1、第六講 二、三級(jí)菌種制作技術(shù),食用菌生產(chǎn)技術(shù)課程組,二、三級(jí)菌種制作技術(shù),一.二、三級(jí)菌種培養(yǎng)基的配制 二.二、三級(jí)菌種培養(yǎng)基的滅菌 三.二、三級(jí)菌種的接種 四.二、三級(jí)菌種的培養(yǎng) 五.二、三級(jí)菌種的質(zhì)量鑒定,原種和栽培種的生產(chǎn)技術(shù),原種和栽培種的生產(chǎn)，無(wú)論是培養(yǎng)基成分，配制方法和滅菌方法基本上是相同的。 1）原種：是由試管斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)的母種作種源接種而成，主要用于繁殖栽培種，也可直接用于生產(chǎn)。（母種原種） 2）栽培種：由原種作種源擴(kuò)大而成，只能用于生產(chǎn)。（原種栽培種),二、三級(jí)菌種制作流程,配制培養(yǎng)基,滅 菌,二級(jí)菌種,培 養(yǎng),接 種,培 養(yǎng),接 種,滅 菌,配制培養(yǎng)基,三級(jí)菌種,一級(jí)菌種

2、,二級(jí)菌種,(二、三級(jí)菌種制作過(guò)程大同小異),原種、栽培種的制作流程 按配方稱取原料拌料裝瓶（袋）打洞（孔徑1cm深至瓶底）滅菌（1.5kgcm2，1.52h）冷卻接種（接入黃豆大小一塊）培養(yǎng)（25 27）菌絲長(zhǎng)滿瓶（袋）培養(yǎng)7d8d擴(kuò)大成栽培種。,一.二、三級(jí)菌種培養(yǎng)基的配制,（一）配制總原則 1選擇適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。 2營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)間配制的比例要恰當(dāng)。 3選擇經(jīng)濟(jì)實(shí)用、來(lái)源廣泛的原料。 4適宜的pH值和含水量。,培養(yǎng)基（料）配制原則 掌握碳氮比例 食用菌對(duì)碳和氮的需要有一個(gè)比例，簡(jiǎn)稱碳氮比（C）。 菌絲體生長(zhǎng)階段：C=201； 子實(shí)體形成階段：C=30401； C 過(guò)高，菌絲體生長(zhǎng)過(guò)旺，而子實(shí)體

3、小、產(chǎn)量低。, 選好培養(yǎng)材料 首先選不含殺菌物質(zhì)的木屑 杉、松、樟等樹(shù)種，含酚、酯、精油等殺菌物質(zhì)，會(huì)抑制食用菌生長(zhǎng)。要用必須經(jīng)過(guò)處理，如：蒸煮、曬等。 根據(jù)食用菌的喜好選木屑 如：培養(yǎng)香菇用樺木屑就比椴木屑好； 培養(yǎng)金針菇用構(gòu)，楮等木屑就比用榆、槐等木屑好。, 注意物理性狀 培養(yǎng)原料要注意顆粒粗細(xì)、質(zhì)地軟硬程度，以及持水性能等物理性狀。 調(diào)節(jié)酸堿度 各種食用菌需要的pH值不同，配制培養(yǎng)料時(shí)，應(yīng)選用NaOH、石灰、鹽酸或過(guò)磷酸鈣等物質(zhì)調(diào)節(jié)pH值。霉菌比食用菌喜歡更低的pH值，生產(chǎn)上有時(shí)為了控制這類雜菌的發(fā)生，往往將pH值適當(dāng)調(diào)高0.51。,原料選擇的注意事項(xiàng)（幾點(diǎn)說(shuō)明） 木屑： 樹(shù)種：除松樹(shù)、

4、杉樹(shù)、柏樹(shù)、樟樹(shù)、蕓香屬、按屬等樹(shù)種之外，絕大多數(shù)闊葉樹(shù)和木屑都可以利用。（因其中含有酚、酯、精油等殺菌物質(zhì)） 粗細(xì)：不宜過(guò)細(xì)，以免培養(yǎng)基過(guò)濕或通氣不良。,選擇：根據(jù)食用菌分解能力選擇，分解能力較強(qiáng)的食用菌采用硬質(zhì)闊葉樹(shù)木屑，反之采用軟質(zhì)樹(shù)種木屑。 如：金針菇分解能力較弱，以含單寧較少木屑為宜，木屑越陳越好； 茯苓菌分解能力較強(qiáng)，可采用顆粒粗的松木屑或松木釘。,米糠、麩皮作用 作用：補(bǔ)充氮源和維生素。 稻草、麥秸、木屑、棉籽殼等纖維素原料，含氮量低。如：木屑含氮量0.03%以下。 麩皮：含氮量比米糠多，但維生素不如米糠。 米糠：含氮量比麩皮少。 用量：一般10%20%，過(guò)多易引起污染。,加糖的

