1、有機溶劑殘留量研究規(guī)劃性,主講人：許真玉 國家食品藥品監(jiān)督管理局 藥品審評中心,前言 有機溶劑的分類 藥物中有機溶劑的引入 確定何種溶劑需進行殘留量研究的原則 質量標準的制訂和修訂 檢測方法的建立及方法學驗證常見問題分析 需要關注的問題,前 言,定義：藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產過程中，以及在制劑制備過程中使用或產生的，但在工藝過程中未能完全去除的有機溶劑。 研究的性質：雜質研究的范疇,前 言,研究的發(fā)展： 隨著對有機溶劑毒性研究的不斷深入而發(fā)展：各種相關組織的研究資料和數據越來越豐富、具體。 隨著對藥物安全有效、質量可控的不斷追求而發(fā)展：力求將伴隨藥物的不安全因素降至更低。,前

2、言,國內外主要相關指導原則和文件 ICH Q3c 雜質：殘留溶劑的指導原則 FD：Guidence for Industry:Q3c Impurities:Residual Solvents EMEA:Position Paper on Specification fro Class 1 and Class 2 Residual Solvents in Active Substances 化學藥物有機溶劑殘留量研究技術指導原則（起草中）,前 言,國內研究現狀：越來越重視，但仍存在很多不規(guī)范之處 原因 ：時間短、經驗少、對總是本質認識不夠，對國際新研究結果跟蹤不及時，對已有指導原則內涵領會不深刻

3、 本講目標：通過分析和總結，明確一些問題，使研究更科學、更規(guī)范。,有機溶劑的分類,分類依據： 允許日暴露量（permitted daily exposure ,PDE） 定義： 是指某一有機溶劑被允許攝入而不產生毒性的日平均最大劑量，單位為mg/天,有機溶劑的分類,計算公式： NOEL體重調整 PDE= F1F2F2F4F5 LOEL體重調 PDE= F1F2F2F4F5,有機溶劑分類,有機溶劑的分類,NOEL：no-observed effect level 不能觀察到反應的量 LOEL：lowest-observed effect level 能觀察到反應的最低量 體重調整：通常指成人體重

4、 F1：種屬之間的換算系數 F2：考慮到個體間的變異而引入的系數 F3：短期的急性毒性相關的系數 F4：與產生嚴重毒性相關的系數 F5：在沒有建立NOEL時采用的換算系數,有機溶劑的分類,N-甲基吡咯烷酮（NMP） 動物試驗： 懷孕的WISTAR大鼠在懷孕第7-20天暴露于150ppm NMP中，暴露時間為6h/day，然后自然分娩 結果： 母體：未觀察到的毒性 仔鼠： 體重有所下降，出生態(tài)周后達到了統(tǒng)計學意義，斷奶前的完成復雜工作的認知功能有發(fā)育受損,有機溶劑的分類,150ppm=(150106L99.13g/mol24.45l/mol) 1L =0.68mg/L 暴露量=0.608gm/L

5、每日實際暴露量每日總時間 =0.608mg/L624=0.152mg/L LOSE=暴露量大鼠呼吸量/大鼠體重=（0.152mg/L290L/天）0.33Kg=133.58mg/（Kg.天） PDE=（LOEL體重調整）（F1 F2 F3 F4F5 ） = 133.58mg/（Kg.天）50Kg) (510155)=5.3mg/天）,有機溶劑的分類,四氫呋喃 動物試驗： 取雄性、雌性大鼠，雄性、雌性小鼠，分別暴露于0、200、600、1800ppm的四氫呋喃中，暴露時間為6h/day，5天/周，共105周。 結果： 雄性大鼠組：腎臟腫瘤或腎癌有所增加 雄性小鼠組：肝臟腫瘤和肝癌有所增加 雌性大

