1、1姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法測(cè)食品總糖含量的簡(jiǎn)化研究J. 食品工業(yè) 992,03:40-42.1. 2試劑 0. 1 mg / mL, 1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取10mg葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶于少量蒸餾水中，溶解后轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用蒸餾水定容至100 mL. 蒽酮硫酸溶液:準(zhǔn)確稱取蕙酮50 mg于100mL二燒杯中，加入蒸餾水25 mL,，緩慢加入98%質(zhì)量分?jǐn)?shù))濃硫酸75 mL,，邊加邊攪(于冰水浴中完成)，直至蕙酮溶解，冷卻至室溫后使用(臨用新配)。 濃鹽酸、濃硫酸、NaOH，以上試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。1. 3方法1. 3. 1顯色劑（蒽酮硫醇溶液）用量選擇。向試管中加入0. 1 mg

2、 / mL 葡萄糖標(biāo)液0. 1 mL,，并加入蒸餾水至1m L,，分別加入不同量的顯色劑顯色測(cè)定，以0. 1 mL,蒸餾水為空白對(duì)照。1.3.2顯色時(shí)間選擇。向10 mL二試管中加入0. 1mg / mL葡萄糖標(biāo)液0. 1 mL二并加入蒸餾水至1mL,，在冰水浴中緩慢加入9 mL顯色劑搖勻，改變沸水浴時(shí)問(wèn)，冷卻至室溫后測(cè)體系吸光度。1.3.3葡萄搪標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。改變0. 1 mgmL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液和蒸餾水的用量，再分別加入9mL顯色劑，進(jìn)行顯色測(cè)定。1.3.4正交試驗(yàn)確定提取條件。采用正交試驗(yàn)，考查4個(gè)影響因素(料液比、鹽酸濃度、提取時(shí)間、水解時(shí)問(wèn))對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，因素水平見(jiàn)表1.1.3.5水

3、溶性總搪的提取。取0. 5 g棉花纖維于150 mL圓底燒瓶中，加入30 mL,蒸餾水，在沸水浴中加熱60 mLn,濾出提取液20 mL于50 mL燒瓶中，加5 mol / L 鹽酸5 mL繼續(xù)在沸水浴中加熱30 mLn，冷卻后，滴加一滴酚酞，用5 mol / L, 1的氧氧化鈉中和至中性。1. 3. 6水溶性總搪的測(cè)定。取提取液1 mL于10mL試管中，在冰水浴中緩慢加入9 mL,蕙酮硫酸溶液搖勻，在沸水浴中加熱9 mLn，冷卻后放置30min測(cè)定吸光度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得對(duì)應(yīng)的濃度并計(jì)算總糖含量。2結(jié)果與分析2. 1吸收曲線 用紫外刊一見(jiàn)分光光度計(jì)在500 700 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描

4、，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在625 nm處有最大吸收，故本實(shí)驗(yàn)采用625 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。2. 2顯色劑用量 由圖1可以看出，當(dāng)顯色劑用量為9 ml二時(shí)吸光度最大，故實(shí)驗(yàn)采用顯色劑用量為9 m l。2. 3顯色時(shí)問(wèn) 由圖2可知，沸水浴時(shí)問(wèn)在9 min內(nèi)，隨著時(shí)問(wèn)的延長(zhǎng)吸光度值明顯增大，9 min后吸光度值減小，12 min后吸光度值基本不變，因此最佳顯色時(shí)間為9 min。2. 4標(biāo)準(zhǔn)曲線 實(shí)驗(yàn)得到吸光度(A)與葡萄糖濃度(C)的回歸方程為11=0.0401C+0.0036 ,r=0. 9994，在010mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(圖3)。2. 5提取條件的確定 準(zhǔn)確稱取棉花纖維，按表1的提取條件提取棉花

5、纖維中的水溶性總糖，采用1. 3. 6方法測(cè)定總糖含量，結(jié)果見(jiàn)表2。 由表2可見(jiàn)，影響總糖含量的提取條件主次關(guān)系為提取時(shí)間鹽酸濃度料液比水解時(shí)問(wèn)，其中提取時(shí)間對(duì)提取效果影響最明顯，鹽酸濃度和料液比其次，實(shí)驗(yàn)最佳提取條件為料液比1：30，鹽酸濃度5 mol /L,水解時(shí)問(wèn)30 min，提取時(shí)問(wèn)60 min。2.6提取液顯色穩(wěn)定性 按2.5項(xiàng)最佳條件提取棉花纖維中的總糖，取提取液后，按1. 3. 6方法操作，分別在顯色后10min，20 min，30 min， 60 min，90 min，120 min內(nèi)測(cè)定吸光度，結(jié)果見(jiàn)圖4。由圖4可知，吸光度在3 0 60 min內(nèi)最大且穩(wěn)定，以后隨著時(shí)問(wèn)推移