5、作用 初期補(bǔ)充碳源，用量1%5%。 誘導(dǎo)胞外酶的產(chǎn)生。 纖維素原料，食用菌利用緩慢。加入少量白糖作為食用菌初期補(bǔ)充碳源，促進(jìn)菌絲快速生長(zhǎng)，同時(shí)誘導(dǎo)纖維素酶的產(chǎn)生，更好地利用纖維素。,Ca2作用 提供食用菌鈣離子：原料中加石膏、CaCO3或過(guò)磷酸鈣、骨粉提供食用菌鈣離子； 鈣不斷中和食用菌產(chǎn)生的有機(jī)酸； 鈣還能中和單寧； 減少過(guò)量K、Mg對(duì)菌絲中毒，促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)。,1、常用培養(yǎng)料的配方和配制方法,（二）培養(yǎng)基常用的配方,糞草培養(yǎng)基（適用于蘑菇） 稻草或麥秸20kg、糞肥（干）30kg、石膏500g、水適量。 方法：稻草切成2cm長(zhǎng)糞肥混合發(fā)酵石膏調(diào)水裝瓶滅菌,1、常用培養(yǎng)料的配方和配制方法,稻草

6、麩皮培養(yǎng)基（草菇） 干稻草78%、麩皮或米糠20%、蔗糖1%、過(guò)磷酸鈣1%、水適量 方法：稻草切成2cm長(zhǎng)發(fā)酵蔗糖麩皮過(guò)磷酸鈣,木屑米糠培養(yǎng)基（香菇、木耳、猴頭、平菇等） 木屑78%、麩皮或米糠20%、石膏1%、蔗糖1%、水適量。 木屑、麩皮、黃豆粉培養(yǎng)基（銀耳） 木屑50kg、麩皮15kg、黃豆粉1kg、蔗糖0.75kg、MgSO4 0.25kg、水7075kg。 棉籽殼培養(yǎng)基（平菇、猴頭、金針菇） 棉籽殼99.7%、蔗糖0.1%、石膏0.2%、水適量。,1、常用培養(yǎng)料的配方和配制方法,（三）培養(yǎng)基配制步驟,稱料,拌料,調(diào)節(jié)pH值,分裝培養(yǎng)料,清潔（洗或擦）瓶、袋外壁,封口,1.不溶性主、輔

7、料混拌均勻,2.可溶性輔料溶于水后拌入主輔料,3.注意檢查含水量（手測(cè)法等）,比實(shí)際要求的pH值調(diào)高1左右,容器：菌種瓶、菌種袋,要求：上緊下松，外緊內(nèi)松，中間一個(gè)洞,二.二、三級(jí)菌種培養(yǎng)基的滅菌,1滅菌方法及要求 高壓蒸汽滅菌：壓力1.5kg/cm2，溫度126-128，時(shí)間1-2h（谷粒和經(jīng)過(guò)堆制發(fā)酵的糞草培養(yǎng)基應(yīng)達(dá)到2-2.5h）。 常壓蒸汽滅菌：100，保持10-12h,臥式高壓蒸汽滅菌鍋,2滅菌效果檢驗(yàn) 隨機(jī)取幾瓶（袋）置于25-30溫度下空白培養(yǎng)4-6天，會(huì)出現(xiàn)以下情況： 全部感雜 少數(shù)感雜 全部沒(méi)有雜菌 3、高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法 按照儀器操作說(shuō)明操作！,分析原因,？,三.二、

8、三級(jí)菌種的接種,概念：菌種移至新培養(yǎng)基上的過(guò)程關(guān)鍵：無(wú)菌操作,接種,接種環(huán)境消毒滅菌 酒精棉球消毒雙手 操作器具消毒滅菌 開(kāi)啟的管口、瓶口靠近燈焰 拔出的棉塞勿觸及任何地方 動(dòng)作快、準(zhǔn)、穩(wěn),無(wú)菌 操作 要點(diǎn),注意：1、嚴(yán)格挑選待接的菌種質(zhì)量； 2、勿接入表面老菌絲及老種塊。,四.二、三級(jí)菌種的培養(yǎng),菌種的培養(yǎng)實(shí)際就是對(duì)菌絲體的培養(yǎng),培養(yǎng)條件,場(chǎng)所清潔,空氣清新,光線暗,溫度約25,空氣濕度60%70%,培養(yǎng)方法,勿堆放過(guò)擠,及時(shí)剔除污染瓶（袋）,栽培種的菌袋缺氧時(shí)可刺孔增氧,控制菌齡（菌絲長(zhǎng)滿7-10天后使用）,五.二、三級(jí)菌種的質(zhì)量鑒定,菌絲白（或呈該菌種應(yīng)有的顏色）均勻、粗壯、有菇香味接種

