1、,20157 -1,血清蛋白電泳與免疫固定,血清含有各種蛋白質，其等電點均在pH7.5以下，若置于pH8以上的緩沖液電泳時均游離成負離子，再向正極移動。由于其等電點，分子量和分子形狀各不相同，其電泳速度也就不同，故可將血清中蛋白質區(qū)分開來。分子量小，帶電荷多者，泳動速度就快，反之亦然。按其泳動速度順序把血清蛋白粗略分為白蛋白，1、2、及球蛋白。,常用的電泳技術,醋酸纖維素薄膜電泳 凝膠電泳 瓊脂糖凝膠電泳 : 瓊脂糖凝膠適用于蛋白質和核酸的電泳支持介質. 聚丙烯酰胺凝膠電泳 : 最常用的定性分析蛋白質的電泳方法，特別是用于蛋白質純度檢測和測定蛋白質分子量. 毛細管電泳 :經(jīng)典電泳技術和現(xiàn)代微柱

2、分離相結合的產(chǎn)物,在電場內,每種蛋白在下列因素的影響下,以特定的速度移動 : 由電場（電壓）及緩沖液的離子強度 電泳載體 膠片的蒸發(fā)程度 載體的多孔性,血清蛋白電泳的原理,_ _,_ _,_,加樣點,帶強負電荷的蛋白快速地向正極方向移動,帶微弱負電賀的蛋白由于受電子力的作用下，向負極方向移動,負極,正極,蛋白在瓊脂糖上電泳的原理,_ _ _,_ _ _,在血清蛋白電泳試劑中，蛋白質在PH值為8.8含緩沖液的瓊脂糖凝膠中被分離，然后用氨基黑對其進行染色，再用酸性溶液進行脫色。,正常血清蛋白電泳圖譜,正常參考范圍： Alb: 57%-68% 1: 1.0%-5.7% 2: 4.9%-11.2% :

3、 7%-13% : 9.8%-18.2%,血清蛋白電泳的目的是什么？,檢測異常 : 含量的變化 : 條帶中蛋白含量的增加或減少 性質的變化 : 異常條帶的出現(xiàn),血清白蛋白,血清白蛋白是血清總蛋白的主要蛋白質成分，由肝臟合成。它在維持血液膠體滲透壓、體內代謝物質運輸、營養(yǎng)等方面均起著很重要的作用。,白蛋白部分的變化,白蛋白濃度升高： (1)常見于嚴重失水，血漿濃縮所致。如嚴重脫水、休克、嚴重燒傷、急性出血、慢性腎上腺皮質功能降低癥。 (2)靜脈輸注白蛋白過多。 (3)尚未發(fā)現(xiàn)單純白蛋白濃度升高的疾病。,白蛋白濃度降低： (1)白蛋白合成不足: 急性或慢性肝臟疾病，由于白蛋白半衰期較長，在一般急性

4、肝病患者中，其濃度變化不明顯； 蛋白質營養(yǎng)不良或吸收不良。 (2) 白蛋白丟失： 各種腎病，Alb從尿中丟失； 腸道炎癥性疾?。?燒傷及滲出性皮炎等，可從皮膚喪失大量Alb。 (3)白蛋白分解代謝增加：組織損傷（手術和創(chuàng)傷）或炎癥使組織分解增加，需要Alb大量補充。,(4)白蛋白的分布異常: 肝硬化導致門脈高壓時，由于合成減少和大量Alb漏入腹水的雙重原因，使血漿Alb顯著減少。 (5) 無白蛋白血癥： 是極少見的遺傳性缺陷，血漿Alb含量常低于1g/L，可能無水腫癥狀出現(xiàn)，部分原因是血管中球蛋白含量代償性升高所致（一般血漿Alb低于28g/L時，會出現(xiàn)水腫）。,雙白蛋白: 持久型 ：家族性血

