1、,第二章 細(xì)胞工程,第一節(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞工程是指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法，通過細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平上的操作，按照人們的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品的一門綜合科學(xué)技術(shù)。,什么叫細(xì)胞工程？,1.1細(xì)胞培養(yǎng)的概念,是細(xì)胞工程中最基礎(chǔ)的技術(shù)，它是把機(jī)體的某一組織或器官取出，分散為單個(gè)細(xì)胞，使其在人工培養(yǎng)條件下繼續(xù)生存、生長(zhǎng)、甚至增殖的過程。,原理：細(xì)胞增殖,補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì),1.2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：,1.無菌、無毒的環(huán)境: 培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理 措施：培養(yǎng)液中加抗生素，定期更換培養(yǎng)液 2.營(yíng)養(yǎng): 糖、氨基酸、無機(jī)鹽、微量元素、促生長(zhǎng)因子（維生素、激

2、素等）和動(dòng)物血清 3.溫度和PH 36.50.5 7.2-7.4 4.氣體環(huán)境 O2 CO2 (95空氣 5的CO2),1.3動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)出過程,胚胎或幼齡動(dòng)物的組織器官,細(xì)胞懸浮液,10代細(xì)胞,50細(xì)胞,無限傳代,剪碎,胰蛋白酶,洗滌、稀釋、分離,原代培養(yǎng),用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為7.27.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。,動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官，它們細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)。,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體,動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞

3、網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。,遺傳物質(zhì)改變,細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到4050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。 細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。 細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別： 細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。,解答概念,原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上

4、的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。,解答概念,短期和臨時(shí)性的保存可以采用一般的低溫，如哺乳動(dòng)物的細(xì)胞在4左右可存活幾十天甚至幾個(gè)月。,長(zhǎng)期的保存方法目前一般采用超低溫凍存法，即將細(xì)胞和保護(hù)劑放入-196 的液氮中進(jìn)行保存。,1.4 冷凍和復(fù)蘇,復(fù)蘇：,冷凍保存：,隨時(shí)取出迅速放入37溫水中解凍,1、生物制品：酶、生長(zhǎng)因子、疫苗、單克隆 抗體等,2、有毒物質(zhì)和藥品的檢測(cè)：將待測(cè)物質(zhì)加入培養(yǎng)液，根據(jù)變異細(xì)胞占全部細(xì)胞的比例來判斷該物質(zhì)的毒性。,3、臨床治療：人工皮膚,4、基礎(chǔ)研究：細(xì)胞全能性、細(xì)胞周期及調(diào)控、癌變機(jī)理與細(xì)胞衰老的研究,1.5 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用,1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生

5、改變的細(xì)胞（） A細(xì)胞系 B細(xì)胞株 C原代細(xì)胞 D傳代細(xì)胞,2、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是 - （ ） A.動(dòng)物細(xì)胞融合 B.單克隆抗體 C.胚胎移植 D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),A,D,3、為了使用于培養(yǎng)的動(dòng)物組織細(xì)胞分散開以便配制成一定濃度的細(xì)胞懸浮液，選取來的動(dòng)物組織應(yīng)選用下列哪種物質(zhì)處理（ ） A.胃蛋白酶 B.胰蛋白酶 C.鹽酸 D.胰脂肪酶,教學(xué)反饋,B,4、用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞 （ ）A.容易產(chǎn)生各種變異 B具有更強(qiáng)的全能性C.取材十分方便 D分裂增殖的能力強(qiáng),D,5、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中，正確的是（ ）

6、A動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的就是為了獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白 B動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶處理使細(xì)胞分散 C細(xì)胞遺傳物質(zhì)的改變發(fā)生于原代培養(yǎng)過程中 D培養(yǎng)至50代后繼續(xù)傳代的細(xì)胞是細(xì)胞株 6、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱之為（ ） A原代培養(yǎng) B傳代培養(yǎng) C細(xì)胞株 D細(xì)胞系,B,D,7、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的正確過程是（ ） A.原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系 B. 原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞系細(xì)胞株 C.傳代培養(yǎng)細(xì)胞系原代培養(yǎng)細(xì)胞株 D. 原代培養(yǎng)細(xì)胞系傳代培養(yǎng)細(xì)胞株 8、下列與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的表述中，不正確的是（ ） A培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)

