1、生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技能實(shí)驗(yàn)講義王玉倩 馮曉英 郭娟 張潮 湯曉辛 唐婧 編 貴州師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院2012年6月目 錄一、顯微操作1實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡的使用方法與繪圖1實(shí)驗(yàn)二 簡(jiǎn)單臨時(shí)裝片的制作與觀察，油鏡的使用5實(shí)驗(yàn)三 壓片的制作，涂片的制作7實(shí)驗(yàn)四 生物材料的解剖結(jié)構(gòu)觀察9二、溶液配制10實(shí)驗(yàn)五 玻璃器皿的洗滌10實(shí)驗(yàn)六、溶液的配制12實(shí)驗(yàn)七、溶液的配制14實(shí)驗(yàn)八 溶液pH值的調(diào)節(jié)17三、分光光度計(jì)的使用19實(shí)驗(yàn)九 分光光度法的介紹及分光光度計(jì)的使用方法19實(shí)驗(yàn)十 混合物中CuSO4的測(cè)定23實(shí)驗(yàn)十一 分光光度法測(cè)定葉綠素的含量25四、無菌操作27實(shí)驗(yàn)十二 無菌操作技術(shù)2733一、顯微操作實(shí)驗(yàn)一

2、 顯微鏡的使用方法與繪圖一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握顯微鏡的構(gòu)造及原理，熟練使用光學(xué)顯微鏡。2、了解顯微鏡使用的基本要求、注意事項(xiàng)及一般維護(hù)方法。3、學(xué)習(xí)生物繪圖的基本要求及方法。二、 實(shí)驗(yàn)原理顯微鏡的原理是經(jīng)過兩次成像，成為倒立的虛像。第一次先經(jīng)過物鏡成像，在物鏡的一倍焦距和兩倍焦距之間成放大的倒立的實(shí)像。第一次成的物像，經(jīng)過目鏡的第二次成像，是一個(gè)虛像。倒置的像常常使初學(xué)者使用發(fā)生困難。1、 顯微鏡的構(gòu)造機(jī)械部分(1) 鏡座顯微鏡最下面呈馬蹄形或園形的部分，起穩(wěn)定和支持鏡身作用。(2) 鏡柱從鏡座向上直立的短柱。上連鏡臂，下連鏡座，可以支持鏡臂和載物臺(tái)。(3) 鏡臂彎曲成馬蹄形的部分，便于手持，

3、下端與鏡柱相連接的地方有一個(gè)傾斜關(guān)節(jié)，可使鏡臂傾斜，便于觀察。(4) 載物臺(tái)自鏡臂下端向前伸出，放置標(biāo)本用的平臺(tái)，其中央有一個(gè)園孔，叫通光孔。臺(tái)上有一移動(dòng)器（老式的左右各有一個(gè)壓片夾），用以固定和移動(dòng)標(biāo)本。(5) 鏡筒和鏡臂上方連接的園筒部分。有的顯微鏡鏡筒內(nèi)有一抽管，可適當(dāng)抽長(zhǎng)，一般長(zhǎng)度是160170毫米。鏡筒上端裝有目鏡，下端有一個(gè)可轉(zhuǎn)動(dòng)的園盤，叫物鏡轉(zhuǎn)換器（或叫物鏡旋轉(zhuǎn)盤，固著在鏡筒下端，分兩層，上層固著不動(dòng)，下層可自由轉(zhuǎn)動(dòng)。轉(zhuǎn)換器上有24個(gè)圓孔，用來安裝不同倍數(shù)的低倍或高倍物鏡）。作用是保護(hù)成像的光路與亮度。(6) 調(diào)節(jié)器（也叫調(diào)節(jié)螺旋）為鏡壁上兩種可轉(zhuǎn)動(dòng)的螺旋，一大一小，能使鏡筒上下

4、移動(dòng)，調(diào)節(jié)焦距。大的叫粗準(zhǔn)焦螺旋，位于鏡臂的上方，可以轉(zhuǎn)動(dòng)，以使鏡筒能上下移動(dòng)，從而調(diào)節(jié)焦距，升降鏡筒較快，用于低倍鏡對(duì)焦；小的叫細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，位于鏡臂的下方，它的移動(dòng)范圍較粗準(zhǔn)焦螺旋小，升降鏡筒較慢，可以細(xì)調(diào)焦距。(7) 傾斜關(guān)節(jié)鏡柱和鏡臂交界處有一個(gè)能活動(dòng)的關(guān)節(jié)。它可以使顯微鏡在一定的范圍內(nèi)后傾（一般傾斜不得超過45）便于觀察。但是在使用臨時(shí)封片觀察時(shí)，禁止使用傾斜關(guān)節(jié)，尤其是裝片內(nèi)含酸性試劑時(shí)嚴(yán)禁使用，以免污損鏡體。(8) 載物臺(tái)從鏡臂向前方伸出的金屬平臺(tái)。呈方形或圓形，是放置玻片標(biāo)本的地方。其中央具有通光孔，在通光孔的左右有一個(gè)彈性的金屬壓片夾，用來壓住載玻片。較高級(jí)的顯微鏡，在載物臺(tái)上

5、常具有推進(jìn)器，它包括夾片夾和推進(jìn)螺旋，除夾住切片外，還可使切片在載物臺(tái)上移動(dòng)。光學(xué)部分(1) 目鏡裝于鏡筒上方，由兩組透鏡構(gòu)成，目鏡的作用是把物鏡所形成的倒立實(shí)像再放大成為一個(gè)虛像。目鏡上刻有，等符號(hào)，表示放大倍數(shù)。我們所觀察到的標(biāo)本的物像，其放大倍數(shù)是物鏡和目鏡放大倍數(shù)的乘積。如物鏡是，目鏡是，其物像的放大倍數(shù)是倍。在目鏡內(nèi)兩個(gè)透鏡間的光欄上可裝一根剪短的毛發(fā)，做為指針，用以指示要觀察的材料。(2) 物鏡裝在鏡筒下端物鏡轉(zhuǎn)換器的孔中，一般的顯微鏡有個(gè)物鏡鏡頭，每個(gè)鏡頭都是由一系列的復(fù)式透鏡組成的，其上也有放大倍數(shù)記號(hào)，有，及。及物鏡是低倍鏡，是高倍鏡，是油鏡。低倍鏡常用于搜索觀察對(duì)象及觀察標(biāo)

6、本全貌，高倍鏡則用于觀察標(biāo)本某部分或較細(xì)微的結(jié)構(gòu)，油鏡則常用于觀察微生物或動(dòng)植物更細(xì)微的結(jié)構(gòu)。(3) 聚光器（集光器）位于載物臺(tái)（通光孔）下方，由兩塊或數(shù)塊鏡組成，它能將反光鏡反射來的光線集中以射入物鏡和目鏡，有的聚光器可升降，便于調(diào)光，集光器下有一可伸縮的園形光圈，叫虹彩光圈，可調(diào)集光器口徑的大小和照射面，以調(diào)節(jié)光線強(qiáng)弱（有的顯微鏡只有遮光極而無集光器）。光線過強(qiáng)時(shí)，可縮小虹彩光圈。(4) 反光鏡是顯微鏡觀察時(shí)獲得光源的裝置，位于顯微鏡鏡座中央，一面為平面鏡，一面為凹面鏡。轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡，可使外面光線通過集光器照射到標(biāo)本上。使用時(shí)，光線強(qiáng)用平面鏡，光線弱用凹面鏡。2、顯微鏡使用（1）放置 放在左

