1、基因毒性雜質(zhì) （Genotoxic Impurities）,主要內(nèi)容,背景知識(shí)介紹,確定毒性閾值的步驟,最大限度地控制雜質(zhì),基因毒性雜質(zhì)與限度,主要內(nèi)容,背景知識(shí)介紹,常見(jiàn)的基因毒性物質(zhì),苯并芘、黃曲霉素、亞硝胺 許多化療藥物也具基因毒性，它們的不良反應(yīng)是由化療藥物對(duì)正常細(xì)胞的基因毒性所致，如順鉑、卡鉑、氟尿嘧啶等。 氨基糖甙類(lèi)抗生素 大劑量、長(zhǎng)期使用會(huì)引起耳毒性 有些特別敏感的病人，僅使用一次或短期使用，就出現(xiàn)了聽(tīng)力損失。 研究表明，他們的一個(gè)基因上有一點(diǎn)(mtl555G)與別人不同，這使他們對(duì)氨基糖甙類(lèi)藥物耳毒性的易感性大大增加。,什么是基因毒性雜質(zhì),是指能直接或間接損傷細(xì)胞DNA，產(chǎn)生致

2、突變和致癌作用的物質(zhì)。 常用的縮寫(xiě) PGLs（potentially genotoxic impurities有潛在基因毒性的雜質(zhì)） GTLs（ genotoxic impurities基因毒性雜質(zhì)） 可能產(chǎn)生基因毒性雜質(zhì)的環(huán)節(jié)： 新藥合成 原料純化 儲(chǔ)存運(yùn)輸（與包裝物接觸） 。,有關(guān)基因毒性雜質(zhì)的指南,EMEA （歐洲藥品局） 2006年首先頒布了基因毒性雜質(zhì)限度指南，并自2007年1月1日起正式實(shí)施。 該指南為限制新活性物質(zhì)中的基因毒性雜質(zhì)提供了解決問(wèn)題的框架和具體做法。 ICH 2006年，ICH也公布了相應(yīng)的要求 具體內(nèi)容參見(jiàn)ICH Q3A(R2),IMPURITIES IN NEW

3、DRUG SUBSTANCES Q3 appendix 2 reference, Step 4 version(25.10.06) 新藥原料藥中的雜質(zhì)，Q3A(R2),步驟4（06年10月 25日）版,FDA 于2008年12月正式簽發(fā)了類(lèi)似指南：Guidance for IndustryGenotoxic and Carcinogenic Impurities in Drug Substances and Products：Recommended Approaches。 主要內(nèi)容包括： 指南發(fā)布的背景 原料藥和制劑中的基因毒性和致癌雜質(zhì)生成的預(yù)防辦法 基因毒性和致癌雜質(zhì)的分析方法、處理方法和

4、減少方法 上市申請(qǐng)和臨床研究申請(qǐng)的可接受限度 草藥原料藥和制劑中基因毒性和致癌雜質(zhì)評(píng)估指南,有關(guān)基因毒性雜質(zhì)的指南,主要內(nèi)容,賴(lài)祖亮小木蟲(chóng),雜質(zhì)與雜質(zhì)限度,FDA原料雜質(zhì)限度,Standard limits for impurities in APIs API中雜質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)限度,/cber/gdlns/ichq3a.pdf,SFDA質(zhì)控限度：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中允許的限度，制定限度超過(guò)該值，應(yīng)有充分的依據(jù)。,SFDA制劑雜質(zhì)限度,考慮病例數(shù)與療程，同時(shí)考慮：遺傳毒性研究；常規(guī)毒性研究；其它特定的毒性終點(diǎn)（酌情而定）。,決策樹(shù),毒性閾值,如果一個(gè)物質(zhì)的體內(nèi)試驗(yàn)表明對(duì)DNA有

5、潛在的破壞性，可能導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生，我們是否可以這樣下結(jié)論： 任何攝入水平都具有致癌的風(fēng)險(xiǎn)。 不存在明顯的閾值。,毒性閾值,我們是不是做一個(gè)試驗(yàn)：劑量從低到高，對(duì)其影響性進(jìn)行線性推斷？ 生物系統(tǒng)的糾錯(cuò)功能使試驗(yàn)不具備可操作性。,引入一個(gè)新觀點(diǎn)：確定一個(gè)可接受其風(fēng)險(xiǎn)的攝入量,突變的機(jī)制： 細(xì)胞水平：基因突變，染色體重排，其他 分子水平：切斷或共價(jià)修飾DNA的損傷 生物系統(tǒng)的糾正措施： 修復(fù)受損的DNA 程序性細(xì)胞死亡（凋亡）,TTC的概念,TTC Threshold of Toxicological Concern：毒性物質(zhì)限量，也可以稱(chēng)之為毒理學(xué)關(guān)注門(mén)檻，是一個(gè)默認(rèn)值。 一個(gè)未知基因毒性數(shù)據(jù)的雜質(zhì)

6、：,TTC=1.5微克/天,TTC的概念,每天攝入1.5微克的基因毒性雜質(zhì)，被認(rèn)為對(duì)于大多數(shù)藥品來(lái)說(shuō)是可以接受的風(fēng)險(xiǎn)。 使得人一生的致癌風(fēng)險(xiǎn)小于十萬(wàn)分之一。 現(xiàn)實(shí)生活中，人一生得癌癥的概率是四分之一。,必須要強(qiáng)調(diào)的是TTC是一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)管理工具，它采用的是概率的方法。 意思為：假如有一個(gè)基因毒性雜質(zhì)，并且我們對(duì)它的毒性大小不太了解，如果它的每日攝入量低于TTC值，那么它的致癌風(fēng)險(xiǎn)將不會(huì)高于105的概率。 所以TTC不能被理解為絕對(duì)無(wú)風(fēng)險(xiǎn)的保障。,主要內(nèi)容,確定毒性閾值的步驟,依據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)，將雜質(zhì)分為五類(lèi)；,Step 1:,Step 2:,Step 3:,按照分類(lèi)，確定驗(yàn)證的策略 (參見(jiàn)決策路線圖