6、下降。因此，要在提取液顯色后3060 min內(nèi)測(cè)定吸光度，以減少誤差。2. 7方法的精密度 從表3可以看出，同一均勻樣品5份，測(cè)得棉花中的水溶性總糖平均含量為7.861 mg/ g，變異系數(shù)為1.8%，說(shuō)明該方法具有較好的精密度。2.8回收率實(shí)驗(yàn) 精密吸取己知濃度棉花總糖提取液5份，分別加入1 mg /ml葡萄糖標(biāo)液0. 3 mL,制備供試溶液，按1.3.6方法操作，測(cè)定吸光度，求回收率。結(jié)果見(jiàn)表4。1姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法測(cè)食品總糖含量的簡(jiǎn)化研究J. 食品工業(yè),1992,03:40-42.2.試驗(yàn)方法2.1樣品處理及標(biāo)準(zhǔn)溶液配制2.1.1標(biāo)液制備:將葡萄糖分別配成50140ug/mL標(biāo)液

7、。吸取標(biāo)液1mL加入裝有8mL蔥酮試劑的試管或量瓶，水浴加熱后用lcm比色皿在620nm波長(zhǎng)下比色，獲得一系列E值。3結(jié)果分析與討論3.1糖溶度與其消光值E間的關(guān)系3.1.1.對(duì)應(yīng)關(guān)系:將配制的不同濃度的標(biāo)液與蒽酮試劑作用，再置于620nm處比色，則得相應(yīng)E值。重復(fù)試驗(yàn)，將測(cè)定結(jié)果列于表1，并繪制成如圖1的標(biāo)準(zhǔn)曲線。從表1中看出，各組試驗(yàn)間的結(jié)果十分接近，繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，則重復(fù)間的三條線是彌合重迭的(如圖1)。對(duì)消光值與糖濃度間相關(guān)關(guān)系數(shù)進(jìn)行計(jì)算，三組試驗(yàn)的相關(guān)系數(shù)均大于0.99，為極顯著正相關(guān)。由此可以證明，糖含量與其消光值之間的關(guān)系在特定波長(zhǎng)下是恒定的，彼此對(duì)應(yīng)。找出這種關(guān)系，便可在實(shí)測(cè)中

8、省去制標(biāo)準(zhǔn)曲線的工作，從而簡(jiǎn)化蕙酮比色法測(cè)糖含量的測(cè)定工作。3.1.2。利用回歸分析建立表達(dá)式將表1中糖濃度與其E值進(jìn)行回歸分析，獲得如表2的表達(dá)式。表2中，Y=179.5X-2.74即總的回歸表達(dá)式，它是三個(gè)重復(fù)的平均回歸，而非回歸之簡(jiǎn)單平均。此式即是用來(lái)代替標(biāo)準(zhǔn)曲線運(yùn)用于實(shí)測(cè)的關(guān)系式。從三個(gè)重復(fù)的關(guān)系式可看出彼此間存在一定的離散，但很微小。將其作圖可看出，它們基本彌合在總式上，即呈重迭狀態(tài)如圖2。這更進(jìn)一步表明所求總式的代表性強(qiáng)，精度高。 3.2實(shí)測(cè)結(jié)果 選擇幾種具代表性的樣品進(jìn)行測(cè)定結(jié)果比較，茶葉可作為干樣典型，菠蘿等則可作為濕樣代表。將樣品按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程測(cè)出與其糖濃度對(duì)應(yīng)的消光值，然后

9、按常規(guī)方法查標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出所獲得的值;同時(shí)利用換算式直接計(jì)算出糖含量。將測(cè)定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，便知其準(zhǔn)確程度與實(shí)用性。在表3中E值為多組測(cè)定值的平均，而常規(guī)法總糖的計(jì)算則按公式計(jì)算。式中c為標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的糖量值ug/mL; L為供試液總量，此為500mL;L為取用試液量，此為1mL; 106為ug轉(zhuǎn)換成g。M為樣品重。 簡(jiǎn)化法中，C變成Y值，即前述Y=C =179 . 5x-2 . 74，余同總糖計(jì)算式。由表3可看出，常規(guī)法與簡(jiǎn)化法分析的值相差極微，將兩種方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較其結(jié)果如表4。從表4可知，兩種方法計(jì)算所獲得結(jié)果相差極微，表明簡(jiǎn)化法完全符合實(shí)測(cè)要求。對(duì)表4再求兩值間的平一均相對(duì)相差則得-0

