1、第三章食用菌菌種的制作,一、母種，也稱一級菌種或試管種 母種鑒定： 潔白，健壯，無蟲害，有蘑菇香味,第一節(jié) 食用菌菌種的概述,二、原種，也稱二級菌種 原種鑒定： 潔白，健壯，有凝水，不干燥,三、栽培種，也稱三級菌種 栽培種鑒定：潔白，健壯，有凝水，不干燥, 一般不超過25-35天,第二節(jié) 培養(yǎng)基,根據各種食用菌生長時對營養(yǎng)物質的要求，用人工方法配制而成的營養(yǎng)基質，供菌絲生長發(fā)育，把這種營養(yǎng)物質叫培養(yǎng)基。它如同農作物需要土壤、肥料，動物需要飼料一樣。 目前，人們采用的培養(yǎng)基相當多，種類各不相同。不論哪種培養(yǎng)基都有共同特點：一般都含有水分、碳源、氮源、無機鹽以及生長因子等。,碳源是構成細胞物質的主

2、要元素，也是食用菌生長發(fā)膏所需能量來源。碳源的主要原料是糖類、淀粉、纖維素物質。代表物質是葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麩皮、米糠、鋸木屑、棉籽殼等。 氮源是食用菌細胞質和細胞核中蛋白質和核酸的主要元素，蛋白質和核酸是生命的基本物質。一切生命活動都離不開這些物質。氮源主要有氨基酸、蛋白胨、尿素、硫酸銨、含有氮素的物質有玉米、棉籽殼。 培養(yǎng)基中的無機鹽雖用量不多；但不可缺少，它主要是酶類的組成成分，調節(jié)各種生命代謝活動，如磷酸二氫鉀、硫酸鎂。 生長因子需要量很少，是培養(yǎng)基中的特殊營養(yǎng)物質，它是維持食用菌正常生長所不可缺少的生長因素。如馬鈴薯、 麩皮、米糠等都含有豐富的生長因子，維生素也屬此類。,1.天然

3、培養(yǎng)基：它是利用天然的有機物配制而成的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基來源廣，成本低，很適合實際生產。特別具備營養(yǎng)豐富、制備方便、經濟實用等優(yōu)點。但他學成分不能定量，每批成分也不穩(wěn)定，因此不宜用來進行精確的科學實驗。 常用的天然培養(yǎng)基，有馬鈴薯培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基、杏汁培養(yǎng)基、蘋果培養(yǎng)基、麥芽培養(yǎng)基、堆肥培養(yǎng)基等。,2.半合成培養(yǎng)基：在天然培養(yǎng)基中，適當增加無機鹽類，或在合成培養(yǎng)基中添加少量別的有機物，成為半合成培養(yǎng)基，介于天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基之間。主要目的是促進菌絲生長發(fā)育。 3.合成培養(yǎng)基：用化學成分已知的有機物或無機物配制而成的培養(yǎng)基。由于各種化學成分已經清楚，容易控制，所以適合某些定性和定量研究。

4、,馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）： 馬鈴薯（去皮）200克葡萄糖 20克 瓊脂 1820克 PH值 5.56.0 制法：先將新鮮無病害的馬鈴薯洗凈，去皮后切成小薄片，稱200克，加水1000毫升，煮沸20分鐘后過濾，其濾汁為馬鈴薯煮汁，然后加瓊脂和葡萄糖煮溶，后補足水分至1000毫升，裝管（瓶）滅菌備用。 一般食用菌母種的分離和培養(yǎng)都適合此培養(yǎng)基。,培養(yǎng)基的滅菌,培養(yǎng)基裝好后就要立即進行滅菌；將其中的雜菌殺死，然后才能接入我們所需要的純菌種，進行培養(yǎng)。 不論是母種分離時用的斜面培養(yǎng)基，還是原種、栽培種瓶培養(yǎng)基或聚丙烯塑料袋培養(yǎng)基，一般都采用熱力滅菌法。,高壓蒸汽滅菌法： 若是斜面試管培養(yǎng)基，

