1、病 毒 學(xué)virology,病毒學(xué)(Virology),研究病毒本質(zhì)，病毒與宿主相互作用和規(guī)律的科學(xué)，稱病毒學(xué)。 醫(yī)學(xué)病毒學(xué)：研究病毒的結(jié)構(gòu)和功能、人體抗病毒侵害的機(jī)制以及從病毒與宿主相互關(guān)系中找到預(yù)防、診斷、治療和消滅病毒性疾病的措施，是醫(yī)學(xué)微生物學(xué)的重要內(nèi)容。 病毒的生命活動一旦被人掌握，又可利用它來造福于人類。,病毒的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成,病毒的大小與形態(tài),概論,病毒的遺傳與變異、理化影響及分類,病毒的增殖,病毒的基本性狀,病毒(virus)：是一群體積微小、結(jié)構(gòu)簡單、只有一種核酸(DNA或RNA)，易感活細(xì)胞內(nèi)寄生、以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型微生物。,主要生物學(xué)性狀,體積微小，可以通過濾菌器

2、結(jié)構(gòu)簡單，無細(xì)胞結(jié)構(gòu) 遺傳物質(zhì)為DNA或RNA 專性細(xì)胞內(nèi)寄生 復(fù)制增殖,發(fā)病率高，75%傳染病由病毒引起； 傳染性強(qiáng)，傳播迅速，流行面廣，病死率高； 與腫瘤及自身免疫性疾病的發(fā)生密切相關(guān)，有致畸作用； 特效藥少，預(yù)防是重點(diǎn)。,病毒引起疾病的特點(diǎn),3000BC 埃及孟菲斯壁畫,病毒病由來已久,埃及法老 拉美西斯五世 1150BC-1145BC,公元前二至三世紀(jì)印度和中國就存在天花，中國從公元十世紀(jì)宋真宗時代就有接種人痘預(yù)防天花的文字記載。,比英國醫(yī)生琴納發(fā)明的牛痘苗早800年!,最早有記載的家畜病毒病可能是狂犬病。亞里士多德（Aristotle）在公元前四世紀(jì)就記述了病犬的瘋狂和暴怒，通過咬嚙

3、將病魔傳給其他動物和人（常被稱作恐水?。?。 巴斯德（Pasteur）在1884年發(fā)明了狂犬疫苗。,Ivanowski,1892.2.12 study on tobacco mosaic disease ,Early Development of Virology,20 世紀(jì) 50 年代初，5000 萬個病例/年； 1967年，1000多萬病例/年；同年WHO發(fā)起了推廣接種、消滅天花的運(yùn)動； 1977年索馬里發(fā)現(xiàn)最后 1 例自然發(fā)生天花的病人； 1978年英國發(fā)現(xiàn)最后 1 例實(shí)驗(yàn)室感染病例； 1980年，WHO宣布徹底消滅天花。,被消滅的病毒 天花病毒,1988年WHO與國際扶輪社和聯(lián)合國兒童基

4、金會共同發(fā)出根除脊髓灰質(zhì)炎倡議。當(dāng)時全世界125個國家中有幾百萬脊髓灰質(zhì)炎患者。 2000.10 西半球(包括我國)消滅了小兒麻痹癥。 2006年WHO說，全世界能否徹底消滅小兒麻痹癥，成敗取決于四個國家：阿富汗、印度、尼日利亞和巴基斯坦。 突發(fā)公共衛(wèi)生事件：發(fā)生脊髓灰質(zhì)炎野病毒輸入和脊髓灰質(zhì)炎疫苗衍生病毒循環(huán)的疫情。,將消滅的病毒 脊髓灰質(zhì)炎病毒,病毒與其他微生物的比較,完整的具有感染性的成熟病毒顆粒稱為病毒體(virion)，是病毒在細(xì)胞外的典型結(jié)構(gòu)形式。 測量單位為納米（nm,1/1000m）。多數(shù)病毒大小介于30200 nm之間，最可靠的測量方法是電子顯微鏡(Electron micr