7、胸前，離桌邊5cm的位置.（2）對(duì)光將低倍鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方與鏡筒成一直線。撥動(dòng)反光鏡，調(diào)節(jié)至視野最亮無陰影。反光鏡有平、凹兩面，光源強(qiáng)時(shí)用平面，較暗時(shí)用凹面，需要強(qiáng)光時(shí)，將聚光器提高，光圈放大；需要弱光時(shí)，將聚光器降低，或光圈適當(dāng)縮小。（3）低倍鏡使用 升高鏡筒，把玻片標(biāo)本放在載物臺(tái)中央，使材料正對(duì)通光孔的中心，然后用壓片夾壓住載玻片的兩端。轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒下降至物鏡距制片0.5cm。于轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器的同時(shí)，須俯身在鏡旁仔細(xì)觀察物鏡與標(biāo)本之間的距離。（注意不可在調(diào)焦點(diǎn)時(shí)邊觀察邊下必鏡筒，否則會(huì)使物鏡和玻片觸碰，壓碎破片，損壞物鏡）。左眼于目鏡觀察，同時(shí)左手轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)，使鏡筒徐徐上升以調(diào)節(jié)焦距，使

8、視野內(nèi)的物象看到上時(shí)即停，再調(diào)微調(diào)節(jié)器，至標(biāo)本清晰為止。如一次調(diào)節(jié)看不到物像，應(yīng)重新檢查材料是否在光軸線上，重新移正材料，再重復(fù)上述操作過程直至物像出現(xiàn)和清晰為止。找到物像后還可根據(jù)材料的厚薄、顏色、成像的反差強(qiáng)弱等是否合適再進(jìn)行調(diào)節(jié)，如果太亮，可降低聚光器或縮小虹彩光圈，反之則升高聚光器或開大光圈。(1) 高倍鏡使用在低倍鏡下找到要觀察的目標(biāo)，移到視野中央，換高倍鏡，轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)螺旋使影像清晰。如果高倍物鏡離蓋玻片較遠(yuǎn)看不到物像時(shí)，則需重新調(diào)整焦點(diǎn)；此時(shí)眼睛應(yīng)從側(cè)面注視物鏡，并小心地轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)焦螺旋使鏡筒慢慢地下必到高倍鏡頭幾乎要與切片接觸時(shí)為止（注意切勿使鏡頭緊壓玻片，以錫損壞鏡頭和壓碎玻片標(biāo)

9、本）。然后再由目鏡向下觀察，同時(shí)向內(nèi)，向右轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)焦螺旋，稍微升高鏡筒至看見物像后，換細(xì)調(diào)焦螺旋，使物像看得更加清晰為止。(2) 收鏡 經(jīng)聚光器降下，再將物鏡轉(zhuǎn)成八字形，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒下降，以免物鏡與聚光器相碰。應(yīng)將鏡頭轉(zhuǎn)為低倍鏡，再水平取下切片，取下時(shí)要注意勿使切片觸及鏡頭。切片取下后，再轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡鏡頭與通光孔錯(cuò)開。下降鏡筒，使兩個(gè)物鏡位于載物臺(tái)上通光孔的兩側(cè)，并將反光鏡還原成與桌面垂直。將顯微鏡放回原處，并蓋上防塵罩。(3) 維護(hù)顯微鏡在從木箱中取出或裝箱時(shí)，右手緊握鏡臂，左手穩(wěn)托鏡座，輕輕取出。不要只用一只手提取，以防顯微鏡墜落，然后輕輕放在實(shí)習(xí)臺(tái)上或裝 入木箱內(nèi)。顯微鏡

10、放到實(shí)習(xí)臺(tái)上時(shí)，先放鏡座的一端，再將鏡座全部放穩(wěn)，切不可使鏡座全面同時(shí)與臺(tái)面接觸，這樣震動(dòng)過大，透鏡和微調(diào)節(jié)器的裝置易損壞。顯微鏡須經(jīng)常保持清潔，勿使油污和灰塵附著。如透鏡部分不潔時(shí)，光學(xué)部分可用擦鏡紙沾清潔液清潔。機(jī)械部分用干凈的軟布清潔。顯微鏡不能在陽光下暴曬和使用。目鏡和物鏡不要隨便抽出和卸下必須抽取目鏡時(shí)，須將鏡筒上口凈用布遮蓋，避免灰塵落入鏡筒內(nèi)。更換物鏡時(shí)，卸下后應(yīng)倒置在清潔的臺(tái)面下，并隨即裝入木箱的置放物鏡的管內(nèi)。顯微鏡用完后，取下標(biāo)本片，經(jīng)聚光器降下，再將物鏡轉(zhuǎn)成八字形，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒下降，以免物鏡與聚光器相碰。顯微鏡應(yīng)放在干燥的地方，以防生霉。2、 生物繪圖的基本要求及方

11、法(1)具有高度的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。認(rèn)真觀察對(duì)象，選出正常典型的材料。形態(tài)結(jié)構(gòu)要準(zhǔn)確，比例要正確，要求真實(shí)，立體，美觀。(2)畫圖前在紙上安排好各圖的位置和比例，并預(yù)留書寫圖題與注字的地方。(3)先繪制草圖，位置略偏左，右邊留著注圖。圖面要力求整潔，用削尖的HB鉛筆勾出圖形輪廓，鉛筆要保持尖銳，盡量少用橡皮。注意大小要與實(shí)物想符合。(4)正式繪圖用2H至3H的繪圖硬鉛筆，描出與物體吻合的線條。線條要一筆勾出，光滑清晰勻稱，接頭處無分叉和痕跡，毋重復(fù)描繪。(5)陰影用圓點(diǎn)襯，表示明暗深淺和立體感。點(diǎn)點(diǎn)要圓而整齊，大小一致。(6)繪圖要完善，字體用正楷，大小要均勻，不能潦草。注圖線用直尺畫出，引出平

12、行線，間隔要均勻，且一般多向右邊引出，圖注部分接近時(shí)可用折線，但注圖線之間不能交叉，圖注要盡量排列整齊。(7)繪圖及圖注一律用鉛筆，不要用鋼筆、水筆、圓珠筆。(8)實(shí)驗(yàn)題目寫在報(bào)告紙上方，圖題和材料的名稱寫在圖的下方并注明放大倍數(shù)（目鏡物鏡）。三、注意事項(xiàng)1、顯微鏡是精密儀器，使用時(shí)一定要嚴(yán)格地按規(guī)程進(jìn)行操作。同時(shí)，顯微鏡的幾個(gè)主要部件都是配套的，并已編號(hào)，不能互換，特別注意不要弄錯(cuò)鏡頭。2、要注意保持顯微鏡清潔，特別是光學(xué)部分，如有灰塵，要用擦鏡紙輕輕擦去。若使用過油鏡頭，需用二甲苯擦拭干凈鏡頭與聚光器上的油。3、顯微鏡安放位置，顯微鏡應(yīng)安放在離桌邊緣5 cm、鏡筒向前，顯微鏡位置稍靠左側(cè)。

