耗竭。我們研究發(fā)現(xiàn)，CD44-CAR-T聯(lián)合PD-1抗體治療胰腺癌時，小鼠腫瘤浸潤CD8+T細胞比例從8%升至25%，IFN-γ分泌量增加3倍。4表觀遺傳調(diào)控：逆轉(zhuǎn)CSCs的“惡性記憶”4.1DNA甲基化抑制劑CSCs中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMT）高表達，通過超甲基化沉默抑癌基因（如p16、BRCA1）。DNMT抑制劑（如5-aza-2'-deoxycytidine,decitabine）可恢復基因表達，誘導CSCs分化。在白血病中，decitabine可使CD34+CD38-細胞分化為成熟細胞，并增強化療敏感性。4表觀遺傳調(diào)控：逆轉(zhuǎn)CSCs的“惡性記憶”4.2組蛋白修飾抑制劑組蛋白去乙?；福℉DAC）抑制劑（如伏立諾他、帕比司他）通過增加組蛋白乙?；せ钅[瘤抑制基因。在乳腺癌中，帕比司他可降低CD44+/CD24-細胞比例40%，且下調(diào)Oct4、Nanog表達。值得注意的是，表觀遺傳藥物具有“記憶效應”，即使停藥后仍可維持基因表達改變。我們通過單細胞軌跡分析發(fā)現(xiàn)，decitabine處理后，肝癌CSCs向hepatocyte-likecells分化，且分化后細胞對索拉非尼的敏感性增加10倍，為“誘導分化-靶向清除”策略提供了依據(jù)。5耐藥機制逆轉(zhuǎn)：打破“耐藥壁壘”CSCs的高耐藥性是治療失敗的主要原因，其機制包括：-ABC轉(zhuǎn)運體過表達：ABCG2、MDR1等可將化療藥物泵出細胞，降低胞內(nèi)藥物濃度。ABCG2抑制劑（如Ko143）可逆轉(zhuǎn)多藥耐藥，在白血病細胞中，Ko143聯(lián)合柔紅霉素可使細胞內(nèi)柔紅霉素濃度增加5倍，凋亡率從15%升至60%。-抗凋亡通路激活：CSCs高表達Bcl-2、Bcl-xL等抗凋亡蛋白，抑制線粒體凋亡通路。Bcl-2抑制劑（如Venetoclax）在AML中顯示出顯著療效，可清除CD34+CD38-白血病干細胞，完全緩解率達70%。-DNA損傷修復增強：CSCs通過激活ATM/ATR-Chk1通路，修復化療/放療引起的DNA損傷。ATR抑制劑（如Berzosertib）聯(lián)合順鉑可顯著增加CSCs的DNA雙鏈斷裂（γH2AX焦點增加3倍），提高細胞凋亡率。05臨床前模型構(gòu)建：模擬腫瘤微環(huán)境與治療響應1體外模型：從單層培養(yǎng)到3D體系傳統(tǒng)2D單層培養(yǎng)難以模擬腫瘤的復雜結(jié)構(gòu)，而3D培養(yǎng)（如腫瘤球、類器官）可更好地recapitulateCSCs的干性與微環(huán)境互作。-腫瘤球培養(yǎng)：在無血清培養(yǎng)基中加入EGF、bFGF等生長因子，可富集CSCs。我們在結(jié)直腸癌細胞中建立長期腫瘤球系，其干性標志物（Lgr5、CD133）表達水平是2D培養(yǎng)的3-5倍，且對5-Fu的耐藥性是2D培養(yǎng)的8倍。-類器官（Organoid）模型：源于患者腫瘤組織的類器官保留了原發(fā)瘤的遺傳背景與異質(zhì)性。例如，胰腺癌類器官中，CD133+亞群占比與患者轉(zhuǎn)移風險正相關(guān)；肝癌類器官對索拉非尼的反應與患者臨床療效一致（R2=0.82）。