5、oscope)技術(shù)。,葡萄球菌 (1000nm）,牛痘病毒 300250nm,A,B,C,D,E,F,G,立克次體 450nm,衣原體 390nm,A、大腸桿菌噬菌體 ( 65 95nm ),B、腺病毒 (70nm ),C、脊髓灰質(zhì)炎病毒 (30nm ),D、乙腦病毒 ( 40nm ),E、蛋白分子 (10nm ),F、流感病毒 ( 100nm ),G、煙草花葉病毒,潘多拉病毒（Pandoravirus），是一類非常大型的病毒。其基因組比其它所有已知病毒都要大得多。直徑達(dá)1微米。,西伯利亞闊口罐病毒 (Pithovirus sibericum),病毒的形態(tài)：多呈球形或近似球形，少數(shù)呈桿狀、絲狀

6、、子彈狀、磚塊狀或蝌蚪狀。,磚形（痘病毒）,子彈形（狂犬病病毒）,蝌蚪形（噬菌體）,桿狀（煙草花葉病毒）,一、病毒的結(jié)構(gòu),基本結(jié)構(gòu)（核衣殼），為所有病毒都必備； 輔助結(jié)構(gòu)（包膜），為某些病毒所特有，它們各有特殊的生物學(xué)功能； 有包膜的為包膜病毒；無包膜的為裸病毒。,一、病毒的結(jié)構(gòu),裸病毒 Naked viruses,核心核酸（core）,蛋白質(zhì)衣殼（capsid）,包膜-,包膜病毒Enveloped viruses,核衣殼Neucleocapsid,基本結(jié)構(gòu),核心(nucleic acid)：位于病毒體的中心，由一種核酸構(gòu)成。病毒復(fù)制、遺傳和變異的物質(zhì)基礎(chǔ)。 衣殼(capsid)：包繞在核酸外

7、的蛋白質(zhì)外殼，由殼粒組成，具有Ag性、保護(hù)核酸和傳染性。,核心,衣殼,殼粒,核衣殼的對稱形式,螺旋對稱,20面體對稱,復(fù)合對稱,立體 對稱,螺旋 對稱,輔助結(jié)構(gòu),包膜：包繞在核衣殼外的膜結(jié)構(gòu)，主要含蛋白質(zhì)、多糖及脂類。來自宿主細(xì)胞，以出芽方式向宿主細(xì)胞外釋放時獲得，具有保護(hù)、吸附和致熱等作用。,刺突：包膜表面不同形狀的突起 (如流感病毒)。能凝集某些動物RBC或毒害宿主細(xì)胞并輔助病毒的吸附。,輔助結(jié)構(gòu),病毒體結(jié)構(gòu)模式圖,殼粒,衣殼,核心,核衣殼,包膜,包膜 病毒,刺突,核心：核酸 基因組genome 決定病毒遺傳、變異 和復(fù)制 殼粒capsomere 衣殼capsid 保護(hù)、介導(dǎo)、抗原性 包膜

8、envelope，刺突spike 保護(hù)、介導(dǎo)、抗原性,二、病毒的化學(xué)組成 1. 核酸：DNA或RNA,多樣性,存在形式多樣 線狀、環(huán)狀,DNA ：dsDNA、ssDNA RNA ：dsRNA、ssRNA 分節(jié)段RNA,感染性核酸,復(fù)制方式多樣,大小懸殊,2. 病毒的蛋白質(zhì) 可分為結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白。 結(jié)構(gòu)蛋白：組成病毒體的蛋白成分，包括衣殼蛋白、基質(zhì)蛋白和包膜糖蛋白。保護(hù)核酸、參與感染、具有抗原性。 非結(jié)構(gòu)蛋白：可以存在于病毒體內(nèi)或受感染的細(xì)胞內(nèi)。作為酶類，參與病毒的復(fù)制，如逆轉(zhuǎn)錄酶、蛋白水解酶、DNA多聚酶等。,3. 脂質(zhì)和糖,主要存在于包膜中，用于維持病毒體結(jié)構(gòu)的完整性，與病毒的入侵相關(guān)

