1、,不同生化檢測系統(tǒng) 實現(xiàn)結(jié)果可比性的方法,1,學習交流PPT,問題的提出,2,學習交流PPT,問題1,目前，很多實驗室都有兩臺或多臺生化分析儀，經(jīng)常有不同儀器檢測同一項目結(jié)果不一致的情況。 怎樣才能使兩臺儀器之間的結(jié)果具有可比性呢？,3,學習交流PPT,問題2,即使只有一臺生化分析儀，但參加EQA結(jié)果不成功，地區(qū)間不同實驗室結(jié)果可比性差。 如何改進EQA成績，提高地區(qū)間不同實驗室之間結(jié)果的可比性呢？,4,學習交流PPT,問題3,病人抱怨在不同醫(yī)院檢驗結(jié)果不一致，不知道該相信誰。 醫(yī)師不知道該如何依據(jù)檢驗結(jié)果對患者診斷和治療。 衛(wèi)生部要求不同實驗室之間結(jié)果“互認”，降低醫(yī)療成本。,5,學習交流P

2、PT,怎樣解決這些問題呢？,6,學習交流PPT,實現(xiàn)同一檢測項目在不同檢測系統(tǒng)中的檢測結(jié)果具有可比性，是臨床診斷疾病的基本要求，也是衛(wèi)生部提倡“結(jié)果互認”的基礎(chǔ)，更是實驗室管理的重要目標。 解決“可比性”的關(guān)鍵在于檢測系統(tǒng)的量值溯源。,鑰匙,7,學習交流PPT,檢測系統(tǒng)：,是指完成一個檢測項目所需要的儀器、試劑、校準品、檢驗程序等的組合。,8,學習交流PPT,儀器,試劑,校準品,實驗程序,9,學習交流PPT,固定檢測系統(tǒng)（封閉檢測系統(tǒng)）：,由公司選定的儀器、試劑、校準品、檢驗程序等組成固定的組合，用戶實驗室不能更改。這樣的檢測系統(tǒng)經(jīng)過公司與參考系統(tǒng)校準比對，可以保證結(jié)果的可比性和量值溯源性。,

3、10,學習交流PPT,自建檢測系統(tǒng)（開放檢測系統(tǒng)）：,實驗室自行選擇的儀器、試劑、校準品、檢驗程序的組合，其中的每一要件都可以更改。如果自建的檢測系統(tǒng)經(jīng)過比對、校準驗證和偏倚評估，證明其有效性。則成為有效的檢測系統(tǒng)，其檢測結(jié)果具有可比性和量值溯源性。,11,學習交流PPT,如果自建的檢測系統(tǒng)未經(jīng)過比對、校準驗證和偏倚評估，其檢測結(jié)果的可比性和量值溯源性未知，則稱為“自攢檢測系統(tǒng)”。,12,學習交流PPT,選擇檢測系統(tǒng)的原則：,選擇性能優(yōu)良的儀器和質(zhì)量好的試劑； 以性能和質(zhì)量為主要標準，價格為次要標準； 儀器制造商和試劑生產(chǎn)商的美譽度； 培訓和售后服務(wù)； 考慮發(fā)展因素； 檢測系統(tǒng)經(jīng)過評價確定后，

4、不可隨意更換任一要素，特別是試劑和程序。除非有特殊原因，如原使用的試劑停產(chǎn)等。特別不能因為經(jīng)濟利益的原因，隨意更換試劑。 如果確實需要更換試劑，必須重新評價新檢測系統(tǒng)的性能指標，證明是有效的檢測系統(tǒng)，方可在實際工作中應(yīng)用。,13,學習交流PPT,實驗方法的分級,14,學習交流PPT,檢驗方法學包括：,(1)經(jīng)詳盡研究尚未發(fā)現(xiàn)不準確度或不確定性原因的決定性方法； (2)經(jīng)詳盡研究證實不準確度與不精密度可以忽略的參考方法； (3)可滿足臨床或其他目的需要的日常使用的常規(guī)方法。,15,學習交流PPT,決定性方法（definitive method）,是指準確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細的研究，沒有

