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1、動(dòng)物組織中核酸的提取制作人:許祥博,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路 掌握動(dòng)物組織中DNA提取的原理和操作過程,學(xué)習(xí)離心技術(shù),掌握離心機(jī)的正確使用,實(shí)驗(yàn)思路,含有0.14 mol/L NaCl的0.015 mol/L檸檬酸鈉溶液 1mol/L NaCl溶液 氯仿-異戊醇(24 : 1, V/V) 95%乙醇 氨水溶液 5% AgNO3溶液,實(shí)驗(yàn)試劑,7.2.5%鉬酸銨試劑 (取蒸餾水400 mL,加入濃硫酸83 mL,將鉬酸銨25 g溶于其中,最后稀釋至1 L,冰箱放置一個(gè)月不變質(zhì)) 8. Vc-鉬酸銨溶液 (稱取還原型抗壞血酸0.53 g溶解于100 mL 2.5%鉬酸銨溶液,貯于棕色瓶中,當(dāng)天
2、配制) 3, 5-二羥基甲苯試劑(取比重1.19的HCl 100mL,加入FeCl36H2O 100 mg及二羥甲苯100 mL,混合溶解后,置于棕色瓶中,臨用前新鮮配制) 二苯胺試劑(取1 g純的二苯胺溶于10 mL重蒸餾的冰乙酸中,加入2.75 mL濃硫酸,放置于棕色瓶,臨用前新鮮配制),【操作】,1.制備勻漿 豬肝 + 沙 + 研磨勻漿 + 生理鹽水,2.分離抽提,肝勻漿倒入刻度離心管,立即加入2%三氯醋酸4ml攪勻,靜置、離心(3000轉(zhuǎn)/分,3分鐘)、傾去上清液,沉淀物中再加入10%NaCl溶液4ml攪勻,再置于沸水浴中加熱5分鐘,用玻棒不斷攪拌,取出冷卻后再離心(3000轉(zhuǎn)/分,3分鐘),將上清液倒入小燒杯內(nèi),取4ml 95%乙醇,逐滴加入小燒杯,白色沉淀物,靜置5分鐘,轉(zhuǎn)入離心管,再離心(3000轉(zhuǎn)/分,3分鐘),傾去上清液,即得到核酸納的白色沉淀,3.核酸水解,含有核酸離心管,加入5%H2SO4溶液4ml,用玻棒攪勻,在沸水中加熱5分鐘,核酸水解液,離心機(jī)使用注意事項(xiàng):,1.記住離心管編號(hào); 2.離心管必須先平衡后才對(duì)稱放入離心機(jī); 3.避免液體灑在離心機(jī)上面或鉆頭
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