GB15998一1995

前言

百日咳是百日咳桿菌引起的呼吸道傳染病，傳染性強，在嬰幼兒中有很高的病死率。臨床表現(xiàn)以陣

發(fā)性痙攣性咳嗽和痙咳終止時出現(xiàn)雞鳴樣吸氣吼聲為特征，多見于兒童，病程可達2-3個月。

禾標準在制定過程中，參考了1989年衛(wèi)生部制定的《中華人民共和國傳染病防治法》及《中華人民

共和國傳染病防治法實施辦法》中的診斷標準，盡量結合我國百日咳的流行病學，臨床實踐與各地情況，

以便易于實施和應用。

本標準附錄A是標準的附錄;

本標準附錄B是提示的附錄。

本標準由中華人民共和國衛(wèi)生部提出。

本標準起草單位:中國預防醫(yī)學科學院流行病學微生物學研究所、北京市地壇醫(yī)院、首都兒科研究

所。

本標準主要起草人:張榮珍、楊立信、王樹山。

本標準由衛(wèi)生部委托技術歸口單位衛(wèi)生部傳染病防治監(jiān)督管理辦公室負責解釋。

中華人民共和國國家標準

百日咳診斷標準及處理原則

GB15998一1995

Diagnosticcriteriaandprinciples

ofmanagementofpertussis

1范圍

本標準規(guī)定了百日咳的診斷標準和處理原則。

本標準適用于各級、各類醫(yī)療、衛(wèi)生、保健機構和人員對百日咳病人的診斷、報告和處理。

2診斷原則

應根據流行病學資料及臨床表現(xiàn)做出臨床診斷，確診需要百日咳桿菌培養(yǎng)陽性或者檢測抗百日咳

菌特異性抗體。

3診斷標準

3.1流行病學史

三周內接觸過百日咳病人，或該地區(qū)有百日咳流行。

3.2臨床表現(xiàn)

3.2.1流行季節(jié)有陣發(fā)性痙攣性咳嗽者。

3.2.2咳嗽后伴有嘔吐，嚴重者有結膜下出血或舌系帶潰瘍者。

3.2.3新生兒或嬰幼兒有原因不明的陣發(fā)性青紫或窒息者，多無典型痙咳。

3.2.4持續(xù)咳嗽兩周以上，能排除其他原因者。

3.3實驗室診斷

3.3.1白細胞總數(shù)顯著升高，淋巴細胞占50%以上。

3.3.2從病人的痰或咽喉部分泌物分離到百日咳桿菌，見附錄A,

3.3.3恢復期血清凝集抗體比急性期抗體呈四倍以上升高，見附錄B,

3.4病例分類

3.4.1疑似病例

具備3.2.1,3.2.2,3.2.3,3.2.4四項中任何一項，或同時伴有3.1項者。

3.4.2臨床診斷病例

疑似病例加3.3.1,

3.4.3確診病例

疑似病例加3.3.2或3.3.3,

4處理原則

4.1對病人的隔離

自發(fā)病后隔離40d，或至痙攣性咳嗽出現(xiàn)后隔離30d。接觸者觀察21d,

國家技術監(jiān)督局1995一12一15批準1996一07一01實施

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4.2對病人的治療

盡早給予抗生素治療及對癥治療，防治并發(fā)癥

4.3發(fā)生暴發(fā)流行的應急措施

4.11對未接種百日咳菌苗的易感兒童應急接種百白破三聯(lián)混合制劑

4.3.2與百日咳患者有密切接觸史的易感兒可用藥物預防。

4.4百日咳的免疫預防

百日咳是一種可以用菌苗預防的傳染病，對易感兒童實行百白破三聯(lián)混合制劑接種，是預防本病的

重要措施。國內外的研究表明，百日咳菌苗的預防效果是肯定的。按我國現(xiàn)行的免疫程序，兒童出生后

第3個月開始初免，全程免疫3針，保護率可達90%以上.第二年再加強一針。

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附錄A

(標準的附錄)