5、發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法。 用于發(fā)展及評價參考方法和一級標準品。,16,學習交流PPT,參考方法（reference method）,是指準確度與精密度已經(jīng)充分證實的分析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差與重復測定的隨機誤差相比可以忽略不計，有適當?shù)撵`敏度、特異性及較寬的分析范圍。這類方法在條件許可的實驗室中應(yīng)經(jīng)常使用。 用于評價常規(guī)方法和試劑盒，鑒定二級標準品。,17,學習交流PPT,常規(guī)方法（routine method）,指性能指標符合臨床或其他目的的需要，有足夠的精密度、準確度、特異性和適當?shù)姆治龇秶?，而且?jīng)濟實用。 這類方法經(jīng)有關(guān)學術(shù)組織認可后可稱為推薦方法（recomm

6、ended method），推薦方法應(yīng)具有足夠的實驗證據(jù)。,18,學習交流PPT,項目 決定性方法 參考方法 常規(guī)方法 鈣 ID-MS 原子吸收分光光度法 鄰甲酚肽絡(luò)合法 氯 電量滴定法、 電流滴定法 電量分析法 中子活化法 硝酸汞滴定法 鎂 ID-MS 原子吸收分光光度法 甲基麝香草酚蘭比色法 磷 ID-MS 鉀 ID-MS、 火焰光度法 火焰光度法 中子活化法 鈉 重量分析法、 火焰光度法 火焰光度法 中子活化法 白蛋白 免疫化學法 溴甲酚綠法 總蛋白 雙縮脲法 雙縮脲法 肌酐 ID-MS、 離子交換層析法 苦味酸法 離子交換層析法 尿素 ID-MS 尿素酶法 尿素酶法 尿酸 ID-MS

7、尿酸酶法（紫外法） 尿酸酶法 膽紅素 重氮反應(yīng)法 重氮反應(yīng)法 葡萄糖 ID-MS 己糖激酶法 葡萄糖氧化酶法 膽固醇 ID-MS Abell-Kendall 法， 膽固醇氧化酶法 膽固醇氧化酶法 甘油三酯 ID-MS 酶法 酶法 AST 酶偶聯(lián)法 酶偶聯(lián)法 ALT 酶偶聯(lián)法 酶偶聯(lián)法 GGT 連續(xù)監(jiān)測產(chǎn)物生成法 連續(xù)監(jiān)測產(chǎn)物生成法 CK 酶偶聯(lián)法 酶偶聯(lián)法,19,學習交流PPT,生化參考方法（衛(wèi)生部臨檢中心2011.12.23）,20,學習交流PPT,血液參考方法（衛(wèi)生部臨檢中心2011.12.23）,21,學習交流PPT,標準品的分級（3級）,22,學習交流PPT,一級標準品（原級參考物質(zhì)）

8、,是一種穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，它的數(shù)值已由決定性方法確定，或由高度準確的方法確定，所含雜質(zhì)也已經(jīng)定量，且有證書； 用于校正決定性方法，評價及校正參考方法以及為二級標準品定值。,23,學習交流PPT,二級標準品（次級參考物質(zhì)）,這類標準品可由實驗室自已配制或為商品，它的示值必須用一級標準品和參考方法確定； 主要用于常規(guī)方法的評價或為控制物定值和常規(guī)測定的結(jié)果計算。,24,學習交流PPT,日常校準品,用二級標準品和常規(guī)方法測定得到校準品，用于常規(guī)測定中的標準。,25,學習交流PPT,生化標準物質(zhì)（國家標準）,1.GBW 09174冰凍人血清中葡萄糖、肌酐、尿酸、尿素標準物質(zhì) 2.GBW 09175冰凍

9、人血清中葡萄糖、肌酐、尿酸、尿素標準物質(zhì) 3.GBW 09176冰凍人血清中葡萄糖、肌酐、尿酸、尿素標準物質(zhì) 4.GBW 09177冰凍人血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、-谷氨?；被D(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶、-淀粉酶活性濃度標準物質(zhì) 5.GBW 09178血清總膽固醇、總甘油、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇標準物質(zhì) 6.GBW 09179血清總膽固醇、總甘油、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇標準物質(zhì) 7.GBW 09180血清總膽固醇、總甘油、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇標準物質(zhì) 8.GBW 09181人血紅蛋白溶液中糖化血紅蛋白標準物質(zhì) 9.GBW 0