10、.07%，對(duì)幾組試驗(yàn)值求出的平均偏差D=0.0115;標(biāo)準(zhǔn)偏差S=0.0181。因此利用多項(xiàng)統(tǒng)計(jì)測(cè)驗(yàn)均顯示出簡(jiǎn)化法與常規(guī)法所獲結(jié)果趨于高度一致，證明蔥酮比色法測(cè)總糖簡(jiǎn)化后十分精確，從而為省去標(biāo)準(zhǔn)曲線制作步驟提供了充足實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 3.3簡(jiǎn)化法計(jì)算公式及其意義: 由于簡(jiǎn)化法與常規(guī)法均是利用蔥酮比色法測(cè)總糖含量的同樣操作方法與步驟，只是簡(jiǎn)化法以關(guān)系式代替了常規(guī)法的標(biāo)準(zhǔn)曲線，故總糖計(jì)算式簡(jiǎn)化為式中：:X即E，為實(shí)測(cè)的消化值。1楊建榮,李玉勝,殷軍港. 蒽酮比色法快速測(cè)定復(fù)合硅鋁酸鹽霉菌吸附劑中酵母多糖含量J. 糧食與飼料工業(yè),2014,12:57-59.1材料與力一法1. 1儀器和試劑1.1.1材料

11、復(fù)合硅鋁酸鹽霉菌吸附劑(主要成分:水合硅鋁酸鹽約85%,酵母細(xì)胞壁約5%10%。1. 1. 2儀器 T6新悅可見(jiàn)分光光度計(jì)，渦漩混合器，分析天平(精確度0. 000 1 g) , MI6微波消解儀。1. 1. 3試劑 甘露糖標(biāo)準(zhǔn)品(純度98 % , Sigma公司);濃鹽酸(質(zhì)量分?jǐn)?shù)37% 38%)、濃硫酸(質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%)和蕙酮皆為分析純;實(shí)驗(yàn)室用水為蒸餾水。 50 g/I, Na()H溶液:5g分析純氧氧化鈉溶于100 ml蒸餾水中;質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%三氯乙酸溶液:15g分析純?nèi)纫宜崛苡?5 g蒸餾水中;6 mol/I二鹽酸溶液:25 ml濃鹽酸和25 ml蒸餾水混勻。1. 2方法1.2.1

12、樣品預(yù)處理 準(zhǔn)確稱取約0.5g復(fù)合硅鋁酸鹽霉菌吸附劑于微波消解罐中，加入50 g/I, Na()H溶液10 ml,渦旋振蕩2 min,混勻。在溫度60條件下微波消解20 min，冷卻后用6 mol/I二鹽酸溶液調(diào)至中性，再加入濃鹽酸使其最終濃度為6 mol/I,。微波消解采用程序升溫，條件為:微波功率為4% W,溫度8 0 0C時(shí)問(wèn)5 min,溫度1%0C、時(shí)問(wèn)5 min和溫度12%C時(shí)問(wèn)90 min。冷卻后轉(zhuǎn)移至1% ml容量瓶中稀釋定容，過(guò)濾后濾液備用。1.2.2溶液配制1.2.2.1甘露糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制 準(zhǔn)確稱取約0.29甘露糖于小燒杯中，用蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)移至100 ml容量瓶中并定容

13、至100 m1。1.2.2.2甘露糖標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制 分別準(zhǔn)確移取甘露糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液1. 00,2. 00,3.00,4.00,5.00和6. 00 ml于50 ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋定容至50 ml。1.2.2.3顯色劑蕙酮習(xí)殼酸溶液的配制 用量筒量取75 ml濃硫酸(質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%)緩緩倒入裝有25 ml蒸餾水的小燒杯中，并不斷攪拌冷卻至室溫;然后加入0.05 g蕙酮，攪拌使其溶解，避光保存，現(xiàn)用現(xiàn)配。1.2.3蕙酮比色法條件的確定 通過(guò)紫外分光光度計(jì)掃描顯色后的溶液，確定最大吸收波長(zhǎng)。在甘露糖標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入不同體積的蒽酮試劑(分別為3,5,7,9,11和13 ml) ,沸水浴時(shí)問(wèn)10