13、4、對(duì)光根據(jù)光線的強(qiáng)弱來選擇平面鏡或凹面鏡；用低倍鏡進(jìn)行對(duì)光，把低倍鏡位置放低；在轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器時(shí)，物鏡到位，光圈調(diào)節(jié)好，視野光線均勻、明亮。5、轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡時(shí)，不可直接用手接觸，而應(yīng)該通過轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器。6正確使用高倍物鏡的方法。由于高倍物鏡的工作距離小，鏡頭易損壞，轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦時(shí)，眼睛要注視鏡筒的下降，并且把光圈開大。不要調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，避免物鏡損壞。7用顯微鏡觀察時(shí)，切忌睜一眼閉一眼，要左眼窺鏡，右眼作圖。8不是倍數(shù)越大，越清晰。如果目鏡倍數(shù)過大，得到的放大虛像則很不清晰。在低倍鏡下能看清楚的物像，不必用高倍鏡觀察。9載玻片上多余的水要即時(shí)擦干凈，載物臺(tái)上應(yīng)隨時(shí)保持清潔。10標(biāo)本必須加蓋玻片，制作

14、帶水或藥液的玻片標(biāo)本時(shí)，必須兩邊擦凈再觀察，千萬不可將藥水沾到鏡頭上。11注意防潮，在觀察時(shí)，顯微鏡上凝結(jié)的水珠（尤其在冬天觀察，呼吸中的水分常在顯微鏡上凝結(jié)成水珠），要及時(shí)擦掉，顯微鏡要放干燥處保存，鏡箱內(nèi)應(yīng)放一袋蘭色硅膠干燥劑。12如遇機(jī)件不靈，使用困難時(shí)，千萬不可用力轉(zhuǎn)動(dòng)，更不要任意拆修，應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師，要求協(xié)助排除故障，以免造成損壞。13視野中物像與標(biāo)本移動(dòng)的關(guān)系：如視野中某觀察對(duì)象位于左下方如何移到中央，應(yīng)將裝片或切片向左下方移動(dòng)（同向移動(dòng)）。原因是視野中物像移動(dòng)的方向或切片移動(dòng)的方向相反。四、結(jié)果與討論1. 顯微鏡的各部分結(jié)構(gòu)2. 繪制一個(gè)細(xì)胞結(jié)構(gòu)圖實(shí)驗(yàn)二 簡(jiǎn)單臨時(shí)裝片的制作與

15、觀察，油鏡的使用（演示）一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆张R時(shí)裝片的制作方法，并熟悉繪制細(xì)胞圖的技能，了解油鏡的使用方法。二、 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法(一)、簡(jiǎn)單臨時(shí)裝片的制作1. 實(shí)驗(yàn)步驟擦：指的是擦玻片，防止玻片上的雜質(zhì)影響觀察效果。一手用食指和拇指輕輕夾住玻片的邊緣，另一只手拿紗布將玻片放在兩層紗布之間，用食指和拇指夾住輕輕擦拭，用力要均勻。滴：主要指載玻片上滴加的液體。根據(jù)所做裝片不同，滴加的液體不同。以適量為最佳，水滴太小容易產(chǎn)生氣泡或干涸，影響觀察，水滴太大容易溢出載玻片而污染顯微鏡。?。褐溉∫^察的物體。以洋蔥表皮為例，用鑷子撕取洋蔥鱗莖表面的薄膜，以05cm05cm為宜。放：將所取的物體放在載玻片液滴

16、的中央。將撕下的薄膜放在載玻片中央的水滴中，用鑷子將其仔細(xì)展平，撕下的薄膜越大就越不容易展平。蓋：指蓋蓋玻片，先使蓋玻片的一端接觸載玻片的水滴，然后慢慢的放下，防止出現(xiàn)氣泡影響觀察效果。滴：指的是滴加染色液。滴到蓋玻片的一端，滴加的不宜過多。染色，將裝片從顯微鏡載物臺(tái)上取下，放在桌面上進(jìn)行染色。不能直接在顯微鏡的載物臺(tái)上進(jìn)行染色，否則會(huì)污染顯微鏡，染色后的裝片一定要擦干凈周邊的液體，再用顯微鏡觀察。吸：用吸水紙從蓋玻片的另一端吸引，使染液浸透所取物體。2. 實(shí)驗(yàn)材料和方法（1） 洋蔥表皮細(xì)胞方法同上（2） 果肉離散細(xì)胞用解剖針跳去番茄果肉少許，放在載玻片上一滴清水中，用針將果肉細(xì)胞撥勻，蓋上蓋

17、玻片觀察。（二）、油鏡觀察材料和器具11218h的微生物培養(yǎng)物。 2染色液：草酸銨結(jié)晶紫、石碳酸復(fù)紅。 3儀器及其他用具：顯微鏡、酒精燈、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、廢液缸、洗瓶、火柴、紗布、擦鏡紙、吸水紙、無菌水、香柏油、二甲苯等。方法及步驟1、簡(jiǎn)單染色 涂片：取一塊載玻片，滴一小滴（或用接種環(huán)挑取少許）無菌蒸餾水于載玻片中央，用接種環(huán)按無菌操作要求挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂片要薄而均勻。干燥、固定：手執(zhí)玻片一端，將涂有菌體的面朝上，通過火焰23次（用手指觸及玻片背面，以不燙手為宜）。其目的是使細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)凝固，以固定細(xì)菌細(xì)胞形態(tài)，并使之牢固附著在載玻片上。染色：將玻片平放于玻片擱架上，在涂菌

18、的部位滴加適量的石炭酸復(fù)紅(或草酸銨結(jié)晶紫)，染色約12min。水洗：傾去染色液，用洗瓶中的自來水沖去染色液，直至涂片上流下的水無色為止。干燥：自然干燥，或用吸水紙輕輕吸干水分（注意勿擦去菌體）。鏡檢：待標(biāo)本片完全干燥后，用油鏡鏡檢。2油鏡的使用 調(diào)節(jié)光源：將10的低倍鏡轉(zhuǎn)到工作的位置。上升聚光器，打開可變光闌，安裝在鏡座內(nèi)的光源燈可通過調(diào)節(jié)電壓以獲得適當(dāng)?shù)恼彰髁炼?，?yīng)根據(jù)光源的強(qiáng)度及所用物鏡的放大倍數(shù)選用凹面或凸面反光鏡并調(diào)節(jié)其角度，使視野內(nèi)的光線均勻，亮度適宜。 調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡：根據(jù)使用者的個(gè)人情況，雙筒顯微鏡的目鏡間距可以適當(dāng)調(diào)節(jié)，而左目鏡上一般還配有曲光度調(diào)節(jié)環(huán)，可以適應(yīng)眼距不同