5、清白蛋白異常的疾病，極少見。 暫時型 ：由藥物引起 如：大量使用抗生素或水楊酸類藥物時，可形成快泳動性的白蛋白成分，治療中斷即逐漸消失。,雙白蛋白血癥,1球蛋白區(qū)域的變化,減少: 肝細胞的缺失， 營養(yǎng)不良, 蛋白的丟失, 先天性的a1抗胰蛋白缺乏 增加: 炎癥引起a1區(qū)域的增高： a1酸性糖蛋白， a1抗胰蛋白酶和結合珠蛋白的增加。,急性炎癥,2球蛋白的變化,減少:肝細胞的缺失, 營養(yǎng)不良, 蛋白的丟失 增加:炎癥 (伴隨 a1區(qū)域的增高), 腎病綜合癥 (a2 巨球蛋白的增加伴隨b區(qū)域的增高，同時白蛋白減少)。 出現(xiàn)游離輕鏈或完整的免疫球蛋白伴隨著a2的變化。,雙條帶: 溶血標本 ：結合珠蛋

6、白-血紅蛋白結合, 觀察標本的顏色 ， 結合珠蛋白顯型, b 脂蛋白的異常移動 ：比正常 b 脂蛋白移動速度快， 出現(xiàn)單克隆條帶。,雙 a2 條帶 : 溶血血清標本,g,b,a2,a1,Alb,腎病綜合癥,總蛋白= 42 g/l,球蛋白的變化,減少: 肝細胞的缺失, 營養(yǎng)不良, 蛋白的丟失. 增加: 貧血癥的轉鐵蛋白增加, 脂蛋白的增加, 酒精性硬化（肝硬化）中的-橋連, 出現(xiàn)單克隆成分. 腎病綜合癥,酒精性硬化（肝硬化）中的- 橋連,g,b,a2,a1,白蛋白,球蛋白區(qū)域的變化,減少: 在兒童和青少年中屬生理現(xiàn)象（不包括帶著母親所有IgG的新生嬰兒） 免疫球蛋白的缺失， 腎上腺皮質類脂醇，免

7、疫抑制性治療, 化療或放射性治療， 輕鏈骨髓瘤 增加: 肝的感染、硬化、炎癥而出現(xiàn)的多克隆條帶（部分原因是抗原刺激肝外網(wǎng)狀內皮系統(tǒng)并誘發(fā)免疫反應產(chǎn)生抗體所致）,球蛋白區(qū)域的變化,異常條帶: 出現(xiàn)纖維蛋白原 ：血漿， 區(qū)的單克隆條帶：惡性或良性 寡克隆條帶：一般與自身免疫類疾病、先天性缺失、濾過性病毒感染及免疫抑制性治療相關 C反應蛋白的異常增高。,低球蛋白血癥,血漿電泳中出現(xiàn)的纖維蛋白原,為了避免單克隆條帶的混淆，必須對血清樣本進行確認,高球蛋白血癥,弱單克隆條帶,強單克隆條帶,雙克隆條帶,寡克隆條帶,臨床疾病的識別 炎癥 肝病 腎病 “M”蛋白的篩查 對疑似骨髓瘤患者檢測單克隆免疫球蛋白 早

8、期檢出無癥狀的骨髓瘤患者 對骨髓瘤疾病進行隨訪及療效觀察,血清蛋白電泳的臨床應用,正常血清蛋白電泳圖譜,急性炎癥白蛋白區(qū)降低，1，2升高,P N,慢性炎癥白蛋白區(qū)降低，1，2，,升高,肝病時的電泳圖譜,N P,肝硬化 - 橋,beta 區(qū)：多克隆Ig A ,N P,總蛋白濃度降低(低于 60g/l),腎病綜合征,原因: 免疫缺陷病、免疫抑制劑、游離輕鏈病,低免疫球蛋白 區(qū)降低,N P,高免疫球蛋白 區(qū)升高,原因: 慢性感染、自身免疫病、慢性肝病、慢性肉芽腫,N P,血清蛋白電泳圖譜常見類型總結,N: 正常,什么是M蛋白,單克隆 漿細胞 惡性增殖產(chǎn)生的均一蛋白 “M” Multiple Myel