百日咳病原學診斷方法

Al病原體分離

從病人鼻咽部采集標本或咳碟法分離病原體。

Al.1標本的采集

Al.1.1咳碟法

用咳碟法采集樣品時，應在病人咳嗽時，將包一姜(Bordet-Gengou)二氏培養(yǎng)平板打開放在病人口前

10cm處.使病人對準平板表面咳嗽數(shù)次，直接收集病人咳出的飛沫。然后蓋好平皿蓋送檢。平皿暴露時

間以15s為宜。

Al.1.2鼻咽試子

由于百日咳多發(fā)于兒童，所以采樣時，病兒的頭部斜依于母親的胸懷，母親以雙手固定病兒的頭部，

醫(yī)師以右手執(zhí)棉拭子，左手按病人的頭頂部，使頂端稍向下彎的棉拭子自前鼻孔進入，沿下鼻道的底部

向后緩緩深人，由于鼻道呈弧形，不可用力過猛，以免發(fā)生外傷出血。待棉拭子頂端到達鼻咽腔后壁時，

將棉拭子稍留片刻，以待反射性咳嗽，然后輕輕旋轉一周，緩緩取出棉拭子。

Al.2接種和菌種檢定

Al.2.1菌型

百日咳桿菌應為革蘭氏陰性呈卵圓形短小桿菌，菌體長。.5-1.0fSm,

Al.2.2菌落

百日咳桿菌接種于包一姜二氏培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)3-4d后其菌落呈圓形、灰白色，表面光滑，中央突

起，邊緣整齊，具有珍珠般的光澤，菌落周圍有彌散性溶血環(huán)。

Al.2.3生化及抗原特性

百日咳桿菌生化反應極不活躍，不發(fā)酵任何碳水化合物，不液化明膠，不產生硫化氫，不形成Ail噪，

不還原硝酸鹽，不利用構椽酸鹽，氧化酶陰性，70%以上菌株觸酶陽性。不產生尿素酶和苯丙氨酸脫氨

酶。

百日咳桿菌新分離菌株有英膜，毒力強，菌落光滑，稱為1相菌。百日咳桿菌有6種凝集因子，1,2,

3因子是主要的，籍此又可將工相菌分為三種血清型:1.2,1.3,1.2.3。血清型具相對穩(wěn)定性，但可發(fā)生

變異。血清型不僅在自然感染，在人工傳代培養(yǎng)過程中也可發(fā)生變異。

A2皮膚壞死試驗

A2.1每次試驗最少用健康家兔或豚鼠2只，每只家兔或豚鼠可同時試驗數(shù)個菌株。

A2.2將培養(yǎng)40^48h第三代或第四代20%羊血包一姜二氏培養(yǎng)基上的菌苔，混懸于緩沖鹽水或生理

鹽水中。

A2.3將菌液用滅菌脫脂棉過濾，測定濃度。

A2.4用生理鹽水將菌液稀釋成4X10a/mL及2Xl0'/mL二個濃度。

A2.5試驗前一天將健康家兔或豚鼠先行脫毛。

A2.6注射前用75%酒精消毒，再用小試管蘸色素印在脊柱兩側、每只家兔可試驗4個菌株。

A2.7每個圈內皮內注射。.1mL，拔針時要在皮內稍稍扭轉以免菌液流出。

A2.8注射完畢要做好記錄。

A2.9注射后48^-72h觀察壞死情況，并量壞死的大小。如兩只家兔有一只注射4X108個菌，注射部

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位出現(xiàn)壞死即為陽性。

A3免疫熒光法檢測百日咳桿菌(直接法)