9、后萌發(fā)快,無(wú)雜色、無(wú)黃水、無(wú)結(jié)皮、無(wú)原基、無(wú)干縮脫壁等現(xiàn)象,菌種出售必須貼有菌種質(zhì)量合格標(biāo)簽，標(biāo)明菌種種類、級(jí)別、品種、生產(chǎn)單位和接種日期。,合格菌種,雜菌檢查（菌種檢查） 接種后的原種，一般在3d5d左右菌絲恢復(fù)生長(zhǎng)，應(yīng)每天全面檢查雜菌情況，如有污染及時(shí)剔除。（正常為白色，若混有其它色澤，應(yīng)及時(shí)處理）；如發(fā)現(xiàn)接種塊無(wú)新菌絲萌發(fā)，則認(rèn)為是死菌，應(yīng)及時(shí)補(bǔ)種。 正常：菌絲白色 雜菌：黃、紅、綠、黑 死菌：補(bǔ)種,菌種制作過(guò)程中，只要做到,選擇正確的配方和優(yōu)質(zhì)原料,嚴(yán)格滅菌,優(yōu)良的二、三級(jí)菌種,嚴(yán)格無(wú)菌操作,科學(xué)培育,選擇優(yōu)良菌種,六、制種、保藏中易碰到的問(wèn)題及處理方法 1、母種污染處理 細(xì)菌污染 底

10、部取菌：可根據(jù)細(xì)菌只發(fā)生在培養(yǎng)基表面，而真菌菌絲能穿透到培養(yǎng)基內(nèi)部的特點(diǎn)，用無(wú)菌操作法敲破試管取出培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基的底部挑取一小塊帶有菌絲的培養(yǎng)基，移植到另一試管中培養(yǎng)，可得到純正的母種。,1、母種污染處理 細(xì)菌污染 覆蓋培養(yǎng)：將熔化培養(yǎng)基冷卻到40，倒在已污染細(xì)菌的斜面上，使之形成厚約20 cm的覆蓋層，當(dāng)食用菌菌絲透過(guò)培養(yǎng)基形成新的菌落時(shí)，即可挑取轉(zhuǎn)管純化。,1、母種污染處理 真菌污染 若污染的是青霉、黃霉、木霉等真菌，只要母種菌絲與這些雜菌沒(méi)有相聯(lián)或尚有一部分菌絲沒(méi)有相聯(lián)，并且這些雜菌的菌絲還沒(méi)有產(chǎn)生孢子時(shí)，可以用無(wú)菌方法仔細(xì)挑取沒(méi)有相聯(lián)的一部分菌絲，移植到另外的試管中繼續(xù)培育，就能得到

11、純正的母種。,2、原種、栽培種被雜菌污染的原因有哪些？怎樣鑒別？ 根據(jù)雜菌開(kāi)始發(fā)生的部位，大致有以下幾種污染原因： 若雜菌同時(shí)在培養(yǎng)基的上、中、下部位發(fā)生，主要是由于培養(yǎng)基滅菌不徹底造成的。 若雜菌開(kāi)始發(fā)生在接種塊上，這很可能是母種或原種已經(jīng)感染了雜菌；或者是由于接種工具不嚴(yán)格（消毒），把雜菌帶入。,2、原種、栽培種被雜菌污染的原因有哪些？怎樣鑒別？ 若雜菌先在培養(yǎng)基表面發(fā)生，這是由于接種過(guò)程中無(wú)菌操作不嚴(yán)而引起的。 若雜菌是在接種后若干天才發(fā)生的，而且是發(fā)生在瓶口往下掛的，這說(shuō)明雜菌是從棉花塞侵入培養(yǎng)基的。引起的原因是培養(yǎng)室濕度過(guò)大、棉塞受潮，造成霉菌滋生所致。,3、為什么母種不能多次轉(zhuǎn)管移植？ 母種轉(zhuǎn)管次數(shù)多了會(huì)削弱菌絲的生活力，降低出菇率，甚至造成菌絲不孕而不能形成子實(shí)體。因此母種培育可以一次多培育幾支試管，不要反復(fù)多次分離轉(zhuǎn)管，以確保菌絲旺盛的生活力。 （發(fā)生變異）,4、優(yōu)良菌種的標(biāo)準(zhǔn)是什么？ 各種食用菌菌種，既有特定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也有共同的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。這些共同的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要是純、壯兩條。 純：除銀耳菌種，其余各種栽培食用菌均是一種菌絲體的純培養(yǎng)物，不得混入雜菌或純培養(yǎng)物以外的其它菌種。 例如：香菇7925菌種，只能是7925菌株菌絲體的純培養(yǎng)。,復(fù)習(xí)思考題,1簡(jiǎn)述二、三級(jí)菌種的制作流程。 2根據(jù)實(shí)際操作說(shuō)明如何測(cè)定培養(yǎng)基的含水