19、或兩眼視力有差異的觀察者。 調(diào)節(jié)聚光器和物鏡的數(shù)值口徑相一致：取下目鏡直接向鏡筒內(nèi)觀察，先將可變光闌縮到最小，再慢慢打開，使聚光器的孔徑與視野的直徑一樣大，然后再放回目鏡。目的是使入射光所展開的角度與鏡口角度相符合，否則因光圈開得太大而超過物鏡的數(shù)值口徑時(shí)會(huì)產(chǎn)生光斑，如光圈收得太小則降低分辨率，從而影響了物像的清晰度。因?yàn)楦魑镧R的數(shù)值口徑不同，所以每轉(zhuǎn)一次物鏡都要進(jìn)行調(diào)節(jié)。 低倍鏡觀察：調(diào)節(jié)粗螺旋，下降載物臺(tái)，將染色標(biāo)本片置于載物臺(tái)上，用標(biāo)本夾好，移動(dòng)推進(jìn)器將觀察的位置移到物鏡的正下方，調(diào)節(jié)粗螺旋，緩慢上升載物臺(tái)，調(diào)節(jié)到物像清晰為止。移動(dòng)標(biāo)本片，把合適的觀察部位移至視野的中心。 高倍鏡觀察：眼

20、睛從側(cè)面觀察，旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器，將高倍鏡轉(zhuǎn)至正下方，注意避免與玻片相撞。眼睛從目鏡觀察，細(xì)心調(diào)節(jié)粗、細(xì)螺旋，直至物像清晰為止。將最適宜觀察的部位移至視野的中心。注意不要移動(dòng)玻片標(biāo)本的位置。 油鏡的觀察：用高倍鏡找到合適的部位后，眼睛從側(cè)面觀察，旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器，使高倍鏡與油鏡的鏡頭呈“八”字形，在玻片標(biāo)本的鏡檢部位滴一滴香柏油。然后眼睛從側(cè)面觀察，將油鏡轉(zhuǎn)到正下方，小心油鏡的鏡頭與載物臺(tái)相撞，小心上升載物臺(tái)，使油鏡的鏡筒浸入香柏油中。眼睛從目鏡觀察，調(diào)節(jié)微螺旋，直至物像清楚為止。仔細(xì)觀察并繪圖(6)注意不能用粗準(zhǔn)焦螺旋，調(diào)節(jié)要適度，特別是當(dāng)載玻片過厚時(shí)應(yīng)更換蓋玻片。(7)油鏡使用完畢，用棉棒或者擦鏡紙蘸少

21、許清潔劑擦去油跡。三、 結(jié)果與討論繪制一個(gè)臨時(shí)裝片的細(xì)胞圖簡(jiǎn)述油鏡使用的注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)三 壓片的制作，涂片的制作（介紹）一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握植物根尖壓片的制作方法2. 掌握涂片的制作方法3. 了解油鏡的使用二、 實(shí)驗(yàn)材料和方法（一） 根尖壓片1、器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、刀片、燒杯等。2、試劑：Carnoy固定液（3份95%乙醇1份冰乙酸）；1mol/L HCL；改良苯酚品紅3、實(shí)驗(yàn)材料：洋蔥根尖4、步驟（1）準(zhǔn)備將洋蔥剝?nèi)ネ鈱永掀?，置于盛清水的小燒杯口上，使根莖部與水接觸，在25左右培養(yǎng)使其生根。每天換水1到2次，一般3天左右即可獲得實(shí)驗(yàn)所需材料。（2）解離剪下根尖約1cm備用。

22、放入1mol/L的鹽酸解離1015min。（3）染色解離后吸出HCl，蒸餾水洗2次，每次35min。將根尖置于載玻片中間，切去根冠，從乳白色分生組織切取盡可能薄的一片，滴加20l改良苯酚品紅染液，染色1015min。（4）壓片 在經(jīng)染色的材料上加一滴染液，蓋上蓋玻片，覆一層吸水紙，用左手一個(gè)手指壓住蓋玻片的一角，右手用帶橡皮頭的鉛筆/鑷子垂直敲打，或以拇指垂直緊壓蓋片（壓片必須用力適當(dāng)，注意勿使蓋片移動(dòng)），使材料分散壓平，便于觀察。（5）鏡檢通常染色清晰而又分散得很好的分裂相只是少數(shù)，因此壓片后要認(rèn)真仔細(xì)地進(jìn)行鏡檢。（二） 根尖涂片 1.取材：細(xì)胞分裂旺盛時(shí)期取樣，一般植物在上午9-12時(shí)，下

23、午2-5時(shí)，一般取根尖、莖尖。2.預(yù)處理（觀察細(xì)胞分裂時(shí)需該步驟）：目的是防止紡錘體的形成，使細(xì)胞分裂停止在中期階段，從而獲得較多的中期分裂相，同時(shí)預(yù)處理還可以使染色體收縮變短，便于觀察統(tǒng)計(jì)。 3.前低滲：將處理后的材料放在0.075M KCl低滲液中，在20-25條件下處理30分鐘左右。4去壁：倒去KCl溶液，加入2.5%混合酶液（纖維素酶與果膠酶各占2.5%），在溫度25-30下處理2-5小時(shí)左右，其間將材料輕輕搖動(dòng)數(shù)次，促使酶反應(yīng)充分。酶液與材料的比例適當(dāng)，酶液不能過少。5 后低滲：倒去酶液，用蒸餾水沖洗2-3次，然后在蒸餾水中停留5-10分鐘左右后進(jìn)行后低滲。6 固定：用甲醇:冰醋酸（

24、3:1）固定液固定。7. 涂片：將去壁固定的材料放在載玻片上，加一滴固定液，然后用鑷子將材料夾碎，去掉大塊殘?jiān)?，然后從載玻片一側(cè)向材料輕輕吹氣，使組織分散成一薄層。8. 火焰干燥：將載玻片于酒精燈上微微加熱烤干。9染色：用40:1的Giemsa染液（用pH7.2的1/15M 磷酸緩沖液稀釋）染色4-30分鐘或更長(zhǎng)，蒸餾水清洗，空氣干燥后可用樹膠封片。10. 鏡檢：于顯微鏡下觀察。（三） 花粉涂片1. 取材：取幼嫩花序2. 固定：將花或者花序固定于卡諾固定液中，2-24小時(shí)。3. 將花取出，換入95%酒精和85%酒精浸洗，再轉(zhuǎn)入70%酒精中保存。注意必須在酒精中洗凈固定液中的醋酸。4. 將固定好

25、的材料轉(zhuǎn)入50%酒精。5. 經(jīng)蒸餾水清洗后，取出一個(gè)花藥置于清潔載玻片上，加一小滴改良的苯酚品紅染色液。6. 用刀片切去花藥的一端，用小鑷子夾著花藥，將切面放在載玻片上涂抹，成一薄層，再滴一滴45%醋酸軟化分色。7. 蓋上蓋玻片，使花粉母細(xì)胞均勻散開。三、 結(jié)果與討論1. 裝片、壓片、切片的異同點(diǎn)2. 油鏡的使用有哪些注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)四 生物材料的解剖結(jié)構(gòu)觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 學(xué)習(xí)使用顯微鏡觀察生物材料的解剖結(jié)構(gòu)2. 通過顯微鏡圖像觀察，理解認(rèn)識(shí)生物材料解剖圖的方法二、實(shí)驗(yàn)方法和步驟1. 實(shí)驗(yàn)材料葉的切片，新鮮的植物葉片2. 實(shí)驗(yàn)步驟（1） 觀察單子葉植物和雙子葉植物的葉片（2） 用顯微鏡觀察單子