14、min，顯色測(cè)定吸光度后確定蒽酮試劑的最佳體積;加入相同體積的蕙酮試劑，采用不同的沸水浴時(shí)問(wèn)(3,5,7,9,11和13 min)，顯色測(cè)定吸光度后確定最佳沸水浴時(shí)問(wèn)。1. 2. 4甘露糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作和樣品總糖含量的測(cè)定分別準(zhǔn)確移取1. 00 ml蒸餾水、6個(gè)不同濃度的甘露糖標(biāo)準(zhǔn)使用液1. 00 ml和經(jīng)消解過(guò)濾后的樣液1. 00 ml于8支25 ml具塞比色管中。在確定的蒽酮比色法的最佳條件下(蒽酮試劑體積7 ml,沸水浴時(shí)問(wèn)9 min)顯色，將比色管在流動(dòng)水下迅速冷卻，于最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度和濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程。根據(jù)回歸方程和樣品的吸光度求出樣品中

15、總糖含量(以甘露糖計(jì))?？偺呛?(C*10-3X100/m)X 0. 9 X 100%，式中，C為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出的100 ml樣品消解液中甘露糖的質(zhì)量濃度，mg/ml;m為樣品的質(zhì)量,g;0. 9為甘露糖和甘露低聚糖的換算系數(shù);100為樣品消解液定容體積，ml。2結(jié)果與分析2. 1蕙酮比色條件的確定2.1.1最大吸收波長(zhǎng)的確定將甘露糖標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)蕙酮試劑顯色后在500700nm波長(zhǎng)之問(wèn)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。由圖1可知，在630nm處有最大吸收峰，因此確定其檢測(cè)波長(zhǎng)為630nm。2. 1. 2蕙酮顯色劑用量的確定由圖2可知，當(dāng)顯色劑用量為7 ml時(shí)，甘露糖的吸光度最大，靈敏度最高。因此選擇顯色劑用量

16、為7 ml。2. 1. 3沸水浴時(shí)問(wèn)的確定由圖3可知，隨著沸水浴時(shí)問(wèn)的增加，吸光度值呈先增后減的趨勢(shì)，并在9 min時(shí)取得最大值;因此確定最佳沸水浴時(shí)問(wèn)為9 min。2. 2樣品測(cè)定2. 2. 1樣品中蛋白質(zhì)干擾的排除 取過(guò)濾后的酵母多糖消解液2 ml于試管中，向其中滴加質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%三氯乙酸溶液，未發(fā)現(xiàn)有沉淀析出，故可確定水解液中己無(wú)蛋白質(zhì)存在，同時(shí)也排除了蛋白質(zhì)對(duì)顯色可能造成的十?dāng)_。2.2.2樣品中總糖含量的測(cè)定分別準(zhǔn)確移取1. 00 ml蒸餾水、1. 00 ml甘露糖標(biāo)準(zhǔn)使用液及1. 00 ml過(guò)濾后的樣液于8支25 ml具塞比色管中，在每支25 ml具塞比色管中再準(zhǔn)確加入7 ml蕙酮試

17、劑顯色劑;然后在沸水浴中加熱9 min，取出后在流動(dòng)水下迅速冷卻。于波長(zhǎng)630 nm處測(cè)其吸光度，得標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)圖4)和回歸力一程。根據(jù)回歸力一程和樣品的吸光度求出樣品中酵母名糖的含量?；貧w力一程為:y=2. 238 1x+0. 038 2，相關(guān)系數(shù)為R2= 0. 998 1，說(shuō)明線性關(guān)系良好。根據(jù)樣品的吸光度計(jì)算出100 ml樣品消解液中酵母多糖含量(以甘露糖計(jì))為0. 286 mg/ml，則復(fù)合硅鋁酸鹽霉菌吸附劑中酵母多糖的含量為5. 13 %，與實(shí)際添加量相符，說(shuō)明該測(cè)定力一法準(zhǔn)確可靠。2. 3加標(biāo)回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的測(cè)定2. 3. 1加標(biāo)回收率的測(cè)定準(zhǔn)確稱取質(zhì)量相同的兩份約0.5g復(fù)合硅鋁酸鹽