10、9182人血紅蛋白溶液中糖化血紅蛋白標準物質(zhì) 10.GBW 09183人血紅蛋白溶液中糖化血紅蛋白標準物質(zhì),26,學習交流PPT,血液標準物質(zhì)（國家標準）,27,學習交流PPT,免疫和核酸標準物質(zhì)（國家標準）,28,學習交流PPT,臨床實驗室使用常規(guī)方法和日常校準品，涉及到分析儀器、試劑、分析參數(shù)和校準品。如果常規(guī)方法的檢測結(jié)果經(jīng)一系列合理實驗的驗證，其量值能夠溯源到高級標準物質(zhì)，說明檢驗結(jié)果有溯源性。 最高級標準為國際或國家標準，如無國際或國家標準，常規(guī)測量結(jié)果通常應(yīng)該溯源到廠家標準。,29,學習交流PPT,實驗室認可的兩個國際標準ISO/IEC17025（檢測和校準實驗室能力認可準則）和I

11、SO/15189（醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力的專用要求）都對檢驗結(jié)果的溯源性和可比性提出了明確要求，強調(diào) 方法學比對試驗是實現(xiàn)準確度溯源和患者標本檢驗結(jié)果可比性的重要途徑,30,學習交流PPT,美國臨床和實驗室標準協(xié)會（CLSI）EP9-A2文件提供了不同檢測系統(tǒng)比對試驗的方法。 在進行比對試驗之前，首先應(yīng)對自建系統(tǒng)作精密度評價。EP5-A2文件提供了精密度評價方法。,31,學習交流PPT,精密度和準確度,32,學習交流PPT,1. 精密度試驗,33,學習交流PPT,精密度實驗一般選擇2個標本，1個為正常或在醫(yī)學決定水平附近，另1個為異常值。 以本實驗室研制的改良血清蛋白方法（中華檢驗醫(yī)學雜志，20

12、05，11：1197-1200）的精密度評價為例，實驗用1份正常值混合血清和1份高值混合血清。,34,學習交流PPT, 精密度初步試驗,正常值和高值混合血清各重復測定20次，計算均值，標準差（s），變異系數(shù)（CV%）。結(jié)果如下。 正常值混合血清：x = 71.0g/L，s =1.30g/L， CV =1.81%。 高值混合血清： x = 96.5g/L，s =1.36g/L， CV =1.42%。,35,學習交流PPT, 精密度正式試驗,測定：取上述2個混合血清，每日測定2次（2次間隔2h），每次測定均作雙份，連續(xù)20天。每次測定均同時做質(zhì)控。 離群點檢查：如每次雙份測定的差值超過初步精密度測

13、定時標準差的5.5倍（是99.99%的上限值），這對數(shù)據(jù)為“離群點”，棄去并重新補做。,36,學習交流PPT,統(tǒng)計分析：所得數(shù)據(jù)按文獻1計算均值，標準差（s），變異系數(shù)（CV%）。包括批內(nèi)CV，批間CV，日間CV和總CV（表1，2）。 結(jié)果判斷：按照國內(nèi)或國際上權(quán)威機構(gòu)公布的精密度指標判斷精密度試驗結(jié)果的可接受性。如果自建系統(tǒng)的精密度不可接受，則要查找原因，必要時更換檢測系統(tǒng)。,37,學習交流PPT,表1 精密度試驗計算表（正常值混合血清）,38,學習交流PPT,正常值混合血清： 日平均均值=70.1 S日間(B)=2.32，CV日間 =B/日平均均值100%=3.32% S批間(A)=(E/

