1、,1、被子植物定義：凡是種子有果皮包被著，胚珠有子房壁包被著的植物，就叫做被子植物。,一、被子植物和裸子植物,2、裸子植物定義：凡是胚珠裸露，外面沒(méi)有子房壁包被，種子外面沒(méi)有果皮包被的植物稱為裸子植物。,實(shí)例：玉米、大豆、梨、杏,實(shí)例：松、杉、柏,花的結(jié)構(gòu)：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊,3、花的結(jié)構(gòu),二、被子植物花粉粒的形成,1、雄蕊的結(jié)構(gòu),雄蕊：,花粉是花粉母細(xì)胞經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。,2、被子植物花粉的發(fā)育,花粉粒的形成,經(jīng)歷時(shí)期：,四分體時(shí)期、單核期、雙核期,兩個(gè)精子和一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核的基因型相同,1個(gè)花粉母細(xì)胞,4個(gè)小孢子,8個(gè)精子,2n,n,n,n,n,

2、四、產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑,五、影響花藥培養(yǎng)的因素,1、材料的選擇,沒(méi)有絕對(duì)的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。,不同植物的誘導(dǎo)成功率很不相同，就同一種植物來(lái)說(shuō)親本的生理狀況對(duì)誘導(dǎo)成功率也有直接影響。,選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素。,因?yàn)椴⒉皇侨魏螘r(shí)期的花粉都可以經(jīng)過(guò)培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體，花粉發(fā)育的過(guò)程中，只有某一個(gè)時(shí)期對(duì)離體刺激敏感。,選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。,選材,一般來(lái)說(shuō)，在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)的成功率最高。即：最適合花藥培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時(shí)期為單核靠邊期。,選擇單核期以前的花藥接種，質(zhì)地幼嫩，極易破碎； 選擇單核

3、期之后的花藥接種，花瓣已有些松動(dòng)，又給材料的消毒帶來(lái)困難，且難以挑選到單核期的花藥。,花藥培養(yǎng)時(shí)期的選擇,其它時(shí)期選擇的缺點(diǎn),為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開(kāi)放的花蕾。盛開(kāi)的或略微開(kāi)放的花，都不宜選作實(shí)驗(yàn)材料。,選擇完全未開(kāi)放花蕾的原因,完全未開(kāi)放的花蕾，可挑選到單核期的花藥，菌少、易消毒,單核期花藥的挑選,為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來(lái)困難？,花瓣松動(dòng)后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來(lái)困難。,花藥培養(yǎng)時(shí)間,一般月季的花藥培養(yǎng)時(shí)間選在5月初到5月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)及生理狀態(tài)會(huì)比較好，可提高花粉的誘導(dǎo)成功率。,月季花藥培養(yǎng)時(shí)的花粉粒最好是（ ） A、

4、四分體時(shí)期 B、單核居中期 C、單核靠邊期 D、二核或三核花粉粒,C,2、培養(yǎng)基：,花藥培養(yǎng)基所采用的培養(yǎng)基可能因植物的不同而有所變化小麥為N6培養(yǎng)基，馬鈴薯、月季為MS培養(yǎng)基，油菜為B5培養(yǎng)基。,3、其他因素 親本植株的生長(zhǎng)條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種的密度等對(duì)誘導(dǎo)成功都有一定的影響,六、實(shí)驗(yàn)操作,（一）材料的選取,某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。,最常用的方法有醋酸洋紅法,1、方法,醋酸洋紅法染色機(jī)理,醋酸洋紅為堿性染色劑，而花粉細(xì)胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是DNA和蛋白質(zhì),易被堿性染料著色染成紅色 。,將體積分?jǐn)?shù)45的醋酸100m

5、l煮沸，緩緩加入1g洋紅，再加熱回流8h，冷卻至50，過(guò)濾即可。,醋酸洋紅的配置,2、醋酸洋紅法,將花藥放在載玻片上，加一滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)1的醋酸洋紅，用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查。,染色操作,3、焙花青鉻釩法,將無(wú)水酒精與冰醋酸按體積比為3：1的比例混勻,卡諾氏固定液的配制方法,花藥應(yīng)該在卡諾氏固定液中固定20min，然后取出放在載玻片上，加焙花青鉻釩溶液染色，蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢查。這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。,將5g鉻明礬K2SO4Cr2(SO4)24H2O加入90ml蒸餾水中，溶解后加入0.1g焙花青，混勻并加熱至沸騰，煮沸5分鐘后冷卻至室溫，過(guò)濾，加蒸餾水定容至10

6、0ml。,焙花青鉻釩溶液的配制方法,染色操作,（二）材料的消毒,1、酒精處理,花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精浸泡30秒，立即取出。 無(wú)菌水清洗 無(wú)菌吸水紙吸干花蕾表面的水分,2、消毒液處理, 放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2-4分鐘（也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）。 無(wú)菌水沖洗3-5次 用于培養(yǎng)的花藥，實(shí)際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，通常處于無(wú)菌狀態(tài)，所以只要將整個(gè)花蕾或幼穗消毒即可。,在無(wú)菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥,要徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。,立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個(gè)。,

7、1、剝?nèi)』ㄋ?勿損傷花藥，否則接種后容易從受傷部位產(chǎn)生愈傷組織。,2、接種,注意：,（三）接種和培養(yǎng),培養(yǎng)條件：溫度控制在25左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。,3、培養(yǎng),培養(yǎng)：一般經(jīng)過(guò)20-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開(kāi)裂，長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體。 長(zhǎng)出愈傷組織則將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。,注意：如果花藥開(kāi)裂釋放出胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開(kāi)裂后盡快將幼小植株分開(kāi)，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開(kāi)。,在花藥培養(yǎng)中，特別是通過(guò)愈傷組織形成的花粉植株，常常會(huì)出現(xiàn)染色體倍性的變化（主要原因是營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核融合造成的）。,4、鑒定和篩選,5、植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)：,植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、無(wú)菌技術(shù)及接種操作等基本相同。 兩者的不同之處在于：花藥培養(yǎng)的選材非常重要，需事先摸索時(shí)期適宜的花蕾；花藥裂開(kāi)后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時(shí)更換培養(yǎng)基；花藥培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。,練習(xí)1. 答：F2代紫色甜玉米的基因型組成可能為Aasusu或AAsusu。如果運(yùn)用常規(guī)育種方法，將F2代中的紫色甜玉米與白色甜玉米（aasusu）進(jìn)行測(cè)交，可以選擇出基因型為AAsusu純種