中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GBGBGBGB26400-2011

中華人民共和國衛(wèi)生部中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布

2011-03-15發(fā)布2011-05-15實(shí)施

食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

食品添加劑

二十二碳六烯酸油脂（發(fā)酵法）

1

食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

食品添加劑二十二碳六烯酸油脂（發(fā)酵法）

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于利用裂壺藻（Schizochytriumsp.）或者吾肯氏壺藻（Ulkeniaamoeboida）或者寇氏

隱甲藻（Crypthecodiniumcohnii）菌種，經(jīng)生物發(fā)酵制得的二十二碳六烯酸（DHA)油脂。

2結(jié)構(gòu)式和相對分子質(zhì)量

2.1結(jié)構(gòu)式

2.2相對分子質(zhì)量

328.5（按2007年國際相對原子質(zhì)量）

3技術(shù)要求

3.1感官要求：應(yīng)符合表1的規(guī)定。

表1感官要求

項(xiàng)目要求檢驗(yàn)方法

色澤淺黃色至橙黃色取試樣10mL，置于試管中，于自然光線下采用目

測的方法觀察其色澤及外觀形態(tài)，采用鼻嗅的方法

檢查氣味。

氣味具有本產(chǎn)品特有的氣味

組織狀態(tài)油狀液體

3.2理化指標(biāo)：應(yīng)符合表2的規(guī)定。

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2

表2理化指標(biāo)

4其他要求

產(chǎn)品應(yīng)裝于適宜的避光容器中充氮或真空保存，產(chǎn)品的最佳保存溫度為-5℃以下。

項(xiàng)目指標(biāo)檢驗(yàn)方法

含量(以C22H32O2甘油三酯計(jì))，w/%≥35.0附錄A中A.3

不皂化物，w/%≤4.0GB/T5535.1乙醚提取法

水分，w/%≤0.1GB5009.3減壓干燥法

不溶性雜質(zhì)，w/%≤0.2GB/T15688

溶劑殘留/（mg/Kg)≤1.0GB/T5009.37

酸價(jià)（以KOH計(jì)）/（mg/g)≤1.0GB/T5009.37

過氧化值/（meq/kg）≤5.0GB/T5009.37滴定法

反式脂肪酸，w/%≤1.0GB5413.36

黃曲霉毒素B1/（μg/kg)≤5.0GB/T5009.22

總砷(以As計(jì))/（mg/kg)≤0.1GB/T5009.11氫化物原子熒光光度法

鉛(Pb)/（mg/kg)≤0.1GB5009.12石墨爐原子吸收光譜法

3

附錄A

檢驗(yàn)方法

A.1安全要求

本檢驗(yàn)方法中使用的部分試劑具有毒性和腐蝕性，操作時(shí)須小心謹(jǐn)慎。如濺到皮膚上應(yīng)立即用

水沖洗，嚴(yán)重者應(yīng)立即治療。使用易燃品時(shí)，嚴(yán)禁使用明火加熱。

A.2一般規(guī)定

除另有說明外，所用試劑均為分析純，檢驗(yàn)用水符合GB/T6682—2008中規(guī)定的三級水。檢驗(yàn)

中所用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液、雜質(zhì)測定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品，在沒有注明其他要求時(shí)，均按GB/T601、

GB/T602和GB/T603的規(guī)定制備。

A.3二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯的測定

A.3.1試劑和材料

A.3.1.1二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99%。

A.3.1.2十三碳烷酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99%。

A.3.1.3氫氧化鉀。

A.3.1.4無水甲醇。

A.3.1.5正庚烷，色譜純。

A.3.1.6石油醚,沸程，30℃～60℃。

A.3.1.7氫氧化鉀甲醇溶液（4mol/L）：稱取22.4g氫氧化鉀（A.3.1.3)于燒杯中，加入適量無水甲

醇（A.3.1.4)使溶解，并轉(zhuǎn)移至100mL的容量瓶中，當(dāng)氫氧化鉀甲醇溶液冷卻至室溫后，用無水甲醇

稀釋至刻度，搖勻。

A.3.1.8二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯儲備液（10mg/mL）：稱取250mg（精確至0.0001g）二

十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯（A.3.1.1）于25mL容量瓶中，加入適量正庚烷(A.3.1.5)使溶解，并稀

釋至刻度，搖勻。

A.3.1.9十三碳烷酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)儲備液（10mg/mL）：稱取0.25g（精確至0.0001g）十三碳烷酸

甘油三酯（A.3.1.2）于25mL容量瓶中，加入適量正庚烷(A.3.1.5)使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。

A.3.1.10標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

按表A.1分別移取適量二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯儲備液（A.3.1.8）于6個(gè)10mL容量瓶中，

分別移入2.0mL十三碳烷酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)儲備液（A.3.1.9），加入正庚烷(A.3.1.5)稀釋至刻度，搖

勻。

表A.1標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯含量

編號

加入二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯儲備液

的體積(mL)