9、oma 多發(fā)性骨髓瘤 Macroglobulinemia 巨球蛋白血癥 Malignant lymphoma惡性淋巴瘤 Monoclonal Gammapathies單克隆丙種球蛋白病 電泳曲線：單株峰,正常漿細胞,多克隆免疫球蛋白,P1 P2 P3 P4 P5,正常電泳結果,免疫球蛋白電泳結果（正常）,正常 所有漿細胞同步合成免疫球蛋白= 多克隆免疫球蛋白,漿細胞惡性增殖,多克隆免疫球蛋白,單克隆免疫球蛋白,異常電泳結果 M蛋白,免疫球蛋白電泳結果（異常）,骨髓瘤,多克隆 Igs,單克隆Ig-“M”蛋白,正常,異常,多發(fā)性骨髓瘤(Multiple Myeloma MM),多發(fā)性骨髓瘤臨床表現(xiàn)

10、/并發(fā)癥,Calcium,Renal,Anemia,Bone,涉及多個科室,多發(fā)性骨髓瘤診治現(xiàn)狀,晚 骨折 預后差 增加負擔 感染發(fā)生率高 腎臟病變不可逆,死亡率 ,1557例多發(fā)性骨髓瘤誤診分析,呂鴻雁, 張金巧. 河北醫(yī)藥. 2009, 31(9): 1052-54,誤診率：65.17%,重視實驗診斷,39.8%,15.6%,19.8%,7.6%,15.6%,實例,患者信息 性別：女 年齡：73 科室：中醫(yī)科 診斷：貧血？,多發(fā)性骨髓瘤分型,早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療,早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療,腫瘤,M蛋白篩查是關鍵,國際骨髓瘤基金會 2010推薦的M蛋白早期篩查流程,正常血清,單克隆 Ig,單

11、克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測,血清蛋白電泳是檢測M蛋白的唯一方法,若在區(qū)出現(xiàn)異常的峰,可以初步判定為M蛋白峰,白蛋白,Gamma,Beta-2,Beta-1,Alpha-2,Alpha-1,徐玲令, 楊再興, 趙文靜, 屠小卿, 高春芳, 孔憲濤. 第二軍醫(yī)大學學報. 2004, 25(12): 1343-45,單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測,單克隆M蛋白的電泳位置,血清蛋白電泳出現(xiàn)下列異常結果,在區(qū)出現(xiàn)明顯條帶 在2 或區(qū)帶出現(xiàn)多余條帶 條帶含量出現(xiàn)單一升高,免疫固定電泳（IFE） ImmunoFixation Electrophoresis,M蛋白？ 什么類型？,為什么要做免疫固定,G

12、 A M kappa lambda,型別 例數(shù) % IgG型骨髓瘤 205 31.73 IgA型骨髓瘤 93 14.40 IgM型骨髓瘤 56 8.67 IgD型骨髓瘤 12 1.86 重鏈病 5 0.77 輕鏈病 214 33.13 半分子病 1 0.15 7S IgM 2 0.31 BMG 49 7.59 雙M蛋白病 8 1.24,上海新華醫(yī)院, 2005年,出現(xiàn)異常血清蛋白結果 需要免疫分型電泳進一步確認,646例M蛋白類型分類,免疫球蛋白,免疫球蛋白是機體的正常生理成分 分類 重鏈：IgG、IgA、IgM 、 IgD、IgE 輕鏈：、 10種類型,免疫固定電泳,將待測血清或尿標本在瓊脂

13、平板上作區(qū)帶電泳，分離后于其上覆蓋含抗k或輕鏈或各類重鏈的抗血清抗體，當抗體與某區(qū)帶中的單克隆免疫球蛋白結合后，便形成復合物而沉淀下來，再通過漂洗與染色，呈現(xiàn)濃而狹窄的著色區(qū)帶，即可判斷單克隆丙種球蛋白的輕鏈或重鏈型別。,正常血清,確認IgM 型M蛋白,血清蛋白免疫固定電泳應用舉例 （1）,IF,在區(qū)發(fā)現(xiàn)疑似M蛋白,確認IgM + IgM 型 雙克隆M蛋白,在區(qū)發(fā)現(xiàn)疑似雙克隆M蛋白,血清蛋白免疫固定電泳應用舉例 （2）,IgG Lambda型M蛋白,IgA Lambda型M蛋白,2-區(qū) 2區(qū),血清蛋白免疫固定電泳應用舉例 （3）,需要使用抗游離輕鏈和/或抗 Ig D和Ig E的抗血清確認,該結果為 l型游離輕鏈,HYDRAGEL BEN