A3門原理

將已知百日咳抗血清用化學方法結合熒光色素制成熒光抗體，以此來浸染固定在玻片上的未知細

菌，若為相應細菌，則兩者結合面留在玻片上，不被緩沖液所沖掉。在熒光顯微鏡下有熒光出現(xiàn)。

A3.2材料

A3.2.，熒光抗體

用前按說明書要求以pH7.3磷酸鹽緩沖鹽水進行稀釋，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

A3.2-2pH7.3磷酸鹽緩沖鹽水

氯化鈉8.5g

磷酸氫二鈉1.07g

磷酸二氫鈉。.39g

蒸餾水1000ml,

A3.2-3熒光顯微鏡

A3.2-4其他材料

0.8^-1.2mm厚載玻片。。.17mm厚的蓋玻片。甘油緩沖液((90mL分析純甘油加10mLpH8.2

磷酸鹽緩沖液)，鏡油可用液體石蠟代替。

A3.3方法

A3.3.1用接種環(huán)將待檢標本涂布于玻片上，大小約1cm,，火焰固定，用蠟筆將標本圈起。

A3.3-2將稀釋的熒光抗體加在標本上，置濕盒，放37'C溫箱30min,

A3.3.3取出玻片，用滴管吸取3-5mL磷酸鹽緩沖鹽水將標本上熒光抗體沖洗，再依次浸人盛有磷

酸鹽緩沖液三個缸中浸泡，每缸3-5min，并不時振蕩。

A3.3-4干燥、封載、鏡檢。

A3.3.5為使結果正確，還需作以下對照:

a)標本陰性對照:標本不加熒光抗體只加磷酸鹽緩沖鹽水。

b)陽性對照:熒光抗體加在已知陽性菌株標本上。

c)封閉試驗:將標本先加未標記的同樣抗血清作用30min，充分洗滌后再加標記抗體染色，若是陽

性標本，應無特異熒光。

d)標本加正常未免疫的標記抗體，結果應無特異熒光。

A3.4結果判定

A3.4門熒光的強度和形態(tài)學的特征

++++:菌體顯著膨大，黑心清楚，熒光明亮。

+++:菌體膨大，黑心清楚，熒光明亮。

++:菌體稍膨大，形態(tài)清晰，有黑心，熒光較弱。

+:菌體不膨大，形態(tài)不清楚，熒光微弱。

一:細菌無熒光。

A3.4-2判定標準

陽性:細菌熒光在“++”以上，在片上可看到分散或成堆出現(xiàn)形態(tài)典型的細菌。陽性對照“++~+

++”，陰性對照為陰性。

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附錄B

(提示的附錄)

百日咳血清學診斷方法

Bl百日咳試管凝集試驗(半量法)

Bl.l原理

細菌、紅血球及其他顆粒性抗原，加入含有特異性抗體的血清，在有適當?shù)碾娊赓|存在時，經一定時

間作用后，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集團塊，利用這種現(xiàn)象進行已知抗原定量測定相應抗體或已知抗體測定

抗原等方法就是定量凝集試驗。

Bl.2材料

B1.2.1百日咳工相標準血清

效價為1‘12800,

Bl.2.2百日咳菌液

菌液的凝集效價應達到I相標準血清的效價的一半以上。菌液濃度定為2X10'/mL,

B1.2.30.85%生理鹽水

B1.2.4待檢血清

患者耳血或靜脈血，分離出血清后進行測定。

Bl.2.5凝集管及試管架

Bl.2.6刻度吸管(1mL,5mL,10mL)

B1.3試驗方法

取待檢血清0.1mL十。.4mL生理鹽水，稀釋成5倍，然后依次倍比稀釋即為1:10,1:20,1:

40,1:80,1:16。等，每管0.25mL。并加入2X10'/mL濃度的百日咳菌液，每管。.25mL。充分搖勻

置35'C過夜，次日取出后，室溫放置1h觀察結果。

每次試驗時要設陰性對照管，即百日咳菌液加生理鹽水，設陽性對照管，用一排試管，采用百日咳工

相標準血清，按已知效價進行稀釋，然后每管加入百日咳菌液和試驗組相同條件觀察結果。

B1.4結果判定

+:管內液體混濁，少量凝集塊沉于管底。

++:管內液體半澄清，部分凝塊沉于管底。

+++:管內液體不完全澄清，凝集塊全部沉于管底。

++++:管內液體完全澄清，凝集塊全部沉于管底。

若恢復期抗體滴度比急性期增高4倍以上對確診病例很有意義。

B2微量凝集試驗(血凝板法)

B2.1材料

B2.1.1百日咳I相標準血清

效價1:12800.

B2.1.2待檢菌液

菌液效價應達到I相標準血清效價之半，菌液濃度為3X10'-4X108/m1。

B2.1.3稀釋液

。.85%生理鹽水。

B2.1.4u型孔血凝板

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8排Xl2孔。

B2.1.5可調微量移液器

B2.1.6多孔道加樣器

B2.1,735C-37C恒溫箱

B2.1.8冰箱

B2.1.9微型振蕩器

B2.1.10帶蓋搪瓷盤

B2.2試驗方法

B2.2.1取標準