1、b,1,質控圖的制作,主講人： 時間： 主要內容：,b,2,質控血清,1內部對照質控血清 2外部對照質控血清 外部對照質控血清是各級實驗室為了監(jiān)控每次檢測的重復性和穩(wěn)定性以及檢驗試劑盒批間差異而設置的一套陰性和陽性對照血清。設立外部對照還可以提示標本處于臨界值狀態(tài)時的檢驗操作情況。,b,3,一、外部對照質控血清的組成,理想的外部對照應該包括陽性對照、弱陽性對照、臨界值對照和陰性對照。 在每次實驗時應設置一個單一濃度水平的質控品即弱陽性對照。這個弱陽性對照的值以設定在該試劑盒Cut-off值的23倍為宜。,b,4,二、外部對照質控血清的來源和選擇,1）通過向有關機構購買獲得 2）通過實驗室制備獲

2、得 ( 比較經(jīng)濟的方法 ) 混合試劑盒內部對照血清，等量分裝。 混合HIV抗體陽性或陰性人血清，3000轉/分鐘離心15分鐘，用0.2m 生物濾膜過濾除菌后再進行56 30分鐘加熱滅活處理。弱陽性對照可以通過使用HIV抗體陰性的正常人血清梯度稀釋HIV抗體強陽性血清并經(jīng)標定后得到。弱陽性對照的OD值以23倍于Cut-off為宜。,b,5,三、外部對照質控血清的保存,1）外部對照血清或血漿的一次制備量應該足夠本實驗室一年使用 2）外部對照血清應該均一、無菌 3）外部對照血清標定后應該等量分裝，每個分裝的量應足夠一周使用 4）外部對照應該分類作好標記，使用不同顏色的標簽 5）外部對照血清應該存放在

3、70 ，如無條件則存放在非自動除霜的20 冰箱 6）外部對照血清一旦融解以后應該存放在 28 ，一周后必須棄去，不能重新凍存。,b,6,四、外部對照質控血清的使用,原則上每一次實驗必須使用外部對照質控血清，建立質控圖，以便監(jiān)控實驗操作的一致性和結果的準確性。同時可以了解各批試劑盒之間的誤差(批間差異)。,b,7,質控圖(1),X-2S,X,X+S,X-S,X+2S,b,8,建立質控圖參數(shù),對HIV抗體檢測(ELISA)外部對照質控血清的評價采用多次測定的OD值的均值上下各兩個標準差的范圍，即外部對照OD值的95可信限為 x 2s。各個外部對照的標定即確定外部對照的均值和可信限， 可用下列幾個統(tǒng)

4、計學參數(shù)來確定可信限: 算術平均值( x )代表一組OD值數(shù)的平均值。 標準差(s) 變異系數(shù)(cv)，,b,9,范例：參考鄭懷競主編免疫學檢驗室間質評與室內質控，1997年出版。,b,10,x 計算公式為： x x = N s 計算公式為： ( xn - x )2 s = N cv 計算公式為： s cv = x 100 % x,b,11,通過上表，計算S/CO值的均值（x），標準差（s）和變異系數(shù)（cv） x =1.72 s =0.29 cv =16.9% 根據(jù)以上數(shù)據(jù)繪制室內質控框架圖, 開始質量控制,b,12,質控圖(Levey-Jennings控制圖),b,13,質控圖的判定和分析,

5、如果檢驗進入質控狀態(tài)時，質控對照值超出 2s，則本次實驗結果不能被接受( 失控 )。 位移：如果幾個連續(xù)質控對照值 (3-5次) 都落在均值(中心線)的一邊則稱之為位移，通常表示存在大的變化 ( 失控 )。 引起位移的原因有使用新批號的試劑盒、使用新試劑、實驗員的更換、孵育溫度的改變、儀器 ( 移液器 ) 故障等。,b,14,質控圖的判定和分析,趨勢：當幾個連續(xù)質控對照值(5-7個)幾乎按一個方向分布時稱之為趨勢(失控)，通常由參數(shù)的緩慢改變引起，如試劑失效和移液器逐漸不準確等。 發(fā)生漂移和趨勢的最常見的原因是試劑(如酶標記物)或對照的失效。,b,15,質量控制圖建立和分析的注意要點,a可以先

6、進行最佳條件下的變異測定，即在最佳條件下(人、儀器、試劑、實驗室等因素)對同一批質控血清連續(xù)進行測定20次以上，獲得一組數(shù)據(jù)，求 x 和s值。然后求出常規(guī)條件下的 x 和 s。如果常規(guī)條件下的 x 和s 值與最佳條件下的 x 和s值比較接近，則可以接受。若不作最佳條件下的測定，可以用本室以往處于控制狀態(tài)下的數(shù)值替代。 b采用S/CO比值制圖要比單用OD或A值制圖的方法給出更為精確的評估，因為它將每次/每天OD值的浮動考慮在內。從S/CO質控圖中可以直觀地發(fā)現(xiàn)外部對照值的漂移和趨勢。,b,16,質量控制圖建立和分析的注意要點,c 由專人負責建立質控圖，每月(月末)定期召開質量控制會，討論本月檢測

