1、實(shí)驗(yàn)七 酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué) pH、溫度、激活劑、抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響,生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)之,山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?1. 了解pH、溫度、激活劑、抑制劑對(duì)酶活力的影響。 2. 學(xué)習(xí)測定酶最適pH值的 方法。,【實(shí)驗(yàn)原理】,對(duì)環(huán)境酸堿度敏感是酶的特點(diǎn)之一。酶表現(xiàn)最大活力時(shí)的pH值稱為酶的最適pH值。一般酶的最適pH值在48之間。,酶的催化作用受溫度的影響很大，反應(yīng)速度達(dá)到最大值時(shí)的溫度稱為酶的最適溫度。大多數(shù)動(dòng)物酶的最適溫度為3740，大多數(shù)植物酶的最適溫度為5060。,激活劑能增加酶的活力，抑制劑會(huì)降低酶的活力。如 Cl-: 唾液淀粉酶的激活劑，Cu2+則是該酶的抑制劑。,在不同p

2、H、溫度以及激活劑、抑制劑存在下，唾液淀粉酶對(duì)淀粉水解活力的高低可通過水解混合物遇碘呈現(xiàn)顏色的不同來判斷。,淀粉及其水解產(chǎn)物遇碘呈現(xiàn)不同的顏色： 淀粉呈蘭色； 大分子糊精（紫色糊精）呈紫色 ； 其次的糊精（紅色糊精）呈紅色； 小分子糊精及麥芽精為無色。,【器材與試劑】 （一）器材 1.恒溫水浴鍋 2.試管 3.試管架 4.錐形瓶（50 ml或100ml） 5.吸量管（1、2、5、10ml） 6.秒表 7.白瓷板 8. pH試紙,（二）試劑 1.含有0.3NaCl的0.5淀粉溶液 2. 0.2molL Na2HPO4溶液 3. 0.1molL檸檬酸溶液 4. KII2溶液 5. 新鮮唾液,【實(shí)驗(yàn)

3、步驟】 1. pH值對(duì)酶活力的影響 (1)取干燥試管6支, 編號(hào)，按下表制備 pH 5.0 8.0的5種緩沖溶液。,(3) 測定淀粉完全水解所需的時(shí)間： 先向第6號(hào)試管中加稀釋50200倍的唾液2ml，搖勻后放入37恒溫水浴中保溫,檢測淀粉水解程度,并測定淀粉完全水解所需的時(shí)間。,(2) 向每支試管中加入0.5%淀粉溶液2ml 。第6號(hào)試管與第3號(hào)試管內(nèi)容物相同。,按照第6號(hào)試管的保溫時(shí)間，依次將各管迅速取出，并立即加入KII2溶液2滴，充分搖勻。觀察各管呈現(xiàn)的顏色， 觀察pH對(duì)唾液淀粉酶活力的影響，并確定其最適pH。,(4) 測定淀粉酶的最適pH： 每隔1分鐘依次向第1至第5號(hào)試管中加入上述

4、稀釋的唾液2ml，搖勻，依次將5支試管放入37恒溫水浴鍋中保溫。,2. 溫度對(duì)酶活力的影響 取試管3支，編號(hào)后按下表加入試劑：,3. 激活劑和抑制劑對(duì)酶活力的影響 （1）取試管3支，按下表編號(hào)加入相應(yīng)試劑：,(2)搖勻，置37水浴中保溫，用稀碘液檢測淀粉水解程度。,【注意事項(xiàng)】 pH值對(duì)酶活力的影響實(shí)驗(yàn)： 1.掌握第6號(hào)試管的水解程度是本實(shí)驗(yàn)成敗的 關(guān)鍵之一。 2.嚴(yán)格控制溫度。在保溫期間，水浴溫度不能 波動(dòng)，否則影響結(jié)果。 3.嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間, 保證每管反應(yīng)時(shí)間相同。 激活劑、抑制劑對(duì)酶活力的影響： 每管中加入的底物應(yīng)是不含NaCl的1淀粉 溶液。,【思考題】 1. 高溫導(dǎo)致酶活性喪失的分子機(jī)理是什么？ 如何在酶的分離純化中克服這種影響？ 2. 什么是酶的最適溫度？有何實(shí)踐意義？ 3.什么是酶的最適pH？它是否是一個(gè)常數(shù)？ 它與哪些