9、，具有抗原性。,病毒 缺乏完整的酶系統(tǒng)、無細(xì)胞器 不能獨(dú)立進(jìn)行代謝 必須寄生在活的易感細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行增殖,病毒的增殖：復(fù)制( replication) 病毒的復(fù)制周期(replication cycle)是指病毒進(jìn)入敏感細(xì)胞后，以其基因組為模板，借助細(xì)胞中的原料、能量及場所合成自己的大分子以組裝子代病毒顆粒，最終按一定方式釋放出細(xì)胞。,復(fù)制周期分五個步驟 吸附：病毒與敏感細(xì)胞相遇，吸附在C表面； 穿入：吞飲、融合、受體結(jié)合、直接穿入； 脫殼：只有核酸進(jìn)入； 生物合成：包括核酸的復(fù)制和蛋白質(zhì)的合成； 組裝與釋放：宿主C破裂，破胞釋放或出芽、胞膜融合等。,吸附 (adsorption) 通過病毒的包膜

10、或裸病毒表面的配體位點(diǎn)與細(xì)胞表面的特異受體結(jié)合而吸附， 如HIV gp120Th(CD4+),穿入(penetration) 融合、胞飲、 直接穿入,融合,直接穿入,胞飲,脫殼 (uncoating) 病毒在細(xì)胞內(nèi)脫去衣殼，多數(shù)是在細(xì)胞的溶酶體酶作用下脫殼釋放出病毒基因組。 生物合成 (biosynthesis) 病毒利用宿主細(xì)胞提供的低分子物質(zhì)大量合成病毒核酸和蛋白質(zhì)。此階段無完整病毒可見，也不能用血清學(xué)檢測出病毒的抗原，稱為隱蔽期(eclispe period),DNA病毒的生物合成,病毒DNA,早期mRNA,早期蛋白(酶),子代DNA,晚期mRNA,晚期蛋白質(zhì) （病毒結(jié)構(gòu)蛋白）,轉(zhuǎn)錄,翻

11、譯,翻譯,轉(zhuǎn)錄,復(fù)制,RNA病毒的生物合成,RNA,蛋白質(zhì),RNA,蛋白質(zhì),RNA,翻譯,翻譯,轉(zhuǎn)錄,逆轉(zhuǎn)錄病毒的生物合成,RNA,互補(bǔ)負(fù)鏈DNA,DNA：RNA中間體,雙股DNA,蛋白質(zhì),mRNA,逆轉(zhuǎn)錄酶,整合于宿主細(xì)胞DNA,裝配與釋放(assembly and release) 裸病毒裝配成核衣殼即為成熟病毒體，以破胞方式釋放； 包膜病毒裝配成核衣殼后以出芽方式釋放，釋放時包有核膜或胞質(zhì)膜成為成熟病毒體。,復(fù)制周期 (replication cycle),43,HIV budding and maturation,Hsiung, GD et al., Diagnostic Virolo

12、gy 1994 p204 (D. Medina),44,Hockley et al. J Gen Virol 69:2455-2469,uninfected,HIV infected (at higher magnifcation),HIV infected,病毒的復(fù)制過程,異常增殖與干擾現(xiàn)象,1. 異常增殖 病毒異常增殖：不能組裝成完整的病毒體 頓挫感染 abortive infection (宿主細(xì)胞的原因) 缺陷病毒 defective viruses (病毒本身的原因) 輔助病毒 helper viruses,2. 干擾現(xiàn)象(interference) 當(dāng)兩種病毒感染同一細(xì)胞時，可發(fā)生

13、一種病毒抑制另一種病毒增殖的現(xiàn)象。,病毒A 細(xì) 胞 病毒B,遺傳特點(diǎn)： 1、遺傳方式簡單 2、受宿主細(xì)胞影響 3、易發(fā)生突變,病毒的變異,基因突變(gene mutation)：病毒基因組發(fā)生堿基置換、缺失或插入引起?？砂l(fā)生形態(tài)、抗原性、宿主范圍、致病性等多種改變。 主要類型：條件致死突變株(ts) 缺陷型干擾突變株(DIM) 宿主適應(yīng)性突變株 耐藥突變株,基因重組(gene recombination) : 兩種或兩種以上不同的病毒感染同一宿主細(xì)胞時，發(fā)生基因片段的交換，產(chǎn)生具有兩個親代特征的子代病毒，并能繼續(xù)增殖。 基因重配(gene reassortment) : 分節(jié)段的RNA病毒通過