7、的質量控制情況。檢驗人員在每次檢驗之前，了解一下質控圖的結果，做到心中有數(shù)。 d 建議長期和穩(wěn)定地使用一種質量好的試劑盒。,b,17,質量控制圖建立和分析的注意要點,e使用新批號或使用不同廠家的試劑盒都必須在質控圖上注明使用日期。原則上，如果改用新批號試劑盒，應重新制作室內質控框架圖，并建議對新舊兩批試劑盒進行平行性試驗。 f 發(fā)現(xiàn)全部對照值劇烈位移，立即報告室主管，分析原因，若是試劑盒質量問題，立刻通知廠家。,b,18,質量控制圖建立和分析的注意要點,h 外部和內部陰性對照質控血清出現(xiàn)高值傾向，應該注意試劑、技術或設備出現(xiàn)問題(如洗板機等)。 i實驗室配制新批次的外部對照質控血清或變動外部對

8、照質控血清的值時，必須重新計算均值和標準差，建立新的質控圖。 j 操作者在測定質控血清時，發(fā)現(xiàn)質控血清數(shù)據(jù)違背了控制規(guī)則，應填寫失控報告單，上交室負責人，由室負責人決定是否要發(fā)出檢驗報告。,b,20,“即刻法”質控,采用“即刻法”質控統(tǒng)計方法，只需在常規(guī)條件下對外部質控血清連續(xù)測定3次，按以下統(tǒng)計方法計算，如連續(xù)測定3次的結果都在控制范圍之內，即可對第3次結果進行質控，以保證檢驗結果的質量。,b,21,“即刻法”的建立參見鄭懷競主編免 疫學檢驗室間質評與室內質控,具體計算方法如下： 先將測定值從小到大排列：x1，x2，x3xn(x1為最小值，xn為最大值) 計算 X 和 s 計算SI上限值和S

9、I下限值,b,22,SI上限= X 最大值 X S SI下限=X - X最小值 S 將SI上限、SI下限與SI值表中的數(shù)字比較。,b,23,SI值表,N n3s n2s N n3s n2s 3 1.15 1.15 122.552.29 4 1.49 1.46 132.612.33 5 1.75 1.67 142.662.37 6 1.94 1.82 152.712.41 7 2.10 1.94 162.752.44 8 2.22 2.03 172.792.47 9 2.32 2.11 182.822.50 10 2.41 2.18 192.852.53 11 2.48 2.23 202.882

10、.56,b,24,當SI上限和SI下限 n3s值時，說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。,b,25,處于“告警”和“失控”狀態(tài)的數(shù)值應舍去，需重新測定該外部質控血清和病人樣本。 舍去的只是本次失控的數(shù)值及同時測定的樣本，其他次測定值仍可繼續(xù)使用。 當檢測的數(shù)值超過20次后,不必再使用“即刻法”質控統(tǒng)計計算,可以轉入常規(guī)的質控圖的質控。,b,26,21次質控血清檢測S/CO值,次數(shù) S/CO值 次數(shù) S/CO值 1 1.71 12 1.35 2 1.81 13 2.00 3 1.90 14 1.52 4 1.81 15 1.71 5 1.09 16 1.81 6 2.10 17 1.52 7

11、1.43 18 2.10 8 1.62 19 2.00 9 2.14 20 1.43 10 1.43 21 1.52 11 1.90,b,27,在第3次測定后按“即刻法”計算：,n=3 三次S/CO值從小到大排列為： 1.711.811.90 求出X= 1.81, S = 0.10 計算: SI下限 =1.81-1.71=1.0 0.10 SI上限=1.90-1.81=0.9 0.10 查SI值表: n=3時, n2s=1.15, n3s=1.15， SI上限和 SI下限均小于n2s，表示該三次檢測數(shù)據(jù)在控制范圍內。,b,28,在第5次測定后,按上法計算:,n=5 1.09 1.71 1.81

12、 1.811.90 X=1.66, S = 0.33 SI下限=1.66-1.09=1.73 0.33 SI上限=1.90-1.66=0.73 0.33 查SI值表： n=5時, n2s=1.67, n3s=1.75 n2s(1.67) SI下限(1.73) n3s (1.75), SI下限值在n2s和n3s之間,說明該值在2s3s范圍，處于“告警”狀態(tài)，故本次數(shù)據(jù)及同時測定的樣本結果應棄去后重新測定。,b,29,第6次檢測，n仍為5進行計算:,n=5 1.71 1.81 1.81 1.90 2.10 X =1.87, S = 0.15 SI下限=1.87-1.71=1.07 0.15 SI上限=2.10-1.87=1.53 0.15 查SI值表: n=5時, n2s=1.67, n3s=1.75. SI上限和SI下限均小于n2s，數(shù)據(jù)在控制范圍內，說明本次測定樣本結果可靠。可繼續(xù)檢測并計算。,b,30,當測定達到21次時,應舍去一個數(shù)據(jù)(第5個),n=20,排序如下: 1.351.431.431.431.521.521.621.711.711.811.811.811.901.901.902.002.002.102