26、葉和雙子葉的葉片解剖結(jié)構(gòu)三、結(jié)果與討論如何通過葉片的縱切裝片理解葉片的結(jié)構(gòu)，其它的生物材料又是如何？二、溶液配制實(shí)驗(yàn)五 玻璃器皿的洗滌一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?、掌握常用儀器的洗滌和干燥方法2、掌握烘箱的使用二、實(shí)驗(yàn)原理為確保實(shí)驗(yàn)順利的進(jìn)行，要求把實(shí)驗(yàn)所用的玻璃儀器清洗干凈并干燥，不同類型器皿的清洗方法不同，不同用途的器皿清洗要求也不同。這些工作看起來很普通簡(jiǎn)單，但如操作不當(dāng)或不按操作規(guī)定去做，則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至?xí)?dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗。三、實(shí)驗(yàn)器材培養(yǎng)皿，燒杯，三角瓶，量筒，移液管，試管，玻璃棒，容量瓶，試管刷，平皿刷，燒杯刷，瓶刷，烘箱四、常用儀器的洗滌和干燥1、玻璃儀器的洗滌要求：內(nèi)外壁被水均勻潤(rùn)

27、濕而不掛水珠（1）新購(gòu)的玻璃儀器的洗滌將器皿放入2%鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，以除去游離的堿性物質(zhì)，最后用流水沖凈。（2）常用的舊玻璃儀器的洗滌a、試管、燒杯、量筒、三角瓶、量杯等（一般玻璃儀器）用毛刷蘸洗衣粉或洗潔精等刷洗自來水洗凈蒸餾水潤(rùn)洗(本著“少量、多次”的原則)3次潤(rùn)洗：化學(xué)定量分析中的一種操作。它是在所用的玻璃儀器清洗完畢、確認(rèn)清潔后，用待裝的工作試液浸泡儀器內(nèi)壁的一個(gè)過程。b、滴定管、移液管、吸量管、容量瓶等（有精確刻度）自來水沖洗用0.2%-0.5%的合成洗滌液或鉻酸洗液浸泡幾分鐘自來水洗凈蒸餾水潤(rùn)洗3次c、光度分析用的比色皿，由光學(xué)玻璃或石英制成，可用熱的HCl-乙醇浸泡自來水洗

28、凈去離子水洗凈d、超聲波洗滌：超聲波的能量能夠穿透玻璃器皿的內(nèi)壁和細(xì)微的縫隙、小孔、死角，通過震動(dòng)，松弛污垢和纖維之間的附著力，將大的污垢團(tuán)分散成細(xì)小的顆粒，以利于洗除，故可以應(yīng)用于任何玻璃器皿的清洗。（3）鉻酸洗液的配制與使用（分濃溶液與稀溶液兩種）配方如下：濃溶液：重鉻酸鈉或重鉻酸鉀（工業(yè)用） 50g自來水 150 mL濃硫酸（工業(yè)用） 800 mL稀溶液：重鉻酸鈉或重鉻酸鉀（工業(yè)用） 50g自來水 850 mL濃硫酸（工業(yè)用） 100 mL配法都是將重鉻酸鈉或重鉻酸鉀先溶解于自來水中，可慢慢加溫，使溶解，冷卻后徐徐加入濃硫酸，邊加邊攪動(dòng)。重鉻酸鈉或重鉻酸鉀與硫酸作用后形成鉻酸（chro-

29、mic acid），酪酸的氧化能力極強(qiáng)，因而此液具有極強(qiáng)的去污作用。配好后的洗滌液應(yīng)是棕紅色或桔紅色。貯存于有蓋容器內(nèi)，以防氧化變質(zhì)。洗滌液可反復(fù)使用，但當(dāng)其變?yōu)槟G色時(shí)即已失效，不能再用。2、玻璃儀器的干燥(1)空氣晾干，又叫風(fēng)干。(2)烤干：將儀器外壁擦干后用小火烘烤（不停轉(zhuǎn)動(dòng)儀器，使其受熱均勻）。適用于試管、燒杯、蒸發(fā)皿等儀器的干燥。(3)烘干：將儀器放在金屬托盤上置于烘箱中，控制溫度在105左右烘干。但不能用于精密度高的容量?jī)x器的烘干。(4)吹干：用電吹風(fēng)吹干。五、烘箱的使用1、把要滅菌的物品放在烘箱內(nèi)，堆積時(shí)要留有空隙，勿使接觸器壁，關(guān)閉箱門。2、打開電源，控溫儀上有數(shù)字顯示。3、按

30、SET鍵進(jìn)入溫度設(shè)定，將溫度設(shè)為80-120。4、再按SET鍵進(jìn)入時(shí)間設(shè)定，將時(shí)間設(shè)定為120min。5、烘干完畢，待烘箱內(nèi)溫度降至60時(shí)，才能打開箱門取出器材。實(shí)驗(yàn)六、溶液的配制一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?、掌握電子天平的使用2、了解分析天平的使用3、掌握常用玻璃儀器的使用方法4、了解不同等級(jí)純水的不同用途5、學(xué)習(xí)配制溶液母液濃度的計(jì)算方法二、實(shí)驗(yàn)器材電子天平，分析天平，稱量紙（杯），燒杯，三角瓶，量筒，容量瓶，移液管，吸耳球，玻璃棒，藥勺三、儀器的使用1、電子天平的使用（1）水平調(diào)節(jié)：調(diào)整地腳螺旋高度，使水平儀內(nèi)空氣泡位于圓環(huán)中央。（2）接通電源，預(yù)熱30min。（3）按開關(guān)鍵（ON/OFF鍵），

31、使顯示器亮，并顯示稱量模式0.0000g（4）稱量：按 TAR鍵，顯示為零后。將稱量物放入盤中央，待讀數(shù)穩(wěn)定后，該數(shù)字即為稱物體的質(zhì)量。（5）去皮稱量：按 TAR鍵清零，將空容器放在盤中央，按 TAR鍵顯示零，即去皮。將稱量物放入空容器中，待讀數(shù)穩(wěn)定后，此時(shí)天平所示讀數(shù)即為所稱物體的質(zhì)量。2、分析天平的使用分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要儀器，一般是指能精確稱量到0.0001g（0.1mg）的天平。（1）事先檢查電源電壓是否匹配（必要時(shí)配置穩(wěn)壓器），按儀器要求通電預(yù)熱至所需時(shí)間。（2）開啟、預(yù)熱（1 小時(shí)），調(diào)水平；（3）校準(zhǔn) CAL；（4）稱量 將量器（稱量紙，稱量杯等）歸零去皮（Ta

32、re 或 T.O）后，慢慢加樣至量器，當(dāng)加試樣與指定量相差不到10 mg時(shí)，極小心地將盛有試樣的藥勺伸向量器的正上方2-3 cm處，勺的另一端頂在掌心上，用拇指、中指及掌心拿穩(wěn)藥勺，并以食指輕彈勺柄，將試樣慢慢的抖入量器中。多加的藥品取出，但不能返回試劑瓶中。（5）稱量結(jié)束應(yīng)及時(shí)除去稱量紙（杯），關(guān)上側(cè)門，切斷電源，并做好使用情況登記。3、常用玻璃儀器的使用（1）燒杯粗略配制一定體積的溶液用容量：10-5000 mL使用注意：加熱時(shí)應(yīng)置于石棉網(wǎng)上，一般不可干燒（2）三角瓶加熱處理試樣和容量分析滴定容量（mL）：50、100、250、500、1000使用注意：加熱時(shí)應(yīng)置于石棉網(wǎng)上，一般不可干燒（