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯的濃度

（mg/mL）

100

20.10.1

30.50.5

41.01.0

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4

52.02.0

63.03.0

A.3.1.11氮?dú)?，純度?9.999%。

A.3.1.12氦氣，純度≥99.9999%。

A.3.2儀器和設(shè)備

A.3.2.1氣相色譜-質(zhì)譜儀。

A.3.2.2氣相色譜儀，配氫火焰離子化檢測器。

A.3.2.3分析天平：感量為0.01g、0.1mg。

A.3.2.4離心機(jī)。

A.3.2.5振搖器。

A.3.3定性分析

A.3.3.1二十二碳六烯酸（DHA)油脂

稱取0.25g（精確至0.01g）試樣于50mL容量瓶中，加入適量正庚烷（A.3.1.5）使溶解，并稀釋

至刻度，搖勻。準(zhǔn)確吸取2mL正庚烷溶解液于10mL帶蓋離心管中，加入0.2mL氫氧化鉀甲醇溶液

（A.3.1.7），劇烈振蕩1min以上，放置10min（甲基化反應(yīng)）。如有機(jī)層渾濁，可離心使之澄清。

取上層有機(jī)相溶液備用。

A.3.3.2測定

A.氣相色譜條件

a)色譜柱：DB-5ms（30.0m×0.25mm×0.25μm）石英毛細(xì)管柱，或相當(dāng)者；

b)柱溫程序：100℃保持3min，以10℃/min升至260℃，保持8min；

c)載氣：氦氣（A.3.1.12）；

d)流速：1.0mL/min；

e)進(jìn)樣口溫度：250℃；

f)進(jìn)樣模式：分流進(jìn)樣（分流比為1：10）；

g)進(jìn)樣量：1μL。

A.質(zhì)譜條件

a)離子源：EI源，70eV；

b)接口溫度：280℃；

c)離子源溫度：230℃；

d)四極桿溫度：150℃；

e)數(shù)據(jù)采集模式：全掃描；

f)質(zhì)量掃描范圍：20m/z～330m/z；

g)溶劑延遲3.5min。

A.3.3.3結(jié)果判定

試樣的質(zhì)譜圖應(yīng)與二十二碳六烯酸（DHA)甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖（附錄B中圖B.1）一致。

A.3.4定量分析

A.3.4.1原理

5

試樣中二十二碳六烯酸（DHA)在氫氧化鉀甲醇作用下，生成二十二碳六烯酸（DHA)甲酯，用配

有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進(jìn)行測定，以內(nèi)標(biāo)法定量，結(jié)果以二十二碳六烯酸（DHA)甘油

三酯計(jì)。

A.3.4.2試液的制備

A.二十二碳六烯酸（DHA)油脂試樣溶液的制備

稱取0.04g試樣（精確至0.0001g）于10mL容量瓶中，加入2.0mL十三碳烷酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)儲

備液（A.3.1.9），以下按A.3.3.1“加入適量正庚烷（A.3.1.5）……取上層有機(jī)相溶液備用”操作。每

份試液至少做兩個(gè)平行樣。

A.空白溶液的制備

除不加試樣外按A.所述方法進(jìn)行處理。

A.3.4.3標(biāo)準(zhǔn)工作溶液甲酯化處理

分別準(zhǔn)確吸取A.3.1.10中系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液2mL于10mL帶蓋離心管中，以下按A.3.3.1自“加入

0.2mL氫氧化鉀甲醇溶液（A.3.1.7）……取上層有機(jī)相溶液備用”操作。

A.3.4.4測定

A.氣相色譜條件

a)色譜柱：DB-23（30.0m×0.25mm×0.25μm）石英毛細(xì)管柱，或相當(dāng)者；

b)柱溫程序：90℃保持5min，9℃/min升至240℃，保持5min，3℃/min升至250℃；

c)載氣：氮?dú)猓ˋ.3.1.11）；

d)流速：1.33mL/min；

e)進(jìn)樣口溫度：250℃；

f）進(jìn)樣模式：分流進(jìn)樣（分流比為1：100）；

g）檢測器溫度：300℃；

i）進(jìn)樣量：1μL。

A.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按A.所列測定條件，將甲酯化后的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液依次進(jìn)樣，測量二十二碳六烯酸（DHA)

甲酯和十三碳烷酸甲酯的峰面積。二十二碳六烯酸（DHA)甲酯的峰面積與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中二十二碳

六烯酸（DHA)甘油三酯的濃度成正比。以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯的濃度

（mg/mL）為橫坐標(biāo)，以二十二碳六烯酸（DHA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制

標(biāo)準(zhǔn)曲線。二十二碳六烯酸（DHA)甲酯和十三碳烷酸甲酯的色譜圖參見附錄C中圖C.1。

按公式（A.1）計(jì)算回歸參數(shù)：

()yaxb=×+……………(A.1)

式中：

y——二十二碳六烯酸（DHA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比；

a——回歸曲線的斜率；

x——標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；

b——回歸曲線的截距。

A.試液的測定

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6

將空白溶液（A.）和試樣溶液（A.）依次進(jìn)樣，扣除空白值，獲得二十二碳六烯酸

（DHA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比。

A.3.4.5結(jié)果計(jì)算

試樣中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯的含量X1按公式（A.2）計(jì)算：

%

m

V

a

b-y

X1100×

1

××=……………(A.2)

式中：

X1——試樣中二十二碳六烯酸（DHA)甘油三酯含量，%；

y——試液甲酯化后二十二碳六烯酸（DHA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比；

a——回歸曲線的斜率；

b——回歸曲線的截距；

V——試液最終定容體積，單位為毫升（mL）；

m——試樣的質(zhì)量，單位為毫克（mg）。

如含量以二十二碳六烯酸（DHA)計(jì)，乘以換算系數(shù)0.9597。

計(jì)算結(jié)果以平行測定值的算術(shù)平均值表示，保留小數(shù)點(diǎn)后兩位。

A.3.4.6重復(fù)性

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值