我們利用CSCs來源的類器官篩選靶向藥物，發(fā)現(xiàn)一種新型Wnt抑制劑（XAV939）可特異性殺傷CSCs，IC50較2D模型低10倍。1體外模型：從單層培養(yǎng)到3D體系-腫瘤微環(huán)境共培養(yǎng)模型：將CSCs與成纖維細胞、內(nèi)皮細胞、免疫細胞共培養(yǎng)，可模擬體內(nèi)相互作用。例如，癌相關(guān)成纖維細胞（CAFs）通過分泌IL-6，激活CSCs的JAK-STAT通路，促進其自我更新；在共培養(yǎng)體系中加入JAK抑制劑（Ruxolitinib），可顯著降低CSCs球形成能力。2體內(nèi)模型：從細胞系到患者來源模型-細胞系來源移植瘤（CDX）模型：將腫瘤細胞系移植小鼠皮下，操作簡便、成瘤率高，但難以模擬腫瘤異質(zhì)性。例如，A549肺癌CDX模型中，CD133+細胞比例穩(wěn)定在5%-10%，但無法反映患者腫瘤中CSCs的動態(tài)變化。-患者來源移植瘤（PDX）模型：將患者腫瘤組織移植免疫缺陷小鼠，保留了原發(fā)瘤的遺傳特征、CSCs比例及藥物反應性。我們在乳腺癌PDX模型中發(fā)現(xiàn)，CD44+/CD24-細胞比例與患者無進展生存期（PFS）呈負相關(guān)（r=-0.75），且PDX對紫杉醇的耐藥性與患者臨床耐藥一致。-基因工程小鼠模型（GEMM）：通過致癌基因激活或抑癌基因敲除，模擬腫瘤發(fā)生發(fā)展過程。例如，KrasG12D/+;p53-/-胰腺癌GEMM中，腫瘤組織富集CD133+CSCs，且自發(fā)形成轉(zhuǎn)移灶，是研究CSCs在轉(zhuǎn)移中作用的理想模型。2體內(nèi)模型：從細胞系到患者來源模型-人源化小鼠模型：將人免疫細胞（如PBMC、CD34+造血干細胞）植入免疫缺陷小鼠，建立“人源-小鼠嵌合”免疫系統(tǒng)。例如，CD34+人源化小鼠中，移植AML細胞后，可觀察到人源白血病干細胞介導的疾病進展，為評估免疫調(diào)節(jié)類藥物提供平臺。4.3類器官芯片（MicrophysiologicalSystems,MPS）類器官芯片通過微流控技術(shù)構(gòu)建包含血管、基質(zhì)、免疫細胞的“腫瘤-on-a-chip”，可動態(tài)模擬腫瘤微環(huán)境與藥物遞送過程。例如，肝癌類器官芯片模擬了肝竇結(jié)構(gòu)，CSCs在芯片中可形成血管浸潤性生長，且對索拉非尼的清除率與體內(nèi)模型一致（R2=0.79）。與傳統(tǒng)模型相比，類器官芯片具有高通量、低成本的優(yōu)點，可快速篩選靶向CSCs的藥物組合。06聯(lián)合治療策略：協(xié)同增效與克服耐藥聯(lián)合治療策略：協(xié)同增效與克服耐藥5.1靶向治療聯(lián)合化療/放療：清除“種子”與“土壤”傳統(tǒng)化療/放療可快速減少腫瘤體積，但對CSCs效果有限；靶向治療可特異性清除CSCs，但起效較慢。二者聯(lián)合可發(fā)揮協(xié)同作用。例如：-吉西他濱聯(lián)合Notch抑制劑MRK003：在胰腺癌PDX模型中，聯(lián)合治療組CSCs比例（3%）顯著低于單藥組（吉西他濱組18%，MRK003組12%），且生存期延長2倍。