5、應在1 kg/cm2 （121）壓力下維持30分鐘，即可達到滅菌目的。開鍋取試管時，趁熱放成斜面。 滅菌材料如是原種和栽培種，應在1.5 kg/cm2 （128）壓力保持6090分鐘，這樣才能達到滅菌目的。,常壓蒸汽滅菌法：如沒有具備高壓鍋，可用土蒸鍋或蒸籠進行。在常壓的條件下，以 100的溫度持續(xù)68小時，以殺死培養(yǎng)料中的各種雜菌。 也可采用常壓間歇滅菌3次，可先蒸1小時，然后隔24小時又如法蒸1次，連續(xù)3次，就可達到滅菌目的。,1.加水閥 2.加水池 3.放氣閥 4.擱擋 5.擱板 6.鍋 7.爐門 8.爐室 9.灰門 10熱水鍋 11.煙囪 12.滅菌倉,滅菌效果檢驗,培養(yǎng)基的滅菌效果要

6、經常檢驗，是否滅菌徹底：一般情況下，滅菌后的培養(yǎng)基最好應放在要培養(yǎng)的溫度下，空白培養(yǎng)1周，可檢查滅菌效果。如果在這一段時間內培養(yǎng)基沒發(fā)生任何變化，說明滅菌效果良好，可以使用。,液體菌種,簡言之就是將純正優(yōu)良的菌種，接入液體培養(yǎng)基（固體培養(yǎng)基不加凝固劑），使菌絲繁殖形成大量小菌球，然后將這種培養(yǎng)基拌入木屑或棉籽皮料內，制成菌塊、培養(yǎng)其形成子實體。還可用于制原種、栽培種。 目前，用液體深層發(fā)酵法生產菌種，具有生產量大、周期短、菌齡整齊、成本低廉、接種方便等特點，是實現食用菌工廠化生產的目標。,生產上常用的栽培種,木屑、棉籽殼菌種 麥粒菌種 玉米粒菌種 木塊菌種 木筷菌種 牙簽菌種,接種技術與環(huán)境的

7、消毒,接種箱（接種室） 接種室和接種箱是進行菌種分離接種的場所，和外界空間隔絕，防止空氣流動，經過一定的消毒措施后，室內就可達到無菌狀態(tài)，防止分離和接種時污染雜菌。一般一個接種箱就可展開工作，如有條件也可建一個接種室。,無菌箱及無菌室的消毒滅菌,l用甲醛和高錳酸鉀混合熏蒸：一般每平方米需40甲醛10毫升、高錳酸鉀8毫升，進行熏蒸。使用時，先密閉門窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高錳酸鉀，人員隨之離開接種室，關緊房門，熏蒸2030分鐘即可。 20.1升汞水消毒：用0.1升汞水浸過的紗布或海綿進行揩擦，或用噴霧器噴霧滅菌，噴霧后 2030分鐘，箱內的雜菌和霧滴一起落到箱底被殺死，內部的空氣

8、就變得很清潔。,3紫外線照射滅菌：在無菌箱中裝一支220伏、30瓦的紫外線燈管；每次開2030分鐘，就能達到空間殺菌的目的。照射結束后，罩黑布半小時，以增強殺菌效果。 4石炭酸噴霧：在每次接種之前，用5石炭酸溶液噴霧，可促使空氣中的微粒和雜菌沉降，防止桌面微塵飛揚，并有殺菌作用。 5石灰揩擦：經常用藥物熏蒸，易造成酸性環(huán)境，特別用甲醛和高錳酸鉀熏蒸長久，污染往往越來越嚴重，預防辦法可把各種藥品交替使用，過一段時間（約五周）用石灰擦洗一遍，實踐證明，這樣做效果很好。,1.接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.接種鋤 5.接種鏟 6.接種匙 7.接種刀 8.接種刀 9.剪刀 10.鋼鉤 11.鑷子

