1、主要用于制備,單克隆抗體,獲得雜種植株,主要用途,物理、化學(xué)方法,（同左）,滅活的病毒,物理（離心、振動、電刺激）,化學(xué)（聚乙二醇）,誘導(dǎo)方法,使細胞分散后誘,導(dǎo)細胞融合,去除細胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合形成雜種細胞，再經(jīng)組織培養(yǎng)形成雜種植株，,步驟,細胞膜的流動性,細胞膜的流動性、,植物細胞全能性,原理,動物細胞融合,植物體細胞雜交,比較項目,植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較,強調(diào)：效應(yīng)B細胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞，下文將其簡稱為B淋巴細胞,抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。,溫故知新,1.抗體是什么？2.抗體如何產(chǎn)生？3.抗體主要分布在哪里？,能產(chǎn)生抗體的細胞是漿細胞（即效應(yīng)B

2、細胞）。,4.如果一個農(nóng)夫被毒蛇咬了，如何獲得相應(yīng)的抗體來治療？,抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法,抗原,反復(fù)注射,從動物的血清中分離抗體,該法制備抗體的缺點：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。,如何解決這個問題呢？,單克隆抗體！,2.1單克隆抗體的定義：克隆單個B淋巴細胞其所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。,單：單個B淋巴細胞克?。涸摷毎罅吭鲋碁橄嗤募毎嚎贵w：該細胞群產(chǎn)生的特異性抗體。,二、單克隆抗體,一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細胞能無限增殖,雜交瘤細胞,動物細胞培養(yǎng)技術(shù),設(shè)計方案：,動物細胞融合技術(shù),單克隆抗體,既能迅速大量增殖，又能的產(chǎn)生專一抗體,197

3、5年英國科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實驗,活動二：閱讀課本P53-54,思考與討論:1.為什么要對小鼠進行注射特定的抗原？2.選擇了哪兩種細胞進行細胞融合？3.為什么選這兩種細胞？4.細胞融合后獲得幾種類型的融合細胞？5.有幾種雜交瘤細胞？6.兩次篩選的目的？7.如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？,2.2單克隆抗體的制備過程,用抗原免疫小鼠,骨髓瘤細胞的培養(yǎng),B淋巴細胞,骨髓瘤細胞,融合,多種細胞,獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細胞,產(chǎn)生專一抗體,無限增殖,BB、B瘤、瘤瘤（B、瘤）,由于培養(yǎng)基中缺乏相應(yīng)的營養(yǎng)物，骨髓瘤細胞死亡,B淋巴細胞培養(yǎng)幾天后死亡,雜交瘤細胞,置于選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng),（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜

4、交瘤細胞才能存活,雜交瘤細胞特點：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。,多孔細胞培養(yǎng)板,陽性克隆的篩選和克隆化培養(yǎng),用培養(yǎng)液稀釋,（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細胞,注射到小鼠體內(nèi),體外培養(yǎng),由單個雜交瘤細胞通過克隆，所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體。,單克隆抗體,活動三、用以下文字和箭頭來構(gòu)建單克隆抗體的制備過程,小鼠、注射特定抗原、已免疫的B淋巴細胞、骨髓瘤細胞、BB細胞，B瘤細胞，瘤瘤細胞、雜交瘤細胞、產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞、體外培養(yǎng)、體內(nèi)培養(yǎng)、單克隆抗體、融合、篩選,你學(xué)會了嗎？,過程：,B淋巴細胞骨髓瘤細胞,融合,B-B細胞,B-瘤細胞,瘤-瘤細胞,選擇性培養(yǎng)基篩選,雜交

5、瘤細胞（B-瘤細胞）,克隆化培養(yǎng),專一抗體檢驗陽性,產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞（群）,體外培養(yǎng),單克隆抗體,瘤細胞,B細胞,小鼠,注射特定抗原,3）、為何要進行兩次篩選？,4）、如何進行第2次篩選？,培養(yǎng)在多孔培養(yǎng)板上，每孔只有一個雜交瘤細胞，進行專一抗體檢驗陽性。,第1次篩選得到雜交瘤細胞（多種）。第2次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞群。,問題強化：,1）、本過程利用了哪些原理？,免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理,2）、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合？,這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單

6、克隆抗體,2.3單克隆抗體的應(yīng)用,診斷試劑最廣泛應(yīng)用準確、高效、簡易、快速,單克隆抗體最主要的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，并能大量制備。,用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，靈敏度很高，在妊娠第8天就可以做出診斷，比原來的診斷方法提前了10天左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準確率在90以上。,“生物導(dǎo)彈”單克隆抗體藥物單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭,治療疾病和運載藥物,主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準確殺傷癌變細胞。,1.動物細胞融合最常用的誘導(dǎo)方法是（）A.離心B.滅活的病毒C.電刺激D

7、.振動2.動物細胞融合的作用中最重要的是（）A.克服遠源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細胞,B,B,課堂評價,評價方向：學(xué)習(xí)目標1動物細胞融合的方法、意義,3.單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的（）B淋巴細胞BT淋巴細胞C骨髓瘤細胞D雜交瘤細胞,課堂評價,D,評價方向：學(xué)習(xí)目標2單克隆抗體的概念,4.科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞B.不經(jīng)過免疫的T淋巴細胞D.不經(jīng)過免疫的B淋巴細胞,A,課堂評價,評價方向：學(xué)習(xí)目標3單克隆抗體制備的過程,課堂評價,5下列關(guān)于單克隆抗體的敘述，錯誤的是A.特異性強、靈敏度高B.單克隆抗體就是“生物導(dǎo)彈”C.單克隆抗體可用于疾病診斷和治療D.生產(chǎn)單克隆抗體需要利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù),B,評價方向：學(xué)習(xí)目標4單克隆抗體的優(yōu)點與應(yīng)用,如圖是制備分泌抗X抗體的過程，根據(jù)圖解回答問題：,（1）給小鼠注射抗原的目的是_（2）在單克隆抗體制備過程中之所以選用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，是因為它們?nèi)诤虾蟮碾s交瘤細胞具有_和_的特性（3）由圖中可看出，單克隆抗體制備過程運用了_和_的動物細胞工程技術(shù)手段，前者常用的誘導(dǎo)劑與植物原生質(zhì)體融合不同的是_（4）動物細胞培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