33、3）量筒或量杯量取一定體積的液體用，精確度不高容量（mL）：5、10、25、50、100、250、500、1000、2000使用注意：沿壁加入或倒出使用；不能加熱和量取熱的液體；不能作反應(yīng)容器；不能在量筒里稀釋溶液；量液和讀數(shù)時(shí)，量筒必須放平，視線同量筒內(nèi)液體的凹液面的最低處保持水平。（4）容量瓶配制標(biāo)準(zhǔn)體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液或被測(cè)溶液用容量（mL）：10、25、50、100、150、200、250、500、1000等使用注意：只能配制容量瓶上規(guī)定容積的溶液；容量瓶的容積是在20時(shí)標(biāo)定的，轉(zhuǎn)移到瓶中的溶液的溫度應(yīng)在20左右；非標(biāo)準(zhǔn)磨口塞要保持原配；漏水的不能用；不能直接用火加熱，可水浴加熱（5）移液管

34、或吸量管用于準(zhǔn)確移取一定體積的溶液容量（mL）：1、2、5、10、15、20、25、50、100等，微量0.1、0.2、0.5等使用注意：吸溶液時(shí)，左手握住移液管，右手捏吸耳球多次；把溶液吸到管頸標(biāo)線以下，不時(shí)放松食指，試管內(nèi)液面慢慢下降；把液面調(diào)節(jié)到標(biāo)線；放出溶液時(shí)，移液管下端緊貼錐形瓶?jī)?nèi)壁，放開食指，溶液沿瓶壁自由流出；殘留在移液管尖的最后一滴溶液，一般不要吹掉。四、不同等級(jí)純水的不同用途1、超純水（Ultrapure Water）：既將水中的導(dǎo)電介質(zhì)幾乎完全去除，又將水中不離解的膠體物質(zhì)、氣體及有機(jī)物均去除至很低程度的水。通常用于多種精密分析實(shí)驗(yàn)的需求。2、雙蒸水（Distillatio

35、n-Distillation H2O，ddH2O）：經(jīng)過2次蒸餾而得的水。適用于多種需求，包括試劑制備、溶液稀釋、細(xì)胞培養(yǎng)所需營(yíng)養(yǎng)液的配制等。3、去離子水（Deionized Water）：應(yīng)用離子交換樹脂去除水中的陰離子和陽離子?？捎糜谇逑?、配制分析標(biāo)準(zhǔn)樣、制備試劑和稀釋樣品。4、純水（Reverse osmosis Water，RO水）：通過反滲透膜過濾后的水，能夠去除95%以上的離子態(tài)雜質(zhì)。通常用于實(shí)驗(yàn)室器皿的最后清洗；高壓滅菌鍋用水。5、蒸餾水（Distilled Water）：實(shí)驗(yàn)室最常用的一種純水，雖設(shè)備便宜，但極其耗能和費(fèi)水且速度慢，應(yīng)用會(huì)逐漸減少。蒸餾水能去除自來水內(nèi)大部分的污

36、染物，但揮發(fā)性的雜質(zhì)無法去除。實(shí)驗(yàn)七、溶液的配制一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?、掌握溶液母液的配制流程2、掌握不同溶液的貯存要點(diǎn)3、學(xué)習(xí)母液濃度和使用濃度的換算4、掌握常用緩沖液的配制二、實(shí)驗(yàn)器材燒杯，量筒，藥勺，稱量紙，移液管，玻璃棒，容量瓶，吸耳球，滴管，試劑瓶，pH試紙，pH計(jì)三、實(shí)驗(yàn)試劑NaH2PO42H2O，Na2HPO412H2O四、溶液的配制方法及步驟1、實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備：準(zhǔn)備所需的藥品和玻璃儀器；洗滌。2、計(jì)算：算出所需固體溶質(zhì)的質(zhì)量或液體溶質(zhì)的體積。（1）百分比濃度計(jì)算：a、G/V比例如配1% NaCl，稱1g NaCl溶于100 mL水。b、V/V比：例如配75%乙醇100 mL，75%=

37、X/100, X=75 mL。取75 mL無水乙醇，加25 mL 蒸餾水。乙醇：乙醚：丙酮=2：1：2配500 mL，各取200 mL，100 mL，200 mL混合。c、G/G比：用的較少，如計(jì)算灰分中某種元素如Fe的含量。（2）摩爾濃度的計(jì)算：(藥品的分子量一般在標(biāo)簽中注明)M=摩爾數(shù)（mol）/體積（L），摩爾數(shù)（mol）=質(zhì)量（g）/摩爾質(zhì)量1 mol/L = 1 m mol/L1000 = 1 mol/L1000000a、0.1 mol/L或0.1 mol/L NaCl配100 mL：稱取NaCl 0.1 mol/L0.1 L40 g/mol=0.4gb、0.1 m mol/L Na

38、Cl配100 mLmM=毫摩爾數(shù)/體積（L） 毫摩爾數(shù)=質(zhì)量（mg）/摩爾質(zhì)量稱取NaCl 0.1 m mol/L0.1L40 g/mol=0.4mgc、0.1 mol/L NaCl配100 mLmol/L =微摩爾數(shù)/體積（L） 微摩爾數(shù)=質(zhì)量（g）/摩爾質(zhì)量稱取NaCl 0.1mol/L0.1 L40 g/mol=0.4 ug（3）混合溶液配制的計(jì)算：如配3 mol/L EDTA，2.25 m mol/L NBT以及60 mol/L核黃素溶液100ml，用50m mol/L磷酸緩沖液配制。注意：分別計(jì)算三種成分的質(zhì)量；用磷酸緩沖液分別配制三種成分的溶液，再混合，使混合后的總體積為100 m

39、L。3、稱量：根據(jù)需要選擇不同量程的天平；根據(jù)要求選擇不同精度的測(cè)量器，如量筒或移液管。4、溶解：（1）將固體或液體溶質(zhì)倒入燒杯里。（2）根據(jù)藥品配置要求選擇溶劑：如：蒸餾水，雙蒸水，去離子水等。（3）加入適量的溶劑（約為所配溶液體積的1/6），用玻璃棒攪拌使之完全溶解，冷卻至室溫。（藥品標(biāo)簽中一般標(biāo)識(shí)有藥品的溶解性能和分子式，可根據(jù)分子式和所學(xué)的常識(shí)判斷藥品的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)特點(diǎn)）如配制酸堿兩性物質(zhì)（氨基酸、蛋白質(zhì)、核苷酸等）時(shí)，如果溶解性能不好，可以用稀酸或稀堿促進(jìn)溶解，但pH應(yīng)在被要求的范圍內(nèi)。（4）加熱可以促進(jìn)溶解，但注意應(yīng)該在配制的范圍內(nèi)。有的藥品還需水浴加熱較好。如配0.1%的淀粉，水浴