14、2n)1/2=1.65，CV批間=A/日平均均值100%=2.35% S批內(nèi)(F)=(C+D)/4n)1/2=1.39 CV批內(nèi)=F/日平均均值100%=1.99% S總(G)=(B2+A2+F2)1/2=3.17 CV總=G/日平均均值100%=4.52% 總CV4.52%，低于IFCC規(guī)定的CV5%的標準。,39,學習交流PPT,表2 精密度試驗計算表（高值混合血清）,40,學習交流PPT,高值混合血清： 日平均均值=91.1 S日間(B)=1.57， CV日間=B/日平均均值100%=1.72% S批間(A)=(E/2n)1/2=0.87，CV批間=A/日平均均值100%=0.96% S

15、批內(nèi)(F)=(C+D)/4n)1/2=1.12， CV批內(nèi)=F/日平均均值100%=1.23% S總(G）=（B2+A2+F2）1/2=2.12 CV總=G/日平均均值100%=2.33% 總CV2.33%，低于IFCC規(guī)定的CV5%的標準。,41,學習交流PPT,精密度好，準確度如何？,是B還是C？,42,學習交流PPT,2. 與參考方法或目標系統(tǒng)比對，實現(xiàn)自建檢測系統(tǒng)的量值溯源,43,學習交流PPT,溯源性,ISO15189：醫(yī)學實驗室-質(zhì)量和能力的專用要求 “通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測量結(jié)果或測量標準的值能夠與規(guī)定的參考標準，通常是與國家標準或國際標準聯(lián)系起來的特性”

16、。,44,學習交流PPT,自建系統(tǒng)與目標系統(tǒng)比對與量值溯源鏈,45,學習交流PPT,比較方法。應(yīng)是參考方法或推薦方法，如果該項目沒有參考方法或推薦方法，也可用公認的常規(guī)方法。但須具備： 比試驗方法有更好的精密度。 干擾影響已知。 與試驗方法使用相同的計量單位。 目標系統(tǒng)。性能良好的固定檢測系統(tǒng)或室內(nèi)質(zhì)控（IQC）和長期室間質(zhì)評（EQA）成績合格的檢測系統(tǒng)，可作為比對的目標系統(tǒng)。, 比較方法和目標系統(tǒng),46,學習交流PPT, 實驗標本,每天收集不同濃度的新鮮血清8份，連續(xù)收集5天以上，濃度范圍盡可能覆蓋該項目的測量范圍，且參考值范圍以外的標本盡可能在50%以上。 各濃度標本數(shù)量的按排可參閱表3。

17、,47,學習交流PPT,表3 方法比較中分析物濃度水平,48,學習交流PPT, 實驗方法,每天用兩種方法分別測定8個標本，每個標本測定2次。第1次按18，第2次按81的順序，共測定5天，各獲得80個數(shù)據(jù)。,49,學習交流PPT,舉例：NCCLS (EP9-A2) 文件,2.3方法比較步驟(以淀粉酶測定為例) 2.3.1樣品大小至少為40 個標本, 每個標本用2種方法分別作雙份測定, 因此樣本應(yīng)有足夠的量, 如臨床標本的量太少可將2 份含量相近的標本混合。 2.3.2每天測定8 個標本, 雙份測定時第一次按順序1, 2.7, 8, 第二次8, 7.2, 1, 共測5 天, 將數(shù)據(jù)整理成表4。,5

18、0,學習交流PPT,表4淀粉酶測定試驗方法(Y ) 與BM 試劑(X ) 比較(U/L) 試驗方法 比較方法 試驗方法 比較方法 樣品結(jié)果1 結(jié)果2 結(jié)果1 結(jié)果2 結(jié)果1-2 結(jié)果1-2 1 1792 1795 1672 1676 3 4 2 1755 1751 1561 1562 4 1 3 1598 1595 1480 1483 3 3 . . 38 35 36 39 40 1 1 39 72 75 79 78 3 1 40 54 52 58 55 2 3,51,學習交流PPT, 離群值檢查,方法內(nèi)離群值的檢查：計算每個標本重復測定值間的絕對差值、每個標本測定值的均值，以平均絕對差值的4