14、交換RNA節(jié)段而進(jìn)行的基因重組。 基因整合(gene integration) 病毒基因組與宿主細(xì)胞基因組的整合。,表型重組：病毒成分和基因產(chǎn)物（非遺傳物質(zhì)）間相互作用，產(chǎn)生變異。 類型：表型混合、核殼轉(zhuǎn)移、互補(bǔ)、增強(qiáng),人工定向變異：利用理化誘變法提高病毒突變率，以便在適合條件下選出所需要的突變株。 方法：1) 改變宿主親嗜性； 2) 培育冷適應(yīng)突變株和溫度敏感株； 3) 通過基因重組獲得雜交毒株。,理化因素對病毒的影響,滅活：病毒因理化因素的作用，失去感染性但仍保持其他特性。 1.物理因素 溫度 大多數(shù)病毒耐冷不耐熱 pH 多數(shù)病毒在pH 6.08.0范圍內(nèi)穩(wěn)定。 射線和UV 以不同機(jī)制均可

15、使病毒滅活。 2.化學(xué)因素 乙醚、氯仿、去氧膽酸鹽等脂溶劑可使有包膜病毒的包膜脂質(zhì)溶解而滅活病毒，失去吸附能力。但對無包膜的病毒（如腸道病毒）幾乎無作用。,病毒的分類,分類依據(jù)： 核酸類型和結(jié)構(gòu)（RNA/DNA，雙鏈/單鏈，線狀/環(huán)狀，是否分節(jié)段) 病毒體形狀和大小 衣殼對稱性 包膜的有無,2004年國際病毒分類委員會（ICTV）第8次分類報告，目前所有病毒分為73個科，11個亞科，289個屬。,生物學(xué)分類 DNA病毒 RNA病毒 DNA和RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒,亞病毒因子(subvirus), 衛(wèi)星病毒(satellites) 類病毒(viroids) 朊粒(prion),近年來發(fā)現(xiàn)的比病毒更小、

16、更簡單的一類傳染因子。,由500-2000bp構(gòu)成的單鏈RNA。 可分為兩類,一類可編碼自身的衣殼蛋白,一類為衛(wèi)星病毒RNA分子,又稱擬病毒(Virusoid)，需利用輔助病毒的蛋白衣殼。 多數(shù)與植物病毒相關(guān)，少數(shù)與噬菌體或動物病毒有關(guān)。,衛(wèi)星病毒(satellitevirus),類病毒(viroids) 大小僅為最小病毒的120左右(200-400nt) 由單股環(huán)狀RNA組成，桿狀結(jié)構(gòu)，無衣殼。 對核酸酶敏感，對熱、有機(jī)溶劑抵抗。,朊粒(prion)正常宿主細(xì)胞基因編碼、結(jié)構(gòu)異常的朊蛋白，沒有核酸成分。,思考題,1、名詞解釋：核衣殼、滅活。 2、簡述病毒的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成？ 3、敘述病毒的復(fù)制

17、周期？,病毒的感染與免疫,病毒的致病機(jī)制,病毒的感染類型,抗病毒免疫,病毒的傳播方式,病毒的感染與免疫,水平傳播：病毒在人群不同個體間的傳播。,垂直傳播：某些病毒經(jīng)胎盤或產(chǎn)道由孕婦 傳給新生兒或胎兒的感染。,病毒感染方式,人類病毒的感染途徑,一、 病毒對宿主細(xì)胞的直接作用 溶細(xì)胞型感染 穩(wěn)定狀態(tài)感染 包涵體的形成 細(xì)胞凋亡 基因整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化,病毒的致病作用,1) 溶細(xì)胞型感染(cytolytic infection) 病毒在感染細(xì)胞內(nèi)增殖，引起細(xì)胞的裂解死亡,正常細(xì)胞,細(xì)胞病變,2) 穩(wěn)定狀態(tài)感染 (steady state infection),為特異性Ag或 CTL細(xì)胞識別,新抗原,多核