40、加熱（溫度在80-90），過熱會(huì)糊化。5、定容（1）固體：于小燒杯中溶解后，移到容量瓶中，用玻璃棒引流或用小漏斗，將小燒杯用剩余溶劑多洗幾次。用溶劑加入到將容量瓶2/3時(shí)，將容量瓶水平方向搖動(dòng)幾周（勿倒置），使溶液大體混勻。再慢慢加溶劑到接近刻度，然后用滴管加入到刻度。眼睛平視刻度，加溶劑至液體凹面與刻度相切。蓋緊瓶塞倒轉(zhuǎn)，使氣泡升到頂，將瓶震蕩數(shù)次，再倒置，重復(fù)操作，混合均勻即可。（注意：不再定容了，防止溶液漏掉）（2）液體稀釋：用移液管移取一定體積的溶液于容量瓶中，再按上法進(jìn)行。如果稀釋時(shí)產(chǎn)生熱量，可先于小燒杯中加少量溶劑溶解，冷卻后移到容量瓶中，再按上法進(jìn)行。6、容量瓶定容后，裝入試劑瓶

41、，貼上標(biāo)簽。標(biāo)簽應(yīng)注明以下內(nèi)容：藥品濃度、名稱、配制人、配制日期等。7、清理實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所。五、緩沖溶液的配制1、概念由一定物質(zhì)組成的溶液，在加入一定量的酸或堿時(shí)，其氫離子濃度改變甚微或基本不變，此種溶液稱為緩沖溶液；這種作用稱為緩沖作用；其溶液內(nèi)所含物質(zhì)稱為緩沖劑，調(diào)節(jié)緩沖劑的比例可以配置成各種pH的緩沖液。緩沖劑的組成，多為弱酸及這種弱酸與強(qiáng)堿所組成的鹽，或弱堿及這種弱堿與強(qiáng)酸所組成的鹽。調(diào)節(jié)二者的比例可以配制成各種 pH 的緩沖液。例如：某一緩沖液由弱酸（HA）及其鹽(BA)所組成，它的解離方程式如下：HA H ABA B A若向緩沖液中加入堿（NaOH），則：HA NaOH NaA（弱酸鹽）

42、+ H2O若向緩沖液中加入酸（HCl），則：BA HCl BCl HA（弱酸）由此可見，向緩沖液中加酸或堿，主要的變化就是溶液內(nèi)弱酸（HA）的增加或減少。由于弱酸（HA）的解離度很小，所以它的增加或減少對(duì)溶液內(nèi)氫離子濃度改變不大，因而起到緩沖作用。實(shí)例：磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液原理：加入鹽酸溶液，其緩沖作用： NaH2PO4 + Na2HPO4 + HCl 2 NaH2PO4 + NaCl 加入氫氧化鈉溶液，其緩沖作用： NaH2PO4 + Na2HPO4 + NaOH 2 Na2HPO4 + H2O 緩沖溶液：磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉溶液緩沖劑：磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉2、配制0.2 mol

43、/L pH=6.8的磷酸緩沖液（用磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉做緩沖液）選用藥品：Na2HPO412H2O（堿）和NaH2PO42H2O（酸）配緩沖液100 mL。（1）計(jì)算100 mL 0.2 mol/L NaH2PO42H2O： g100 mL 0.2 mol/L Na2HPO412H2O： g（2）分別配制0.2 mol/L Na2HPO4和0.2 mol/L NaH2PO4各100 mL，定容于容量瓶之后。注意：在容量瓶上帖標(biāo)簽。（3）按照下表中的比例分別量取0.2 M Na2HPO4 和 0.2 M NaH2PO4溶液，混合后裝入試劑瓶，貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽應(yīng)注明以下內(nèi)容：試劑名稱，試劑濃度，p

44、H值，配制人，配制日期，貯存條件等。（4）磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液（0.2 mol/L）的檢驗(yàn)：取一滴所配制的緩沖溶液于精密pH試紙上，檢測(cè)其pH值。（5）如配50 mM pH=6.8的緩沖液100 mL，以配制好的母液稀釋即可。計(jì)算： 取0.2 M pH=7.2的緩沖液 mL，用蒸餾水定容至100 mL即可。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：檢驗(yàn)所配制的緩沖溶液與預(yù)期pH值是否相符合。4、注意事項(xiàng)（1）溶液要用帶塞的試劑瓶盛裝。（2）每瓶試劑必須標(biāo)明名稱、規(guī)格、濃度和配制日期的標(biāo)簽。（3）配制硫酸、磷酸、硝酸、鹽酸等溶液時(shí)，應(yīng)把酸倒入水中。（4）不能用手接觸腐蝕性及有劇毒的溶液，劇毒廢液應(yīng)作解毒處理，不可直

45、接倒入下水道。（5）應(yīng)熟悉一些常用溶液的配制方法。5、實(shí)驗(yàn)報(bào)告（1）詳細(xì)記錄溶液配制步驟。（2）如果所配制的緩沖溶液與預(yù)期pH值不相符合，請(qǐng)思考其原因。附表 磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液（0.2 mol/L）pH0.2 mol/L Na2HPO4 (mL)0.2 mol/L NaH2PO4 (mL)pH0.2 mol/L Na2HPO4 (mL)0.2 mol/L NaH2PO4 (mL)5.8 8.092.07.0 61.0 39.05.910.090.07.167.033.06.012.387.77.272.028.06.115.085.07.377.023.06.218.581.57.4

46、81.019.06.322.577.57.584.016.06.426.573.57.687.013.06.531.568.57.789.510.56.637.562.57.891.58.56.743.556.57.993.07.06.849.051.08.094.75.36.955.045.0實(shí)驗(yàn)八 溶液pH值的調(diào)節(jié)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?、掌握稀酸稀堿的配制方法2、學(xué)習(xí)pH試紙和pH計(jì)的使用方法3、掌握測(cè)定溶液pH值的原則二、實(shí)驗(yàn)器材燒杯，三角瓶，量筒，稱量紙，移液管，玻璃棒，容量瓶，吸耳球，滴管，pH試紙，pH計(jì)三、稀酸稀堿的配制方法1、1 M KOH液的配制：稱取57.1 g KOH，加蒸

47、餾水至1000 mL。2、0.1 M KOH液的配制：取10 mL、1 M KOH液加蒸餾水90 mL。3、1 M NaOH液的配制：稱取40 g NaOH，加蒸餾水至1000 mL。4、0.1 M NaOH液的配制：取10 mL、1 M NaOH液加蒸餾水90 mL。5、1 M HCl液的配制：取濃鹽酸（比重1.19）82.5 mL加蒸餾水至1000 mL。配制時(shí)先將濃鹽酸緩緩加入約800 mL的蒸餾水中，然后用蒸餾水補(bǔ)足至1000 mL。6、0.1 M HCl液的配制：取10 mL、1 M HCl液加蒸餾水90 mL。7、酒精是組培工作中常用的消毒液，廣泛用于外植體材料、接種用具及接種人員

