1、2020/7/17,第三章液相色譜分析法,一、液相色譜固定相 stationary phase of HPLC 二、液相色譜流動相 mobile phase of HPLC,第三節(jié)液相色譜的固定相與流動相,high performance liquid chromatograph,stationary phase and mobile phase of HPLC,2020/7/17,一、液相色譜固定相 stationary phases of LC,1. 液-液分配及離子對分離固定相 （1）全多孔型擔體 由氧化硅、氧化鋁、硅藻土等制成的多孔球體；早期采用100m的大顆粒，表面涂漬固定液，性能不

2、佳已不多見； 現(xiàn)采用10m以下的小顆粒，化學鍵合制備柱填料；,（2）表面多孔型擔體 （薄殼型微珠擔體） 3040m的玻璃微球，表面附著一層厚度為1 2m的多孔硅膠。 表面積小，柱容量底；,2020/7/17,（3）化學鍵合固定相,化學鍵合固定相: 目前應用最廣、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳鍵型： SiOC b. 硅氧硅碳鍵型：SiOSi C 穩(wěn)定，耐水、耐光、耐有機溶劑，應用最廣； c. 硅碳鍵型： SiC d. 硅氮鍵型： SiN,2020/7/17,化學鍵合固定相的特點,（1）傳質(zhì)快，表面無深凹陷，比一般液體固定相傳質(zhì)快； （2）壽命長，化學鍵合，無固定液流失，耐流動相沖擊； 耐水、耐

3、光、耐有機溶劑，穩(wěn)定； （4）選擇性好，可鍵合不同官能團，提高選擇性； （5）有利于梯度洗脫；,存在著雙重分離機制： (鍵合基團的覆蓋率決定分離機理) 高覆蓋率：分配為主； 低覆蓋率：吸附為主；,2020/7/17,2.液-固吸附分離固定相,種類：硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等； 結構類型：全多孔型和薄殼型； 粒度：510 m；,2020/7/17,3.離子交換色譜分離固定相,結構類別： （1）薄殼型離子交換樹脂 薄殼玻璃珠為擔體，表面涂約1%的離子交換樹脂； （2）離子交換鍵合固定相 薄殼鍵合型；微粒硅膠鍵合型（鍵合離子交換基團） 樹脂類別： （1） 陽離子交換樹脂（強酸性、弱酸性） （2）

4、 陰離子交換樹脂（強堿性、弱堿性）,2020/7/17,4. 空間排阻分離固定相,（1）軟質(zhì)凝膠 葡聚糖凝膠、瓊脂凝膠等。多孔網(wǎng)狀結構； 水為流動相。適用于常壓排阻分離。 （2）半硬質(zhì)凝膠 苯乙烯-二乙烯基苯交聯(lián)共聚物，有機凝膠； 非極性有機溶劑為流動相，不能用丙酮、乙醇等極性溶劑 （3）硬質(zhì)凝膠 多孔硅膠、多孔玻珠等； 化學穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性好、機械強度大，流動相性質(zhì)影響小，可在較高流速下使用。 可控孔徑玻璃微球，具有恒定孔徑和窄粒度分布。,2020/7/17,二、液相色譜的流動相 mobile phases of LC,1. 流動相特性 （1）液相色譜的流動相又稱為：淋洗液，洗脫劑。流動相組

5、成改變，極性改變，可顯著改變組分分離狀況； （2）親水性固定液常采用疏水性流動相，即流動相的極性小于固定相的極性，稱為正相液液色譜法，極性柱也稱正相柱。 （3）若流動相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。,2020/7/17,2. 流動相類別,按流動相組成分：單組分和多組分； 按極性分：極性、弱極性、非極性； 按使用方式分：等度淋洗和梯度淋洗。 常用溶劑： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元組合溶劑作為流動相可以靈活調(diào)節(jié)流動相的極性或增加選擇性，以改進分離或調(diào)整出峰時間。,2020/7/17,20

6、20/7/17,3. 流動相選擇,在選擇溶劑時，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。 采用正相液-液分配分離時：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時間太短，降低溶劑極性，反之增加。 也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時間縮短。 常用溶劑的極性順序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六環(huán) 四氫呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 異丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳環(huán)己烷己烷煤油(最小),2020/7/17,4. 選擇流動相時應注意的幾個問題,（1）盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。,（2）避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定