18、巨細(xì)胞,3)包涵體 (inclusion body) 概念：某些受病毒感染的細(xì)胞內(nèi)，用普通光學(xué)顯微鏡可看到有與正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)和著色不同的圓形或橢圓形的斑塊。是病毒感染的診斷依據(jù)。,4) 細(xì)胞凋亡 (apoptosis),細(xì)胞核,細(xì)胞核,5) 基因整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化,結(jié)果：細(xì)胞轉(zhuǎn)化或腫瘤形成,與人類腫瘤相關(guān)的病毒,二、病毒感染的免疫病理作用,病毒進(jìn)入機(jī)體不引起臨床癥狀的感染。,病毒感染后引起疾病。,隱性感染,顯性感染,有無臨床癥狀,機(jī)體可獲得特異性免疫;向外播散病毒，成為重要傳染源,病毒感染類型,病毒進(jìn)入機(jī)體后，在細(xì)胞 內(nèi)增殖，經(jīng)數(shù)日至數(shù)周的 潛伏期后發(fā)病。,急性感染,持續(xù)性感染,感染過程時間,病毒感

19、染機(jī)體后，可在受感染細(xì)胞內(nèi)長期存在或終生攜帶，且不斷或間斷地向外界排出病毒。,慢性感染,顯性或隱性感染后未完全清除， 血中可持續(xù)檢測出病毒，常反復(fù) 發(fā)作，遷延不愈。 如HBV，HCV,潛伏感染,在顯性或隱性感染后，病毒基因存在于細(xì)胞內(nèi)，在一定條件下，病毒被激活開始復(fù)制，使疾病復(fù)發(fā)?？煞磸?fù)激活。如 HSV、VZV,慢發(fā)病毒 感染,慢性發(fā)展的進(jìn)行性加重的病毒感 染，較為少見但后果嚴(yán)重潛伏期 長。如HIV，朊粒,尋常病毒,prion,麻疹病毒,持 續(xù) 性 感 染,急性病毒感染的遲發(fā)并發(fā)癥,急性感染后1年或數(shù)年，發(fā)生致死性的并發(fā)癥。如麻疹病毒,一、非特異性免疫 1、屏障作用 2、吞噬細(xì)胞的作用 3、干

20、擾素獲得性非特異性免疫 由病毒或其他干擾素誘生劑刺激人或動物細(xì)胞所產(chǎn)生的一類具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的糖蛋白。,種類產(chǎn)生細(xì)胞 抗病毒 抗腫瘤 免疫調(diào)節(jié) 人白細(xì)胞 強(qiáng) 弱 弱 人成纖維細(xì)胞 強(qiáng) 弱 弱 T細(xì)胞 弱 強(qiáng) 強(qiáng),I型,型,抗病毒免疫,非直接滅活病毒 誘生抗病毒蛋白(AVP) 自身和鄰近細(xì)胞 降解病毒mRNA 抑制病毒蛋白合成 抑制病毒組裝、釋放 抑制病毒復(fù)制 早期中斷病毒感染，阻止病毒擴(kuò)散,IFN抗病毒機(jī)理,25合成酶 蛋白激酶 磷酸二酯酶,干擾素因具有抗病毒、抗增殖、抗纖維化、免疫調(diào)節(jié)和抗血管生成等活性,已被廣泛用于丙型和乙型肝炎、尖銳濕疣、多種血液腫瘤、腎癌和膀胱癌等疾病的

21、治療。,二、特異性免疫,細(xì)胞免疫,體液免疫,按種類：IgG IgM IgA 按功能：中和抗體、補(bǔ)體結(jié)合抗體 中和抗體：免疫球蛋白的類型,抗病毒免疫的主要成分 TD、TC 、NK、M,二、特異性免疫,思考題,1、名詞解釋：干擾素、包涵體。 2、舉例說明病毒與腫瘤的相關(guān)性（5例）？ 3、敘述病毒的持續(xù)性感染類型并舉例說明。,病毒感染的檢查方法與防治原則,病毒感染的檢查方法,病毒感染的防治原則,病毒感染的檢查,檢測內(nèi)容,查病毒,查特異性抗體,病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶,電鏡直接觀察 光鏡檢查包涵體 分離培養(yǎng),一、標(biāo)本的采集與送檢,原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意： 1.標(biāo)本用“雙