7、)；,按照日劑量，確定原料藥中雜質(zhì)的限度 (參見(jiàn)表1：短期用藥推薦容許日攝入量)。,分類(lèi),Class1:Genotoxic Carcinogens,第1類(lèi)：已知的、具有基因毒性（突變性）和致癌性的雜質(zhì),Step 1:,Class2:Genotoxic Carc unknow,第2類(lèi)：已知的、具有基因毒性（突變性），但致癌性未知的雜質(zhì),Class3:Alert-Unrelated to parent,第3類(lèi)：具有警示結(jié)構(gòu)、與API無(wú)關(guān)、基因毒性（突變性）未知的雜質(zhì),Class4:Alert- Related to parent,第4類(lèi)：具有警示結(jié)構(gòu)、與API有關(guān)、基因毒性（突變性）未知的雜質(zhì),C

8、lass5: No Alerts,第5類(lèi)：沒(méi)有警示結(jié)構(gòu)，沒(méi)有基因毒性（突變性）的雜質(zhì),致癌警示結(jié)構(gòu),決策路線圖,Step 2:,Step 3:,TTC值,短期用藥的容許攝入量,TTC=1.5微克/天,表1：短期用藥推薦容許日攝入量,最大日攝入量與濃度轉(zhuǎn)化表,0.5%,0.5%,100ppm,100ppm,Increased duration=Decreased ADI of Impurity,Increasing Dose of API,可參考使用的范圍,可參考使用的范圍,Regulator Toxicology and Pharmacology.2006,44:198-211,EMEA,如何

9、確定PDE？,NOEL=LD50 x 70/2000 ICH Q3C Guideline for Residual Solvents殘留溶劑指南： /Regulatorylnformation/Guidances/ucm128223.htm /downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatorylnformatio6n/Guidances/ucm073394.pdf,常見(jiàn)的PDE值,Gold carcinogenicity database (http:/potency.berkeley.e

10、du) 里面有1574種致癌物質(zhì)的列表，結(jié)構(gòu)式，CAS號(hào)，作用部位，TTC值等等一系列信息。 近30年的關(guān)于基因毒性方面研究的出版物（PDF版） 用不同分類(lèi)方法統(tǒng)計(jì)的致癌物質(zhì)列表。 不用注冊(cè)，可以直接點(diǎn)擊查看、下載全文。,基因毒性物質(zhì)列表,目的在于檢測(cè)試驗(yàn)物質(zhì)是否直接或間接引發(fā)基因損傷，并測(cè)知其對(duì)基因的損傷程度。 測(cè)試潛在基因毒性雜質(zhì)的順序： 計(jì)算機(jī)篩選（軟件模擬計(jì)算） 微生物試驗(yàn)（例如：誘變可能性試驗(yàn)） 動(dòng)物試驗(yàn)（通常是小鼠和大鼠）,基因毒性試驗(yàn)（genotoxicity study）,結(jié)構(gòu)不同的單個(gè)雜質(zhì)的限度應(yīng)該小于1.5微克/天。 有相同作用機(jī)制、結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)，其含量總和的限度應(yīng)該參考

11、1.5微克/天的限量進(jìn)行評(píng)估。,如何評(píng)估多個(gè)基因毒性雜質(zhì),主要內(nèi)容,最大限度地控制雜質(zhì),藥學(xué)評(píng)價(jià) 應(yīng)該根據(jù)現(xiàn)有的處方工藝，提供雜質(zhì)限度的合理性。 應(yīng)該列明所有涉及到的具有基因毒性或致癌性的化學(xué)物質(zhì)，如所有試劑、中間體、副產(chǎn)品等。 即使這些基因毒性反應(yīng)物或者有基因毒性結(jié)果的物質(zhì)沒(méi)有在API上體現(xiàn)，也都應(yīng)該被考慮。,原料藥合成,藥學(xué)評(píng)價(jià) 如果在合成路線、起始物料方面沒(méi)有更好的選擇，則需要提供一個(gè)正當(dāng)?shù)睦碛?。即：“物質(zhì)中能引起基因毒性和致癌性的結(jié)構(gòu)部分在化學(xué)合成中是不可避免的” 假如基因毒性雜質(zhì)被認(rèn)為是不可避免的，那么應(yīng)該采用技術(shù)手段盡可能的減少基因毒性雜質(zhì)在產(chǎn)品中的含量，使其符合安全的需要或使其降低到一個(gè)合理的水平。 對(duì)于活性中間體、反應(yīng)物、以及其它化合物的化學(xué)穩(wěn)定性都應(yīng)該進(jìn)行評(píng)估。 應(yīng)該有合理的分析方法去檢測(cè)和量化這些雜質(zhì)的殘留量。,原料藥合成,決策樹(shù),風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估流程,注意事項(xiàng),有幾個(gè)結(jié)構(gòu)基團(tuán)被認(rèn)定為具有非常高的基因毒性，它們即使被攝入低于TTC值的量也會(huì)面臨非常高的基因毒性風(fēng)險(xiǎn)。 高基因毒性的致癌物包括： 黃曲霉素類(lèi) N-亞硝基物類(lèi) 偶氮苯類(lèi) 氧化偶氮類(lèi) 。,不能用TTC值的方法來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。 需進(jìn)行特殊的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)。,在某些特定