9、12.彈簧接種槍 13.接種槍（日本式）,第三節(jié) 食用菌菌種分離的方法,（一） 組織分離法 （二） 孢子分離法,（一） 組織分離法,使用組織分離復壯菌種，簡便易行、效果明顯，很適宜一般種植戶。 其操作技術要點是： 選擇種菇：在菇床、菌墻中選擇出菇早、無雜菌侵染、株型緊湊、圓整肉厚、色澤美觀、七八成熟的第一潮菇的肥壯菇體作種菇； 種菇消毒：在種菇中部取最大的3-4張菇片，用70%的酒精輕擦表面后置于接種箱內消毒；,菇肉接種：將菇片縱向撕開，在每個裂面靠近菇片邊緣處取一米粒大小的菇肉組織接于PDA培養(yǎng)基上。每張菇片共撕10個裂面，接10支試管，一次分離共接3040支試管； 將試管置于1530下培養(yǎng)

10、； 培養(yǎng)期間每天都要檢查發(fā)菌情況，從中選擇菌絲濃白粗壯、邊緣整齊、長速正常、無綠、黃及漿糊狀等雜菌斑點的，表現最好的分離種轉接于木屑麩皮培養(yǎng)基上，于1530下培養(yǎng)；,菌絲發(fā)滿后，在接種箱內去掉棉塞，用蠟封口，用黑膜包裹后于49的冰箱內保藏； 在下一個生產季節(jié)與原始保藏種作對比試驗，擇優(yōu)作為生產用種。每季都如此篩選，能逐步提高菌種各方面的性狀，使發(fā)菌加快，抗逆抗雜性增強，質量明顯提高。,（二） 孢子分離法,同一品種經過四年以上栽培就會表現出一些退化現象，如出菇遲，長勢弱，轉潮慢，產量不高等。通過有性繁殖所產生的孢子進行母種繁殖是解決種性退化的一條有效途徑。因子實體孢子彈射量大，接種操作簡易，在栽

11、培專業(yè)戶中推廣孢子分離提純復壯技術是可行的。,母種孢子分離與接種 （）采菇 選擇菇體形態(tài)好，生長勢健壯，并能代表該品種性狀接近成熟的平菇子實體，采摘一叢或兩叢作為種菇拿回室內備用。要求所采的子實體菌蓋邊緣稍卷或已接近平展。,（）裝置與滅菌 用0.2新潔爾滅清洗干凈個1000毫升燒杯和個培養(yǎng)皿，烘干水分后將培養(yǎng)皿放入燒杯底部。切取菌蓋長達厘米上層或中層的一朵子實體，用藥棉蘸75酒精輕擦菌蓋和菌柄后，將菌褶朝下放入燒杯中的培養(yǎng)皿中如有插菇鋼絲架更好。此操作完成后在燒杯口沿上蓋好用無菌水潤濕的層沙布，上面再蓋一層白紙，用皮筋扎口，以次類推連同個同樣處理的燒杯一起放入接種箱。接種箱中另放入3040支P

12、DA試管培養(yǎng)基，接種鏟、鑷子酒精燈等工具，用10毫升甲醛加克高錳酸鉀混合后對接種箱進行熏蒸消毒滅菌。,（）接種與培養(yǎng) 放入接種箱用于孢子分離的平菇，經過812小時后就有孢子彈出，一般放晝夜培養(yǎng)皿中就有厚厚一層白色孢子印，這時要及時進行接種。一朵菇體彈射的孢子量可接種10支以上試管種，接種完成后貼上標簽放入25左右的恒溫箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，前34天為孢子定植期，外表看不出任何變化，7天以后孢子開始萌發(fā)并在四周長出白色絨毛狀菌絲體，1618天左右菌絲布滿培養(yǎng)基面，即得純菌絲母種，如有污染管應及時棄除。,原種擴接 選取10支菌絲潔白、粗壯、生長整齊的試管種進行原種的擴接，另外20支純菌絲母種等做完