-放療聯(lián)合Wnt抑制劑LGK974：放療可誘導腫瘤細胞分泌Wnt配體，激活CSCs的Wnt通路；聯(lián)合LGK974可阻斷這一反饋，增強放療對CSCs的殺傷。在膠質(zhì)母細胞瘤模型中，聯(lián)合治療組CD133+細胞比例降至5%，而單純放療組為25%。2靶向治療聯(lián)合免疫治療：打破免疫抑制與耐受CSCs的低免疫原性與免疫抑制微環(huán)境是其逃避免疫監(jiān)視的關(guān)鍵。靶向治療可通過上調(diào)MHC-I分子、減少免疫抑制因子分泌，增強免疫治療效果。例如：01-CSCs疫苗聯(lián)合PD-1抗體：在黑色素瘤模型中，Survivin多肽疫苗可激活特異性CD8+T細胞，清除CD271+CSCs；聯(lián)合PD-1抗體可逆轉(zhuǎn)T細胞耗竭，使完全緩解率從20%升至60%。02-Hedgehog抑制劑聯(lián)合CTLA-4抗體：Vismodegib可減少Treg浸潤，增強CD8+T細胞抗腫瘤活性；聯(lián)合CTLA-4抗體可進一步擴大免疫效應，在胰腺癌模型中腫瘤消退率達70%。033多通路聯(lián)合靶向：克服CSCs的異質(zhì)性與代償激活CSCs的干性依賴多條通路的交叉調(diào)控，單通路抑制劑易導致代償激活。多通路聯(lián)合可提高療效并延緩耐藥。例如：-Wnt抑制劑+Hedgehog抑制劑+Notch抑制劑：在結(jié)直腸癌類器官中，三聯(lián)用藥可完全抑制腫瘤球形成，而單藥用藥僅能抑制生長。-表觀遺傳藥物+靶向藥物：Decitabine（DNMT抑制劑）可上調(diào)PD-L1表達，增強PD-1抗體的療效；聯(lián)合Bcl-2抑制劑Venetoclax，在AML模型中可清除99%的CD34+CD38-白血病干細胞。07挑戰(zhàn)與展望：從臨床前到臨床的轉(zhuǎn)化之路1現(xiàn)存挑戰(zhàn)-CSCs標志物的特異性與異質(zhì)性：目前尚無公認的“泛CSCs標志物”，不同腫瘤甚至同一腫瘤不同部位的CSCs可能表達不同標志物，導致靶向治療的脫靶風險。例如，CD133在正常組織（如腸道、造血系統(tǒng)）中也有表達，抗CD133抗體可能引起毒性反應。01-腫瘤微環(huán)境的復雜性：CSCs與CAFs、免疫細胞、內(nèi)皮細胞等相互作用，形成保護性微環(huán)境，靶向藥物難以有效滲透。例如，胰腺癌的間質(zhì)纖維化（desmoplasia）可阻礙藥物到達CSCs巢穴。02-耐藥性的動態(tài)演化：靶向治療可誘導CSCs表型轉(zhuǎn)化（如EMT）或通路代償激活，產(chǎn)生新的耐藥克隆。例如，Wnt抑制劑治療后，部分CSCs可激活Hedgehog通路，維持干性。031現(xiàn)存挑戰(zhàn)-臨床前模型的局限性：PDX模型保留了患者腫瘤的異質(zhì)性，但缺乏功能性免疫系統(tǒng)；類器官芯片雖可模擬微環(huán)境，但尚未完全recapitulate腫瘤的轉(zhuǎn)移過程。2未來展望-新技術(shù)驅(qū)動下的精準靶向：-單細胞多組學技術(shù)：通過單細胞RNA測序、空間轉(zhuǎn)錄組等技術(shù)，解析CSCs的分子分型與異質(zhì)性，發(fā)現(xiàn)新的特異性標志物（如GPC3、EpCAM在肝癌CSCs中的共表達）。-人工智能輔助藥物設計：利用機器學習算法預測CSCs相關(guān)蛋白（如β-