19、倍為限，超出限值即為離群點。（表5） 方法間離群值的檢查：計算兩方法間成對結(jié)果的絕對差值及其平均值，以平均絕對差值的4倍為限，超出限值即為離群點。（表6）,52,學習交流PPT,表5方法內(nèi)復測結(jié)果離群值檢查 Xi1= 1672Xi2= 1676 Yi1= 1792Yi2= 1795 DXi = xi1 - xi2 = 1672 - 1676= 4, X1= (Xi1+ Xi2) / 2= 1674 DYi = Yi1 - Yi2= 1792 - 1795= 3, Y1= (Yi1+ Yi2) / 2= 1793.5 DXi= DXi / Xi = 4/1674 = 0.00239 DYi= D

20、Yi / Yi = 3/1793.5 = 0.00167 同樣: I Xi1 Xi2 Yi1 Yi2 DX i DY i DX i DY i 1 1672 1676 1792 1795 4 3 0.00239 0.00167 2 1561 1562 1755 1751 1 4 0.00511 0.00228 3 1480 1483 1598 1595 3 3 0.00202 0.00202 . 38 39 40 35 36 1 1 0.0253 0.0282 39 79 78 72 75 1 3 0.0127 0.0382 40 56 55 54 52 1 2 0.0180 0.0377,53

21、,學習交流PPT,DX = 2.75, 控制限值 = 4 DX = 42.75= 11 進位制= 11 DY = 2.875, 控制限值= 4 DY = 42.875= 11.5 進位制= 12 DX = 0.00698 控制限值= 4DX = 0.0288 DY = 0.0105 控制限值= 4DY = 0.0420 本例方法內(nèi)未發(fā)現(xiàn)離群點。,54,學習交流PPT,表6方法間離群點檢查 Xi1= 1672 Xi2= 1676 Yi1= 1792 Yi2= 1795 Ei1=Yi1- Xi1=1792- 1672= 120 Ei2=Yi2- Xi2=1795- 1676= 119 Ei1= E

22、i1 / Xi1 = 120/1672 = 0.0718 Ei2= Ei2 / Xi2 = 119/1676 = 0.0710 同樣： I Ei1 Ei2 Ei1 Ei2 1 120 119 0.0718 0.0710 2 185* 189* 0.1180 0.1210 3 118 112 0.0797 0.0755 . 38 4 4 0.1030 0.1000 39 7 3 0.0886 0.0385 40 2 3 0.0357 0.0545,55,學習交流PPT,40 2 E = 1/80Eij =1/803359 = 41.99 I=1 j=1 E 的控制限值= 4E = 441.99=

23、 167.96進位= 168 40 2 E = 1/80 Eij =1/804.831 = 0.0604 I=1 j=1 E 的控制限值= 4E = 0.2416 本例方法間出現(xiàn)2 個離群點,56,學習交流PPT, 實驗數(shù)據(jù)的可接受性判斷,兩種方法的相關(guān)性分析： 計算回歸方程 y（自建）= a+bx（比對） 計算相關(guān)系數(shù)（r）和決定系數(shù)（r2）。,57,學習交流PPT, 相關(guān)系數(shù)r 0.975或決定系數(shù)r20.95，說明實驗數(shù)據(jù)范圍合適，直線回歸統(tǒng)計的斜率和截距可靠。 相關(guān)系數(shù)r 0.975或決定系數(shù)r20.95，說明自建系統(tǒng)方法精密度差或?qū)嶒灁?shù)據(jù)范圍不合適，直線回歸統(tǒng)計的斜率和截距不可靠，需

24、改進方法的精密度或擴大濃度范圍。,58,學習交流PPT, 臨床可接受性判斷, 計算方法間的系統(tǒng)誤差：將各個項目的醫(yī)學決定水平濃度（Xc）代入回歸方程，計算Y與X之間的系統(tǒng)誤差（SE）。 SE=YX 計算相對偏差（SE%）=（SE/Xc）100%,59,學習交流PPT, 以方法學比較評估的SE%1/2美國臨床醫(yī)學檢驗部門修正法案（CLIA88）能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求允許總誤差（TEa）為臨床可接受水平，判斷自建系統(tǒng)與目標系統(tǒng)檢驗結(jié)果的可比性。淀粉酶測定的最大允許誤差（TEa）= 靶值 30%（附錄）。 SE%15%即為臨床可接受。,60,學習交流PPT, 自建系統(tǒng)與比對方法或目標系統(tǒng)的檢驗結(jié)