13、出菇試驗后再作留種及相關處理。一支試管種可接瓶原種，每支試管接完要進行火焰干熱滅菌后再擴接另一支試管。接種完畢后取出菌種瓶放入25左右恒溫箱培養(yǎng)，菌絲滿瓶后10天左右進行出菇試驗。,出菇試驗 一般接種1020袋即可，接種后在適宜溫度下發(fā)菌，菌絲長滿后移到出菇最佳條件下進行觀察。對菌絲生長速度快，吃料能力強，出菇早，朵形好，轉潮快，產量高，質量好的菌種可用于擴大培養(yǎng)，投入栽培生產。,第四節(jié) 食用菌菌種的保存,無論是母種、原種或栽培種，如果未及時使用，其菌絲就會很快衰老，降低生產力，影響產量和質量。因此，菌種必須進行適當的保存，其目的是防止退化，確保菌種純一，防止雜菌感染。 菌種保存的基本原理，主

14、要是通過采用低溫、干燥與缺氧的條件，以中止菌種的繁殖，降低其新陳代謝，使之處于休眠狀態(tài)。,1.斜面低溫保存法 將斜面菌種，置于冰箱內，在4左右低溫下保存，以后每隔23個月轉管移接一次。這種保存方法適于大多數食用菌菌種。但草菇菌種在5以下很快死亡；所以草菇的菌種，不必放在冰箱中，置于室溫保存即可。 為了延長保存時間，試管口處要用塑料薄膜包扎，以防培養(yǎng)基干固。在農村沒有冰箱設備的，可把母種試管，用石蠟封口，再用塑料薄膜包封，沉放于清涼的井底保存。,2.液體石蠟保存法 食用菌的菌絲體都可用此法保存，方法簡單，只在斜面菌種試管內，注入一層已滅過菌的液體石蠟，注入量以高出斜面1厘米為宜，使菌種與空氣隔絕

15、，降低其新陳代謝的活動，然后在棉塞外包以塑料薄膜，直立存放于室內干燥處或低溫下保存，一般可保存一年以上。 使用液體石蠟菌種時，只要用接種計從斜面上挑取少許菌體，放在新鮮的培養(yǎng)基上；經過培養(yǎng)，即可應用，原種則重新蠟封，繼續(xù)保存。,3.木屑試管菌種保存法 用雜木屑按原種的培養(yǎng)基配制裝入大號試管，容量為管高的三分之二，擦凈管口塞緊棉塞，用牛皮紙包扎管口后高壓滅菌，然后移入母種，在2528下培養(yǎng)，待長滿菌絲后，立即移到低溫干燥環(huán)境保存、或埋于尿素、硝酸銨或地洞中保存，效果更好，并能延長保存時間。,4.冷凍干燥保藏法 這種方法采用真空、干燥、低溫等手段，使菌種新陳代謝活動處于相對靜止狀態(tài)，在低溫下快速冷

16、凍，又在低溫下真空干燥，而使菌細胞的結構與成分保持原來狀態(tài)而保存菌種。,還有沙土保存法、液氮超低溫保藏法、濾紙片保存法、菌絲球生理鹽水保藏法、麥粒保藏法、干孢子真空保藏法等。這里不一一介紹。要根據自己的工作需要及具體條件而定，一邊保存，一邊還要分離，復壯，做好選育工作，延續(xù)菌種的憂良性能。,原種和栽培種培養(yǎng)好后，應立即用于擴接栽培種或栽培生產，不宜保存過久，時間越長，生活力越差，也越容易感染雜菌。若因特殊情況不能及時使用，原種瓶口用牛皮紙包好，置414條件下可保藏一年左右。栽培種短期保存也可放于陰涼、干燥通風的室內，但種瓶不宜堆疊過高，以免堆內發(fā)熱，加速菌絲老化。,如何防止食用菌菌種退化,菌種退化會