22、抗”或兩性霉素B處理 2.低溫保存，盡快送檢 3.血清學(xué)診斷采雙份血清,二、病毒分離培養(yǎng)的方法,動物接種 雞胚接種 組織培養(yǎng),器官培養(yǎng) 移植培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng),原代細(xì)胞培養(yǎng) 二倍體細(xì)胞培養(yǎng) 傳代細(xì)胞培養(yǎng),培養(yǎng)方法,二、病毒的分離與鑒定,一般程序：,標(biāo)本,無菌處理,動物接種 雞胚培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng),指標(biāo)陽性 指標(biāo)陰性,病毒鑒定,盲傳23代,指標(biāo)陰性,病毒陰性,（一）病毒的分離培養(yǎng) 1.細(xì)胞培養(yǎng) 單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayer cell culture） 分類 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspended cell culture） 細(xì)胞種類 原代細(xì)胞（primary cell） 二倍體細(xì)胞（diploid cel

23、l） 傳代細(xì)胞系（continuous cell line）,病毒的細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)瓶,單層細(xì)胞,特點(diǎn)：對多種病毒敏感 生長能力有限, 獲取成本高 可攜帶潛伏病毒,1.細(xì)胞培養(yǎng),(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng),(2)二倍體細(xì)胞培養(yǎng) 體外分裂50100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。,特點(diǎn)：對多種病毒敏感 不帶異種蛋白(人源性) 不帶病毒，無致瘤潛能 可傳50代左右,1.細(xì)胞培養(yǎng),(3) 傳代細(xì)胞培養(yǎng),特點(diǎn)：對多種病毒敏感性高 繁殖能力高，傳代時間長 有致癌危險，不能用于疫苗生產(chǎn),1.細(xì)胞培養(yǎng),2.雞胚培養(yǎng) 采用孵化914天的雞胚 絨毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗

24、病毒、人類皰疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 接種部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分離 卵黃囊（yolk sac） 嗜神經(jīng)病毒,2、雞胚培養(yǎng),優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低 缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜,3.動物接種 應(yīng)用：尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng) 動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動物模型 缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動物 體內(nèi)常帶有潛伏病毒,登革病毒對新生乳鼠的致病作用,1-3日齡乳鼠接種病毒6日后，小鼠陸續(xù) 出現(xiàn)體弱、弓背、行動遲緩等癥狀。,1病毒增殖鑒定 (1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effe

25、ct, CPE ） 細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）； 形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。,（二）病毒的鑒定,細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落,(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect, CPE),麻疹病毒感染細(xì)胞,呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞,形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞,epithelial cells - adenovirus,uninfected,early infection,late infection,epithelial cells - respiratory syncy

26、tial virus,uninfected,respiratory syncytial virus,fibroblastic cells - herpes simplex virus,uninfected,early infection,late infection,fibroblastic cells - poliovirus,uninfected,early infection,late infection,腮腺炎病毒感染細(xì)胞,(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）,病毒包膜表面血凝素(HA) 紅細(xì)胞表面HA受體,(3)細(xì)胞代謝改變 細(xì)胞代謝變慢 pH變化,2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定,電子

27、顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限 光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒）， 對一般病毒檢測意義不大,3.病毒血清學(xué)鑒定,鑒定病毒種、型、亞型 (1)血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutination inhibition test）正粘病毒型與亞型鑒定 病毒雞紅細(xì)胞凝集（血凝試驗(yàn)） 病毒特異性抗體雞紅細(xì)胞不凝集 （血凝抑制試驗(yàn)）,(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA） 多種病毒鑒定,3.病毒血清學(xué)鑒定,4.病毒分子生物學(xué)鑒定,抗原變異病毒基因的鑒定 核酸擴(kuò)增 核酸雜交 基因芯片 基因測序,（三）病毒數(shù)量與感染性測定,1.血凝試驗(yàn),2.空斑形成試驗(yàn) （plaque formation test） 3.50組織細(xì)胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50）,(四) 新病毒的鑒定,核酸類型的測定 理化性狀的檢測 形態(tài)學(xué)鑒定 血清學(xué)鑒定 基因測序和生物對比,病毒感染的血清學(xué)診斷,中和試驗(yàn),補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn),血凝抑制試驗(yàn),免疫擴(kuò)散等,病毒感染的血清學(xué)診斷,應(yīng)用： 采取標(biāo)本分離病毒為時已晚 目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒 為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義 進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等,1.中和試驗(yàn)（neutralizing test）,病毒中和抗體 病毒失去感染性 特點(diǎn)：特異性高，抗體維持時間長 應(yīng)用：人群免疫情況的