25、果有可比性，即認為自建檢測系統(tǒng)為有效的檢測系統(tǒng)。其檢測結(jié)果具有量值溯源性。,61,學習交流PPT, 如果自建系統(tǒng)與目標系統(tǒng)檢驗結(jié)果不具可比性，則應(yīng)依據(jù)NCCLS EP15-A文件7對自建系統(tǒng)進行校準驗證和溯源性確認。,62,學習交流PPT,3. 自建系統(tǒng)的校準驗證和溯源性確認,63,學習交流PPT,采用新鮮血清賦值傳遞的方法，是實現(xiàn)自建系統(tǒng)與目標系統(tǒng)檢測結(jié)果一致性的有效途徑。 用目標系統(tǒng)先給新鮮血清定值，再賦值給商品校準物（日常校準品），解決了自建系統(tǒng)的校準溯源性問題。 由于商品血清校準物存在“基質(zhì)效應(yīng)”，新鮮血清不存在基質(zhì)效應(yīng)但不易儲存，二者結(jié)合應(yīng)用可克服缺陷，優(yōu)勢互補。,64,學習交流PP

26、T, 自建檢測系統(tǒng)的校準,65,學習交流PPT, 校準驗證和溯源性確認, 選取由低到高系列濃度患者新鮮血清56份，濃度覆蓋整個測量范圍； 分別在自建系統(tǒng)和目標系統(tǒng)上重復測定2次，求平均值； 進行相關(guān)與回歸分析，若回歸線性相關(guān)系數(shù)（r）0.975，斜率（b）與1差異無統(tǒng)計學意義，截距（a）與0差異無統(tǒng)計學意義，說明相關(guān)性良好。 將醫(yī)學決定水平值代入回歸方程，計算各點校準驗證值。若校準驗證的相對偏差（SE%）1/4CLIA88允許總誤差（TEa），說明校準成功，結(jié)果具有溯源性。否則重新校準。,66,學習交流PPT,4. 用室內(nèi)質(zhì)控（IQC）和室間質(zhì)評（EQA）相結(jié)合的方法驗證自建系統(tǒng)的量值溯源性,

27、67,學習交流PPT, 室內(nèi)質(zhì)控（IQC）,主要控制測定的隨機誤差（精密度） 是A還是B或C?,68,學習交流PPT,室內(nèi)質(zhì)控（IQC）, 質(zhì)控物：選取與人血清基質(zhì)相同的質(zhì)控品，要求性能穩(wěn)定、有效期1年以上且瓶間變異小。 確定靶值與標準差： 當實測標準差（s）1/4CLIA88TEa（附錄1，2）時，以實測標準差為質(zhì)控圖的標準差。 當實測標準差（s）1/3CLIA88TEa時，測定隨機誤差不能接受。如果是方法本身的精密度差，則應(yīng)更換更好的方法。,69,學習交流PPT, 每天隨病人標本同時測定，記錄結(jié)果，繪制質(zhì)控圖。全部檢測數(shù)據(jù)不超出2s，且在靶值線兩側(cè)隨機分布為成功的質(zhì)控結(jié)果。 以Westgard多規(guī)則判斷標準，符合22S規(guī)則或13S規(guī)則為失控。應(yīng)找出原因予以糾正。,室內(nèi)質(zhì)控（IQC）,70,學習交流PPT,室間質(zhì)評（EQA）,主要控制測定的系統(tǒng)誤差（準確度）。 是B還是C?,71,學習交流PPT,室間質(zhì)評（EQA）, 參加國際、國內(nèi)或地區(qū)間質(zhì)量評價活動。 根據(jù)結(jié)果的偏倚（%）、能力比對檢驗（PT）得分、變異指數(shù)得分（VIS）判斷EQA成績。 PT得分80%，VIS得分150，為不成功的EQA成績。說明該項目存在不可接受的系統(tǒng)誤差，必須分析原因予以糾正。,72,學習交流PPT,