7、物血清 B原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右便會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)停滯 C動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般能夠傳到4050代，但其遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變 D動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測(cè)有毒物質(zhì)和獲得大量自身健康細(xì)胞,A,C,9、下圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請(qǐng)據(jù)此圖回答,(1)容器A中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般取自_。 (2)容器A中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是_，然后用 酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開來。這樣做的目的是_. (3)培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行。瓶中的培養(yǎng)基成分有 _ _等。在此瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后，一般傳到第 代，有許多細(xì)胞衰老死亡，到這時(shí)的培養(yǎng)稱為_. (4)為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用_ 處理，然后

8、配置成_，再分裝。 (5)在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部死亡。原因是_。,幼齡動(dòng)物的器官或組織、動(dòng)物胚胎,剪碎,胰蛋白,使每個(gè)細(xì)胞能與培養(yǎng)液接觸,葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清,10,原代培養(yǎng),胰蛋白酶,細(xì)胞懸浮液,細(xì)胞沒有發(fā)生瘤變,知識(shí)能力化,1為了使用于培養(yǎng)的動(dòng)物組織細(xì)胞分散開以便配制成一定濃度的細(xì)胞懸浮液，選取來的動(dòng)物組織應(yīng)選用下列哪種物質(zhì)處理 A.胃蛋白酶 B.胰蛋白酶 C.鹽酸 D.胰脂肪酶 2下列與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的表述中，不正確的是 （ ） A培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等 B原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右便會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)停滯 C動(dòng)物

9、細(xì)胞培養(yǎng)一般能夠傳到4050代，但其遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變 D動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測(cè)有毒物質(zhì)和獲得大量自身健康細(xì)胞 3動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞來自于（ ） A任何個(gè)體的細(xì)胞B只能取自幼齡動(dòng)物的組織細(xì)胞C只能取自動(dòng)物胚胎細(xì)胞 D胚胎或幼齡動(dòng)物的器官和組織細(xì)胞,4動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段中，最基礎(chǔ)的是 （ ） A.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) B.動(dòng)物細(xì)胞融合 C.單克隆杭體 D.胚胎、核移植 5在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱之為: A原代培養(yǎng) B傳代培養(yǎng) C細(xì)胞株 D細(xì)胞系 6衛(wèi)生部2005年4月6日發(fā)布了蘇丹紅危險(xiǎn)性報(bào)告評(píng)估，報(bào)道中提到蘇丹紅一號(hào)是一種人工色素(工業(yè)染料)，

10、它在人體內(nèi)代謝生成相應(yīng)的胺類?？蒲腥藛T欲采用一定的技術(shù)手段探究蘇丹紅是否對(duì)人體有危害，你認(rèn)為采取下列哪種技術(shù)手段最合適： A動(dòng)物細(xì)胞融合 B動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) C胚胎移植 D核移植,7下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，不正確的是 A.用于培養(yǎng)的細(xì)胞大都取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織 B.將所取的組織先用胰蛋白酶等進(jìn)行處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞 C.在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液 D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細(xì)胞就會(huì)衰老死亡 8用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞 （ ） A.容易產(chǎn)生各種變異 B具有更強(qiáng)的全

11、能性 C.取材十分方便 D分裂增殖的能力強(qiáng),（無菌處理和添加抗生素、更換培養(yǎng)液）,與體內(nèi)相同。合成培養(yǎng)基：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子（血清、血漿）、無機(jī)鹽、微量元素等,（3637、7.27.4）,（O2、CO2-維持培養(yǎng)液PH）,1.2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程:,1.2 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程,胚胎或幼齡動(dòng)物的組織器官,細(xì)胞懸液,10代細(xì)胞,50細(xì)胞,剪碎,胰蛋白酶,洗滌、稀釋、分離,原代培養(yǎng),用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為7.27.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。,比老齡動(dòng)物的組織細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，有絲分裂旺盛。分化程度越低，繁殖能力越強(qiáng)，越容易培養(yǎng)。,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體,動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來