6、鼠組：未發(fā)現致癌性 雌性小鼠組：未發(fā)現致癌性,有機溶劑的分類,200ppm=(200106L72.10g/mol24.45l/mol) 1L =0.59mg/L 暴露量=0.59gm/L每日實際暴露量每日總時間 =(0.59mg/L65)247=0.105mg/L LOSE=暴露量大鼠呼吸量/大鼠體重=（0.105mg/L290L/天）0.425Kg=71.65mg/（Kg.天） PDE=（LOEL體重調整）（F1 F2 F3 F4F5 ） = 71.65mg/（Kg.天）50Kg) (510155)=7.2mg/天）,藥物中有機溶劑的引入,根據研究對象具體情況 分析有機溶劑的引入,有機溶劑毒

7、性,確定何種有機溶劑需要進行研究,研究方法的建立及方法學驗證,研究結果的分析及質量標準的建立,藥物有機溶劑的引入,兩個已知： 通過分析已知的有機溶劑引入途徑，針對研究對象中可能存在的殘留溶劑進行研究 主要針對已知毒性的一些溶劑、如第一、二、三類溶劑,藥物中有機溶劑的引入,研究對象：原料藥/輔料、制劑 原料藥/輔料：合成過程中引入 包括： 作為合成原料或反應溶劑引入 作為反應副產物引入 由其他合成原料或其他溶劑帶入 制劑 各種成份（原料藥、輔料）帶入 制劑制備過程中引入,藥物中有機溶劑的引入,研究集中在：原料藥的第一種情況 影響因素： 有機溶劑在合成過程中使用的步驟 后續(xù)溶劑的影響 中間體的影響

8、 。 有機溶劑的使用和殘留與合成工藝密不可分，是評價合成工藝優(yōu)劣，篩選、確定合成工藝的重要因素之一。,藥物中有機溶劑的引入,第一類溶劑 原則：考慮其毒性，建議盡量避免使用。,當合成路線涉及此類溶劑時,合成化學發(fā)展水平,判斷使用是否合理,合理,不合理,嚴格控制殘留量,替代研究,臨床研究前,臨床研究期間,產品上市后,確定何種溶劑需進行研究的原則,意義和目的 保障臨床用藥安全，控制產品質量 與其他方面研究工作密不可分 進一步驗證工藝控制的合理性 為確定合理可行的質量標準提供數據支持 思考的出發(fā)點 有機溶劑的毒性 產品的合成工藝,確定何種溶劑需進行研究的原則,EMEA 第一類溶劑：不議使用。一旦作為起

9、始原料、溶劑，或者反應副產物，或者由其他溶劑帶入時，殘留量需符合ICH相關規(guī)定。 殘留量控制方法：隨引入情況不同而不同 直接控制終端產品 控制中間體 控制引入第一類溶劑的物質,確定何種溶劑需進行研究的原則,EMEA 第二類溶劑：可直接對終產品進行控制，可對中間體進行控制，結果需符合ICH相關規(guī)定 當6批試生產規(guī)?；蛘?批生產規(guī)模的中間體檢測結果顯示殘留量低于ICH規(guī)定限度的十分之一時，可不對終產品進行控制。,確定何種溶劑需進行研究的原則,研究原則： 考慮到各類有機溶劑有毒性和在終產品中殘留的可能性，建議： 第一類溶劑：無論任何步驟使用，均需進行檢測 第二類溶劑：無論任何步驟使用，均需進行檢測

10、第三類溶劑：建議可僅對用于終產品精制的此類溶劑進行研究。,確定何種溶劑需進行研究的原則,研究原則： 第四類溶劑 若結構與毒性大的溶劑非常接近，建議盡量不使用 注意中間體的處理，盡量除盡 根據結構和理化性質，參考其他的有機溶劑的檢測方法進行檢測和控制 注意檢測圖譜中未知峰的情況，盡量進行歸屬，若無法歸屬，可以控制揮發(fā)性雜質總量。,質量標準的制訂和修訂,殘留量表示方法：濃度限度 計算公式： 濃度限度（%）PDE/(1000劑量) 100% 其中：PDE：mg/天 劑量：一般為10g/天,質量標準的制訂和修訂,PDE、濃度限度的比較 PDE值：絕對值，控制精確，但可能忽略多種溶劑的綜合影響。 濃度限