48、雙手的消毒，也用于培養(yǎng)室的酒精噴霧消毒等。酒精的消毒效果以70%為最好。所以常將市售95%的酒精稀釋至70%-75%（檢測(cè)學(xué)生如何換算）。四、pH試紙的使用用干燥、潔凈的玻璃棒蘸有待測(cè)溶液（不能在原瓶中），滴在干燥的pH試紙中部，試紙變色，立即與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比較，確定溶液的pH值。在操作過程中，試紙不能用水潤(rùn)濕，也不能將pH試紙丟放在待測(cè)溶液中。五、pH計(jì)的使用方法1、開機(jī)前準(zhǔn)備：（1）取下復(fù)合電極套；（2）用蒸餾水清洗電極，用濾紙吸干。2、開機(jī)：按下電源開關(guān)，預(yù)熱30 min。（短時(shí)間測(cè)量時(shí)，一般預(yù)熱不短于5 min；長(zhǎng)時(shí)間測(cè)量時(shí)，最好預(yù)熱在20 min以上，以便使其有較好的穩(wěn)定性。）3、標(biāo)定

49、：（1）拔下電路插頭，接上復(fù)合電極；（2）把選擇開關(guān)旋鈕調(diào)到pH檔；（3）調(diào)節(jié)溫度補(bǔ)償旋鈕白線對(duì)準(zhǔn)溶液溫度值；（4）斜率調(diào)節(jié)旋鈕順時(shí)針旋到底；（5）把清洗過的電極插入pH緩沖液中；（6）調(diào)節(jié)定位調(diào)節(jié)旋鈕，使儀器讀數(shù)與該緩沖溶液當(dāng)時(shí)溫度下的pH值相一致。4、測(cè)定溶液pH值：（1）先用蒸餾水清洗電極，再用被測(cè)溶液清洗一次。（2）用玻璃棒攪拌溶液，使溶液均勻，把電極浸入被測(cè)溶液中，讀出其pH值。5、結(jié)束：（1）用蒸餾水清洗電極，用濾紙吸干；（2）套上復(fù)合電極套，套內(nèi)應(yīng)放少量補(bǔ)充液；（3）拔下復(fù)合電極，接上短接線，以防止灰塵進(jìn)入，影響測(cè)量準(zhǔn)確性；（4）關(guān)機(jī)。六、測(cè)定溶液pH值的原則1、讀數(shù)時(shí)保留整數(shù)；

50、2、不能將pH試紙濕潤(rùn)（稀釋了待測(cè)溶液，影響測(cè)量結(jié)果）；3、不能將pH是指直接深入待測(cè)液中（污染待測(cè)液）。三、分光光度計(jì)的使用實(shí)驗(yàn)九 分光光度法的介紹及分光光度計(jì)的使用方法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)分光光度法的原理、應(yīng)用范圍，學(xué)會(huì)使用可見分光光度計(jì)。二、分光光度法的介紹分光光度法是通過測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。在分光光度計(jì)中，將不同波長(zhǎng)的光連續(xù)地照射到一定濃度的樣品溶液時(shí)，便可得到與眾不同波長(zhǎng)相對(duì)應(yīng)的吸收強(qiáng)度。如以波長(zhǎng)（）為橫坐標(biāo)，吸收強(qiáng)度（A）為縱坐標(biāo)，就可繪出該物質(zhì)的吸收光譜曲線。利用該曲線進(jìn)行物質(zhì)定性、定量的分析方法，稱為分光光

51、度法，也稱為吸收光譜法。用紫外光源測(cè)定無色物質(zhì)的方法，稱為紫外分光光度法；用可見光光源測(cè)定有色物質(zhì)的方法，稱為可見光光度法。它們與比色法一樣，都以Lambert-Beer定律為基礎(chǔ)。 上述的紫外光區(qū)與可見光區(qū)是常用的。但分光光度法的應(yīng)用光區(qū)包括紫外光區(qū)，可見光區(qū)，紅外光區(qū)。1、波長(zhǎng)范圍：(1)200400nm的紫外光區(qū)，(2)400760nm的可見光區(qū)， (3)2.525m(按波數(shù)計(jì)為4000cm400cm)的紅外光區(qū)。2、儀器：紫外分光光度計(jì)，可見分光光度計(jì)（或比色計(jì)）、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。3、基本原理：當(dāng)一束強(qiáng)度為I0的單色光垂直照射某物質(zhì)的溶液后,由于一部分光被體系吸收,

52、因此透射光的強(qiáng)度降I,則溶液的透光率T為：根據(jù)朗伯(Lambert)-比爾(Beer)定律：A=abc式中A為吸光度，b為溶液層厚度（cm），c為溶液的濃度（g/dm-3)， a為吸光系數(shù)。其中吸光系數(shù)與溶液的本性、溫度以及波長(zhǎng)等因素有關(guān)。溶液中其他組分（如溶劑等）對(duì)光的吸收可用空白液扣除。由上式可知，當(dāng)固定溶液層厚度和吸光系數(shù)時(shí)，吸光度A與溶液的濃度成線性關(guān)系。在定量分析時(shí)，首先需要測(cè)定溶液對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收情況（吸收光譜），從中確定最大吸收波長(zhǎng) ，然后以此波 的光為光源，測(cè)定一系列已知濃度c溶液的吸光度A，作出A-c工作曲線。在分析未知溶液時(shí)，根據(jù)測(cè)量的吸光度A，查工作曲線即可確定出相應(yīng)的

53、濃度。這便是分光光度法測(cè)量濃度的基本原理。三、可見分光光度計(jì)的使用 （一）、722型分光光度計(jì)儀器介紹目前科研最常用的分光光度儀器（可見光區(qū)）是721分光光度計(jì)。721型分光光度計(jì)采用自準(zhǔn)式光路，單光束方法。光譜范圍在360800nm。以鎢絲燈泡為光源，經(jīng)透鏡聚光后射入單色器內(nèi)，再經(jīng)棱鏡色散后，反射到準(zhǔn)直鏡，穿狹縫得到波長(zhǎng)范圍更窄的光波作為入射光，進(jìn)入比色池透出的光波被光電管接受，產(chǎn)生光電流。經(jīng)微電流放大器送至對(duì)數(shù)放大器，由對(duì)數(shù)放大器變換成常用對(duì)數(shù)值輸出，再送至濃度調(diào)節(jié)器，數(shù)字面板表面通過切換開關(guān)分別選擇微電流放大器的輸出、對(duì)數(shù)放大器的常用對(duì)數(shù)輸出及濃度調(diào)節(jié)器的輸出信號(hào)進(jìn)行透射比（T）、光密度（A）和濃度（C）的顯示。104379862511、 液晶顯示屏；2、0%T調(diào)節(jié)按鈕，數(shù)字下調(diào)按鈕； 3、100%T調(diào)節(jié)按鈕，數(shù)字上調(diào)按鈕；4、 模式轉(zhuǎn)換按鈕； 5、功能按鈕； 6、模式顯示；7、波長(zhǎng)調(diào)節(jié)旋鈕； 8、波長(zhǎng)指示窗；9、樣品槽； 10、樣品移動(dòng)拉桿（二）、器材1、擦鏡紙或棉花、濾紙片。2、1厘米的比色皿，鋪有濾紙的表面皿或培養(yǎng)皿。3、220V交流電源，外接地線牢固。4、722型分光光度計(jì)，配有儀器布罩。（三）、試劑1.蒸餾水或空白試劑（B）。2.不同濃度的同種顏色透明溶液兩份，用作標(biāo)準(zhǔn)液（S）及待測(cè)液（U）。（四）、儀器的基本操作1、 預(yù)熱為使儀器內(nèi)部達(dá)到熱平衡，開機(jī)后預(yù)熱時(shí)間