11、度：以PDE為基礎，并采用比較大的每是給藥量計算，給出了一個比較大的安全系數。 目前情況下，采用濃度限度比較簡便，而且只要日攝入總量不超過10g，就無需進一步計算。,質量標準的制訂和修訂,實驗室規(guī)模生產工藝,中試、工業(yè)化生產規(guī)模工藝,臨床前研究,臨床用質量標準,臨床期間研究,試行標準,正式標準,工藝放大,修訂,修訂,樣品,樣品,制訂,制訂,質量標準的制訂和修訂,第一類溶劑：均需訂入標準（1，1，1三氯乙烷可參照第二類溶劑要求） 由于第一類溶劑替代研究會在臨床研究前、臨床研究期間、產品上訕后等不同階段進行，質量標準需替代研究結果的不斷進行修訂。,質量標準的制訂和修訂,第二類溶劑： 臨床用質量標準

12、：根據臨床前研究結果制訂。 研究結果提示： 無殘留：可暫不訂入標準，但需根據臨床期間研究結果進一步修訂。 有殘留：訂入質量標準,質量標準的制訂和修訂,第二類溶劑： 試行、正式標準：根據多批中試和工業(yè)化生產規(guī)模產品研究結果，在臨床用質量標準基礎上完善、修訂后形成 研究結果充分提示： 無殘留：不訂入標準 有殘留：保留或增加殘留檢查,質量標準的制訂和修訂,第三類溶劑： 臨床用質量標準：根據臨床研究結果，至少需將有殘留的溶劑訂入標準 試行/正式標準：根據多批中試和工業(yè)化生產規(guī)模研究結果，在臨床用質量標準基礎上進一步完善、修訂后形成。,質量標準的制訂和修訂,一般采用ICH中的限度，其他特殊因素也一并考慮

13、： PDE值是以成人體重50kg計算得到的，對于體重不足50kg的患者，如衰弱的患者、婦女，兒童、幼兒、嬰兒等，可依據具體情況，必要時需調整。,質量標準的制訂和修訂,濃度限度是以每日劑量為10mg進行計算的，可結合藥物臨床應用的一些特點，如給藥途徑、用藥劑量、用藥周期、適應癥等，可依據具體情況，必要時需調整 綜合考慮各種因素，注意相互之間的關聯。,檢測方法的建立及方法學驗證,BP 藥物：水溶性藥物 溶劑：二氯甲烷、苯、乙睛、氯仿、二氧六環(huán)、吡啶 方法：頂空進樣GC法（頂空處理條件、氣相檢測條件） 供試品溶液：采用水為溶劑 對照品溶液：采用二甲亞砜溶解，再采用水稀釋。,檢測方法的建立及方法學驗證

14、,常用檢測方法：GC法 特點：靈敏度較高，選擇性較好，所需樣品用量較少 檢測條件的確定：結合藥物和待檢溶劑的性質，通過方法學研究確定，建議盡量采用同樣的檢測條件控制盡量多種類的有機溶劑。,檢測方法的建立及方法學驗證,進樣方法： 溶液直接進樣：沸點高的溶劑 頂空進樣法：沸點低的溶劑、樣品干擾測定 配制供試品溶液、對照品溶液的溶劑。 供試品溶液： 溶液直接進樣法：水或其他合適 頂空進樣法：水或不揮發(fā)的酸、堿液；非水溶性藥物，采用N，N二甲基甲酰按或二甲基甲砜 對照品溶液：與供試品溶液相同,檢測方法的建立及方法學驗證,方法學驗證 專屬性檢測限定量限 線性準確度耐用性 以上為一情況，需根據品種具體的有

15、機溶劑使用和殘留情況，科學合理的進行方法學研究。,檢測方法的建立及方法學驗證,專屬性：考察在其他成分，如檢測所用的溶劑、可能殘留的其他溶劑、主成分、其他雜質等存在的條件上，能否準確測出待檢溶劑殘留量 檢測限：考察能否將殘留的少量或微量的有機溶劑檢出 定量性：考察能否將殘留的少量或微量的有機溶劑定量檢出,檢測方法的建立及方法學驗證,線性：考察殘留溶劑有濃度（或量）與色譜峰面積是否直接成正比關系。 準確度：考察檢測結果是否能夠代表產品的實際情況。 耐用性：考察測定條件發(fā)生細小變動時，測定方法和結果是否仍準確可靠。,常見問題分析,溶劑使用方面 突出問題：不合理的使用了第一類溶劑 實例1：某精神神經藥

16、物采用四氯化碳作為一酯類中間體的重結晶溶劑 對策：重新評價四氯化碳使用的合理性，一般不建議采用第一類溶劑作為中間體的精制溶劑。,常見問題分析,實例2：某藥物早期有有關合成有文獻采用苯為脫水劑，近期文獻采用甲苯為脫水劑，藥物早研發(fā)者仍采用苯。 對策：重新評價苯使用的合理性，跟蹤新的研究結果，在有其他溶劑替代的情況下，需使用替代溶劑,常見問題分析,質量研究方面 突出問題：不進行研究、研究不全面 實例1：某已有國家標準藥物，合成過程中使用了甲苯、DMP，但未進行殘留量檢測 原因：國家標準中未收載此項檢查，故未進行研究 對策：根據產品具體情況，按照上述的原則進行研究，必要時需將此項檢查增訂入注冊標準,

17、常見問題分析,實例2：某藥物經甲酯化、氯代、乙?；⒖s全、成環(huán)、抿化、酰胺化等反應制得，合成過程中，使用了第一類溶劑苯，但未進行殘留檢測。 原因：因使用步驟比較靠前，故未進行殘留量檢測 對策：考慮到第一類溶劑的毒性一，無論任何步驟使用，均需進行殘留量檢測，并訂入質量標準,常見問題分析,實例3：某藥物經縮合、取代、脫乙基化、縮合制得，使用了第二類溶劑DMF、乙腈、氯仿、檢測了氯仿殘留量，未檢測DMF，乙腈殘留量 原因：氯仿收載于CP附錄在F中，DMF、乙腈未收載，氯仿在合成后段使用，DMF、乙腈在合成前段使用 對策：考慮到第二類溶劑的毒性和殘留的可能性，需要對合成過程中使用的全部第二類溶劑進行殘

18、留量檢測,常見問題分析,實例4：某藥物用丙酮重結晶精制，未檢測丙酮殘留量 原因：丙酮為第三類溶劑 對策：因重結晶溶劑系在合成最后一步使用，殘留可能性相對比較大，盡管第三類溶劑屬于對從體低毒的溶劑，但仍對人體有一定的危害，需要對殘留可能比較大的精制用溶劑進行檢測。,常見問題分析,質量標準方面 突出問題： 不重視對數據的積累 不重視對中試規(guī)模、大生產規(guī)模產品的研究 不重視質量標準的修訂,常見問題分析,實例1：某藥物在合成過程中使用了乙腈、甲醇、乙酸乙酯，三批實驗室規(guī)模產品檢測結果均無殘留，正式標準中未收載此項檢查。 原因：誤將質量標準看作三批樣品研究結果的匯總 對策：以上僅完成了質量研究的一部分，需要繼續(xù)積累中試，大生產規(guī)模樣品數據，繼續(xù)修訂、完善質量標準,常見問題分析,實例2：某藥物合成時使用了DMF、氯仿、甲醇、乙醇、氯苯、三批實驗室規(guī)模產品檢測結果僅乙醇有殘留，正式標準中收載了以上所有溶劑殘留量檢查 原料：誤認為這樣即為制定了一份嚴格有效的質量標準 對策：藥物研發(fā)者仍未真正掌握將來上市產品